CN101830875A

CN101830875A - 抗炎化合物线叶旋覆花内酯a及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN101830875A
Application number: CN 201010200697
Authority: CN
Inventors: 张卫东; 金慧子; 聂利月; 覃江江; 黄鹰
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2010-06-13
Filing date: 2010-06-13
Publication date: 2010-09-15

Abstract

一种医药技术领域的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A及其制备方法和应用。其化学结构式如下：

。制备方法：提取：将线叶旋覆花干燥全草粉碎合并提取液，浓缩成流浸膏，稀释后萃取，得到石油醚部位；分离：将上述石油醚部位应用硅胶柱层析，梯度洗脱，层析检测，再经C₁₈反相柱层析，以甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得线叶旋覆花内酯A纯品。本发明对采集自安徽长丰县的线叶旋覆花进行了系统的化学成分研究，从植物线叶旋覆花中分离得到，发现其具有良好的抗炎活性，可用于制备抗炎的药物。

Description

抗炎化合物线叶旋覆花内酯A及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及的是一种医药技术领域的化合物及其制备方法和应用，具体涉及一种从植物线叶旋覆花中分离得到的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A及其制备方法和应用。

背景技术

旋覆花属(Inula L.)植物是菊科(Compositae)中的一属，全世界约有100种，分别于亚洲、欧洲和非洲，以地中海地区为主。我国有20余种，本属多种植物常供药用，如土木香(I.helenium)可作为健胃、利尿、祛痰和驱虫药；欧亚旋覆花(I.britannica)具有消痰、下气、软坚、行水等功效。倍半萜类化合物是本属植物的特征性成分，以桉烷型、吉马烷型和愈创木烷型为主，还包括伪愈创木烷型、裂环桉烷型、榄烷型、苍耳烷型和少量的无环倍半萜及倍半萜二聚体。研究表明，该属植物中的倍半萜类化合物具有驱虫杀虫、抗菌抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制的功效。旋覆花属植物在我国分布广，种类多，具有较长的临床应用历史。近年来，旋覆花在抗菌、抗炎、抗肿瘤等多方面的不同生物活性引起了越来越多的关注，对该属植物化学成分的研究也逐渐成为一个热点。

线叶旋覆花[Inula lineariifolia Turcz.(syn.Inula linariaefolia)]是菊科旋覆花属植物，多年生草本，俗名窄叶旋覆花、条叶旋覆花、小朵旋覆花。广产于我国东北部、北部、中部和东部，如河南、河北等省。也分布于蒙古、朝鲜、俄罗斯(远东地区)和日本。生于山坡、荒地、路旁、河岸，极常见。中药旋覆花即为旋覆花或大花旋覆花等的头状花序，而植物全草(金沸草)亦供药用。线叶旋覆花过去在华东等部分地区也作旋覆花使用，并且作为下气、行水、消炎、软坚之药，曾被收载于1963年版中国药典(一部)，但病人服后有恶心、呕吐等反应，目前已停止使用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种抗炎化合物线叶旋覆花内酯A及其制备方法和应用。本发明对采集自安徽长丰县的线叶旋覆花进行了系统的化学成分研究，发现其具有良好的抗炎活性，可用于制备抗炎的药物。

本发明涉及的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A，其化学结构式如下：

本发明还涉及的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A的制备方法，包括步骤如下：

(1)提取：将线叶旋覆花干燥全草粉碎，以80～95％乙醇8～20倍体积W/V回流提取1～3次，每次2～3小时，合并提取液，提取液减压浓缩成流浸膏，流浸膏相当于1ml含线叶旋覆花0.8-1.2g，流浸膏加水1～3倍量W/V稀释后，以石油醚0.5～2倍量V/V萃取3～5次，得到石油醚部位；

(2)分离：将上述石油醚部位应用硅胶柱层析，以体积比为100∶0～1∶1的石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，分别收集含线叶旋覆花内酯A的流分，再经C₁₈反相柱层析，以重量比为50∶100-70∶100的甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得线叶旋覆花内酯A纯品。

所述的线叶旋覆花内酯A为无色四角形结晶、熔点181-184℃；[α]_D ²⁰-23.20(c 1.00，CHCl₃)，由电喷雾离子质谱信号m/z 389.2[M+Na]⁺，m/z 365.0[M-H]^-，高分辨质谱得该化合物精密质量数为367.1767[M+H]⁺，推算其分子式为C₁₉H₂₇O₇。

所述的线叶旋覆花内酯A是从生长于安徽长丰县的线叶旋覆花中提取分离得到的一种倍半萜化合物。

本发明对所述的线叶旋覆花内酯A进行了X-衍射，晶胞参数为：

α＝90°；

β＝90°；γ＝90°；

Z＝8，D_calc＝1.318mg/m³，晶体大小0.320×0.285×0.197mm³.

F(000)＝1568，T＝293(2)K.R因子为R₁＝0.0458，wR₂＝0.1013[I＞(2σ(I)]。

所述的线叶旋覆花内酯A的X-衍射结构如下：

线叶旋覆花内酯A的NMR数据如表1.

本发明还涉及的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A的应用，实验表明，线叶旋覆花内酯A具有良好的抗炎活性，可用于制备抗炎的药物。

表1线叶旋覆花内酯A的¹H和¹³C核磁共振数据

碳原子序号	碳化学位移	氢化学位移(J)
碳原子序号	碳化学位移	氢化学位移(J)	1	51.1	1.91m

碳原子序号	碳化学位移	氢化学位移(J)
碳原子序号	碳化学位移	氢化学位移(J)	2	75.3	4.90t (5.0)
3	36.3	1.83m，2.07m	2	75.3	4.90t (5.0)
3	36.3	1.83m，2.07m	4	72.9	4.13dd(11.0，9.0)
5	51.1		4	72.9	4.13dd(11.0，9.0)
5	51.1		6	76.5	5.05d(12.0)
7	52.4	3.04m	6	76.5	5.05d(12.0)
7	52.4	3.04m	8	76.1	4.53m
9	44.0	1.45m；2.45m	8	76.1	4.53m
9	44.0	1.45m；2.45m	10	30.2	1.90m
11	138.6		10	30.2	1.90m
11	138.6		12	168.8
13	120.0	6.15d(3.0)	12	168.8
13	120.0	6.15d(3.0)			5.39d(3.0)
14	15.9	0.99d(6.0)			5.39d(3.0)
14	15.9	0.99d(6.0)	15	20.4	1.03s
2-OAc	170.2	2.05s	15	20.4	1.03s
2-OAc	170.2	2.05s		21.2
6-OAc	172.6	2.25s		21.2
6-OAc	172.6	2.25s		21.2

溶剂：CDCl₃，¹HNMR：500MHz，¹³C NMR 125MHz.J：偶合常数

本发明对采集自安徽长丰县的线叶旋覆花进行了系统的化学成分研究，从植物线叶旋覆花中分离得到，发现其具有良好的抗炎活性，可用于制备抗炎的药物。

具体实施方式

以下实例对本发明作进一步说明。本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：

线叶旋覆花内酯A的制备

线叶旋覆花干燥全草10Kg，粉碎后，用95％乙醇100L回流提取2次，每次2小时，合并提取液，提取液减压浓缩成每ml含线叶旋覆花1g的流浸膏，共10L，加入10L水稀释，以20L石油醚萃取4次，得到石油醚部位120g。将石油醚部位上硅胶柱层析，以100∶0-1∶1的石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含线叶旋覆花内酯A的流分，再经C₁₈反相柱层析，以重量比为50∶100-70∶100的甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得到线叶旋覆花内酯A 2.5g。

实施例2

线叶旋覆花内酯A的制备

线叶旋覆花干燥全草5Kg，粉碎后，用80％乙醇40L回流提取1次，每次3小时，合并提取液，提取液减压浓缩成每ml含线叶旋覆花0.8g的流浸膏，共4L，加入12L水稀释，以6L石油醚萃取3次，得到石油醚部位48g。将石油醚部位上硅胶柱层析，以100∶0-1∶1的石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含线叶旋覆花内酯A的流分，再经C₁₈反相柱层析，以重量比为50∶100-70∶100的甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得到线叶旋覆花内酯A 1.3g。

实施例3

线叶旋覆花内酯A的制备

线叶旋覆花干燥全草5Kg，粉碎后，用90％乙醇100L回流提取3次，每次3小时，合并提取液，提取液减压浓缩成每ml含线叶旋覆花1.2g的流浸膏，共6L，加入18L水稀释，以36L石油醚萃取5次，得到石油醚部位57g。将石油醚部位上硅胶柱层析，以100∶0-1∶1的石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含线叶旋覆花内酯A的流分，再经C₁₈反相柱层析，以重量比为50∶100-70∶100的甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得到线叶旋覆花内酯A1.7g。

实施例4

线叶旋覆花内酯A的抗炎活性实验

在炎症过程中，一般都认为抑制NO的释放可缓解炎症的损伤。因此，我们测定了线叶旋覆花内酯A对RAW264.7细胞中，由LPS诱导NO生成的抑制作用。

用Griess试剂测定细胞培养上清中NO分泌的水平。Griess试剂成分：1％对氨基苯磺酸(溶于2.5％磷酸中)和0.1％N-1-奈乙二胺盐酸盐，临用前等体积混合。将RAW264.7细胞按每孔1.0×10⁵个细胞接种于24孔培养板，待细胞贴壁后换液，加入含不同浓度药液和相应体积浓度的DMSO作为对照。药物作用30min后各自加入LPS(1μg/mL)刺激24h，收集细胞培养上清检测方法如下：在96孔板中加入100μL待测上清样品(每样品设3个复孔)，加入混合后的Griess试剂100μL，室温下避光反应10min，在酶联仪上检测波长570nm处的OD值。以NaNO₂与Griess试剂反应作标准曲线，计算上清中NO浓度。结果见表2。

表2线叶旋覆花内酯对LPS诱导的NO活性测试结果

结果表明：LPS能显著增加巨噬细胞产生的NO(p＜0.01)。线叶旋覆花内酯A在5、10、25、50μM的浓度下能显著抑制LPS诱导的NO的生成。抑制率分别为79.49％、83.99％、87.51％、90.04％，提示该化合物具有良好的抗炎活性。

实施例5

线叶旋覆花内酯A对小鼠耳肿胀模型的抗炎活性评价

(一)小鼠耳肿胀模型

1实验动物

Swiss种小鼠，雄性，体重20-24g。

2.实验模型和测试方法

取小鼠50只，随机分成5组，按表3所示的剂量灌胃给药3d，于末次给药后1h，用0.05ml的二甲苯将小鼠左耳致炎，用直径为7mm的打孔器将双耳重叠打孔，将打下的圆片在扭力天平(灵敏度为万分之一)上称量，用鼠耳两圆片的重量差表示其肿胀度。

3统计分析：

全部实验结果均以均数±标准误表示。用student t-检验比较各组数据与空白组的显著性差异，P＜0.05，表示差异有显著性意义。

4试验结果：

试验结果见表3.

结果表明，阳性对照药氢化可的松、线叶旋覆花内酯A对小鼠耳肿胀模型引起的炎症有显著的抑制作用。

表3.线叶旋覆花内酯A对小鼠耳肿胀试验的影响

实施例6

线叶旋覆花内酯A对大鼠角叉菜胶足肿胀模型的抗炎效果

1实验动物

SD大鼠，雌雄兼用，体重180-220g。

2.实验模型和测试方法

取大鼠50只，随机分成5组，按表4所示的剂量灌胃给药4d，于末次给药前测量致炎前容积；末次给药后30min，于大鼠右后肢足跎皮下注射1％角叉菜胶0.1ml致炎。分别于致炎后2、4、6h测量右踝关节以下容积。

3统计分析：

4试验结果：

表4.线叶旋覆花内酯A对大鼠角叉菜胶足肿胀试验的影响

结果表明，阳性对照药地塞米松、线叶旋覆花内酯A对大鼠角叉菜胶足肿胀模型所引起的炎症有显著的抑制作用。

Claims

1.一种抗炎化合物线叶旋覆花内酯A，其特征在于，其化学结构式如下：

2.一种如权利要求1所述的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：

提取：将线叶旋覆花干燥全草粉碎，以80～95％乙醇8～20倍体积W/V回流提取1～3次，每次2～3小时，合并提取液，提取液减压浓缩成流浸膏，流浸膏相当于1ml含线叶旋覆花0.8-1.2g，流浸膏加水1～3倍量W/V稀释后，以石油醚0.5～2倍量V/V萃取3～5次，得到石油醚部位；

分离：将上述石油醚部位应用硅胶柱层析，以体积比为100∶0～1∶1的石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含线叶旋覆花内酯A的流分，再经C₁₈反相柱层析，以重量比为50∶100-70∶100的甲醇-水进行洗脱，薄层层析检测，得线叶旋覆花内酯A纯品。

3.根据权利要求2所述的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A的制备方法，其特征是，所述的线叶旋覆花内酯A为无色四角形结晶、熔点181-184℃；

由电喷雾离子质谱信号m/z 389.2[M+Na]⁺，m/z 365.0[M-H]^-，高分辨质谱得该化合物精密质量数为367.1767[M+H]⁺，其分子式为C₁₉H₂₇O₇。

4.根据权利要求2或者3所述的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A的制备方法，其特征是，所述的线叶旋覆花内酯A是从生长于安徽长丰县的线叶旋覆花中提取分离得到的一种倍半萜化合物。

5.一种如权利要求1所述的抗炎化合物线叶旋覆花内酯A，其特征在于，所述的线叶旋覆花内酯A在制备抗炎药物中的应用。