CN101817861A - 一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法 - Google Patents
一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明是一种用于治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法。该单体化合物系从黄芪药材根中得到。黄芪药材原料经乙醇热回流提取，提取液进行碱水解后上大孔树脂，收集一定醇浓度下的洗脱液经过硅胶纯化、重结晶等技术处理后，得到黄芪甲苷纯品。本方法制备的黄芪甲苷纯度达到98％-100％。以本方法制备的黄芪甲苷为有效成分制备的制剂，经药理实验证实，可有效治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎。本发明方法具有操作简便，产品纯度高，得率高，生产成本低和无污染等优点。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域，涉及一种以药材为原料制备高纯度黄芪甲苷的方法，属于中药制药领域。
背景技术：
黄芪Radix Astragali是豆科植物蒙古黄芪Astraglus membranaceusBre.Var.mongholicuns(Bge.)Hsia或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。所含化学成分黄芪皂苷有多种同系物，其中黄芪甲苷(AS-IV)为主要药理活性成分。继1982年南京医科大学黄芪课题组首次报道黄芪甲苷的药理作用后，本发明涉及的AS-IV可防治糖尿病肾病(DN)和糖尿病周围神经病变(DNP)的应用(专利号：2004100147858，即将授权，已通知，专利号：ZL200510094276，授权公告2007年8月29日)也尚属首次，AS-IV及其同系物已有文献报道，但其核磁-氢谱及碳谱存在不少混乱，本发明首次准确的归属了7种环阿顿烷四环二萜皂苷的1H-NMR和13C-NMR，确定了相对构型(刘玥辉，孙视，张涵庆，张银娣，夏冰，中国药科大学学报，2008，31(1)：15-19.)
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法。该方法不仅具有操作简便，产品纯度高、得率高、生产成本低和无污染等优点，而且操作条件经验证不含对AS-IV(黄芪甲苷)的结构造成影响，从而保证了AS-IV操作工艺和药理作用的稳定性。
本发明所提供的制备黄芪甲苷的方法包括以下步骤：
a.黄芪药材(经粉碎60目)用一定浓度的乙醇回流提取、过滤、合并滤液，减压浓缩至无醇味。
该步骤采用正交Lp(34)设计，采用3个水平，4个因素。(1)溶剂浓度65％，80％，95％；(2)溶剂用量，4、6、8倍量；(3)提取次数1、2、3次(4)提取时间1h、1.5h、2h。经正交实验结果表明得出最优提取条件：用4倍于药材量的80％乙醇，回流提取4次，每次2h。
b.水解条件2水平，3因素(1)碱用量分别2g/kg，5g/kg，8g/kg；(2)水解温度20℃、60℃、100℃；(3)水解时间4h、8h、12h；
实验结果表明：碱水浓度为0.5％-1.5％，温度在60℃-100℃，水解时间在8h-12h范围。
c.水解液上大孔吸附树脂(D-101，AB-8)，分别用10倍上样量，0.5％碱水液，30％乙醇，95％乙醇洗脱。
d.收集95％乙醇洗脱液，处理后上硅胶柱(10倍于上样量硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯∶甲醇(3∶1或4∶1)进行洗脱。
e.收集含黄芪甲苷的洗脱液，处理后上硅胶柱(200-300目，10倍于上样量，湿法装柱)，以乙酸乙酯∶甲醇＝3∶1或4∶1进行洗脱。
f.用甲醇重结晶，的黄芪甲苷白色针晶，其纯度为98％-100％。
g.其纯度测定采用HPLC-ELSD法：A.色谱条件：流动相∶乙腈∶水(34∶66)，色谱柱ODS-C-18(250mm×5mm×46mm)，流速：1.0ml/min，柱温：30℃，EISD参数，载气量：管温103℃。
本发明方法制备的黄芪甲苷纯度达98％-100％，方法操作简便，产品纯度高，得率高，生产成本低和无污染等优点。
本发明方法制备的黄芪甲苷及有效成分制备的制剂，可用于治疗糖尿病并发症肾病，周围神经炎的用途。
实例1
取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量80％乙醇在常压热回流提取4次，每次2h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0.5％氢氧化钠水溶液，在100℃水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(D-101)，用10倍量床体积水洗涤后，再用0.05％碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30％乙醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得粗提物(皂苷)(约0.05-0.07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱)以乙酸乙酯∶甲醇(3∶1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色结晶，纯度100％(HPLC-ELSD法测定)。
实例2
取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量95％乙醇在常压热回流提取3次，每次1.5h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0.05％氢氧化钠水溶液，在60℃水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(AB-8)，用10倍量床体积水洗涤后，再用0.05％碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30％乙醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得粗提物(皂苷)(约0.05-0.07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱)以乙酸乙酯∶甲醇(4∶1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色结晶，纯度98％(HPLC-ELSD法测定)。
Claims (7)
1.一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于利用黄芪根分碎成粗粉，用乙醇常压热回流提取，滤液减压浓缩至无醇味，浸膏以水混悬，用氢氧化钠或氢氧化钾水溶液加温水解，放冷，水解液上大孔树脂用水、碱水、不同浓度的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，处理后上硅胶柱(数倍于上样量的硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯：甲醇不同比例洗脱，收集含黄芪甲苷的洗脱液，减压浓缩，析出粗品，用溶剂重结晶后，得到黄芪甲苷白色结晶，纯度98-100％。
2.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于用药材经粉碎60目4倍于量的65-95％乙醇回流提取4次，每次2小时，根据正交实验设计L9(34)得出。
3.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于采用稀碱水解提取液，即氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠水溶液，且浓度控制在0.5-1.5％，温度控制在60-100℃，时间控制在8-12小时范围内。
4.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于采用大孔吸附树脂的型号为D-101，AB-8，diaionHp20等，其中D-101，AB-8价格较适中。
5.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于采用硅胶柱200-300目层析，以乙酸乙酯-甲醇(3∶1)(4∶1)进行洗脱。
6.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于对所得的黄芪甲苷粗品采用甲醇重结晶处理。
7.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于所指的黄芪甲苷的结构如下：
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