CN101816715B - 使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 - Google Patents
使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101816715B CN101816715B CN2009102182408A CN200910218240A CN101816715B CN 101816715 B CN101816715 B CN 101816715B CN 2009102182408 A CN2009102182408 A CN 2009102182408A CN 200910218240 A CN200910218240 A CN 200910218240A CN 101816715 B CN101816715 B CN 101816715B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- shenshuaining
- danshensu
- capsules
- water
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000009961 Shenshuaining Substances 0.000 title claims abstract description 60
- 239000002775 capsule Substances 0.000 title claims abstract description 60
- PAFLSMZLRSPALU-MRVPVSSYSA-N (2R)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)lactic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 PAFLSMZLRSPALU-MRVPVSSYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- PAFLSMZLRSPALU-QMMMGPOBSA-N Danshensu Natural products OC(=O)[C@@H](O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 PAFLSMZLRSPALU-QMMMGPOBSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- PAFLSMZLRSPALU-UHFFFAOYSA-N Salvianic acid A Natural products OC(=O)C(O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 PAFLSMZLRSPALU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 75
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 27
- ZMMKVDBZTXUHFO-DDWIOCJRSA-M sodium;(2r)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-hydroxypropanoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 ZMMKVDBZTXUHFO-DDWIOCJRSA-M 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 21
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 abstract 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 abstract 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 235000005412 red sage Nutrition 0.000 description 5
- -1 N-acetyl-β-D-glucosamine glucoside Chemical class 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000008327 renal blood flow Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 241000427159 Achyranthes Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- 244000247747 Coptis groenlandica Species 0.000 description 1
- 235000002991 Coptis groenlandica Nutrition 0.000 description 1
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 244000197580 Poria cocos Species 0.000 description 1
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 description 1
- 240000004980 Rheum officinale Species 0.000 description 1
- 235000008081 Rheum officinale Nutrition 0.000 description 1
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 description 1
- 244000182022 Salvia sclarea Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000002254 renal artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
一种使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法：1、称取肾衰宁胶囊于量瓶中，压破，加甲醇，水浴中超声，置冰水浴中，取出，加甲醇，离心，取上清液为衰宁胶囊供试溶液；2、称取丹参素钠对照品，置量瓶中，水浴中超声，取出，置冰水浴中，取出，加甲醇摇匀，作为对照品溶液；3、色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6X 150mm 5μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸，体积比为19∶80∶1；流速：1.0ml/min；检测波长为281nm；灵敏度：0.01AUFS；进样量：10μL；柱温：40℃，理论塔板数：按丹参素色谱峰计不小于5000；4、分别取丹参素钠对照品溶液和肾衰宁胶囊供试溶液，注入液相色谱仪，测定肾衰宁胶囊供试溶液应呈现与丹参素钠对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。本发明为准确评价肾衰宁胶囊的质量提供了新的对照标准。增强了肾衰宁胶囊产品质量的可控性，有利于对肾衰宁胶囊产品质量全面监控。
Description
技术领域
本发明涉及一种使用HPLC法测定中成药含量的方法，具体的是一种使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法。
背景技术
肾衰宁胶囊是由丹参、大黄、太子参、牛膝、黄连、茯苓、红花等组成的中药复方制剂，其中丹参是君药。丹参为唇形科鼠尾草植物的干燥根部，现代中药药理学研究表明，丹参可有效地保护原位肾热缺血时对肾小管上皮所造成的损害，对肾热缺血后血肌酐浓度、肌酐清除率和自由水清除率有效地调整有一定的保护和修复作用可，可增加兔肾动脉血流量。能降低血尿素氮、肌酐，使肾小球滤过率(GFR)、肾血浆流量(RPF)、肾血流量(RBF)显著增加，肾脏功能明显改善，能显著增加尿中尿素、肌酊、钠和无机磷的排出。能降低血肌酐和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甙酶(NAG酶)。其机制与稳定溶酶体膜，阻止细胞钙离子内流，抗凝血、抗血栓形成、抗血小板聚集、扩张血管、增加巨噬吞噬细胞功能等有关。其中的丹参素可能是丹参治疗肾脏病方面的主要有效成分之一。
随着对中药研究的进一步深入，人们逐渐认识到对中药制剂，简单的用西医合成药的质量控制模式不能恰当反映中药的内在质量。HPLC是指中药指纹图谱，中药指纹图谱借用了法医学指纹鉴定的概念，运用现代分析技术得到某种中药材、提取物或中成药中所共有的、具有特征性的成份共同组成的光谱或色谱的图谱。中药指纹图谱是由被测物的特征信号组成，具有个体的惟一性，代表了被测物的特征。中药指纹图谱对于有效控制中药材、提取物或中成药的质量具有重要意义，可提供更深层次的质量评价模式。
发明内容：
本发明的目的在于，提出一种使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法的新技术方案，本发明的技术方案具有快速、准确测定肾衰宁胶囊中丹参素的含量，有效控制肾衰宁胶囊产品质量的特点。
本发明的技术方案：使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法，步骤如下：
(1)肾衰宁胶囊供试溶液制备：准确称取肾衰宁胶囊12粒(0.35g/粒)于25mL量瓶中，轻轻压破，加入甲醇15mL，于40℃水浴中超声10min，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度，离心5min，取上清液为衰宁胶囊供试溶液；
(2)对照品溶液的制备：精密称取丹参素钠对照品1.66mg，置10mL量瓶中，于40℃水浴中超声10min，取出，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6X150mm 5μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸，体积比为19∶80∶1；流速：1.0ml/min；检测波长为281nm；灵敏度：0.01AUFS；进样量：10μL；柱温：40℃，理论塔板数：按丹参素色谱峰计不小于5000；
(4)测定法：分别精密吸取丹参素钠对照品溶液和肾衰宁胶囊供试溶液各10mL，注入液相色谱仪，测定肾衰宁胶囊供试溶液应呈现与丹参素钠对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。
步骤(2)所述的丹参素钠对照品使用前现配制，避光、低温保存。所采用的甲醇为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。
中药制剂所采用的各种中药原料因产地、气候、季节等原因，其中所含有效成份不尽相同。生产中经常出现采用相同数量的原料和相同的制备工艺，生产出的产品中有效成份却不相同，使得中药制剂质量的可控性不好。本发明是对肾衰宁胶囊产品中的主要有效成份丹参素化学组分用高效液相色谱法建立宏观指纹图谱，再用丹参素钠为对照品建立丹参素钠指纹图谱，用丹参素钠指纹图谱与肾衰宁胶囊指纹图谱中的丹参素钠部份的指纹图谱相比较，从而准确测定肾衰宁胶囊中丹参素的含量，有效控制肾衰宁胶囊产品质量。该图谱代表着肾衰宁胶囊主要药理活性，能有效地表征肾衰宁胶囊的品质和效果。本发明为准确评价肾衰宁胶囊的质量提供了新的对照标准。与常规质量标准相比较，本发明是更深层次的质量评价模式，增强了肾衰宁胶囊产品质量的可控性，可实现对肾衰宁胶囊最大可能的化学成份进行检测，有利于对肾衰宁胶囊产品质量全面监控。本发明是采用科学方法，通过大量实验所得到的切实可行的方法，具有很好的重复性和稳定性。在生产中具有使用方便，快速、准确的特点。
附图说明
图1为按2.2、2.3项方法制备的对照品、供试品溶液，在2.1项的色谱条件下，依次进样检测，获得各批次肾衰宁胶囊高效液相色谱叠加图。图中：R为对照品中文图谱；S1-S13为肾衰宁胶囊样品，8为丹参素，9为盐酸小糪碱。
图2为本发明改变流动相中冰醋酸加入量的色谱图。
图3为本发明改变流动相中甲醇和水比例的色谱图。
具体实施方式
1、仪器与试药
仪器：大连依利特科学仪器公司生产的ELIIE-P200II型高效液相色谱仪，包括可变波长紫外检测器、色谱工作站、10μL定量进样环。
药品：云南理想药业有限公司生产的肾衰宁胶囊，批号20090814，20090921，20090927；
试剂：中国药品与生物制品研究所生产的丹参素钠对照品，甲醇为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。
2、含量测定
2.1、色谱条件
色谱柱：大连依利特科学仪器公司装填的Inertsil ODS-3(4.6X150mm 5μm)；
流动相：甲醇∶水∶冰醋酸的体积配比为19∶80∶1；
检测波长：281nm；
流速：1.0ml/min；
柱温：40℃；
理论塔板数：按丹参素色谱峰计不小于5000。
在上述条件下的色谱分离结果见图1，图中B丹参素峰。
由图1可知，组分得到良好分离。
2.2、对照品溶液的制备
精密称取丹参素钠对照品1.66mg，置10mL量瓶中，于40℃水浴中超声10min，取出，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度摇匀，作为丹参素钠对照品液，使用前新鲜配制。
2.3、供试品溶液的制备
准确称取肾衰宁胶囊12粒(0.35g/粒)于25mL量瓶中，轻轻压破，加入甲醇15mL，于40℃水浴中超声10min，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度，离心5min，取上清液，为肾衰宁胶囊供试品液。
3、方法考察
3.1测定条件的选择
对显色有影响的因素有：水浴温度、水浴时间、浓度。根据文献资料确定各自水平，对各影响因素作了考察。
3.2水浴温度的考察
吸取对照品溶液1.2ml于三角瓶中，立即加入99％甲醇溶液1ml，混匀，于不同温度水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在281nm波长处测定吸光度，结果表明40℃测得的吸光度较高，故选择40℃为水浴温度。
3.3、甲醇浓度的考察
吸取对照品溶液1.2ml于三角瓶中，分别精密加入85％、90％、95％、99％甲醇1ml，混匀，于40℃水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在281nm波长处测定吸光度，结果表明，95％和99％的甲醇溶液测得的吸光度较好，但95％的甲醇溶解不均匀，取样量不准确，故选择甲醇浓度为99％。
3.4、萃取时间的考察
取肾衰宁药80-100目粗粉六份每份各1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，称重，加热回流1.5，2.0，2.5小时，冷却，称重，用脱脂棉滤过，取续滤液50ml。精密量取续滤液2ml，加乙醇10ml，摇匀，静置12小时，离心，取上清液，置50ml量瓶中，精密量取上清液2ml于三角瓶中，立即加入99％甲醇溶液1ml，混匀，于40℃水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在281nm波长处测定吸光度，结果表明，回流2.0小时和2.5小时比回流1.5小时的含量高，而回流2.0小时和2.5小时的含量相差不大，从经济合理的角度考虑，选取回流时间为2.0小时。
3.5、测定波长的选择
按供试品的制备方法，制备丹参素钠对照品液和肾衰宁胶囊供试品液，并将样品和对照品液在200nm-400nm处进行光谱扫描，结果样品液和对照品液在281nm处都有最大吸收，见图2，故本含量测定选择281nm作为测定波长。
3.6、重复性
吸取肾衰宁胶囊供试品液，用20μL定量进样环重复进样5次，记录峰面积，RSD为0.35％。取同一批次肾衰宁制剂，按“2.3”项制备肾衰宁胶囊供试品液5份，用20μL定量进样环进样，以外标法测定含量，丹参素测定结果的RSD为0.58％。
3.6、稳定性
取同一批次肾衰宁制剂，按上述测定方法，每间隔0.5h测定1次，测得结果表明，肾衰宁胶囊供试品液在12h内测得的结果基本一致。
3.7、线性范围
精密称取丹参素钠对照品16.55mg，置50mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。分别从中精密量取1.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL、9.0mL，分别稀释至10mL后，各取20μL进样，以色谱峰面积为纵坐标，以溶液中丹参素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝9320.69X-891.63，r＝0.9992。结果表明，丹参素在0.0298～0.2681mg/mL范围内与峰面积值呈良好线性关系。
3.8、加样回收率试验
与5个10mL容量瓶中，分别精密加入已知含量的肾衰宁胶囊供试品液4.0mL，再分别加入3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL丹参素钠对照品液后，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按样品测定项下方法测定含量，计算回收率。丹参素的平均回收率为101.28％，RSD为0.471％。
3.9、样品测定
取3个批号的肾衰宁胶囊样品，每批取4份，按“2.3”项制肾衰宁胶囊供试品液。分别取供试液和丹参素钠对照品液10μL进样，以峰面积按外标法计算含量，测定结果见表1。
表1肾衰宁胶囊的含量测定结果(n＝3)
| 批号 | 20090814 | 20090921 | 20090927 |
| 平均含量(mg/g) | 12.199 | 11.546 | 12.381 |
4、结论
4.1肾衰宁胶囊的制备工艺过程中，丹参药材的提取主要以水提取物为主，因此，本发明以丹参中的水溶性成分丹参素在肾衰宁胶囊中的含量作为质量控制标准。实验中通过使用复方肾衰宁胶囊中丹参素的含量测定方法，其测定结果准确性高，可控性强。是一种能对肾衰宁胶囊产品质量进行全面监控、能更加快速、高效，并且对仪器伤害较小的测定方法。
4.2流动相的选择
4.2.1冰醋酸加入的量
在保持甲醇和水比例不变的前提下，改变流动相中冰醋酸的加入量，结果如图2。
图2中：A 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(7∶91∶2)
B 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(8∶91∶1)
C 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(8∶91∶0.1)
在图2中，丹参素峰的T值依次为0.99、0.96、0.89。可以发现，随着流动相中冰醋酸加入量的减少，丹参素峰的对称性逐渐降低。由于实验中使用的是C18柱，随着流动相中冰醋酸加入量的增大，色谱柱的稳定性和使用寿命等会逐渐降低，且对色谱柱的保养和长期也使用不利。考虑以上两方面的原因，按照使用峰面积进行定量计算时，T值在0.95～1.05之间均可，所以选择流动相中加入冰醋酸的量为1。
4.2.2甲醇和水的比例
保持冰醋酸的加入量为1，改变流动相中甲醇和水的比例，结果如图3。
图3中：A 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(8∶91∶0.5)
B 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(19∶80∶1)
C 甲醇-水-冰醋酸methanol-water-acetic acid(30∶70∶0.1)
丹参素峰的R值依次为20.13、9.96和1.34，可以发现。随着流动相中甲醇和水比例的增加，丹参素峰的分离度逐渐降低，而样品中全部组分流出色谱柱所需时间逐渐增大。随着测定时间的延长，色谱峰易发生漂移，且所需流动相增多，实验的成本增高。按照分离度至少应大于1.5的规定，考虑到分析时间和分离度等因素，选用了甲醇-水-冰醋酸(19∶80∶1)为流动相。
4.3生产提取方法
将肾衰宁胶囊中药材，装于聚乙烯管中，内径100cm，样品长度150cm。聚乙烯管两端用脱脂棉塞住，一端连接蠕动泵，一端连接样品接受器。将该聚乙烯管放入微波谐振腔中，使原料位于该谐振腔的3/4波长处。萃取剂通过蠕动泵进入，流经物料后进入接收器，共接收3000kg萃取液。
表2肾衰宁胶囊图谱中共有指纹峰的相对保留时间
表3肾衰宁胶囊指纹图谱中共有指纹峰相对峰面积
表4肾衰宁胶囊HPLC中指纹图谱相似度
| 样品编号 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | S10 | S11 | S12 | S13 | 对照指纹图谱 |
| 相似度 | 0.986 | 0.984 | 0.979 | 0.917 | 0.905 | 0.913 | 0.969 | 0.948 | 0.973 | 0.987 | 0.988 | 0.962 | 0.943 | 1.000 |
Claims (3)
1.使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法，其特征在于，步骤如下：
(1)肾衰宁胶囊供试溶液制备：准确称取肾衰宁胶囊12粒，0.35g/粒，于25mL量瓶中，轻轻压破，加入甲醇15mL，于40℃水浴中超声10min，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度，离心5min，取上清液为衰宁胶囊供试溶液；
(2)对照品溶液的制备：精密称取丹参素钠对照品1.66mg，置10mL量瓶中，于40℃水浴中超声10min，取出，置冰水浴中5分钟，取出，加甲醇至刻度摇匀，为对照品溶液；
(3)色谱条件：色谱柱为Inertsil ODS-3，4.6X 150mm 5μm；流动相为甲醇-水-冰醋酸，体积比为19∶80∶1；流速：1.0ml/min；检测波长为281nm；灵敏度：0.01AUFS；进样量：10μL；柱温：40℃，理论塔板数：按丹参素色谱峰计不小于5000；
(4)测定法：分别精密吸取丹参素钠对照品溶液和肾衰宁胶囊供试溶液各10mL，注入液相色谱仪，测定肾衰宁胶囊供试溶液应呈现与丹参素钠对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰。
2.根据权利要求1所述的使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法，其特征在于，步骤(2)所述的丹参素钠对照品使用前现配制，避光、低温保存。
3.根据权利要求1所述的使用HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法，其特征在于，所采用的甲醇为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102182408A CN101816715B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102182408A CN101816715B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101816715A CN101816715A (zh) | 2010-09-01 |
| CN101816715B true CN101816715B (zh) | 2012-03-28 |
Family
ID=42652092
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009102182408A Active CN101816715B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101816715B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103071006B (zh) * | 2013-02-07 | 2014-10-22 | 云南理想药业有限公司 | 一种治疗肾功能衰竭中药的制备方法 |
| CN103592392B (zh) * | 2013-11-25 | 2015-02-11 | 山西振东安特生物制药有限公司 | 脑震宁制剂中的丹参素含量测定方法 |
| CN105486790B (zh) * | 2015-11-18 | 2018-06-19 | 山西德元堂药业有限公司 | 肾衰宁颗粒的指纹图谱检测方法 |
| CN111198234A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-05-26 | 安领生物医药(苏州)有限公司 | 测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法 |
| CN114636760B (zh) * | 2020-12-15 | 2024-01-02 | 云南雷允上理想药业有限公司 | 一种治疗肾脏疾病的中药组合物的指纹图谱建立方法及其应用 |
-
2009
- 2009-11-24 CN CN2009102182408A patent/CN101816715B/zh active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 张明.中药肾衰宁颗粒的剂型改革与质量标准研究.《中药肾衰宁颗粒的剂型改革与质量标准研究》.2006,14. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101816715A (zh) | 2010-09-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101816715B (zh) | 使用hplc法测定肾衰宁胶囊中丹参素含量的方法 | |
| CN104614456A (zh) | 一种同时检测血浆中脑心通胶囊主要成分的方法 | |
| CN103954719B (zh) | 小儿消积止咳口服液hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN102928523B (zh) | 一种野菊花指纹图谱的测定方法和野菊花的检测方法 | |
| CN102038728A (zh) | 灯盏细辛药材的质量控制方法 | |
| CN103207255A (zh) | 一种脑心通胶囊的含量检测方法 | |
| CN104730171A (zh) | 一种中药复方制剂中赤芍、金银花多指标成分含量测定方法 | |
| CN101028460B (zh) | 一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法 | |
| CN103969350A (zh) | 一种穿王消炎胶囊hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN104316613A (zh) | 一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法 | |
| CN104849375B (zh) | 橘红痰咳制剂的检测方法 | |
| CN104502485A (zh) | 由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂中6个化学成分的定量分析方法 | |
| CN104007198B (zh) | 一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用 | |
| CN109856270A (zh) | 一种用高效液相色谱法同时测定华盖散配方颗粒中7个指标成分的方法 | |
| CN101221153B (zh) | 蜜环菌液体发酵产物hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN103316102B (zh) | 治疗痔疮外用中药制剂的检测方法 | |
| CN103424476A (zh) | 同时测定丹参多酚酸中4种水溶性成分的方法 | |
| CN101961405A (zh) | 检测复方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法 | |
| CN102680593B (zh) | 一种行气活血、化瘀通脉的药物组合物的检测方法 | |
| CN1790013B (zh) | 一种同时测定生脉注射液中原儿茶酸和5-羟甲基糠醛含量的方法 | |
| CN109709222A (zh) | 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法 | |
| CN101596229B (zh) | 猴耳环提取物及其制剂的质量控制方法 | |
| CN103969356A (zh) | 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN103675135A (zh) | 一种中药组合物的含量测定方法 | |
| CN100522198C (zh) | 前列安通胶囊的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for measuring content of Danshensu in shenshuaining capsules by utilizing HPLC method Effective date of registration: 20141117 Granted publication date: 20120328 Pledgee: China Merchants Bank Limited by Share Ltd. Kunming hi tech sub branch Pledgor: Luo Shi|YUNNAN LIXIANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: 2014990000950 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20160519 Granted publication date: 20120328 Pledgee: China Merchants Bank Limited by Share Ltd. Kunming hi tech sub branch Pledgor: Luo Shi|YUNNAN LIXIANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: 2014990000950 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for measuring content of Danshensu in shenshuaining capsules by utilizing HPLC method Effective date of registration: 20160520 Granted publication date: 20120328 Pledgee: China Merchants Bank Limited by Share Ltd. Kunming branch Pledgor: YUNNAN LIXIANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.|Luo Shi Registration number: 2016990000388 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 650503 Kunming new town high tech industrial base, Hing Street, No. 39, Yunnan Co-patentee after: Luo Shi Patentee after: YUNNAN LEIYUNSHANG LIXIANG PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Address before: 650106 Kunming national hi tech Industrial Development Zone, Yunnan Province, Jin Road, No. 139 Co-patentee before: Luo Shi Patentee before: YUNNAN LIXIANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No. 39 Huanxing Street, High tech Industrial Base, Kunming New City, Yunnan Province, 650503 Patentee after: Yunnan Leiyunshang Pharmaceutical Co.,Ltd. Country or region after: China Patentee after: Luo Shi Address before: No. 39 Huanxing Street, High tech Industrial Base, Kunming New City, Yunnan Province, 650503 Patentee before: YUNNAN LEIYUNSHANG LIXIANG PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Country or region before: China Patentee before: Luo Shi |