CN101816283A - 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 - Google Patents
一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101816283A CN101816283A CN201010164136A CN201010164136A CN101816283A CN 101816283 A CN101816283 A CN 101816283A CN 201010164136 A CN201010164136 A CN 201010164136A CN 201010164136 A CN201010164136 A CN 201010164136A CN 101816283 A CN101816283 A CN 101816283A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- seed
- root
- bud
- hybridizing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 241000173289 Cymbidium goeringii Species 0.000 title claims abstract description 15
- 235000017141 Cymbidium goeringii Nutrition 0.000 title claims abstract description 14
- 238000009331 sowing Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 230000010152 pollination Effects 0.000 claims abstract description 38
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 24
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 18
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 18
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 12
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 12
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 claims description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 5
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 5
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 abstract description 9
- 230000035784 germination Effects 0.000 abstract description 6
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 2
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 16
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 15
- 241000732800 Cymbidium Species 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 3
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 3
- 241001136239 Cymbidium hybrid cultivar Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000008117 seed development Effects 0.000 description 3
- ISOVWEWRUVBJME-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triphenyltetrazole Chemical class C1=NN(C=2C=CC=CC=2)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 ISOVWEWRUVBJME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 1H-tetrazole Chemical compound C=1N=NNN=1 KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 2
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 2
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 240000005250 Chrysanthemum indicum Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 240000002514 Cymbidium ensifolium Species 0.000 description 1
- 241000173290 Cymbidium faberi Species 0.000 description 1
- 241000173256 Cymbidium kanran Species 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- 241000201976 Polycarpon Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- 241000212346 Spermolepis Species 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- XOSXWYQMOYSSKB-UHFFFAOYSA-M disodium;4-[4-[(4-amino-3-methyl-5-sulfophenyl)-[4-(4-sulfonatophenyl)azaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]anilino]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].OS(=O)(=O)C1=C(N)C(C)=CC(C(=C2C=CC(C=C2)=[NH+]C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(NC=3C=CC(=CC=3)S([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 XOSXWYQMOYSSKB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y02P60/216—
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
本发明提供一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，通过人工授粉后获得杂交种子，待朔果未完全成熟时采下、经表面消毒后进行无菌播种，在黑暗中培养、萌发后获得根状茎、接入诱导芽培养基，根状茎诱导芽、生根壮苗培养及试管苗移栽等步骤。本发明采用三种经筛选优化的培养基，使春兰杂交种子萌发率高，育苗周期缩短，种苗品质好。本发明的整套方法，可操作性强，较好的解决了春兰杂交种子由于胚发育不完全，自然条件下极难萌发的困难，具有较高的应用和推广价值。
Description
技术领域
本发明属于植物生物技术领域，具体为春兰的杂交育种和种子繁殖方法。
背景技术
兰花是我国的传统特色花卉，中国兰通常是指兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidum)植物中一部分地生种，如春兰(C.goeringii)、蕙兰(C.faberi)、建兰(C.ensifolium)、墨兰(C.sinense)和寒兰(C.kanran)等。兰花淡雅幽香，倍受诗画赞美，被誉为“花中君子”，儒家文化崇尚“君子比德”，常以花喻人，使得兰花在东南亚国家也十分流行。兰花优良品种量少价高，主要靠引种驯化获得新品种，自20世纪80年代以来，各地利用当地的资源优势，进行了大规模的引种选育工作，即为野外大量挖掘后栽培筛选，虽然培育出了一批新品种，但对野生资源的破坏也是有目共睹的。近十几年来，国内开展了针对当地国兰资源特色的杂交育种科研，如广东的墨兰，福建的建兰和寒兰，四川的春剑和云南的莲瓣兰等，由于兰花种子极为细小，一粒朔果中有成千上万的种子，但种子没有胚乳和子叶，透明种皮内只有一发育不完全的蝌蚪形胚，常规播种很难萌发，因此必须通过组培无菌播种的方法进行萌发。各地国兰的杂交研究有这明显的地域性，有的主要以科研为主，选择的亲本多为性状一般的草兰、草兰的自然杂交或自交，这对优秀后代的获得不利。江浙是春兰和蕙兰的主产区，沿海经济发达，爱兰人士众多，兰花新品种价格奇高，使得野外挖掘量大，交易频繁，资源破坏严重，因此，发挥江浙当地的春兰资源优势，有目的地选择性状优良的亲本，开展春兰品种间以及和兰属内的其它种进行种间杂交，成功研发出春兰杂交种子无菌播种，提高萌发率，根状茎诱导芽，生根壮苗培养和试管苗移栽等无菌播种成苗的关键技术，从而选育幽香、花型、花色、彩斑、株型、抗病或生长快速等特性的兰花新品种，其科研、环保和生产意义非常重大，是对国兰早日产业化和可持续发展的有力保证。
发明内容
本发明的目的是针对春兰杂交育种和种子无菌播种中，如何提高优良品种授粉结实率、种子萌发率、诱芽成苗率和试管苗移栽成活率等，提出一种使杂交成苗快、品质好，高效、简便、推广性强的春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，是通过解决亲本选择、授粉培育、果实消毒、前期暗培养、播种成苗过程的三种培养基筛选、移栽介质筛选等关键技术，来实现发明的目的。
本发明一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，具体通过以下步骤实现：
(1)获得人工授粉的杂交种子：以具有性状优势互补的春兰名品为亲本(母本)，开花2～20天内进行人工授粉，为防昆虫，授粉前亲本的唇瓣要去掉，授粉前后要用透气白色无纺布包盖蕊柱或整朵花套授粉袋，若花期不遇，花粉块可在3～5℃低温、干燥(硅胶)条件下冷藏备用。所述春兰名品是在瓣型、花色、花大或彩叶上有优势的品种。
所述人工授粉的操作为兰花授粉的常规方法，是用尖头的钟表镊子将亲本的花药帽去掉，将两个大花粉块取下，分别放在干净的白纸上，两个大花粉块可以自然分成4小块，将父本花粉块用镊子捡取小心地放在母本的蕊柱凹槽处，注意手势轻巧，防止镊子尖头碰伤蕊柱凹槽壁，4个花粉块可以授4朵花，以作后备选择，从而保证授粉的成功率，父母本也可以互为进行正反交，所述人工授粉的操作为兰花授粉的常规方法，开花授粉的时间段为春兰上试验结果。
为防昆虫，授粉前亲本的唇瓣可去掉，防止昆虫停留，授粉前与授粉后要用小块的透气白色无纺布包盖蕊柱，或是用透气的半透明纸做的授粉袋套住整朵花，待授粉成功后再去掉。
若亲本花期不遇，可将父本的花粉块取下放于小的自封口塑料袋、小注射药瓶或塑料指形管中盖好，再放到有干燥剂硅胶铺垫的塑料饭盒中，在干燥低温(3～5℃)的冰箱中冷藏备用，当母本开花时，将保存的父本花粉块取出，放在白纸上，在温度(20～25℃左右)和湿度(70～80％)适宜的自然环境下放置30～40分钟，再进行授粉。
用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法可以测定花粉块生活力，配制0.5％的四氮唑溶液，每月对花粉块取样，将花粉块放在载玻片上，加一滴四氮唑溶液，在适宜的温湿度环境下放置20～30分钟后观察着色情况，呈红色为正常花粉，结果表明花粉块可保存8～10月。
人工授粉后，结实期长达5～7个月，必须要加强肥水管理，可以施用爱贝施(APEX)2号或好康多1号长效缓释颗粒肥，每盆5～10克左右，以促进结实，并获得量多的种子，如果因管理不当或亲缘关系较远，后期出现败育，果柄脱落，可尝试提前进行胚抢救处理，但由于种子发育还不够成熟，呈浆状或种子量少，萌发就极为困难。
(2)无菌播种：待朔果未完全成熟时采下，清洗果实表面，用10％的次氯酸钠(NaClO)浸泡10～20分钟进行表面消毒，无菌水冲洗，用滴管吸取悬浮于无菌水中的种子，均匀滴播于播种培养基上。播种培养基：1/2MS+NAA4～5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4。所述的朔果未完全成熟时，是指朔果膨大、表面呈黄绿色、达到八成熟未开裂时。
成熟开裂的果实对消毒和萌发都不利。无菌播种方法是切除多余果柄，清洗果实表面，将果实放入烧杯，经自来水冲洗30分钟后，放在超净工作台上，用70～75％酒精浸泡30秒钟，无菌水冲洗3次，再经10％次氯酸钠溶液浸泡10～20分钟进行表面消毒，无菌水冲洗5次，将消毒好的果实放在无菌滤纸上纵切，可以看到大量细如白絮的种子，将种子刮入装有无菌水的烧杯中，使种子呈悬浮状态，用无菌滴管吸入，均匀滴播于播种培养基上，轻摇三角瓶，使种子均匀分布在培养基表面，三角瓶放在20～25℃的黑暗条件下培养2～3个月，促进种子后熟，以后再放到散射光下培养，光照强度800～1000lux，每天光照12小时，播种3个月左右，种子内的胚发育突破种皮，形成原球茎(protocorm)，原球茎继续生长，伸长，形成根状茎(rhizome)。根状茎可以直接诱导芽，也可以保持在继代增殖状态。
播种培养基中1/2MS是指MS(Murashige-Skoog 1962)基本培养基的母液1、母液2和母液3等大量元素母液的用量减半，其它铁盐、微量元素和维生素母液用量保持不变。培养基略偏酸性或琼脂量减少些，使凝固度低，培养基偏软些，对种子萌发更有利。
种子发育镜检：可以用来判断种子发育的完好程度，对萌发率有影响，方法是将消毒后没播完的种子用滴管吸入，滴于载玻片上，根据种子数决定滴几滴，一般是1～2滴，盖上盖玻片时防止气泡产生，在OLMPUS万能生物显微镜下进行观察，在2.5×目镜和4×物镜下选取10个镜面，统计好胚、弱胚、无胚的个数，计算出好胚率。一般种子大致可以分成三类：饱满、发育正常的种子(好胚)；发育不良、胚乳较小的种子(弱胚)；没有胚、空壳的败育种子(无胚)。只有发育正常的种子，才能在适宜的培养基和环境下萌发。
(3)根状茎诱导芽：播种后在黑暗中培养，使种子在模拟自然生态条件的环境以及富有营养的培养基中后熟生长，萌发后获得根状茎，待根状茎长至1.5～2cm长时，接入诱导芽培养基，放在温度20～25℃，在双支日光灯光照强度2500lux左右，光照12小时/天的条件下培养2～3个月，在根状茎的顶端和侧面有芽点抽出，伸长，当芽高4-5cm时可转至生根壮苗培养。
为了得到一定数量的同一株系，根状茎可以分割，进行不断的继代增殖培养，培养温度20～25℃，单支日光灯的光照条件下培养，光照强度800～1000lux左右。
根状茎诱导芽培养基：1/2MS+NAA0.2～0.5mg/l+BA1～2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4，注意诱导芽培养基不需要添加活性炭，它会严重抑制芽的生长。
根状茎继代增殖培养基：1/2MS+NAA3～4mg/l+BA0.1～0.2mg/l+蛋白胨2～3g/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4，添加外源营养物质蛋白胨，可以使根状茎生长更粗壮。
(4)生根壮苗培养：将芽高4-5cm时可转至生根壮苗培养，放在温度20～25℃，双支日光灯光照强度2500lux左右，光照12小时/天的条件下培养2～3个月，在培养后期的1～2个月，可放在温室内，靠自然光照培养，可以节省能源。
生根壮苗培养基：1/2MS+NAA 1～2mg/l+IBA0.2～0.5mg/l+BA0.5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4，在生根壮苗阶段，如果有条件，可以添加30～50g/l的椰子粉，能使根更加粗壮些。
(5)试管苗移栽：当小苗高约7cm，根数2～3条，叶片3～4片，即可移栽，炼苗成活率高达85～90％，移栽介质以珍珠岩、蛭石和泥炭2∶1∶1为好。
优质试管苗可提高移栽成活率及移栽成活后的生长量，有利于提早开花。春兰生长较慢，因此，试管苗的移栽养护技术难度较大。除培养壮苗外，应注意介质、光照、温度、水份、营养等因素与兰花生物学特性的协调统一。移栽具体方法是开瓶口炼苗7～15天，在有细孔的塑料筐内装满介质(珍珠岩、蛭石和泥炭以2∶1∶1混合为好)，将洗净根部琼脂的小苗种植于筐内，介质填埋于根茎部位，不要种植太深，以防止通气不够，引起茎腐烂，种好后先放置在高湿弱光(1500lux)条件缓苗10～15天，以后放在15℃～25℃，空气相对湿度70％左右，光线稍强的条件下养护，1～2个月喷施1/1000的营养液和抗菌剂，控制浇水量为栽种的秘诀，成活率可达85～90％，兰苗年生长量达5～8cm，经3～5年种植可开花选择。
本发明所具有的优点及效果：
(1)本发明得出在开花2～20天之内进行人工授粉，以及花期不遇时，对父本花粉块的干燥低温(3～5℃)冷藏等方法，使得花期合适的优良亲本的杂交成功率高达100％，特别对一些花期不遇的优良亲本杂交成功率也达70～90％。
(2)本发明采用10％次氯酸钠溶液进行蒴果消毒，消毒效果好，不污染，可以代替0.1％的氯化汞消毒液，从而使该技术更安全环保，便于大规模的推广应用。
(3)本发明试验成功在播种期采用暗培养，促进种子后熟萌发，在根状茎增殖期采用弱光培养，在生根壮苗的后期放在温室中培养的方法，均取得较好的萌发率、生长量以及壮苗量，这使得组培中大量耗电的普遍问题，在本发明中得到一定的解决，能节约能源，降低成本。
(4)本发明筛选优化的无菌播种、根状茎诱导芽和生根壮苗培养的三种培养基，有着简便易配制，适用性广而效果好的特点，使得春兰杂交种子萌发率高，育苗周期缩短，种苗品质好，较好的解决了春兰杂交种子由于胚发育不完全，自然条件下极难萌发的困难，本发明具有较高的应用和推广价值。
附图说明
图1为春兰蒴果。
图2为果实消毒。
图3为蒴果内飞絮状的兰花种子。
图4为种子镜检——好胚、弱胚、无胚。
图5为无菌播种。
图6为种子萌发成根状茎。
图7为根状茎诱导芽。
图8为生根壮苗培养。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明，但本发明的内容不是仅限于此。
实施例一
春兰大富贵和绿云的杂交和种子无菌播种育苗方法：
(1)人工授粉：在2月中下旬，两个亲本同时开花时，可以互为父母本，进行正反交，授粉前后都要注意防止昆虫影响，授粉时用尖头的钟表镊子将亲本的花粉块取下，互相交换后，再将父本花粉块用镊子捡取小心地放在母本的蕊柱凹槽处，注意手势轻巧，防止镊子尖头碰伤蕊柱槽壁，1朵花的花粉块可以授2～4朵花，授粉后要用小块的白色无纺布包盖蕊柱或用半透明纸做的授粉袋套住整朵花，挂上塑料牌，写清楚父母本、授粉日期和授粉人，待15～30天后检查授粉膨大情况，若授粉成功，可以去掉无纺布或授粉袋。结果率100％。
(2)无菌播种：10月中旬，剪下蒴果，流水冲洗30分钟，在超净台上，用75％酒精浸泡30秒，无菌水冲洗3次，再经10％次氯酸钠溶液浸泡15分钟，无菌水冲洗5次，将果实纵切，取种子播于培养基上，暗培养，种子镜检好胚率100％。80天后形成根状茎，种子萌发率8％。播种培养基为1/2MS+NAA5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(3)根状茎诱导芽：播种获得的根状茎长至1.5～2cm长时，可以接入诱芽培养基，在光照下培养3个月(温度20～25℃、光照强度2500lux)，诱芽率100％，当芽高约4cm时可转至生根壮苗培养。根状茎诱导芽培养基为1/2MS+NAA0.5mg/l+BA2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(4)生根壮苗培养：高约4cm的芽接入生根壮苗培养基，放在光照下培养3个月(温度20～25℃、光照强度2500lux)，生根率95％，生根壮苗培养基为1/2MS+NAA 2mg/l+IBA0.5mg/l+BA0.5mg/l+椰子粉50g/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(5)试管苗移栽：当小苗高约7cm，根数2～3条，叶片3～4片，根苗茁壮，即可移栽。移栽具体方法是开瓶口炼苗10天，在有细孔的塑料筐内装满介质(珍珠岩、蛭石和泥炭以2∶1∶1混合为好)，将洗净根部琼脂的小苗种植于筐内，介质填埋于根茎部位，不要种植太深，以防止通气不够，引起茎腐烂，种好后先放置在高湿弱光(1500lux)条件缓苗10天，以后放在15℃～25℃，空气相对湿度70％左右，光线稍强的条件下养护，每隔1个月喷施1/1000的营养液，春季按用量喷抗菌剂和预防介壳虫药共3次，日常控制浇水量，介质要干湿间隔，不要一直太湿，造成不通气而烂根，移栽成活率可达90％左右。
实施例二
春兰集圆(♀)和元红的杂交和种子无菌播种育苗方法：
(1)人工授粉：元红花期早于集圆20天，将元红花粉块取下，放在小的塑料自封袋里，在干燥(硅胶)低温(5℃)的冰箱中保存，当集圆开花时，将冷藏的花粉块取出放于白纸上，在温湿度适宜的环境(温度20～25℃、湿度70～75％)下放置30分钟，个别抽样用TTC染色法测定，被测花粉块均有生活力，将其余的花粉块授于集圆的蕊柱上，授粉后要用小块的白色无纺布包盖蕊柱或用半透明纸做的授粉袋套住整朵花，挂上塑料牌，写清楚父母本、授粉日期和授粉人，待15～30天后检查授粉膨大情况，若授粉成功，可以去掉无纺布或授粉袋。结果率87％。
(2)无菌播种：9月下旬，待朔果八成熟未开裂，表面呈黄绿色时剪下(参见图1)，自来水冲洗30分钟，在超净台上，用75％酒精浸泡30秒，无菌水冲洗3次，再经10％次氯酸钠溶液浸泡15分钟(参见图2)，无菌水冲洗5次，将果实纵切(参见图3)，让种子悬浮于无菌水中，吸取种子播于培养基上(参见图5)，在20～25℃的黑暗条件下培养，促进种子后熟，种子镜检好胚率65％(参见图4)。90天后形成根状茎(参见图6)，转移到散射光下培养(光照强度1000lux)，种子萌发率5％。播种培养基为1/2MS+NAA5mg/l+IBA0.5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(3)根状茎诱导芽：播种获得的根状茎长至1.5～2cm长时，可以接入诱芽培养基，在光照下培养3个月(温度20～25℃、光照强度2500lux)，诱芽率95％(参见图7)，当芽高约4cm时可转至生根壮苗培养。根状茎诱导芽培养基为1/2MS+NAA0.5mg/l+BA2mg/l+KT0.2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(4)生根壮苗培养：高约4cm的芽接入生根壮苗培养基，放在光照下培养3个月(温度20～25℃、光照强度2500lux)，在培养后期的1～2个月，可放在温室内，靠自然光照培养，可以省电。生根率90％(参见图8)，生根壮苗培养基为1/2MS+NAA 2mg/l+IBA0.5mg/l+BA0.5mg/l+椰子粉50g/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂10g/l，pH5.4。
(5)试管苗移栽：当小苗高约7cm，根数2～3条，叶片3～4片，根苗茁壮，即可移栽。具体方法是开瓶口炼苗10天，在有细孔的塑料筐内装满介质(珍珠岩、蛭石和泥炭以2∶1∶1混合为好)，将洗净根部琼脂的小苗种植于筐内，介质填埋于根茎部位，不要种植太深，以防止通气不够，引起根茎部位腐烂，种好后先放置在高湿弱光(1500lux)条件缓苗10天，以后放在15℃～25℃，空气相对湿度70％左右，光线稍强的条件下养护，每隔1个月喷施1/1000的营养液，春季按用量喷抗菌剂和预防介壳虫药共3次，日常控制浇水量，介质要干湿间隔，不要一直太湿，造成不通气而烂根，移栽成活率可达85％左右。
Claims (6)
1.一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，通过以下步骤实现：
(1)获得人工授粉的杂交种子：以具有性状优势互补的春兰名品为亲本，开花2～20天内进行人工授粉，为防昆虫，授粉前亲本的唇瓣要去掉，授粉前后要用透气白色无纺布包盖蕊柱或整朵花套授粉袋，若花期不遇，花粉块可在3～5℃低温、干燥条件下冷藏备用；
(2)无菌播种：待朔果未完全成熟时采下，清洗果实表面，用10％的次氯酸钠浸泡10～20分钟进行表面消毒，无菌水冲洗，用滴管吸取悬浮于无菌水中的种子，均匀滴播于播种培养基上，播种培养基为：1/2MS+NAA4～5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4；
(3)根状茎诱导芽：播种后在黑暗中培养，萌发后待根状茎长至1.5～2cm长时，接入诱导芽培养基，放在温度20～25℃，在光照强度2500lux左右，光照12小时/天的条件下培养2～3个月，在根状茎的顶端和侧面有芽点抽出，伸长，当芽高4-5cm时可转至生根壮苗培养，根状茎诱导芽培养基为：1/2MS+NAA0.2～0.5mg/l+BA1～2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4；
(4)生根壮苗培养：待芽高4-5cm时转至生根壮苗培养，放在温度20～25℃，光照强度2500lux左右，光照12小时/天的条件下培养2～3个月，在培养后期的1～2个月，放在温室内，靠自然光照培养，生根壮苗培养基：1/2MS+NAA 1～2mg/l+IBA0.2～0.5mg/l+BA0.5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4；
(5)试管苗移栽：当小苗长至高6-7cm，根数2～3条，叶片3～4片时，即移栽，移栽介质为珍珠岩∶蛭石∶泥炭＝2∶1∶1。
2.根据权利要求1中所述一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，其特征在于，步骤(1)所述春兰名品是指在瓣型、花色、花大或彩叶上有优势的品种。
3.根据权利要求1中所述一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，其特征在于，步骤(1)中，若亲本花期不遇，可将父本的花粉块取下放于小的自封口塑料袋、小注射药瓶或塑料指形管中盖好，再放到有干燥剂硅胶铺垫的塑料饭盒中，在干燥、3～5℃低温的冰箱中冷藏备用，当母本开花时，将保存的父本花粉块取出，放在白纸上，在20～25℃温度和70～80％湿度的自然环境下放置30～40分钟，再进行授粉。
4.根据权利要求1中所述一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，其特征在于，步骤(2)所述的朔果未完全成熟，是指朔果膨大、表面呈黄绿色、达到八成熟未开裂。
5.根据权利要求1中所述一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，其特征在于，步骤(3)所述根状茎可以直接诱导芽，也可以保持在继代增殖状态。
6.根据权利要求1中所述一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法，其特征在于，步骤(3)中为了得到一定数量的同一株系，根状茎可以分割，进行不断的继代增殖培养，培养温度20～25℃，单支日光灯的光照条件下培养，光照强度800～1000lux左右，根状茎继代增殖培养基为：1/2MS+NAA3～4mg/l+BA0.1～0.2mg/l+蛋白胨2～3g/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+琼脂8～10g/l，pH5.4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101641368A CN101816283B (zh) | 2010-05-05 | 2010-05-05 | 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101641368A CN101816283B (zh) | 2010-05-05 | 2010-05-05 | 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101816283A true CN101816283A (zh) | 2010-09-01 |
| CN101816283B CN101816283B (zh) | 2011-12-07 |
Family
ID=42651688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101641368A Expired - Fee Related CN101816283B (zh) | 2010-05-05 | 2010-05-05 | 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101816283B (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102379242A (zh) * | 2011-08-29 | 2012-03-21 | 张笑逸 | 中国地生兰花原生细胞胚超声波破壁培养法 |
| CN102783401A (zh) * | 2012-08-06 | 2012-11-21 | 云南农业大学 | 一种利用试管水琼脂培养基栽培水稻测量根长的方法 |
| CN103548669A (zh) * | 2013-10-22 | 2014-02-05 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种促进建兰种子非共生萌发的方法 |
| CN103704130A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-09 | 江苏里下河地区农业科学研究所 | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 |
| CN104285803A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-21 | 柳州市天姿园艺有限公司 | 线叶春兰专用培养基 |
| CN105325287A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-02-17 | 长江大学 | 微小植物种子及花粉的消毒与接种方法 |
| CN106538386A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-29 | 福建农林大学 | 一种杂交春兰的试管开花技术 |
| CN111183900A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-05-22 | 贵州大学 | 一种高效获得红花无菌苗的方法 |
| CN113179948A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-07-30 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种兔耳兰无菌播种培养基配方及组织培养方法 |
| CN114303954A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-04-12 | 杭州市农业科学研究院 | 墨兰×春兰杂交兰后代根状茎分化成苗的方法 |
| CN115918539A (zh) * | 2022-12-23 | 2023-04-07 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种贵州地宝兰试管开花及结实的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1404724A (zh) * | 2002-11-07 | 2003-03-26 | 中国科学院武汉植物研究所 | 春兰的快速繁殖方法 |
| CN1799336A (zh) * | 2005-12-16 | 2006-07-12 | 江苏阳光生态农林开发股份有限公司 | 春兰种子组织培养育苗方法 |
| CN1994062A (zh) * | 2006-12-27 | 2007-07-11 | 李�杰 | 一种春兰的育种方法 |
-
2010
- 2010-05-05 CN CN2010101641368A patent/CN101816283B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1404724A (zh) * | 2002-11-07 | 2003-03-26 | 中国科学院武汉植物研究所 | 春兰的快速繁殖方法 |
| CN1799336A (zh) * | 2005-12-16 | 2006-07-12 | 江苏阳光生态农林开发股份有限公司 | 春兰种子组织培养育苗方法 |
| CN1994062A (zh) * | 2006-12-27 | 2007-07-11 | 李�杰 | 一种春兰的育种方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 《安徽农学通报》 20061231 孙志栋等 中国春兰组织培养初探 20-21 1-6 第12卷, 第1期 2 * |
| 《安徽农学通报》 20071231 钟雨薇 春兰无菌播种技术研究 87-88 1-6 第13卷, 第20期 2 * |
| 《核农学报》 20091231 孔凡龙等 春兰离体根状茎生长和分化的研究 253-256 1-6 第23卷, 第2期 2 * |
| 《植物生理学通讯》 19931231 张菊野等 几种影响春兰原球茎生长与分化的因素 175-178 1-6 第29卷, 第3期 2 * |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102379242A (zh) * | 2011-08-29 | 2012-03-21 | 张笑逸 | 中国地生兰花原生细胞胚超声波破壁培养法 |
| CN102783401A (zh) * | 2012-08-06 | 2012-11-21 | 云南农业大学 | 一种利用试管水琼脂培养基栽培水稻测量根长的方法 |
| CN103548669A (zh) * | 2013-10-22 | 2014-02-05 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种促进建兰种子非共生萌发的方法 |
| CN103548669B (zh) * | 2013-10-22 | 2015-07-08 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种促进建兰种子非共生萌发的方法 |
| CN103704130B (zh) * | 2014-01-03 | 2016-04-27 | 江苏里下河地区农业科学研究所 | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 |
| CN103704130A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-09 | 江苏里下河地区农业科学研究所 | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 |
| CN104285803B (zh) * | 2014-10-24 | 2016-06-29 | 柳州市天姿园艺有限公司 | 线叶春兰专用培养基 |
| CN104285803A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-21 | 柳州市天姿园艺有限公司 | 线叶春兰专用培养基 |
| CN105325287A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-02-17 | 长江大学 | 微小植物种子及花粉的消毒与接种方法 |
| CN106538386A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-29 | 福建农林大学 | 一种杂交春兰的试管开花技术 |
| CN111183900A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-05-22 | 贵州大学 | 一种高效获得红花无菌苗的方法 |
| CN113179948A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-07-30 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种兔耳兰无菌播种培养基配方及组织培养方法 |
| CN113179948B (zh) * | 2021-04-22 | 2023-01-13 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种兔耳兰无菌播种培养基配方及组织培养方法 |
| CN114303954A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-04-12 | 杭州市农业科学研究院 | 墨兰×春兰杂交兰后代根状茎分化成苗的方法 |
| CN114303954B (zh) * | 2022-01-06 | 2023-02-28 | 杭州市农业科学研究院 | 墨兰×春兰杂交兰后代根状茎分化成苗的方法 |
| CN115918539A (zh) * | 2022-12-23 | 2023-04-07 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种贵州地宝兰试管开花及结实的方法 |
| CN115918539B (zh) * | 2022-12-23 | 2023-10-03 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种贵州地宝兰试管开花及结实的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101816283B (zh) | 2011-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101816283B (zh) | 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 | |
| CN101822220B (zh) | 一种春兰名品茎尖组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105706900B (zh) | 杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法 | |
| CN103704130B (zh) | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 | |
| CN103416294A (zh) | 同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法 | |
| CN101124889B (zh) | 用种子类原球茎诱导四倍体秋石斛兰新品种的方法 | |
| CN101116424B (zh) | 高效诱导培养百合小鳞茎的方法 | |
| CN104885773A (zh) | 一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法 | |
| CN106386488B (zh) | 一种提高大花型兜兰种子萌发率及其栽培方法 | |
| CN106417014B (zh) | 一种大花型兜兰育种与栽培方法 | |
| CN103004604A (zh) | 一种万代兰品种的繁育方法 | |
| CN102613087B (zh) | 生物组织培养繁育考来木的方法 | |
| CN101855995B (zh) | 川东灯台报春的组培繁殖方法 | |
| CN106489730B (zh) | 一种火焰兰一次成苗快速繁殖方法及培养基 | |
| CN106857258A (zh) | 一种带叶兜兰的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103583361B (zh) | 一种沙枣组织培养方法 | |
| CN108260530A (zh) | 一种白芨壮苗生根的培养基及其应用 | |
| CN103858768A (zh) | 一种鸡蛋花的组织培养方法 | |
| CN1255023C (zh) | 火焰兰的快速繁殖方法 | |
| CN114190277A (zh) | 一种促进大根兰试管开花和结实的方法 | |
| CN106612735A (zh) | 一种促进路易斯安娜鸢尾种子萌发成苗的方法 | |
| CN102763598B (zh) | 利用体细胞胚繁育文山兜兰苗的方法 | |
| CN107568063B (zh) | 一种油料植物白檀组培快繁方法 | |
| CN102308749B (zh) | 一种红王子锦带花药诱导花粉植株培养基 | |
| CN101077062B (zh) | 红头兰(Tuberolabium quisumbingii)的组织培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20111207 Termination date: 20140505 |