CN1799336A - 春兰种子组织培养育苗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种采用春兰种子组织培养育苗方法，它包括以下工艺步骤：取春兰未裂开的蒴果，为外植体；用酒精浸泡或用药棉蘸酒精揩试春兰蒴果表面，切开春兰蒴果，取出春兰粉沫状种子，装入细布袋内，用酒精浸泡，再放入0.08～0.12mol/L NaoH溶液中处理8～10分钟，最后放入10.5±2％次氯酸钠溶液中6～8分种；把经处理的春兰种子均匀地播种在种子萌发培养基上，每天光照14～16小时，光照强度1000～1500lux，温度23±2℃，培养160～180天，即可生长为原球茎；将原球茎转接到上述同样的种子萌发培养基中继代培养，50～60天，长成新芽或原球茎，以后不断切割原球茎继代，即可几何级数增长。本发明采用春兰种子组织培育方法，既可繁殖优良品种，又可从种子实生苗中选择优异兰株。

Description

春兰种子组织培养育苗方法
技术领域：
本发明涉及一种植物组织培养技术领域，特别是涉及一种借助于基本培养基附加不同成份对春兰进行种子育苗的方法。
背景技术：
春兰是地生兰的一种，原产中国，栽培历史悠久，不仅花姿优美，花香幽雅，被誉为“花中君子”；而且叶色翠绿，有“看叶胜看花”之赞，另外它还有很高的药用价值，可治疗多种疾病，随着世界经济的增长，中国地生兰特别是春兰的稀有珍贵品种的需求也在随之增大。
兰属(Cymbidium)植物种子的萌发，已积累了许多材料，但是兰属植物中的一些地生兰的种子不易人工使之萌发，一般将这类种子称为难萌发种子。春兰品种虽多，但都是从野生的自然变异中选择出来的，春兰的杂交育种工作还没有完全展开，主要原因是在有性繁殖中存在一些问题，如播种后胚不活动。科学家研究发现，春兰种子非常小，有一层极薄的膜质种皮，种皮内通常有一个发育很差的胚，没有胚乳和子叶，没有养分贮藏器官，只是一团没有分化的细胞。由于没有解决大量繁殖的问题，导致农民上山大量采挖野生春兰，自然资源受到严重破坏，在交通稍为方便的地区，已难以找到野生春兰植株。
自古至今，春兰的优良品种只是从自然变异中选择，费时费事效率低，品种改良慢，园艺事业发展到今天，现代育种手段几乎已经把所有的花卉改变了面貌，唯独在春兰中尚未广泛应用。
发明内容：
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种采用春兰种子组织培养育苗方法，以改变上述完全靠大量野生资源，并从中选择少量的自然变异植株的落后状态。
本发明的目的是这样实现的：一种采用春兰种子组织培养育苗方法，其特征在于它包括以下工艺步骤：
a)外植体的选取取春兰未裂开的蒴果，为外植体；
b)种子处理用70～75％酒精浸泡20～30秒或用药棉蘸70～75％酒精揩试春兰蒴果表面，切开春兰蒴果，取出春兰粉沫状种子，装入细布袋内，用70～75％酒精浸泡30～45秒，无菌水冲洗多次，沥干水，再放入0.08～0.12mol/LNaoH溶液中处理8～10分钟，无菌水冲洗多次，沥干水，最后放入10.5±2％次氯酸钠溶液中6～8分种，无菌水冲洗多次，沥干水待用；
c)种子萌发把经处理的春兰种子均匀地播种在种子萌发培养基上，每天光照14～16小时，光照强度1000～1500lux，温度23±2℃，培养160～180天，即可生长为原球茎，所述的种子萌发培养基为美国花宝1号2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激动素4～6mg/L+琼脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培养基PH值5.0～6.0；
d)继代培养将原球茎转接到上述同样的种子萌发培养基中继代培养，培养50～60天，长成新芽或原球茎，以后不断切割原球茎继代，即可几何级数增长。
本发明采用春兰种子组织培育方法，所述的1/2MS有机成份为：肌醇50mg/L+烟酸0.25mg/L+盐酸吡哆醇0.25mg/L+盐酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
本发明采用春兰种子组织培育方法，既可繁殖优良品种，又可从种子实生苗中选择优异兰株，避免花费大量奖金，每年派人到山区采集或收购兰苗，减少对野生资源的破坏，保护生态环境。本发明方法可行，操作简便，为人们进行杂交育种，选择新的兰花品种，提供了一种有效堂途径。
具体实施方式：
下面为本发明采用春兰种子组织培养育苗方法的最佳方式：
a)、外植体：10～11月份取春兰未裂开由黄转褐的春兰蒴果，为外植体；
b)、种子处理：用70～75％酒精浸泡20～30秒或用药棉蘸70～75％酒精揩试春兰蒴果表面，尤其注意蒴果纵沟处揩试干净，带进操作室备用，在超净工作台内，用无菌纸垫着，用解剖手术刀纵向切开春兰蒴果，取出春兰粉沫状种子，装入已消毒的细布袋内，用70～75％酒精浸泡消毒30～45秒，无菌水冲洗3～4次，沥干水，再放入已灭菌的0.08～0.12mol/LNaoH溶液中处理8～10分钟，无菌水冲洗3～4次，沥干水，最后放入10.5±2％次氯酸钠溶液中6～8分种，无菌水冲洗3～4次，沥干水待用；
c)、种子萌发：将消毒好的黄豆粒大的春兰种子块接种到改良美国花宝1号2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激动素4～6mg/L+琼脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培养基PH值5.0～6.0的种子萌发培养基中，拧好瓶盖，利用培养基表面的冷凝水，摇荡培养瓶，使种子在瓶内分布均匀，放入培养基培养，每天光照14～16小时，光照强度1000～1500lux，温度23±2℃，培养160～180天，即可生长为青绿色原球茎。所述的1/2MS有机成份为：肌醇50mg/L+烟酸0.25mg/L+盐酸吡哆醇0.25mg/L+盐酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
d)、继代培养：将原球茎转接到种子萌发的培养基上，培养50～60天，长成新芽或原球茎，以后不断切割原球茎继代，即可几何级数增长。
本发明所述的美国花宝1号，其英文名称Hyponex，由美国制造，其保证成份氮为7％，水溶性磷酐为6％，水溶性氧化钾为19，含有多种微量元素。

Claims (2)

1、一种采用春兰种子组织培养育苗方法，其特征在于它包括以下工艺步骤：
a)外植体的选取  取春兰未裂开的蒴果，为外植体；
b)种子处理  用70～75％酒精浸泡20～30秒或用药棉蘸70～75％酒精揩试春兰蒴果表面，切开春兰蒴果，取出春兰粉沫状种子，装入细布袋内，用70～75％酒精浸泡30～45秒，无菌水冲洗多次，沥干水，再放入0.08～0.12mol/LNaoH溶液中处理8～10分钟，无菌水冲洗多次，沥干水，最后放入10.5±2％次氯酸钠溶液中6～8分种，无菌水冲洗多次，沥干水待用；
c)种子萌发  把经处理的春兰种子均匀地播种在种子萌发培养基上，每天光照14～16小时，光照强度1000～15001ux，温度23±2℃，培养160～180天，即可生长为原球茎，种子萌发培养基为美国花宝1号2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激动素4～6mg/L+琼脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培养基PH值5.0～6.0；
d)继代培养  将原球茎转接到上述同样的种子萌发培养基中继代培养，培养50～60天，长成新芽或原球茎，以后不断切割原球茎继代，即可几何级数增长。
2、根据权利要求1所述的一种采用春兰种子组织培养育苗方法，其特征在于所述的1/2MS有机成份为：肌醇50mg/L+烟酸0.25mg/L+盐酸吡哆醇0.25mg/L+盐酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
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