CN102524062B

CN102524062B - 一种兰花组织培养的培养基

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Publication number: CN102524062B
Application number: CN 201110397345
Authority: CN
Inventors: 李恩举; 李富文; 常本金; 李树刚; 辛恩兰; 李树鑫; 王金柱; 许晓飞
Original assignee: TIANJIN HUATAI LAN PARK KINDS OF FARMING COOPERATIVES
Current assignee: TIANJIN HUATAI LAN PARK KINDS OF FARMING COOPERATIVES
Priority date: 2011-12-05
Filing date: 2011-12-05
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2031-12-05
Also published as: CN102524062A

Abstract

本发明提供一种兰花组织培养的培养基，该培养基由硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锌、硼酸、钼酸钠、烟酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化钾、香蕉、土豆、蛋白胨、花宝、花肥、活性碳、琼脂粉、白糖和椰汁组成。最佳配比是2000毫升椰汁中硝酸铵31g、硝酸钾27g、氯化钙8g、硫酸镁5.9g、硫酸亚铁5.7g、硫酸锌8.5g、硼酸7.3g、钼酸钠1.25g、烟酸0.1g、肌醇10.1g、6-卡氨基嘌呤1.0g、碘化钾0.24g、香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花宝8g、花肥8g、活性碳15g、琼脂粉50g、白糖150g。此培养基适合兰花的组织培养，可以将兰花进行大规模繁殖。

Description

一种兰花组织培养的培养基

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，尤其涉及一种兰花组织培养的培养基。

背景技术

兰花为多年生草本，单子叶植物。根长筒状。叶自茎部簇生，线状披针形，稍具革质，2至3片成一束。兰花是中国传统名花，是一种以香著称的花卉。兰花以它特有的叶、花、香独具四清(气清、色清、神清、韵清)，具高洁、清雅的特点。古今名人对它品价极高，被喻为花中君子。在古代文人中常把诗文之美喻为“兰章”，把友谊之真喻为“兰交”，把良友喻为“兰客”。绍兴是兰花的故乡。由于兰花漂亮，种植较简单是一些家庭养殖的首选品种，市场需求很大。使用组织培养法繁殖兰花的优点可以大量繁殖兰花苗，而且后代可保持与亲本相同的优良性状。

1838年，德国植物学家Schleiden发表《植物发生论》论文，提出植物细胞学说；1840年，Link首先证实了兰科植物根部具有内生真菌；1886年，Wahrlich对来自世界各地的500多种兰花进行研究，证实内生真菌普遍存在，并研究了真菌在寄主细胞内的消解变化；1899年，法国Bernard发现兰花种子萌发需要真菌侵染，提出真菌共生萌发假说，并于1902-1909年，公布了这方面的成果，认为真菌能改进兰花种子和幼苗的营养状态，初步证实共生萌发假说。1900年，德国Hos Burgeff认为，真菌可侵染正常种子，他分离并命名了许多真菌，提出了真菌的消解是提供营养物质给兰花的重要途径的理论，他还研究了兰花根系被侵染的方式，指出多种兰科植物通过真菌获取碳源的增加与叶片面积减少是平行的，有时还伴有光合色素的减少；以上的研究结果，发展与完善了当时的种子繁殖兰花的共生萌发法，并在许多兰花中得到应用。1902年，德国植物学家G.Haberlandt发表《植物细胞培养》论文，提出植物细胞培养学说，认为单一细胞可以发育成为独立的个体；1922年，Kundson成功在含糖培养基上用种子培养出兰花幼苗，建立一套兰花种子无菌萌发的方法与培养基配方，此法为今后的杂交育种和兰花工业发展提供了必备的条件；1935年，Cappellati认为，维生素C是兰花种子发芽所必需的。他进一步证实，兰花新鲜种子可以无菌萌发，但陈旧的种子需加入生长激素才能发芽；以上Hos Burgeff，Kundson，Cappellati等人的研究结果被总结为：在适合矿物质营养，可溶性糖和适宜的PH条件下，兰花种子可以无菌萌发。1937年，White首先建立综合培养基，证实了IAA与B族维生素(如硫胺素，烟酸等)在组培中的调控作用，组培开始缓慢向前发展；1943年，White出版第一本组培专著《植物组培培养手册》，组培技术进一步普及；1948年，美国科学家F.Skoog与崔澄发现腺嘌呤或腺苷/生长素比例是控制芽和根形成的主要条件之一，完善了激素调控理论；1949年，Gavino Roter首先将兰花组织培养获得成功，他将蝴蝶兰茎节接上于Kundson C培养基上获得再生苗；同年，美国Swamy首先对兰花胚胎学进行系统研究；1957年，Hans首次采用兰花茎尖为外植体培养获得成功，认为此法对兰花无性繁殖行之有效；1958年，Steward实验证实细胞全能性假说，植物组培技术进入实用阶段；1960年，G.Morel开创了兰花茎尖组织培养工业化生产技术，并被兰花生产者应用到新品种的快速繁殖中来，兰花工业从此兴起。组织培养的不同阶段对营养的要求是不一样的，初代培养作为植株后期生长来说是十分重要的，但目前并没有专门针对于兰花初代培养的培养基。

发明内容

本发明提供一种适于兰花组织培养的培养基，尤其适合兰花初代培养。

本发明采用的技术方案是：一种兰花组织培养的培养基，该培养基由硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锌、硼酸、钼酸钠、烟酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化钾、香蕉、土豆、蛋白胨、花宝、花肥、活性碳、琼脂粉、白糖和椰汁组成。

一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中的含量分别为：硝酸铵25.0-40.0g、硝酸钾20.0-30.0g、氯化钙7.0-9.0g、硫酸镁5-6g、硫酸亚铁5-6g、硫酸锌7.5-9.0g、硼酸6.5-7.8g、钼酸钠1.0-2.0g、烟酸0.05-0.2g、肌醇9.0-11.0g、6-卡氨基嘌呤0.5-1.5g、碘化钾0.2-0.3g、香蕉300-500g、土豆200-400g、蛋白胨10-30g、花宝7-9g、花肥6-9g、活性碳14-16g、琼脂粉40-55g、白糖140-160g。

一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中优选的含量分别为：硝酸铵30.0-35.0g、硝酸钾25.0-28.0g、氯化钙7.5-8.5g、硫酸镁5.8-5.95g、硫酸亚铁5.5-5.8g、硫酸锌8.3-8.8g、硼酸7.0-7.5g、钼酸钠1.2-1.5g、烟酸0.08-0.15g、肌醇9.5-10.5g、6-卡氨基嘌呤0.9-1.2g、碘化钾0.22-0.28g、香蕉350-450g、土豆250-350g、蛋白胨15-25g、花宝7.5-8.5g、花肥7.5-8.5g、活性碳14.5-15.5g、琼脂粉45-52g、白糖145-155g。

一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中最佳的含量分别为：硝酸铵31g、硝酸钾27g、氯化钙8g、硫酸镁5.9g、硫酸亚铁5.7g、硫酸锌8.5g、硼酸7.3g、钼酸钠1.25g、烟酸0.1g、肌醇10.1g、6-卡氨基嘌呤1.0g、碘化钾0.24g、香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花宝8g、花肥8g、活性碳15g、琼脂粉50g、白糖150g。

其中所述的花宝为美国产的全元素复合肥，是世界家庭园艺用肥第一品牌。

其中所述的花肥是收集的烂花叶、树叶发酵制得。

硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锌、硼酸、钼酸钠、烟酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化钾是植物生长所需要的营养要素。可以促进苗发根，是相辅相成的，互相作用。

蛋白胨和琼脂粉是起到是液体固态作用的。

香蕉、土豆、白糖甜度适中，因为蝴蝶兰是喜酸性的，这些都起到降低变异率的作用。

花肥、花宝是肥料，可以保证生长过程的基础营养。

培养基的制作工艺包括如下步骤：

1、称取一定量的硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锌、硼酸、钼酸钠、烟酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化钾放入一定量的椰汁溶解。

2、称取土豆蒸熟后粉碎，将香蕉粉碎，加入白糖，用椰汁调匀。

3、称取一定量的花肥、花宝用椰汁调匀，椰汁补足量。

4、将步骤1-3的溶液混合后加入蛋白胨、活性炭、琼脂，加热煮沸，使其溶化。

5、分装，可用漏斗将液状培养基注入培养瓶，注入量视培养瓶容量大小而定，通常为容器的1/5左右。

6、封瓶口。

7、高压蒸汽灭菌。120℃，1.5Mpa，消毒15～20min。

8、灭菌后的培养基放入接种室内静置，让其降温后凝固。

具体实施方式

实施例1

按下述比例取原料(按2000毫升椰汁计)

硝酸铵31g、硝酸钾27g、氯化钙8g、硫酸镁5.9g、硫酸亚铁5.7g、硫酸锌8.5g、硼酸7.3g、钼酸钠1.25g、烟酸0.1g、肌醇10.1g、6-卡氨基嘌呤1.0g、碘化钾0.24g、香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花宝8g、花肥8g、活性碳15g、琼脂粉50g、白糖150g。

实施例2

按下述比例取原料(按2000毫升椰汁计)

硝酸铵40.0g、硝酸钾20.0g、氯化钙9.0g、硫酸镁5g、硫酸亚铁5g、硫酸锌9.0g、硼酸6.5g、钼酸钠1.0g、烟酸0.2g、肌醇9.0g、6-卡氨基嘌呤1.5g、碘化钾0.3g、香蕉300、土豆200g、蛋白胨30g、花宝7g、花肥6g、活性碳14g、琼脂粉55g、白糖140g。

实施例3

按下述比例取原料(按2000毫升椰汁计)

硝酸铵30.0g、硝酸钾25.0g、氯化钙8.5g、硫酸镁5.8g、硫酸亚铁5.8g、硫酸锌8.3g、硼酸7.0g、钼酸钠1.5g、烟酸0.08g、肌醇9.5g、6-卡氨基嘌呤1.2g、碘化钾0.28g、香蕉350g、土豆350g、蛋白胨25g、花宝8.5g、花肥8.5g、活性碳14.5g、琼脂粉45g、白糖155g。

制备方法如下：

3、称取一定量的花肥、花宝用椰汁调匀，椰汁补足量。

6、封瓶口。

7、高压蒸汽灭菌。120℃，1.5Mpa，消毒15～20min。

8、灭菌后的培养基放入接种室内静置，让其降温后凝固。

Claims

1.一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中的含量分别为：硝酸铵25.0-40.0g、硝酸钾20.0-30.0g、氯化钙7.0-9.0g、硫酸镁5-6g、硫酸亚铁5-6g、硫酸锌7.5-9.0g、硼酸6.5-7.8g、钼酸钠1.0-2.0g、烟酸0.05-0.2g、肌醇9.0-11.0g、6-苄氨基嘌呤0.5-1.5g、碘化钾0.2-0.3g、香蕉300-500g、土豆200-400g、蛋白胨10-30g、花宝7-9g、花肥6-9g、活性碳14-16g、琼脂粉40-55g、白糖140-160g，所述花肥是收集的烂花叶、树叶发酵制的。

2.根据权利要求1所述的一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中的含量分别为：硝酸铵30.0-35.0g、硝酸钾25.0-28.0g、氯化钙7.5-8.5g、硫酸镁5.8-5.95g、硫酸亚铁5.5-5.8g、硫酸锌8.3-8.8g、硼酸7.0-7.5g、钼酸钠1.2-1.5g、烟酸0.08-0.15g、肌醇9.5-10.5g、6-苄氨基嘌呤0.9-1.2g、碘化钾0.22-0.28g、香蕉350-450g、土豆250-350g、蛋白胨15-25g、花宝7.5-8.5g、花肥7.5-8.5g、活性碳14.5-15.5g、琼脂粉45-52g、白糖145-155g，所述花肥是收集的烂花叶、树叶发酵制的。

3.根据权利要求1所述的一种兰花组织培养的培养基，其中各组分在2000毫升椰汁中的含量分别为：硝酸铵31g、硝酸钾27g、氯化钙8g、硫酸镁5.9g、硫酸亚铁5.7g、硫酸锌8.5g、硼酸7.3g、钼酸钠1.25g、烟酸0.1g、肌醇10.1g、6-苄氨基嘌呤1.0g、碘化钾0.24g、香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花宝8g、花肥8g、活性碳15g、琼脂粉50g、白糖150g，所述花肥是收集的烂花叶、树叶发酵制的。