CN104719159B - 一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法。营养液由以下成分组成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0。本发明营养液成分丰富，对于促进种苗生长，提高成活率具有显著效果，而且能有效防止病虫害。
Description
技术领域
本发明涉及组培种植技术领域，具体涉及一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物，具有滋阴补肾、润肺生津、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效，为我国传统名贵中药材。道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首，民间称其为“救命仙草”。
铁皮石斛是我国的特有珍稀濒危植物，野生分布于我国广东、云南、贵州、广西、浙江、四川等地。对生境要求特殊，生长于高山峻岭、悬崖峭壁及岩石缝隙之间，铁皮石斛的种子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培，而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人们长期掠夺性、毁灭性的采挖与无计划的消耗，破坏了它们赖以生存的自然生态环境，致使其野生资源严重枯竭，被列为国家二级重点保护植物。
然而，目前铁皮石斛的市场需求量不断增长，供求矛盾进一步增大，将铁皮石斛野生变家种，利用快繁技术大规模地人工栽培以满足市场需要就成了当务之急。近20年来，我国开展了铁皮石斛人工驯化栽培研究，取得了一定的成果。但伴随着产业化的迅猛发展，我国的石斛种植还存在着诸多的突出问题，主要表现在：(1)种苗良莠不齐，组培苗分离，退化。由于铁皮石斛生产繁育基本依赖于种子扩繁的组培苗，采用种子做外植体生产的铁皮石斛试管苗，由于外植体材料遗传背景差异和培养环境的影响，试管苗植株形态特征差异明显，且在组培室中繁育后，品种分离、退化现象严重，而本发明采用茎段作外植体生产的试管苗，遗传背景相同，植株形态特征一致，保持了种源稳定性。(2)组织培养周期长，技术尚需进一步突破。传统的种子组培快繁法需要经历播种、诱导原球茎、原球茎增殖、生根壮苗等步骤，时间长达1年以上，其中播种至原球茎耗时长达5个月以上，而采用传统的茎段无性繁殖法，则可以省去播种到原球茎的步骤，直接茎段诱导原球茎，缩短了组培扩繁的时间。本发明通过改良培养基配方结合微波刺激法，可加快茎段诱导原球茎的进程，进一步缩短了生产周期，解决产业化发展对种苗的大批量需求。(3)栽培时间长，成活率低。铁皮石斛瓶苗移栽成活率通常只有60％，栽培半年以上才可移栽至苗床中。若能通过改良的营养液，使铁皮石斛种苗直接在基质苗床中进行驯化炼苗，就可以节约炼苗时间和成产成本。
发明内容
为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法。本发明能保持母本优质性状，加快繁殖速度，可以解决实际生产中种苗良莠不齐，分离退化等问题，并提高种苗成活率及质量，有效防止病虫害。
本发明的一种营养液，由以下成分组成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0；所述叶片超声液为15g/L铁皮石斛叶、5g/L金钱草、5g/L平车前、7g/L侧柏叶、10g/L茯苓、12g/L威灵仙粉碎后，加入0.8g/L竹叶抗氧化物AOB，648W超声处理30min所得溶液，即用即加。
本发明还提供了一种将本发明的上述营养液在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法，该方法按照如下步骤进行：
(1)茎段消毒灭菌：选取铁皮石斛茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份；
(2)原球茎诱导及增殖：将前述步骤(1)中处理后的茎段的芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于原球茎增殖培养基中；
(3)原球茎分化：将前述步骤(2)得到的原球茎接种于分化培养基中；
(4)生根壮苗培养：将前述步骤(3)中得到的分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根培养基中；
(5)出瓶移栽：将前述步骤(4)中得到的生根的试管苗移入水苔基质中，1个月后移入苗床基质中栽培，喷施所述营养液。
优选的，所述步骤(2)中，采用微波法诱导原球茎：将所述步骤(2)中的所述接种于原球茎增殖培养基中的所述原球茎置于4℃环境中，暗培养3h，微波处理2min，功率500W，再置于冰块中1h，然后转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养。
优选的，所述步骤(2)中的所述芽点下方连带茎段部位一齐取出采用斜切方式。
优选的，所述步骤(2)中的所述原球茎诱导及增殖培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。
优选的，所述步骤(3)中的所述分化培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。
优选的，所述步骤(4)中的所述生根培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％香蕉汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。
优选的，所述步骤(5)中的所述营养液的喷施方法如下：施肥频率为一周一次，施肥浓度为0.3％，每株用量15mL。
本发明还提供了一种能应用于上述方法中的原球茎诱导及增殖培养基，由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。
本发明还提供了一种能应用于上述方法中的分化培养基，由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。
本发明采用茎段作外植体生产的试管苗，遗传背景相同，植株形态特征一致，保持了种源稳定性。本发明通过改良培养基配方结合微波刺激法，能在短时间内诱导产生大量原球茎，提高增殖系数大幅度提高，加快茎段诱导原球茎的进程，进一步缩短了生产周期，解决产业化发展对种苗的大批量需求。本发明通过改良营养液配方，使得成活率提高至97％以上，炼苗1个月即可移栽至苗床中，提高了繁殖速度和种苗存活量。本发明在常规激素的基础上，添加了芋头汁，并采用斜切方式连带茎段一齐诱导原球茎，效果优于常规添加物。
具体实施方式
为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。
实施例1 原球茎诱导及增殖培养基选择
经过前期试验，茎段中部诱导率高于茎段下部及上部，为了避免诱导材料之间的误差，选取两年生的同一品种的铁皮石斛茎段中部进行实验。首先剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份。以斜切方式将芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于原球茎诱导及增殖培养基A-E，每种培养基接种150个茎段：
培养基A：1/2MS基本培养基、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基B：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基C：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基D：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％土豆汁、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基E：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖、8g/L琼脂。
表1为原球茎诱导及增殖培养基A-E的比较结果表，从表1结果可以看出，不添加激素的培养基A，诱导率很低，随着添加激素及天然添加物，诱导率逐渐升高，特别是加入了天然添加物芋头汁，其诱导率显著高于其他处理组。因此，本发明选用培养基E作为原球茎诱导及增殖培养基。
表1
实施例2 切割方式选择
为了探讨不同的切割方式对茎段诱导原球茎的影响，本试验采集两年生的同一品种的铁皮石斛茎段中部进行切割诱导，原球茎诱导及增殖培养基均为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。选择如下A-D的切割法进行实验，每种培养基接种150个茎段：
切割法A：小心划一刀茎段腋芽处进行刺激。
切割法B：以纵切方式将不定芽下方连带茎段部位一齐取出。
切割法C：以斜切方式将不定芽下方连带茎段部位一齐取出。
表2为不同切割方式处理后原球茎诱导情况表。由表2可见，采用切割法C斜切方式获得的原球茎诱导率、原球茎重量都比其它切割方式效果好，生长情况也较为良好。因此，本发明选用斜切方式处理。
表2
实施例3 物理刺激方式选择
采集两年生的同一品种的铁皮石斛茎段中部进行切割诱导，原球茎诱导及增殖培养基均为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂。以斜切方式将不定芽下方连带茎段部位一齐取出，每种培养基接种150个茎段，选择如下A-D的物理法进行刺激：
刺激法A：紫外光下照射1h。
刺激法B：超声处理15min，500W。
刺激法C：置于-8℃环境中，暗培养5h，再转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养。
刺激法D：置于4℃环境中，暗培养3h，微波处理2min，功率500W，再置于冰块中1h，然后转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养。
表3为不同刺激法处理后的原球茎诱导情况表。由表3可见，刺激法D处理后，诱导出原球茎的茎段数、原球茎诱导率、原球茎重量及生长情况都优于其它刺激方法处理的。因此，本发明选用刺激法D。
表3
实施例4 原球茎分化培养基选择
将上述诱导出的原球茎接种于分化培养基A-D，每种培养基接种120块1cm*1cm大小的原球茎，培养基配方如下：
培养基A：1/2MS基本培养基、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基B：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基C：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基D：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％芋头汁、30％蔗糖、8g/L琼脂。
表4为不同分化培养基培养后的分化情况表。由表4可见，使用培养基D，丛生芽出现时间、从芽分化数、分化率及生长情况都优于其它培养基处理的。因此，本发明选用培养基D。
表4
实施例5 生根壮苗培养基选择
本发明选择如下A-D的培养基配方进行生根壮苗培养基的选择实验，两个月后记录数据：
培养基A：1/2MS基本培养基、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基B：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基C：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30％蔗糖、8g/L琼脂。
培养基D：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％香蕉汁、30％蔗糖、8g/L琼脂。
铁皮石斛小苗在4种不同培养基的生长情况见表5，表5为不同生根培养基培养后的生长情况表。由表5可见，使用培养基D，苗高、茎粗、叶片数/片、始根时间/d、根数/条、根长和生根瓶苗生长情况都优于其它培养基处理的。因此，本发明选用培养基D。
表5
实施例6 栽培营养液选择
当铁皮石斛生根苗高度达4～6cm，每一株有3～5条2cm以上的新根时，即可进行移栽炼苗。炼苗的目的是使组培苗适应外界的环境，包括温差，湿度差以及微生物环境。将生根的试管苗移入水苔基质中，并置于塑料穴盘，首日浇足水，此后保持水苔半干半湿的状态，1个月后移入苗床基质中栽培，喷施营养液，本发明选择如下A-F的营养液配方进行单因素对比栽培实验，共6个处理，每个处理210株，溶液均为纯水1L，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0。施肥频率均为一周一次，施肥浓度为0.3％，每株用量15mL，以施纯水作为对照组，光照应控制在13000～15000Lux，温度为18～30℃，空气湿度保持在70％～95％，遮光率为55％～75％。
铁皮石斛苗移栽入苗床后，测量茎长(从根茎到茎尖)、茎粗(茎中部最粗处)、根数、根长(从节点处至根尖)、根粗(根中部最粗处)，6个月后计算成活率，并对成活丛苗性状数据进行测定及记录。
营养液A：大量元素：700mg/L硝酸钾，700mg/L硝酸钙，800mg/L过磷酸钙，280mg/L硫酸镁，120mg/L硫酸铁，微量元素0.6mg/L硼酸，0.6mg/L硫酸锰，0.6mg/L硫酸锌，0.6mg/L硫酸铜，0.6mg/L钼酸铵。(汉普营养液)
营养液B：303mg/L硝酸钾，897mg/L硝酸钙，204mg/L磷酸二氢钾，26mg/L硫酸铵，246mg/L硫酸镁，15mg/L硫酸锰，0.3mg/L硼酸，0.02mg/L硫酸锌，0.01mg/L硫酸铜，0.003mg/L钼酸铵，2.0g/L乙二胺四乙酸二钠铁。(荷兰花卉所配方)
营养液C：大量元素：1900mg/L硝酸钾，440mg/L二水氯化钙，370mg/L七水硫酸锰，170mg/L磷酸二氢钾，1690mg/L硝酸铵，微量元素：0.83mg/L碘化钾，6.2mg/L硼酸，0.223mg/L四水硫酸锰，8.6mg/L七水硫酸锌，0.25mg/L钼酸钠，0.025mg/L五水硫酸铜，0.025mg/L氯化钴，铁盐：27.8mg/L七水硫酸铁，37.3mg/L乙二胺四乙酸二钠，维生素：100mg/L肌醇，0.5mg/L烟酸，0.1mg/L盐酸吡哆醇，0.5mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸。(MS培养液)
营养液D：50g/L硝酸钾、44g/L硝酸铵、13g/L硫酸镁、5g/L硫酸锰、0.8g/L硫酸锌、1.8g/L磷酸二氢钾、1.0g/L硫酸铜、1.2g/L碘化钾、0.3g/L氯化钴、7.0g/L硼酸、0.5g/L钼酸钠、0.75g/L盐酸硫胺素、0.35g/L盐酸吡哆醇、0.5g/L泛酸、0.75g/L甘氨酸、0.65g/L硫酸亚铁、1.45g/L乙二胺四乙酸二钠、1.8g/L氯化钙、0.25g/L萘乙酸、14g/L香蕉泥、22g/L土豆泥、10g/L白糖、50g/L肌醇、1.4g/L琼脂粉、0.2g/L 6-苄基氨基嘌呤、0.3g/L油菜素内酯、0.4g/L多效唑和0.3g/L增甘膦。
营养液E：按体积比配制，大量元素70％：166mg/L硫酸铵，83mg/L磷酸二氢钾，66mg/L硫酸镁，333mg/L硝酸钙；微量元素10％：2.5mg/L硫酸锰，8.3mg/L硫酸亚铁；66mg/mL萘乙酸1.0％；多菌灵6.3％。
营养液F：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0；所述叶片超声液为15g/L铁皮石斛叶、5g/L金钱草、5g/L平车前、7g/L侧柏叶、10g/L茯苓、12g/L威灵仙粉碎后，加入0.8g/L竹叶抗氧化物AOB，648W超声处理30min所得溶液，即用即加。
表6
由表6的结果，可见铁皮石斛营养液对其育苗的影响极大，对照组纯水最不利于铁皮石斛育苗，成活率低且叶片发黄有病斑，营养液A、B和C为兰科植物常用的营养液配方，添加元素为基本营养成分，用于铁皮石斛育苗成活率不高，且茎叶有病斑，种苗质量较差。营养液D和E为石斛兰营养液配方，但营养液D可能由于施肥浓度略高，种苗长势不好，营养液E长势较好，根系相对粗长，几乎无病斑。营养液F综合了前五者的优点，添加促进茎叶生长、生根的生长调节剂、天然无毒的叶片超声液肥料和防止病害的杀菌剂，提高种苗质量，加快育种周期。
实施例7 本发明铁皮石斛茎段组培育苗方法的一个优选实施例
本发明的一种铁皮石斛茎段组培育苗的方法的一个优选实施例作为试验组，按如下步骤进行：
(1)茎段消毒灭菌：选取铁皮石斛优质资源茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份。
(2)原球茎诱导及增殖：以斜切方式将芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于特定的原球茎诱导培养基：1/2MS基本培养基+0.5mg/L萘乙酸+1.5mg/L苯基噻二唑基脲+10％芋头汁+30％蔗糖+8g/L琼脂。
(3)微波诱导原球茎：将接种于增殖培养基中的原球茎，采用微波法可达到高频诱导原球茎的目的。
(4)原球茎分化：将原球茎接种于分化培养基中，1/2MS基本培养基+0.5mg/L萘乙酸+2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+10％芋头汁+30％蔗糖+8g/L琼脂。
(5)生根壮苗培养：分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根培养基，1/2MS基本培养基+1.0mg/L萘乙酸+2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+10％香蕉汁+30％蔗糖+8g/L琼脂。
(6)出瓶移栽：将生根的试管苗移入水苔基质中，并置于塑料穴盘，首日浇足水，此后保持水苔半干半湿的状态，1个月后喷施营养液，营养液配方：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0。施肥频率均为一周一次，施肥浓度为0.3％，每株用量15mL。
同时，我们进行了如下几组对照试验：
对照组A：
步骤(1)、(3)、(4)、(5)、(6)同试验组。
步骤(2)如下：原球茎诱导及增殖：以斜切方式将芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于原球茎诱导培养基：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30％蔗糖、8g/L琼脂。
对照组B：
步骤(1)、(2)、(4)、(5)、(6)同试验组。
步骤(3)如下：置于-8℃环境中，暗培养5h，再转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养。
对照组C：
步骤(1)、(2)、(3)、(5)、(6)同试验组。
步骤(4)如下：原球茎分化：将原球茎接种于分化培养基中，1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30％蔗糖、8g/L琼脂。
对照组D：
步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(6)同试验组。
步骤(5)如下：生根壮苗培养：分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根培养基，1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30％蔗糖、8g/L琼脂。
对照组E：
步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(5)同试验组。
步骤(6)如下：出瓶移栽：将生根的试管苗移入水苔基质中，并置于塑料穴盘，首日浇足水，此后保持水苔半干半湿的状态，1个月后喷施营养液，营养液配方：按体积比配制，大量元素70％：166mg/L硫酸铵，83mg/L磷酸二氢钾，66mg/L硫酸镁，333mg/L硝酸钙；微量元素10％：2.5mg/L硫酸锰，8.3mg/L硫酸亚铁；66mg/mL萘乙酸1.0％；多菌灵6.3％。施肥频率均为一周一次，施肥浓度为0.3％，每株用量15mL。
对照组F：
选取铁皮石斛茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份，将灭菌后的茎段置于诱导培养基中：1/2MS基本培养基、30％蔗糖、8g/L琼脂。待两个月后，芽点长出苗高2cm，于茎段与苗根茎部相连处切割，置于生根培养基中：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、10％香蕉汁、30％蔗糖、8g/L琼脂。五个月后，根长至5cm以上，出瓶驯化。将生根的试管苗移入水苔基质中，并置于塑料穴盘，首日浇足水，此后保持水苔半干半湿的状态，喷施自来水。
对照组F的增殖系数取决于茎段的节数，而靠近上部及下部的茎段较难诱导出腋芽，增殖系数较低。
结果如表7所示。
表7
六个月后，用本方法得到的的茎长、茎粗、根数、根长、根粗较对照均有明显增加，成活率为97.8％，提高了种苗质量及成活率。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (2)
1.一种营养液，其特征在于，由以下成分组成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值0.6mS/cm，酸碱度pH值调至6.0；所述叶片超声液为15g/L铁皮石斛叶、5g/L金钱草、5g/L平车前、7g/L侧柏叶、10g/L茯苓、12g/L威灵仙粉碎后，加入0.8g/L竹叶抗氧化物AOB，648W超声处理30min所得溶液，即用即加。
2.一种权利要求1所述的营养液在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法，其特征在于，所述方法按如下步骤进行：
(1)茎段消毒灭菌：选取铁皮石斛茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份；
(2)原球茎诱导及增殖：将前述步骤(1)中处理后的茎段的芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于原球茎诱导及增殖培养基中；
(3)原球茎分化：将前述步骤(2)得到的原球茎接种于分化培养基中；
(4)生根壮苗培养：将前述步骤(3)中得到的分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根培养基中；
(5)出瓶移栽：将前述步骤(4)中得到的生根的试管苗移入水苔基质中，1个月后移入苗床基质中栽培，喷施所述营养液；
所述步骤(2)中，采用微波法诱导原球茎：将所述步骤(2)中的所述接种于原球茎诱导及增殖培养基中的茎段置于4℃环境中，暗培养3h，微波处理2min，功率500W，再置于冰块中1h，然后转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养；
所述步骤(2)中的所述芽点下方连带茎段部位一齐取出采用斜切方式；
所述步骤(2)中的所述原球茎诱导及增殖培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L苯基噻二唑基脲、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂；
所述步骤(3)中的所述分化培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、0.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％芋头汁、30％蔗糖和8g/L琼脂；
所述步骤(4)中的所述生根培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10％香蕉汁、30％蔗糖和8g/L琼脂；
所述步骤(5)中的所述营养液的喷施方法如下：施肥频率为一周一次，施肥浓度为0.3％，每株用量15mL。
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