CN106134997A

CN106134997A - 苹果砧木m26的组培快速育苗方法

Info

Publication number: CN106134997A
Application number: CN201610528531.7A
Authority: CN
Inventors: 高登涛; 杨录军; 魏志峰; 刘长书; 徐世彦; 王俊; 杨书才; 赵玉安
Original assignee: Zhengzhou Fruit Research Institute CAAS
Current assignee: Zhengzhou Fruit Research Institute CAAS
Priority date: 2016-07-06
Filing date: 2016-07-06
Publication date: 2016-11-23

Abstract

本发明公开了一种苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其包括以下步骤：初代培养‑继代培养‑生根培养‑炼苗移栽‑重复的对苹果砧木M26品种进行继代培养、生根培养和炼苗移栽，其中，初代培养基的配方为：MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8；继代培养基的配方为：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8；生根培养基的配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8。本发明的有益之处在于：通过组织培养技术不仅能够在短时间内大量成苗，而且保证了苹果砧木M26较高的成苗率和成活率，同时也保留了苹果砧木M26的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。

Description

苹果砧木M26的组培快速育苗方法

技术领域

本发明涉及一种育苗方法，具体涉及苹果砧木M26的组培快速育苗方法，属于植物育苗技术领域。

背景技术

苹果产业是我国农业的优势产业，在我国农业经济中占有非常重要的地位。2014年我国苹果种植面积2272.20千公顷，产量为4092.32万吨，面积和产量均居世界第一。但是，与美国、欧洲等世界苹果先进生产国家相比，我国的苹果生产还存在较大差距，主要表现为单位面积产量低、果品质量差、经济效益不高、在国际鲜果市场上占有的份额少，与我国苹果生产大国的地位极不相称，其中苹果苗木质量差是造成这种局面的重要原因之一。苗木是苹果生产栽培的基础，苗木的质量直接影响着苹果树体的生长、开花、结果以及抗逆性、抗病能力和寿命。我国目前大部分果园采用的是乔化砧苗木栽植模式，树体高大，开始结果较晚，盛果期果园容易郁闭，病虫害较重。另外，砧木是用种子繁殖的实生苗，其后代性状分离严重，因此，导致乔华砧苗木长势差异较大，建园时即使挑选相对一致的苗木建园，其长势在几年后仍会产生较大差异，园相不整齐，给生产管理带来很大难度。矮化砧木具有早果、丰产、树体高度适中等诸多优点，并且矮化自根砧苗木的砧木一般采用组培、压条等无性繁殖方式，苗木整齐度高，长势好，因此，欧美苹果生产发达国家广泛采用矮化自根砧苗建立果园，园貌整齐，结果早，产量高，品质好，取得了良好效果。今后一段时期是我国苹果大规模更新换代的关键时期，如何从苗木方面提供支持和保障便成为一个值得高度重视的问题。目前，我国矮化苹果苗木市场供不应求，限制苗木产业发展的关键在于一方面缺乏适应性广的优良矮化砧木，另一方面对现有矮化砧木繁育技术尚未取得突破。

苹果矮化砧木M26是我国目前应用最广泛的矮化砧木，具有矮化、早果、丰产、抗性强、适应性较广等诸多优点。由于其扦插育苗难以生根，压条繁育自根砧木则耗时长，占地较多，出苗慢，因此，为尽快在生产上推广应用，我国主要是以中间砧的形式对其加以利用，矮化中间砧苗木也具有较好的矮化和早结果的作用，但是由于其和乔化砧一样，中间砧苹果树由于是用海棠等实生种子繁殖苗做基砧，实生苗由于其后代性状分离严重，因此，导致中间砧苗木长势差异较大，即使挑选相对一致的苗木建园，其长势在几年后仍会产生较大差异，园相不整齐，给生产管理带来一定难度。另外，中间砧段嫁接长度很难保持一致，果农把握不好栽植的深浅，常常造成树势过旺或过弱等问题。矮化自根砧嫁接苗繁育过程中不用实生种子播种，因此，苗木整齐度、建园后的整齐度都相对较好，并且长势也优于中间砧苗木，然而由于前述原因，M26自根砧苗木繁育主要通过压条繁育的，目前在推广应用上存在诸多问题，例如，压条繁育需要有一定的土地做苗圃，每年只能繁育一次，出苗量小，耗时较长。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种苹果砧木M26的组培快速育苗方法，该方法可快速繁育无毒自根砧木苗，成苗率和移栽成活率均极高，可以短时间内大量成苗并控制成本，从而为M26自根砧苗的普及应用打下良好的基础。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1、初代培养：以苹果砧木M26为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25℃的温室内进行水培，每升水含有30g蔗糖，每隔3d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5cm～2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6h～8h，然后用75％酒精处理8s，再用0.1％升汞处理7min，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3次～4次，将处理好的嫩芽接种到初代培养基中，前述初代培养基的配方为：MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，每个三角瓶接3个嫩芽，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期16h光照/8h黑暗，培养14d；

Step2、继代培养：将获得的无菌体接种到继代培养基中，前述继代培养基的配方为：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，每个三角瓶接3株无菌体，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期12h光照/12h黑暗，培养20d；

Step3、生根培养：选择继代培养获得的生长健壮、高度大于4.0cm的芽苗，接种于生根培养基中，前述生根培养基的配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，每个三角瓶接种3个芽苗，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期14h光照/10h黑暗，直至组培苗根长度达到2cm；

Step4、炼苗移栽：当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10d～12d，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2d～4d，然后将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2次～3次，然后移栽到容量相同的营养钵中，前述营养钵中装有纯锯末；

Step5：按照Step2、Step3和Step4的记载，重复的对苹果砧木M26品种进行继代培养、生根培养和炼苗移栽。

前述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step4中，移栽苗的管理方式为：将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气，培养14d。

本发明的有益之处在于：

(1)本发明的快速育苗方法以苹果砧木M26的新梢为材料，通过组织培养的方式，可快速繁育无毒自根砧木苗，成苗率(95％以上)和移栽成活率(90％以上)均极高，可以短时间内大量成苗并控制成本，从而为苹果砧木M26自根砧苗的普及应用打好了基础；

(2)可以在全年任何时候进行自根砧苗木繁育，打破了每年只能繁育一次的限制；

(3)通过对无菌体进行脱毒处理，从源头上保证了苗木的无毒性，苗木长势更好，应用前景广阔。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。

Step1：初代培养

以苹果砧木M26为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25℃的温室内进行水培(每升水含有30g蔗糖)，每隔3d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5cm～2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6h～8h，然后用75％酒精处理8s，再用0.1％升汞处理7min，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3次～4次，将处理好的嫩芽接种到激素浓度不同的培养基中进行培养，每个激素浓度处理的培养基灌装15个三角瓶，每个三角瓶接3个嫩芽，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期16h光照/8h黑暗，14d后分别调查污染率、褐化率、成活率。

调查结果如下：

通过观察上述调查结果我们发现：在第2组培养基培养下的嫩芽污染率和褐化率均较低、成活率较高，所以我们最终确定第2组培养基为苹果砧木M26的最适宜的初代培养基，即：

MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8。

在第2组培养基培养下的嫩芽，其污染率仅为11.23％、褐化率仅为47.39％，成活率高达41.38％，这十分有利于苹果砧木M26组培苗无菌体系的建立。

Step2：继代培养

将获得的无菌体接种到含有不同浓度6-BA和IBA配比的培养基中进行继代培养，每升培养基中加40g蔗糖和8g琼脂，每个浓度配比的培养基灌装10个三角瓶，每个三角瓶接3株无菌体，重复3次。然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期12h光照/12h黑暗，20d后调查苗的高度、扩繁系数、叶片数量。

调查结果如下：

通过观察上述调查结果我们发现：在第3组培养基培养下的无菌体高度较高且均匀、扩繁系数较大、叶片数量较多，所以我们最终确定第3组培养基为苹果砧木M26的最优的继代培养基，即：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8。

在第3组培养基培养下的无菌体，其苗平均高度为4.36cm、扩繁系数高达5.46、叶片数量为5.23片，这十分有利于苹果砧木M26快速繁殖。

Step3：生根培养

选择继代培养获得的生长健壮、高度大于4.0cm、生长时间为20天的芽苗，接种于1/2MS+不同浓度IBA(0.3mg/L、0.4mg/L、)+不同浓度IAA(0.5mg/L、0.6mg/L)处理的生根培养中进行生根培养，每个浓度配比的培养基灌装10个三角瓶，每个三角瓶接种3个芽苗，重复3次。然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期14h光照/10h黑暗，25d后调查成苗率、生根率、根长。

调查结果如下：

通过对比上述调查结果我们发现：在第2组培养基培养下的芽苗成苗率和生根率均较高，根的长度也适宜，所以我们最终确定第2组培养基为苹果砧木M26的最适宜的生根培养基，即：

1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8。

在第2组培养基培养下的芽苗，其成苗率高达95.48％、生根率高达95.03％，根长平均达到2cm以上，这十分有利于苹果砧木M26的快速繁殖。

Step4：炼苗移栽

当组培苗根的长度达到2cm后(大概的培养时间是25d)，移到室外遮阴炼苗10d～12d，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2d～4d，然后将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2次～3次，然后移栽到容量相同的不同基质处理(纯锯末、锯末+基质、纯基质、基质+珍珠岩)的营养钵中。移栽苗的管理方式为：将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。于14d后统计炼苗移栽成活率、苗高、叶片数、根长等。

统计结果如下：

组号	营养钵内物质	移栽成活率	苗高	叶片数	根长
						1	纯锯末	90.35％	21.36cm	18.43片	8.37cm
2	锯末+基质	86.21％	13.63cm	12.78片	5.69cm
						3	纯基质	65.18％	9.45cm	7.36片	5.16cm
4	基质+珍珠岩	73.29％	11.53cm	9.47片	5.78cm

通过观察上述统计结果我们发现：在第1组物质培养下的组培苗移栽成活率较高、苗高度较高、叶片数量多、根系较长，所以我们最终确定第1组物质为苹果砧木M26的最适宜的炼苗物质，即：使用纯锯末进行炼苗时，炼苗移栽成活率高达90％，炼苗移栽效果最好。

在第1组物质培养下的组培苗，其移栽成活率高达90.35％、苗高达20cm以上、叶片数18片以上、根长达8.37cm，这十分有利于苹果砧木M26向大田的移栽。

Step5：重复继代培养-生根培养-炼苗移栽

按照Step2、Step3和Step4的记载，重复的对苹果砧木M26品种进行继代培养、生根培养和炼苗移栽，这样就能够在较短的时间内实现苹果砧木M26无病毒苗木的快繁生产。

由此可见，本发明的快速育苗方法具有以下特点和优势：

1、能够在短时间内大量成苗

由于繁殖是在室内进行，不受外界温度、湿度、光照等自然条件的影响，按照正常生产，扣除启动14d、生根培养25d、炼苗12d、移栽14d，一株成功启动的小芽一年可繁殖出50万株以上驯化苗，所以本发明的方法能够在短时间内大量成苗，并且最快的成苗时间是85d。

2、成苗率极高

本发明的方法是经过十余年不断的探索、反复实践总结而成的，尤其是最终确定的生根配方(1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L)，使得成苗率达到了95％以上，成苗率极高。

3、移栽成活率极高

在组培生根阶段其成苗率高达95.48％、生根率高达95.03％、根长平均达到2cm以上，这十分有利于苹果砧木M26的驯化移栽。再在移栽时采用锯末做基质，其移栽成活率高达90％以上、苗高达20cm以上、叶片数18片以上、根长达8.37cm，这大大提高了苹果砧木M26向大田移栽的成活率，移栽成活率高达90％以上。

4、保留了苹果砧木M26的优良特性

组培初代启动时，选择的外植体是健壮无病虫害、性状最能表现M26特性的材料，且在组培继代过程中通过热处理还可以脱除其感染的病毒，进行品种复壮，所以采用本发明的方法生产的M26组培苗保留了苹果砧木M26的优良特性。

5、成本可控且较低

假如按照年产50万株M26驯化苗计算，试剂药品4万元、用工10万元、水电费8万元、培养容器5万元、栽培基质3万元、组培室及温室租金10万元、其他3万元，每株成本0.86元，如果生产量大，成本还可以降低，所以采用本发明的方法生产M26自根砧脱毒苗成本可控且较低。

综上所述，本发明通过组织培养技术不仅能够在短时间内大量成苗，而且保证了苹果砧木M26较高的成苗率和成活率，同时也保留了苹果砧木M26的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1、初代培养：以苹果砧木M26为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25℃的温室内进行水培，每升水含有30g蔗糖，每隔3d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5cm～2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6h～8h，然后用75％酒精处理8s，再用0.1％升汞处理7min，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3次～4次，将处理好的嫩芽接种到初代培养基中，所述初代培养基的配方为：MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期16h光照/8h黑暗，培养14d；

Step2、继代培养：将获得的无菌体接种到继代培养基中，所述继代培养基的配方为：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期12h光照/12h黑暗，培养20d；

Step3、生根培养：选择继代培养获得的生长健壮、高度大于4.0cm的芽苗，接种于生根培养基中，所述生根培养基的配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L，pH＝5.8，然后放置在25℃条件下进行光培养，光照强度2000lux，光周期14h光照/10h黑暗，直至组培苗根长度达到2cm；

Step4、炼苗移栽：当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10d～12d，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2d～4d，然后将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2次～3次，然后移栽到容量相同的营养钵中；

2.根据权利要求1所述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step1中，每个三角瓶接3个嫩芽。

3.根据权利要求1所述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step2中，每个三角瓶接3株无菌体。

4.根据权利要求1所述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step3中，每个三角瓶接种3个芽苗。

5.根据权利要求1所述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step4中，所述营养钵中装有纯锯末。

6.根据权利要求5所述的苹果砧木M26的组培快速育苗方法，其特征在于，在Step4中，移栽苗的管理方式为：将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气，培养14d。