CN101781350B

CN101781350B - 一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法

Info

Publication number: CN101781350B
Application number: CN2010101061216A
Authority: CN
Inventors: 龚行楚; 瞿海斌; 程翼宇; 王珏
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2010-02-02
Filing date: 2010-02-02
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2030-02-02
Also published as: CN101781350A

Abstract

本发明提供一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，包含配制混合溶剂，洗涤胆酸混合物和干燥得到熊去氧胆酸三个步骤。本方法的特点是使用了一种由小分子醇1-80份和小分子酯99-20份按重量比配制成混合溶剂。该混合溶剂可以选择性地溶解胆酸混合物中鹅去氧胆酸等杂质而保留熊去氧胆酸。该混合溶剂既保留了醇类对鹅去氧胆酸较强的溶解能力，又保留了酯类选择性溶解鹅去氧胆酸的特点。使用本发明纯化熊去氧胆酸，可以在相同生产能力的前提下，明显减少有机溶剂的使用量，节省溶剂回收的能量消耗，适合用于制备高纯度的熊去氧胆酸。

Description

一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法

技术领域

本发明属于医药领域的分离方法，特别涉及一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法。

背景技术

熊去氧胆酸(3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸，Ursodeoxycholic Acid)是一种二羟基胆酸，在人类总胆汁中占3％左右。熊去氧胆酸是一种无毒性的亲水胆酸，对多种疾病具有治疗作用。目前熊去氧胆酸被用于原发性硬化性胆管炎、胆固醇性胆结石、胆汁反流性胃炎和胆源性胰腺炎等疾病的治疗。另外，熊去氧胆酸也是胆汁淤积性肝病的首选药物，并且用于提高肝脏移植术后的成活率。

熊去氧胆酸是熊类特有的胆汁酸成分，目前主要由两种方法获得。第一种是养殖熊，然后通过活体引流得到熊的胆汁，再从胆汁中提取熊去氧胆酸。这种方法的周期较长，效率不高，而且对熊的身体伤害明显。第二种是通过其他原料合成熊去氧胆酸。鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆烷酸，Chenodeoxycholic Acid)是合成熊去氧胆酸的原料之一。鹅去氧胆酸是熊去氧胆酸的同分异构体，本身也可以用于胆固醇性胆结石的治疗。但是相比熊去氧胆酸，鹅去氧胆酸治疗胆结石容易产生腹泻、肝功能损害、血清胆固醇浓度增高等副作用。由于鹅去氧胆酸可以从鸡胆、鸭胆和猪胆中获得，来源比较丰富，所以从鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸是工业应用较多的方法。通过鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的反应转化率只能达到50％-75％，为了减少药物的副作用并且提高原料的利用率，将末反应的鹅去氧胆酸从熊去氧胆酸中分离出去是十分重要的。

目前工业中采用有机溶剂选择性地从含有熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的混合物中溶解除去鹅去氧胆酸等杂质。氯仿和乙醚等常用溶剂虽然可以选择性溶解更多的鹅去氧胆酸，但是由于溶解度太小，溶剂消耗量很大，所以不适合工业应用。乙醇和乙酸等溶剂对两种去氧胆酸的溶解度都很大，对鹅去氧胆酸的选择性溶解不明显，所以也不适合工业应用。乙酸乙酯是工业中最常用的有机溶剂。常温下，熊去氧胆酸在乙酸乙酯中的溶解度约为0.004g/g溶剂，鹅去氧胆酸的溶解度则可以超过0.04g/g溶剂。由于两者的溶解度相差巨大，采用多次乙酸乙酯洗涤之后，就可以从沉淀物中得到纯度较高的熊去氧胆酸。但是由于两种胆酸在乙酸乙酯中的溶解度都不大，所以实际生产中需要用固体量30倍以上的乙酸乙酯才能将鹅去氧胆酸从去氧胆酸混合物中充分溶解出来。总体来说，以乙酸乙酯作为溶剂，单位溶剂的生产能力较低，溶剂用量大，后续的溶剂回收步骤能耗巨大。

发明内容

本发明的目的是针对目前工业生产中使用乙酸乙酯纯化熊去氧胆酸时溶解度小，溶剂用量大，溶剂回收能耗大等问题而提出一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，具有溶剂消耗量小，熊去氧胆酸得率高的特点。

所述的一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下三个步骤实现：第一，用小分子醇和小分子酯按重量比配制成醇∶酯为1∶99～80∶20的混合溶剂；第二，用混合溶剂洗涤胆酸混合物1～12次，每次洗涤时加入的溶剂质量是胆酸混合物质量的0.1～10倍；第三，干燥未溶解的固体得到高纯度熊去氧胆酸，其中熊去氧胆酸占总固体质量的95～99％。方法中提到的小分子醇，具体指的是乙醇、异丙醇、正丙醇或叔丁醇；小分子酯，具体指的是乙酸乙酯或乙酸异丙酯。熊去氧胆酸产品的纯度采用高效液相色谱法测定。

本发明的有益效果是所使用的混合溶剂既保留了小分子醇对于鹅去氧胆酸溶解度大的特点，也保留了小分子酯选择性溶解鹅去氧胆酸而保留熊去氧胆酸的特点。由于混合溶剂兼具大溶解度和高选择性优点，应用本发明可以明显减少溶剂用量，减少溶剂回收的能耗。本发明提出的混合溶剂可以根据实际生产中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸组成的波动，灵活调整混合溶剂中醇和酯的比例来改变溶解度和选择性，增加生产效率并且节省能量。本发明所选择的酯和醇的沸点均不高，所以可以较容易地通过蒸发的方法除去溶剂残留。

附图说明

图1为本发明制备方法流程图。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

实施例1：

取乙醇0.5kg，乙酸乙酯9.5kg，混合制成重量比为5∶95的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为60％，一次性加入混合溶剂1.6kg，搅拌1h后密闭静置20h。过滤得到不溶固体。干燥不溶固体得到熊去氧胆酸产品0.56kg。采用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为95.3％。

高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品纯度的色谱条件为：

色谱柱为迪马C₁₈柱(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，流动相为0.2％醋酸乙腈-0.2％醋酸水(70∶30)，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL；检测器：蒸发光散射检测器(ELSD)，漂移管温度为105℃，雾化气为高纯氮气，雾化气流速为2L/min。

对照品溶液的制备取熊去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解、稀释制成每1mL含熊去氧胆酸0.4mg的溶液，作为对照品溶液1。精密量取对照品溶液1适量，加甲醇稀释制成每1mL含熊去氧胆酸0.2mg的溶液，作为对照品溶液2。取对照品溶液1、2适量，10000rpm离心10min，取上清液，即得。

供试品溶液的制备取熊去氧胆酸产品适量，精密称定，加甲醇溶解、稀释制成每1mL含熊去氧胆酸产品0.3mg的溶液，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，即为供试品溶液。

含量测定分别精密吸取对照品溶液1、2和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按二点法计算熊去氧胆酸产品中熊去氧胆酸含量。即为熊去氧胆酸产品的纯度。

实施例2：

取正丙醇1kg，乙酸乙酯9kg，混合制成重量比为1∶9的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为70％。加入0.8kg混合溶剂进行洗涤，搅拌1h后密闭静置5h，过滤，将不溶固体再重复洗涤一次。干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.65kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为96.3％。

实施例3：

取异丙醇2kg，乙酸异丙酯8kg，混合制成重量比为2∶8的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为55％。加入0.4kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复4次。干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.48kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.6％。

实施例4：

取叔丁醇3kg，乙酸异丙酯3kg，混合制成重量比为5∶5的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为50％。加入0.6kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复5次。干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.38kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为98.8％。

实施例5：

取乙醇0.1kg，乙酸异丙酯9.9kg，混合制成重量比为1∶99的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为75％。加入0.5kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复12次。干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.64kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为99.5％。

实施例6：

取叔丁醇3.0kg，乙酸乙酯7.0kg，混合制成重量比为3∶7的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为55％。加入0.7kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复3次。干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.46kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为96.9％。

实施例7：

取正丙醇4.0kg，乙酸乙酯6.0kg，混合制成重量比为4∶6的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为50％。加入0.5kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复6次。干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.41kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为98.1％。

实施例8：

取异丙醇8.0kg，乙酸乙酯2.0kg，混合制成重量比为8∶2的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为70％。加入0.1kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置1h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复5次。干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.25kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.0％。

实施例9：

取正丙醇0.2kg，乙酸异丙酯19.8kg，混合制成重量比为1∶99的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为77％。一次性加入10kg混合溶剂进行溶解，搅拌1h后密闭静置5h，然后过滤得到不溶固体。干燥不溶固体得到的熊去氧胆酸产品0.64kg，按实施例1的高效液相色谱条件测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.5％。

Claims

1.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取异丙醇2kg，乙酸异丙酯8kg，混合制成重量比为2:8的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为55%，加入0.4kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体，上述洗涤过程重复4次，干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.48kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.6%。

2.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取叔丁醇3kg，乙酸异丙酯3kg，混合制成重量比为5:5的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其熊去氧胆酸纯度以质量分数计为50%，加入0.6kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体，上述洗涤过程重复5次，干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.38kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为98.8%。

3.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取乙醇0.1kg，乙酸异丙酯9.9kg，混合制成重量比为1:99的混合溶剂。取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为75%。加入0.5kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体。上述洗涤过程重复12次。干燥不溶固体，得到熊去氧胆酸产品0.64kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为99.5%。

4.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取叔丁醇3.0kg，乙酸乙酯7.0kg，混合制成重量比为3:7的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为55%，加入0.7kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体，上述洗涤过程重复3次，干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.46kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为96.9%。

5.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取正丙醇4.0kg，乙酸乙酯6.0kg，混合制成重量比为4:6的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为50%。加入0.5kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体，上述洗涤过程重复6次，干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.41kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为98.1%。

6.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取异丙醇8.0kg，乙酸乙酯2.0kg，混合制成重量比为8:2的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为70%。加入0.1kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置1 h，然后过滤得到不溶固体，上述洗涤过程重复5次，干燥不溶固体，得到的熊去氧胆酸产品0.25kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.0%。

7.一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，通过以下步骤实现：取正丙醇0.2kg，乙酸异丙酯19.8kg，混合制成重量比为1:99的混合溶剂，取待纯化的胆酸混合物1kg，其中熊去氧胆酸纯度以质量分数计为77%，一次性加入10kg混合溶剂进行溶解，搅拌1 h后密闭静置5 h，然后过滤得到不溶固体，干燥不溶固体得到的熊去氧胆酸产品0.64kg，用高效液相色谱法测定熊去氧胆酸产品的纯度，以质量分数计为97.5%。

8.根据权利要求1-7任一所述的一种用混合溶剂纯化熊去氧胆酸的方法，其特征在于，熊去氧胆酸产品的纯度采用高效液相色谱法测定。