CN101745035A - 治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，该质量控制方法是由性状、鉴别、检查和含量测定组成，其中鉴别是对天麻、蓝布正、丹参、钩藤、黄芪和虎杖的鉴别，含量测定分别是用紫外分光光度法对胶囊制剂中总黄酮的含量测定和用高效液相色谱法对胶囊制剂中天麻素的含量测定。与现有技术相比，本发明建立了治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，对胶囊制剂的性状、鉴别、检查和含量测定进行了研究和筛选，所采用的质量控制方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制质量中风的胶囊制剂的质量，确保该制剂的临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及药品的质量控制方法，特别是一种治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，属于药品的技术领域。
背景技术
中风又称脑卒中、脑血管意外，脑卒中是一种严重威胁人类健康和生命的常见疾病，是由于缺血或出血引起的急性局部、短暂或持久性脑损害，通常包括脑出血、脑梗死、蛛网膜下腔出血在内的一组疾病。中风分为出学性中风和缺血性中风，其中缺血性中风占中风患者的70％左右。主要临床表现为突然昏仆、半身不遂、眩晕头痛、偏身麻木、语言无力、口舌涡斜等症状。脑卒中是脑血管疾病的一种类型。后者包括的范围更广，除了脑卒中外，还有血管性痴呆、高血压性脑病、脑动脉炎等疾病。随着经济的发展，人民生活水平的提高，以及传染病的良好控制，在许多国家，脑卒中成为三大死亡原因之一。有关资料表明，脑卒中在我国的死亡原因中居第二位，仅次于恶性肿瘤，在北方一些城市已上升为第一位。我国的脑卒中发病准绳约为120～180/10万，死亡率约为60～120/10万，也就是说，我国每年新发病例约150万，每年死于卒中者近100万，患病人数更是高达500万以上。幸存者中约3/4不同程度丧失劳动能力，重度致残者占40％以上。
上述数据中我们可以看出，脑卒中不仅发病率、死亡率高，并且致残率也高，严重降低了患者的生活质量，给社会、家庭带来极大负担。近年来，随着人口老年化程度的加剧，中风已成为一个备受关注的社会问题。中风发病率随年龄随年龄的增大而显著升高，发达国家65岁以上的老年人口的比例增加，而发展中国家在今后20年内60岁以上的老年人口的比例将增加1倍，这种情况加剧了中风发病的增长。中风的病死率在近几十年内虽略有下降，但仍然居高不下。在世界范围内中风为第二大高病死率疾病，28天内病死率男性为15％～49％，女性为18％～57％，在中国病死率男性为28％，女性为37％。而在中风的存活者当中，只有10％的病人可完全恢复正常功能，48％的病人遗有偏瘫，22％的病人无法行走，24％～53％的病人完全或部分生活不能自理，给患者家庭和社会带来沉重负担。因此，治疗中风药物具有较大的药品需求市场。中医药及民族医药在中风先兆期、恢复期、后遗症的康复治疗及防止中风再次发作，减轻致残机率和因残疾所带来的后果方面有独特效果，使残疾者的残存功能和潜在能力在治疗后获得最大的发挥，获得生活能力和工作能力，重返家庭和社会，平等地享受人类的各种权利，提高生活质量有其独道疗效和特色。由于该药物是一种新药，目前还没有有效的质量控制方法。发明人对该药物的胶囊制剂进行了研究，以期探索如何有效控制胶囊制剂的质量，以确保胶囊制剂的临床疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，包括性状、鉴别、检查和含量测定。所制定的质量控制方法能全面有效地控制胶囊制剂的质量，从而确保了该胶囊制剂的临床疗效。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法。这种胶囊这样制备：蓝布正200g、天麻150g、杜仲100g、红禾麻200g、虎杖200g、钩藤120g、丹参200g、黄芪200g、女贞子150g、鸡血藤200g、苦丁茶80g、红花80g、夏枯草200g、伸筋草80g、舒筋草80g，以上十五味药材，取天麻，粉碎，过100目筛，备用；其余蓝布正等十四味加水煎煮两次，每次加水8倍，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至60℃相对密度为1.25的浸膏，减压干燥，粉碎，过80目筛，加入上述天麻粉，以适量75％乙醇制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，其质量控制方法由性状、鉴别、检查和含量测定组成，其中鉴别是对天麻、蓝布正、丹参、钩藤、黄芪和虎杖的鉴别，含量测定是分别用紫外分光光度法对胶囊制剂中总黄酮的含量测定和用高效液相色谱法对胶囊制剂中天麻素的含量测定。
上述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法中，具体包括以下几项：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：对制剂中天麻进行显微鉴别；以蓝布正对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别蓝布正；以原儿茶醛对照品为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别丹参；以钩藤对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别钩藤；以黄芪对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂照薄层色谱法鉴别黄芪；以虎杖对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别虎杖；
检查：符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：以无水芦丁对照品为对照，在500nm波长处照紫外分光光度法测定胶囊制剂中总黄酮的含量；以天麻素对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相照高效液相色谱法测定胶囊制剂中天麻素的含量。
前述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法中，所述鉴别由以下项组成：
(1)天麻鉴别：分别取本品0.4g，加水适量振摇洗至溶液几近无色，残渣装片后置显微镜下观察：见棕色组织碎块，加碘液(0.02mol/L)染色3～5分钟，染成茶棕色，再用水洗除碘液，则部分组织碎块边缘或部分菲薄组织碎块呈紫堇色或茶紫色；
(2)蓝布正鉴别：取胶囊内容物5g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml溶解，作为供试品溶液；另取蓝布正对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.5∶0.05的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)丹参鉴别：取胶囊内容物5g，加稀盐酸20ml，超声处理30min，离心，取上清液用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一聚酰胺板上，以体积比为10∶9∶1的苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)钩藤鉴别：取胶囊内容物5g，加乙醇20ml、25％盐酸2.5ml，回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取钩藤对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板或厚板上，以体积比为14∶6∶0.5的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下365nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)黄芪鉴别：取胶囊内容物5g，加甲醇30ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，水层挥去乙醚，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的1％氢氧化钾溶液洗3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下显色至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)虎杖鉴别：分别取虎杖对照药材1g，照鉴别(4)供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别(4)供试品溶液及虎杖对照药材溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法中，所述胶囊制剂中总黄酮、天麻素的含量测定为：
(1)总黄酮的含量测定
对照品溶液的制备：取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液；
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；
测定法：分别取装量差异项下的本品，研细，取0.1g，精密称定，精密加水100ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算；
(2)天麻素的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的乙腈-0.05％磷酸溶液作为流动相，检测波长为220nm，理论板数按天麻素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异下本品内容物1.5g，精密称定，精密加入50％乙醇50ml加流提取3小时，过滤，精密吸取20ml续滤液过中性氧化铝柱(3g，200-300目，d＝2cm)，用80％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，水浴挥干，残渣加体积比为4∶96的乙腈-水混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
前述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法中，每粒胶囊含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计，不得少于30mg；含天麻以天麻素(C13H18O7)计，不少于0.30mg。
为了研究治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，发明人进行了大量的实验以筛选最佳方案，具体如下：
一、性状的研究
根据样品的试验结果拟定，三批中试样品均与拟定结果描述一致，列入质量控制方法正文。
二、鉴别方法的研究
2.1处方中天麻的显微鉴别
分别取本品0.4g，加水适量振摇洗至溶液几近无色，残渣装片后置显微镜下观察：见棕色组织碎块，加碘液(0.02mol/L)染色3-5分钟，染成茶棕色，再用水洗除碘液，则部分组织碎块边缘或部分菲薄组织碎块呈紫堇色或茶紫色。经3批中试样品验证，此方法重复性好，专属性强，故将其收入质量控制方法正文。
2.2处方中蓝布正的薄层色谱鉴别
蓝布正鉴别：取胶囊内容物5g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml溶解，作为供试品溶液。另取蓝布正对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.5∶0.05的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。供试品色谱与对照药材色谱对应整齐，斑点分离清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.3处方中丹参的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物5g，加稀盐酸20ml，超声处理30min，离心，取上清夜用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一聚酰胺板上，以体积比为10∶9∶1的苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.4处方中钩藤的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物5g，加乙醇20ml 25％盐酸2.5ml，回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取钩藤对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板(厚板)上，以体积比为14∶6∶0.5的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下365nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.5处方中黄芪的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物5g，加甲醇30ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，水层挥去乙醚，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的1％氢氧化钾溶液洗3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下显色至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
三、检查项的研究
3.1崩解时限
按《中国药典》2005年版一部“附录XII A崩解时限检查法”测定，规定本品应在30分钟内全部崩解，本品三批检测结果见表1，均符合规定。
3.2水分检查
按《中国药典》2005年版一部“附录IX H水分测定法第一法”测定，测定结果见表1，3批样品均符合规定。
3.3装量差异检查
依据《中国药典》2005年版一部“附录I L胶囊剂”项下进行检查，结果见表1，3批样品均符合规定。
3.4重金属检查
照《中国药典》2005年版一部附录IX E重金属检查法第二法操作。
3.4.1标准铅溶液的制备：精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置1000ml容量瓶中，加硝酸5ml，水50ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准铅贮备液。
临用时，精密量取前贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10ug的铅)。
3.4.2供试品溶液的制备：精密称取本品内容物1g，置坩锅中，电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸1ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽，加硝酸0.5ml，蒸干，放冷，马弗炉中500～600℃炽灼使完全灰化，放冷加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至酚酞指示剂显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释成25ml。
3.4.3阳性对照液的制备：将配制供试品溶液的试剂，置另一坩锅中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加入标准铅溶液1ml，再加水稀释成25ml。
3.4.4空白对照液的制备：将配制供试品溶液的试剂，置另一坩锅中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，再加水稀释成25ml。
3.4.5比色：供试品溶液、阳性对照液和空白对照液的3支纳氏比色管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试品液显出的颜色与阳性对照液比较，颜色更浅，空白对照无干扰。结果见表1。
结果表明，3批样品重金属含量均小于10ppm，故未列入正文。
3.5砷盐检查
照《中国药典》2005年版一部附录IXF砷盐检查法第一法操作。
3.5.1标准砷溶液的制备：称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于1μg的As)。
3.5.2供试品溶液的制备：精密称取本品内容物1g，置坩埚中，加入氢氧化钙0.5g，混匀，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼，(注意不使内容物溅出)至烟雾除尽，移入马弗炉中在500～600℃炽灼至灰化，放冷，加盐酸5ml和水23ml，水浴上加热溶解，作为供试品溶液。
3.5.3阳性对照液的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置坩锅中，同3.5.2方法制得阳性对照液。
3.5.4空白对照液的制备：另取坩锅一只，加入氢氧化钙0.5g，同供试品溶液的制备方法制得空白对照液。
3.5.5砷斑的制备：将供试品溶液、阳性对照液、空白对照液分别移至测砷瓶中，再分别加碘化钾试液5ml，酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，30℃水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，观察砷斑颜色，结果供试品溶液砷斑浅于标准砷斑颜色。结果见表1。
结果表明，3批样品砷盐含量均小于2ppm，故未列入正文。
表1三批样品检查结果表
| 样品批号 | 20051112 | 20051113 | 20051114 |
| 崩解时间(min) | 10 | 11 | 10 |
| 装量差异 | 符合规定 | 符合规定 | 符合规定 |
| 水分(％) | 2.0 | 1.9 | 2.0 |
| 重金属(ppm) | ＜10 | ＜10 | ＜10 |
| 样品批号 | 20051112 | 20051113 | 20051114 |
| 砷盐(ppm) | ＜2 | ＜2 | ＜2 |
3.6微生物检查方法验证
实验材料：生化培养箱、立式压力蒸汽消毒器、双筒实目显微镜。阳性对照菌及常规微生物检验用化学试剂和玻璃仪器等。
营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、曙红亚甲蓝琼脂、胆盐乳糖增菌培养基、胆盐乳糖发酵培养基(以上均为中国北京三科科技开发公司生产，按CP05版规定配制及灭菌)、四甲基伞形酮葡萄糖苷酸(中国北京牛牛基因技术有限公司)；
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]，以上菌种均来源于贵州省药品检验所。
供试液制备：按规定取胶囊内容物，充分摇匀后混合，取胶囊内容物10g，加入pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，即为1∶10供试液。验证结果见表2至表5。
表2细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证回收试验记录
回收率＝(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数×100％
表3采用培养基稀释法0.2mL/皿
表4控制菌检查方法验证记录(大肠埃希菌)
表5控制菌检查方法验证记录(大肠菌群)
可知，本品可采用常规法进行霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群检验，用培养基稀释法(0.2mL/皿)对细菌进行检验。按验证方法对本品的三批样品微生物限度进行了检查，结果均符合规定。
结论：由以上实验可知，可采用常规方法对胶囊制剂进行检查项下的各项检查。
四、胶囊制剂中总黄酮、天麻素含量测定的研究
本品中多味药含有总黄酮，主药天麻含有天麻素，现代研究表明，总黄酮具有降低血压作用；天麻素具有镇静、催眠、阻止血栓形成、增强免疫和抗遗忘抗衰老的药理作用，因此，它是天麻有效成分，本品采用紫外分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)测定总黄酮的含量，高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定天麻素含量，总黄酮测定方法参照药材槐花中总黄酮测定方法；天麻素测定方法参照药材天麻中天麻素测定方法进行。
4.1总黄酮的含量测定
4.1.1仪器与试药：紫外分光光度计(北京普析通用)；AUW220D(十万分之一)天平(日本)；水(重蒸馏，临用前制备)；亚硝酸钠(分析纯，重庆川江)；硝酸铝(分析纯，汕头西陇)；氢氧化钠(分析纯，成都金山)；无水芦丁(中检所，批号：100080-200307)。样品三批(批号：20051112、20051113、20051114)。
4.1.2标准溶液的制备：精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品0.0528g，置于25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
4.1.3检测波长选择：精密量取标准溶液3ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，作为对照品溶液。取上述溶液适量，在400-600nm波长范围内扫描，对照品溶液在500nm处有最大吸收，因此我们选择500nm为本品中总黄酮检测波长。
4.1.4精密度试验：取“标准曲线”项下3号对照品溶液(0.0253ug/ml)适量，依法重复测定5次，记录吸收度值，求出相对标准偏差，结果表明，对照品无水芦丁吸收度测定精密度良好，RSD＝0.03％，结果见表6。
表6精密度试验结果
4.1.5稳定性试验：分别取装量差异项下的本品，研细，取0.1g，精密称定，精密加水100ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用水补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，制备成供试品溶液，在室温下每隔一段时间依法测定吸收度，求相对标准偏差；结果表明，该方法测定样品中总黄酮吸收度在40分钟内基本稳定，RSD＝0.04％，结果见表7。
表7稳定性试验结果
4.1.6重复性试验：分别取装量差异项下的本品，研细，分别取0.1g，共5份，精密称定，分别精密加水100ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用水补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，制备成供试品溶液，依法测定吸收度，求相对标准偏差；结果表明，该方法测定样品中；芦丁含量重复性良好，回归方程为：A＝0.01449C+0.02091(r＝0.9995)；RSD＝0.53％，结果见表8。
表8重复性试验结果
| 取样量(g) | 吸收度 | 芦丁(mg/g) | 平均含量(mg/g) | RSD(％) |
| 0.10230.10140.10320.10090.1024 | 0.34420.34080.34410.33820.3404 | 109.0481108.8590108.0637108.5093107.6611 | 108.4282 | 0.53 |
4.1.7回收率试验：采用加样回收试验，取已知含量的重复性试验的同一批样品(总黄酮平均含量为108.4282mg/g)共5份，精密称取0.05g，分别加入无水芦丁对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，照上述条件测定吸光度，计算含量，求相对标准偏差，回归方程为：A＝0.01701C+0.00821(r＝0.9998)；RSD＝0.34％，结果表明，此方法具有较好的加样回收率，结果见表9。
表9供试品中天麻素加样回收试验结果
| 序号 | 样品取样量(g) | 理论含量(mg) | 加入量(mg) | 吸收度 | 实测值(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 1 | 0.0502 | 5.4474 | 5.0032 | 0.3647 | 10.4788 | 100.56 | ||
| 2 | 0.0503 | 5.4550 | 5.0032 | 0.3637 | 10.4494 | 99.82 | ||
| 3 | 0.0508 | 5.5103 | 5.0032 | 0.3665 | 10.5317 | 100.36 | 100.20 | 0.34 |
| 4 | 0.0501 | 5.4366 | 5.0032 | 0.3631 | 10.4318 | 99.84 | ||
| 5 | 0.0505 | 5.4724 | 5.0032 | 0.3653 | 10.4964 | 100.42 |
4.1.8三批样品测定及成品含量限度制定：按质量标准草案总黄酮测定项下制备供试品溶液和对照品溶液，测定吸光度，计算其中总黄酮的含量，结果见表10。
表10三批样品中总黄酮含量测定结果
本品处方多味药均含总黄酮，考虑到生产工艺的波动和检测操作误差等因素的影响，根据三批本品含量测定结果，暂定本方每粒含总黄酮含量为30mg。
4.2天麻素的含量测定
4.2.1仪器与试药：高效液相色谱仪：岛津2010(日本)；AUW220D(十万分之一)天平(日本)；乙腈(色谱纯，天津大茂)；水(重蒸馏，临用前制备)，磷酸(分析纯，天津大茂)，天麻素(中检所，批号：110807-200307)。样品三批(批号：20051112、20051113、20051114)。
4.2.2色谱条件：DiamonsilC18柱(5μm)，流动相：乙腈-0.05％磷酸溶液(4∶96)，波长220nm，流速：1ml/min，柱温：35℃。
4.2.3系统适用性试验：分别取天麻素对照品溶液、供试品溶液及缺天麻的阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可知，在此色谱条件下，天麻素与其他组分峰分离完全，在与天麻素峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰。
4.2.4供试品溶液的制备
本试验对供试品处理方法作了以下考察：
取本品内容物1.5g，精密称定，置回流瓶中，精密加入50％乙醇50ml回流提取3小时，过滤，精密吸取20ml续滤液过中性氧化铝柱(3g，200～目，d＝2cm)，分别用不同量的80％甲醇洗脱，收集洗脱液，水浴挥干。残渣加乙腈-水(4∶96)混合溶液溶解，转移至10ml容量瓶中，稀释至刻度。摇匀，滤过，取续滤液即得。结果见表11。
表11洗脱量考察结果
| 洗脱体积(ml) | 60 | 80 | 100 | 120 |
| 含量(mg/g) | 1.82 | 2.14 | 2.38 | 2.39 |
试验结果表明，本品采用80％甲醇100ml与120ml含量无明显变化，根据不同洗脱量考察结果，确定洗脱量为100ml。
4.2.5线性关系考察：精密称取天麻素对照品15.49mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得0.06196mg/ml的天麻素对照品溶液，分别精密吸取天麻素对照品溶液2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，测定结果见表12，并以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积值Y(mv.s)为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，天麻素在0.1549～1.2392μg范围内线性关系良好。
表12天麻素线性关系考察
4.2.6精密度试验：精密吸取天麻素对照品溶液10μl(浓度为0.06196mg/ml)，重复进样5次，测定天麻素峰面积积分值，求出相对标准偏差，结果表明精密度良好，结果见表13。
表13精密度实验结果
4.2.7稳定性试验：取一供试品(批号：20051112)，按质量控制方法正文中供试品溶液的制备方法制备供试液。在室温下每隔一段时间进样10μl，测定天麻素峰面积值，求相对标准偏差，结果表明，天麻素在12小时内基本稳定(RSD＝0.77％)，结果见表14。
表14稳定性试验结果
4.2.8重复性试验：精密取本品(批号：20051112)各1.5g，共5份，按质量质量控制方法正文中供试品溶液的制备方法制备供试液。精密吸取供试品溶液各10μl，测定天麻素峰面积积分值，计算含量，求相对标准偏差，结果表明，重复性良好(RSD＝0.77％)。见表15。
表15重复性试验结果
4.2.9中间精密度：取同一批样品(批号：20051112)，分两组由不同操作人员在不同设备上对本品进行含量测定，结果表明，中间精密度良好(RSD＝0.12％)。结果见表16。
A组：LC-2010A高效液相色谱仪；B组：SSI高效液相色谱仪。
表16中间精密度试验结果
4.2.10回收率试验：采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品(批号：20051112)6份，精密称取各约0.75g，精密加入天麻素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10μl，照上述色谱条件测定，记录色谱图，计算含量，结果表明，天麻素的回收率良好，结果见表17。
表17加样回收试验结果
4.2.11样品测定：取3批中试样品，按质量控制方法正文测定其中天麻素含量(结果见表18)。按下式计算含量：
式中：A样-供试品天麻素峰面积积分值
A对-天麻素对照品峰面积积分值
C对-天麻素对照品浓度(mg/ml)
M样-供试品取样量(g)
M装量-平均装量(g)
50、10、20-供试品稀释体积(ml)
表183批样品中天麻素的含测结果
样品中含量限规定：本品处方中天麻药材150g，天麻素含量限度为0.20％，按下式计算本品每粒胶囊天麻素含量限：
含量限(mg/粒)＝药材量×药材含量限×转移率/制成量
即：含量限(mg/粒)＝150g×0.2％×100％/1000粒＝0.30mg/粒
考虑到生产和贮存过程对药品的影响，规定本品每粒含天麻以天麻素(C13H18O7)计，不得少于0.30mg。
五、质量控制方法中所用到的标准物质
芦丁对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：100080-200307，供含量测定用。
天麻素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110807-200205，供含量测定用。
原儿茶醛对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110810-200506，供含量测定用。
蓝布正对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：121380-200401，供鉴别用。
钩藤对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：121190-200402，供鉴别用。
黄芪对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：121462-200203，供鉴别用。
虎杖对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：120980-200304，供鉴别用。
本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明建立了治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，对胶囊制剂的性状、鉴别、检查和含量测定进行了研究和筛选，所采用的质量控制方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制质量中风的胶囊制剂的质量，确保该制剂的临床疗效。
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的说明。
具体实施方式
实施1。治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法如下：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：(1)天麻鉴别：分别取本品0.4g，加水适量振摇洗至溶液几近无色，残渣装片后置显微镜下观察：见棕色组织碎块，加碘液(0.02mol/L)染色3-5分钟，染成茶棕色，再用水洗除碘液，部分组织碎块边缘或部分菲薄组织碎块呈紫堇色或茶紫色。
(2)蓝布正鉴别：取胶囊内容物5g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml溶解，作为供试品溶液。另取蓝布正对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.5∶0.05的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)丹参鉴别：取胶囊内容物5g，加稀盐酸20ml，超声处理30min，离心，取上清夜用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一聚酰胺板上，以体积比为10∶9∶1的苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)钩藤鉴别：取胶囊内容物5g，加乙醇20ml 25％盐酸2.5ml，回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取钩藤对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板(厚板)上，以体积比为14∶6∶0.5的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下365nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)黄芪鉴别：取胶囊内容物5g，加甲醇30ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，水层挥去乙醚，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的1％氢氧化钾溶液洗3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下显色至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)虎杖鉴别：分别取虎杖对照药材1g，照鉴别(4)供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取鉴别(4)供试品溶液及虎杖对照药材溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：
(1)总黄酮的含量测定
对照品溶液的制备：取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。
测定法：分别取装量差异项下的本品，研细，取0.1g，精密称定，精密加水100ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算，即得。
(2)天麻素的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的乙腈-0.05％磷酸溶液作为流动相，检测波长为220nm，理论板数按天麻素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异下本品内容物1.5g，精密称定，精密加入50％乙醇50ml加流提取3小时，过滤，精密吸取20ml续滤液过中性氧化铝柱(3g，200-300目，d＝2cm)，用80％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，水浴挥干。残渣加乙腈-水(4∶96)混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，稀释至刻度。摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计，不得少于30mg。含天麻以天麻素(C13H18O7)计，不少于0.30mg。
功能主治：活血祛瘀，通脉活络，用于缺血性脑血栓、脑栓塞；脑动脉粥样硬化等脑血管疾病。用法用量：口服。一次3粒，一日3次。规格：每粒装0.40g。贮藏：密封，防潮。
Claims (5)
1.一种治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，这种胶囊这样制备：蓝布正200g、天麻150g、杜仲100g、红禾麻200g、虎杖200g、钩藤120g、丹参200g、黄芪200g、女贞子150g、鸡血藤200g、苦丁茶80g、红花80g、夏枯草200g、伸筋草80g、舒筋草80g，以上十五味药材，取天麻，粉碎，过100目筛，备用；其余蓝布正等十四味加水煎煮两次，每次加水8倍，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至60℃相对密度为1.25的浸膏，减压干燥，粉碎，过80目筛，加入上述天麻粉，以适量75％乙醇制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，其特征在于：质量控制方法由性状、鉴别、检查和含量测定组成，其中鉴别是对天麻、蓝布正、丹参、钩藤、黄芪和虎杖的鉴别，含量测定是分别用紫外分光光度法对胶囊制剂中总黄酮的含量测定和用高效液相色谱法对胶囊制剂中天麻素的含量测定。
2.根据权利要求1所述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：对制剂中天麻进行显微鉴别；以蓝布正对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别蓝布正；以原儿茶醛对照品为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别丹参；以钩藤对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别钩藤；以黄芪对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂照薄层色谱法鉴别黄芪；以虎杖对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别虎杖；
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：以无水芦丁对照品为对照，在500nm波长处照紫外分光光度法测定胶囊制剂中总黄酮的含量；以天麻素对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相照高效液相色谱法测定胶囊制剂中天麻素的含量。
3.根据权利要求1或2所述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：所述鉴别由以下项组成：
(1)天麻鉴别：分别取本品0.4g，加水适量振摇洗至溶液几近无色，残渣装片后置显微镜下观察：见棕色组织碎块，加碘液染色3～5分钟，染成茶棕色，再用水洗除碘液，部分组织碎块边缘或部分菲薄组织碎块呈紫堇色或茶紫色；
(2)蓝布正鉴别：取胶囊内容物5g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml溶解，作为供试品溶液；另取蓝布正对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.5∶0.05的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)丹参鉴别：取胶囊内容物5g，加稀盐酸20ml，超声处理30min，离心，取上清液用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一聚酰胺板上，以体积比为10∶9∶1的苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)钩藤鉴别：取胶囊内容物5g，加乙醇20ml、25％盐酸2.5ml，回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取钩藤对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板或厚板上，以体积比为14∶6∶0.5的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下365nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)黄芪鉴别：取胶囊内容物5g，加甲醇30ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，水层挥去乙醚，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的1％氢氧化钾溶液洗3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下显色至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)虎杖鉴别：分别取虎杖对照药材1g，照鉴别(4)供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别(4)供试品溶液及虎杖对照药材溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1或2所述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：所述胶囊制剂中总黄酮、天麻素的含量测定为：
(1)总黄酮的含量测定
对照品溶液的制备：取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液；
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白；照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；
测定法：分别取装量差异项下的本品，研细，取0.1g，精密称定，精密加水100ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算；
(2)天麻素的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的乙腈-0.05％磷酸溶液作为流动相，检测波长为220nm，理论板数按天麻素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异下本品内容物1.5g，精密称定，精密加入50％乙醇50ml加流提取3小时，过滤，精密吸取20ml续滤液过中性氧化铝柱，用80％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，水浴挥干，残渣加体积比为4∶96的乙腈-水混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
5.根据权利要求1、2或4所述的治疗中风的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：每粒胶囊含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计，不得少于30mg；含天麻以天麻素(C13H18O7)计，不少于0.30mg。
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