CN109682657B - 一种天麻粉末的显微观察制片方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种天麻粉末的显微观察制片方法及其应用，属于显微技术领域。本发明的天麻粉末显微制片方法包括以下步骤：(1)取天麻粗粉，加入稀盐酸后，除去稀盐酸溶解出来的白色乳浊状液体，用NaOH水溶液洗涤后再用蒸馏水洗涤；(2)加入乙醇‑甘油溶液得混悬液，吸取混悬液至载玻片上，加热挥干溶剂使天麻粗粉聚集；(3)滴加水合氯醛溶液至天麻粗粉上，加热透化；(4)滴加醋酸甘油水溶液，盖上盖玻片压平，显微镜观察拍照。本发明的天麻粉末显微制片方法，使天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，准确度更高，从而更科学地计算超微粉破壁率。

Description

一种天麻粉末的显微观察制片方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种天麻粉末的显微观察制片方法及其应用，属于显微技术领域。
背景技术
超微粉碎技术是近年来迅速发展的一项新技术。目前关于天麻破壁饮片的专利有数篇，相对于天麻常规饮片，经过超微粉碎后制备的天麻破壁饮片有效成分利用率更高，能最大程度地发挥天麻的药效活性；超微粉碎技术是制备天麻破壁饮片中的关键技术，评价超微粉碎效果的一个重要指标是细胞的破壁率。然而，目前天麻超微粉破壁率还没有明确的计算方法，大部分报道是以超微粉碎后剩余细胞数目来限定破壁率，此方法缺乏科学性，不能体现天麻超微粉的真实破壁程度。
公开号为CN1528379A的专利公开了“全天麻细胞破壁微丸胶囊的制备方法”，包括天麻粗粉碎、干燥、超微粉碎、制软材、制丸等步骤，此专利公开了超微粉碎的破壁率达到80％以上，但并未明确破壁率的定义和计算方法。
公开号为CN107802746A的专利公开了“天麻破壁饮片及其制备方法”，此专利限定天麻破壁饮片的未破壁限度为0～5个，并没有明确破壁率，无法真实反映超微粉碎的效果。
针对以上破壁率定义和计算方法的不足，本发明公开了一种天麻粉末的显微观察制片方法，使天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，从而更科学地计算超微粉破壁率。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种天麻粉末的显微观察制片方法及其应用，本发明的显微观察制片方法，使天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，从而更科学计算超微粉破壁率。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种天麻粉末的显微观察制片方法，包括以下步骤：
(1)取天麻粗粉，加入稀盐酸后，过滤除去稀盐酸溶解出来的白色乳浊状液体，重复多次至加入的稀盐酸呈澄清状态，过滤除去稀盐酸，用NaOH水溶液洗涤天麻粗粉再用蒸馏水洗涤；
(2)向洗涤后的天麻粗粉中加入乙醇-甘油溶液得天麻粗粉混悬液，吸取天麻粗粉混悬液至载玻片上，同时加热挥干溶剂使天麻粗粉聚集；
(3)然后滴加水合氯醛溶液至天麻粗粉上，加热透化，待细胞透化完全后用滤纸吸干剩余溶剂；
(4)滴加醋酸甘油水溶液，盖上盖玻片压平，完成制片，显微镜观察拍照。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，天麻粗粉的粒度为30～100目，稀盐酸的浓度为0.05～1mol/L，NaOH水溶液的浓度为0.05～1mol/L。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，乙醇-甘油溶液中乙醇与甘油的体积比为(5～1)：1，天麻粗粉与乙醇-甘油溶液的质量体积比为1：(5～20)，加热方式为水浴锅加热，温度为85～95℃。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，水合氯醛溶液的配制方法为：将10～50g水合氯醛晶体溶解于10mL水中，即得。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，水合氯醛的用量为1～2滴，加热透化的次数为2～3次，每次1～5分钟。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，加热方式为水浴锅加热，温度为85～95℃。
作为本发明所述显微观察制片方法的优选实施方式，所述步骤(4)中，显微镜为光学显微镜，醋酸甘油水溶液中醋酸、甘油、水的体积比为(0.5～2)：(0.5～2):1，醋酸甘油水溶液的用量为50～150μl。
本发明还提供了上述显微观察制片方法在计算天麻超微粉破壁率中的应用。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述计算天麻超微粉破壁率还包括以下步骤：
(1)显微镜观察拍照后，记录6～10个视野中薄壁细胞的数目，取薄壁细胞数目的平均值；
(2)统计分析天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述步骤(2)的具体操作为：取6份不同体积的天麻粗粉混悬液，制片，显微观察记录薄壁细胞数目，获得天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的天麻粉末显微制片方法，使天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，准确度更高，从而更科学地计算超微粉破壁率。
附图说明
图1为本发明实施例1中光学显微镜观察到的薄壁细胞照片图。
图2为本发明实施例2中光学显微镜观察到的薄壁细胞照片图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
利用本发明的方法观察并统计天麻粉末薄壁细胞数量与质量的线性关系，包括以下步骤：
(1)取30目的天麻粗粉，置于容量瓶中加入1mol/L盐酸后，除去盐酸溶解出来的白色乳浊状液体，重复多次后直至加入的盐酸呈澄清状态，除去盐酸，用少量0.05mol/L的NaOH洗涤后再用蒸馏水洗涤天麻粗粉；
(2)加入体积比为5：1的乙醇-甘油溶液混悬天麻粗粉，定容天麻粗粉与乙醇-甘油溶液的质量体积比为1:20，充分摇匀天麻粗粉混悬液，用移液枪吸取6份不同体积的混悬液至载玻片上并同时加热挥干部分溶剂使粉末集中在一定区域内；
(3)滴加5g/mL的水合氯醛溶液1～2滴至天麻粗粉上，水浴锅设定85℃使用蒸汽加热透化2～3次，每次1～5分钟，并同时显微观察监测细胞透化程度，待细胞透化完全后用滤纸吸干剩余溶剂；
(4)滴加醋酸甘油水(体积比0.5:0.5:1)溶液50μl，盖上盖玻片压平粉末，完成制片；
(5)光学显微镜观察拍照，6块板子分别记录8个视野中薄壁细胞数目，取薄壁细胞数目的平均值；
(6)统计分析天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。显微照片如图1所示。
由图1可知，本发明的显微观察制片方法使天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，准确度更高，从而更科学地计算超微粉破壁率。
实施例2
利用本发明的方法观察并统计天麻粉末薄壁细胞数量与质量的线性关系，包括以下步骤：
(1)取100目的西藏波密天麻粗粉，置于容量瓶中加入0.05mol/L盐酸后，除去盐酸溶解出来的白色乳浊状液体，重复多次后直至加入的盐酸呈澄清状态，除去盐酸，用含少量1mol/L的NaOH溶液洗涤后再用蒸馏水洗涤西藏波密天麻粗粉；
(2)加入体积比为1：1的乙醇-甘油溶液混悬藏天麻粗粉，天麻粗粉与乙醇-甘油溶液的质量体积比为1:5，充分摇匀西藏波密天麻粗粉混悬液，用移液枪吸取6份不同体积的混悬液至载玻片上并同时加热挥干部分溶剂使粉末集中在一定区域内；
(3)滴加1g/mL的水合氯醛溶液1～2滴至西藏波密天麻粗粉上，水浴锅设定95℃使用蒸汽加热透化2～3次，每次1～5分钟，并同时显微观察监测细胞透化程度，待细胞透化完全后用滤纸吸干剩余溶剂；
(4)滴加醋酸甘油水(体积比2:2:1)溶液150μl，盖上盖玻片压平粉末，完成制片；
(5)光学显微镜观察拍照，6块板子分别记录8个视野中薄壁细胞数目，取薄壁细胞数目的平均值；
(6)统计分析西藏波密天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。显微照片如图2所示。
由图2可知，本发明的显微观察制片方法使西藏波密天麻细胞在显微镜下清晰可见，易于计数细胞数目，确定天麻粉末细胞数目与质量的线性关系，准确度更高，从而更科学地计算超微粉破壁率。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种用于观察并统计天麻粉末薄壁细胞数量与质量的线性关系的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取天麻粗粉，加入稀盐酸后，过滤除去稀盐酸溶解出来的白色乳浊状液体，重复多次至加入的稀盐酸呈澄清状态，过滤除去稀盐酸，用NaOH水溶液洗涤后再用蒸馏水洗涤天麻粗粉；
（2）向洗涤后的天麻粗粉中加入乙醇-甘油溶液得天麻粗粉混悬液，吸取天麻粗粉混悬液至载玻片上，同时加热挥干溶剂使天麻粗粉聚集；
（3）然后滴加水合氯醛溶液至天麻粗粉上，加热透化，待细胞透化完全后用滤纸吸干剩余溶剂；
（4）滴加醋酸甘油水溶液，盖上盖玻片压平，完成制片，显微镜观察拍照；
（5）显微镜观察拍照后，记录6~10个视野中薄壁细胞的数目，取薄壁细胞数目的平均值；
（6）统计分析天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。
2.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（1）中，天麻粗粉的粒度为30~100目，稀盐酸的浓度为0.05~1mol/L，NaOH水溶液的浓度为0.05~1mol/L。
3.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（2）中，乙醇-甘油溶液中乙醇与甘油的体积比为（5~1）：1，天麻粗粉与乙醇-甘油溶液的质量体积比为1：（5~20），加热方式为水浴锅加热，温度为85~95℃。
4.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（3）中，水合氯醛溶液的配制方法为：将10~50g水合氯醛晶体溶解于10mL水中，即得。
5.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（3）中，水合氯醛的用量为1~2滴，加热透化的次数为2~3次，每次1~5分钟。
6.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（3）中，加热方式为水浴锅加热，温度为85~95℃。
7.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（4）中，显微镜为光学显微镜，醋酸甘油水溶液中醋酸、甘油、水的体积比为（0.5~2）：（0.5~2）:1，醋酸甘油水溶液的用量为50~150µl。
8.如权利要求1所述的天麻粉末显微观察制片方法，其特征在于，所述步骤（6）的具体操作为：取6份不同体积的天麻粗粉混悬液，制片，显微观察记录薄壁细胞数目，获得天麻薄壁细胞数目与天麻粗粉质量的线性关系方程式。
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