CN103091501B - 液基细胞系统质量控制物的制取方法 - Google Patents
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Abstract
液基细胞系统质量控制物的制取方法，涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种控制和保证液基细胞系统制片染色效果的质量控制液(质控物)。制取方法是：(一)收集细胞：收集至少10000ml的尿液，加适量防腐剂；静置，弃去上清液，将所剩沉淀过滤，将过滤液离心沉淀，再弃去上清液，余下为质控物细胞；(二)清洗固化细胞；(三)质控物的标化，以此作为制片染色效果标准。本发明通过提取人体尿液中自然脱落细胞作为该质控物的基本细胞，通过防腐、定量标化、保存期观察等实验处理，形成该质控物；同时还对该质控物的应用程序化。解决了液基细胞制片染色系统的质量控制中存在的缺乏一种能够适应该系统各机型使用的标准品——质控物的问题。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种控制和保证液基细胞系统制片染色效果的质量控制液，简称质控物。
背景技术
液基细胞薄层技术TCT(Thin-layercytologytest，Thinprepcytologytest)自1996获美国食品与药品管理局FDA(FoodandAdministration，)认证应用于临床以来，以其标本量大，制片细胞分布均匀、清晰，染色效果好，可实现自动化操作，阳性诊断率高等优点，已逐步取代了传统的巴氏手工制片染色法而广泛应用于临床各类脱落细胞学检验，对各类癌症的早期诊断发挥了前所未有的作用。
但由于液基细胞薄层技术系统目前生产的厂家多，型号杂，加之厂家技术各自保密，其制片的厚薄、染色的时间、细胞着色效果等缺乏统一质量标准，严重制约了该技术效率的发挥，为此，国际国内很多专家试图解决液基细胞制片染色系统的质量控制方法。但到目前为止，该系统的质量控制仍然停留在行政管理和人员培训等主观行为方面，尚未进入客观技术层面质量管理，为什么该技术难于从客观技术层面进行质量管理，其关键问题就是缺乏一种能够适应该系统各机型使用的标准品——质控物。
发明内容
本发明提供一种液基细胞系统质量控制物的制取方法，本发明解决了液基细胞制片染色系统的质量控制中存在的缺乏一种能够适应该系统各机型使用的标准品——质控物的问题。
本发明在长期探索的基础上，通过提取人体尿液中自然脱落细胞作为该质控物的基本细胞，通过防腐、定量标化、保存期观察等实验处理，形成该质控物；同时还对该质控物的应用程序化。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：液基细胞系统质量控制物的制取方法，具体的制备与应用操作如下：
(一)收集细胞：收集至少10000ml的尿液，加适量防腐剂；静置11-13h，弃去85-95％上清液，将所剩沉淀于150-200μm孔径滤器过滤，将过滤液以1900-2100r/5min离心沉淀，再弃去85-95％上清液余下5-15％沉淀为质控物细胞；
(二)清洗固化细胞：将上述细胞沉淀用生理盐水洗涤2-4次，并用生理盐水稀释成20000～30000G/L浓度，再按4-6％的浓度加入戊二醛醛化固定细胞；
(三)质控物的标化：将上述醛化固定的细胞液于UF-1000i尿液分析仪上计数定量，并用4-6％的戊二醛液稀释成20000-25000G/L左右保存于2-4℃冰箱中；同时将该细胞液上液基细胞仪同日常脱落细胞标本一道进行制片染色；通过质控物的用量观察所制片中每高倍视野中平均细胞数，同时求出角化与非角化细胞的平均比例，以此作为制片染色效果标准。
在第(一)步骤中收集细胞所用的防腐剂为叠氮钠，加入量是每升尿液加入Na3N0.4-0.6g。
本发明所制备的质控物的应用方法是：上述质控物放置2-4℃冰箱可保存3-4个月；使用时每天随日常标本上机制片染色，先观察质控物所制片中10个高倍视野细胞平均数和角化与非角化细胞的比例，如果所得结果在质控物标化范围内，说明仪器制片染色符合要求，如果细胞数超出标化范围或角化与非角化细胞比不符合标化指标，均视为标本操作失败，必须对标本重新制片染色，直到符合标化值方为操作成功。
本发明的有益效果是：该质控物的应用可使不同厂家、不同型号的液基细胞系统在制片染色方面达到统一效果，保证不同型号仪器和不同层次用户操作达到同一水平，有效提高脱落细胞诊断阳性率，减少癌症病人的误诊和漏诊率。
具体实施方式
实施例一：
液基细胞系统质量控制物的制取方法，具体的制备与应用操作如下：
(一)收集细胞：收集至少10000ml的尿液，加适量防腐剂，所述防腐剂为叠氮钠，叠氮钠的加入量是每升尿液加入Na3N0.5g；静置12h，弃去90％上清液，将所剩沉淀于100μm孔径滤器过滤，将过滤液以2000r/5min离心沉淀，再弃去90％上清液余下10％沉淀为质控物细胞；
(二)清洗固化细胞：将上述细胞沉淀用生理盐水洗涤3次，并用生理盐水稀释成20000～30000G/L浓度，再按5％的浓度加入戊二醛醛化固定细胞；
(三)质控物的标化：将上述醛化固定的细胞液于UF1000i尿液分析仪上计数定量，并用5％的戊二醛液稀释成20000G/L左右保存于2-4℃冰箱中；同时将该细胞液上液基细胞仪同日常脱落细胞标本一道进行制片染色；通过质控物的用量观察所制片中每高倍视野中平均细胞数，同时求出角化与非角化细胞的平均比例，以此作为制片染色效果标准。
所制备的质控物的应用方法是：上述质控物放置2-4℃冰箱可保存4个月；使用时每天随日常标本上机制片染色，先观察质控物所制片中10个高倍视野细胞平均数和角化与非角化细胞的比例，如果所得结果在质控物标化范围内，说明仪器制片染色符合要求，如果细胞数超出标化范围或角化与非角化细胞比不符合标化指标，均视为标本操作失败，必须对标本重新制片染色，直到符合标化值方为操作成功。
实施例二：
1.质控物的标化：取质控物0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml上液基细胞系统同日常标本制片染色，观察不同浓度制片中10个高倍视野平均细胞数，同时计数10个高倍视野中角化与非角化的平均比值如表1所示：
表1质控物定量标准化表
2.质控物应用：取上述质控物0.5ml与日常标本同时于液基细胞仪上制片染色，然后将所制成的细胞层片在显微镜高倍镜下计数10个视野的平均数19.3；角化/非角化比值为1.37，对照表1标化值表明：此次液基细胞制片染色效果符合质控要求(18～23；1.2～1.6)；如果细胞平均数或比值超出表1标化值范围，则该次制片染色不符合质控要求，必须重新操作，直至符合要求才能继续诊断发报告；
3.如果不同机型采用不同标本量，该质控物表1的标化值均可适合，必要时可将表1中对应的各函数值采用回归处理，制成曲线表可适合更多不同标本量的机型。
本发明参考文献：1.刘建彬邱森灵钟伟娇严美华液基细胞学检测在宫颈癌筛查中的应用实验与检验医学2009年12月第27卷第6期。
2.潘秦镜李凌乔友林等液基细胞学筛查宫颈癌的研究中华肿瘤杂志2001年7月23卷第4期。
3.无锡市江原实业技贸总公司申请专利：一种液基细胞保存液CN101664028A。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (3)
1.液基细胞系统质量控制物的制取方法，其特征在于：具体的制备与应用操作如下：
(一)收集细胞：收集至少10000ml的尿液，加适量防腐剂；静置11-13h，弃去85-95％上清液，将所剩沉淀于150-200μm孔径滤器过滤，将过滤液以1900-2100r/5min离心沉淀，再弃去85-95％上清液余下5-15％沉淀为质控物细胞；
(二)清洗固化细胞：将上述细胞沉淀用生理盐水洗涤2-4次，并用生理盐水稀释成20000～30000G/L浓度，再按4-6％的浓度加入戊二醛醛化固定细胞；
(三)质控物的标化：将上述醛化固定的细胞液于UF-1000i尿液分析仪上计数定量，并用4-6％的戊二醛液稀释成20000-25000G/L保存于2-4℃冰箱中；同时将该细胞液上液基细胞仪同日常脱落细胞标本一道进行制片染色；通过质控物的用量观察所制片中每高倍视野中平均细胞数，同时求出角化与非角化细胞的平均比例，以此作为制片染色效果标准。
2.如权利要求1所述液基细胞系统质量控制物的制取方法，其特征在于：在第(一)步骤中收集细胞所用的防腐剂为叠氮钠，加入量是每升尿液加入Na3N0.4-0.6g。
3.如权利要求1所述液基细胞系统质量控制物的制取方法，其特征在于：所制备的质控物的应用方法是：上述质控物放置2-4℃冰箱可保存3-4个月；使用时每天随日常标本上机制片染色，先观察质控物所制片中10个高倍视野细胞平均数和角化与非角化细胞的比例，如果所得结果在质控物标化范围内，说明仪器制片染色符合要求，如果细胞数超出标化范围或角化与非角化细胞比不符合标化指标，均视为标本操作失败，必须对标本重新制片染色，直到符合标化值方为操作成功。
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