CN104991029A - 一种小儿止咳药物的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种小儿止咳药物的质量检测方法，其药物原料组成为：黄芩500g、金荞麦444g、蜜枇杷叶444g、浙贝母333g、虎杖333g、甘草167g，对其中的浙贝母、虎杖、甘草进行薄层鉴别，对黄芩苷进行高效液相色谱法含量测定。本检测方法专属性好，检测灵敏度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种小儿止咳药物的质量检测方法。
背景技术
感冒是一种常见的呼吸道传染病，广泛的影响人们的健康。小儿感冒或感冒后因治疗不当或治疗不彻底，余热未清，痰浊阻肺，肺失宣肃引起咳嗽不已，咳声重浊，痰稠色黄或黄白相兼，咽干不利，或大便秘结。针对痰热阻肺，肺失宣肃，治当清肺化痰，止咳利咽。
我们经过多年研究和临床应用，发明了一种治疗咳嗽的药物组合物，尤其对小儿更适用，安全性高、毒性低。该药物组合物具有见效快，用药量少，无毒副作用，稳定性好，成本低等特点，适合大规模生产，并已申请相关专利。
针对上述药物的生产，亟需建立相应的质量检测方法用于检测药物的质量。经过大量的实验和创造性劳动，我们建立了如下的小儿止咳颗粒的质量检测方法。
发明内容
本发明提供了一种小儿止咳药物的质量检测方法。本检测方法专属性好，检测灵敏度高。
本发明的小儿止咳药物的质量检测方法，其药物原料组成为：
黄芩500g 金荞麦444g 蜜枇杷叶444g
浙贝母333g 虎杖333g 甘草167g，
上述药物的剂型可以是颗粒剂。
其颗粒剂的制备方法为：以上六味，加12倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30(80℃)的稠膏，60℃真空干燥成干浸膏，粉碎成细粉，加入蔗糖粉240g、阿斯巴甜5g、枸橼酸3g及糊精适量，混匀，用85％乙醇适量过16目筛制成颗粒，干燥，14目筛整粒，加入香精适量，混匀，制成1000g，即得。
上述药物的质量检测方法为：对其中的浙贝母、虎杖、甘草进行薄层鉴别，对黄芩苷进行高效液相色谱法含量测定。
具体地，浙贝母、虎杖、甘草的薄层鉴别方法为：
(1)取药物10g，研细，加氨水10-20ml，拌匀，加三氯甲烷30-200ml，置水浴中加热回流1-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取浙贝母对照药材1g，加氨水10-20ml，拌匀，加三氯甲烷30-200ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取药物10g，研细，加三氯甲烷20-100ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)20-80分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.5g，加三氯甲烷20-100ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取药物5g，研细，加乙醇20-100ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)10-60分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更具体地，浙贝母、虎杖、甘草的薄层鉴别方法为：
(1)取本品10g，研细，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷50ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取浙贝母对照药材1g，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品10g，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材0.5g，加三氯甲烷20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加乙醇40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
具体地，黄芩苷高效液相色谱法含量测定方法为：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为278nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加20％-95％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取药物适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加20％-95％乙醇约45ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40KHz)20-80分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
更具体地，黄芩苷高效液相色谱法含量测定方法为：
含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18011)计，不得少于52.0mg。
所述药物的性状为为棕黄色至棕褐色的颗粒；气香，味甜、微苦；应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录I C)。
本发明所述药物的功能为：清肺化痰，止咳利咽。用于小儿痰热阻肺证。症见咳嗽，咳痰，痰黄或黄白相兼、或痰粘稠，咽喉不利，口渴，或大便干燥，舌红苔黄腻；小儿急性咳嗽(普通感冒、急性气管-支气管炎)见上述证候者。
用法用量为：开水冲服。一日2次；一岁至三岁一次1.5袋，三岁至七岁一次2袋，七岁至十四岁一次3袋。每袋装3g。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例
【处方】黄芩500g 金荞麦444g 蜜枇杷叶444g
浙贝母333g 虎杖333g 甘草167g
【制法】以上六味，加12倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30(80℃)的稠膏，60℃真空干燥成干浸膏，粉碎成细粉，加入蔗糖粉240g、阿斯巴甜5g、枸橼酸3g及糊精适量，混匀，用85％乙醇适量过16目筛制成颗粒，干燥，14目筛整粒，加入香精适量，混匀，制成1000g，即得。
【性状】本品为棕黄色至棕褐色的颗粒；气香，味甜、微苦。
【鉴别】(1)取本品10g，研细，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷50ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取浙贝母对照药材1g，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品10g，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材0.5g，加三氯甲烷20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加乙醇40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录I C)。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于52.0mg。
试验例1
方中浙贝母的薄层鉴别：以浙贝母对照药材代表方中浙贝母进行薄层色谱鉴别方法的试验研究。
供试品溶液的制备取本品10g，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷50ml，水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备取浙贝母对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号：120972-200404)1g，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷30ml，同法制成对照药材溶液。
阴性对照溶液的制备取按处方同法制备不含浙贝母的样品10g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液。
结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，且斑点清晰，分离效果好。结果表明该法鉴别浙贝母专属性强，。
试验例2
方中虎杖的薄层色谱鉴别：以虎杖对照药材代表方中虎杖进行薄层色谱鉴别方法的试验研究。
供试品溶液的制备取本品10g，加三氯甲烷40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备取虎杖对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号：120980-200604)0.5g，加三氯甲烷20ml，同法制成对照药材溶液。
阴性对照溶液的制备取按处方同法制备不含虎杖的样品10g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液2μl、供试品及阴性对照样品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰，且斑点清晰，分离效果好。结果表明该法鉴别虎杖专属性强。
试验例3
方中甘草的薄层色谱鉴别：按如下方法进行本方中甘草薄层色谱鉴别的方法研究。
供试品溶液的制备取本品5g，加乙醇40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备取甘草对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号：120904-200410)0.5g，同法制成对照药材溶液。
阴性对照溶液的制备取按处方同法制备不含甘草的样品5g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取对照药材溶液2μl、供试品及阴性样品溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。
结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰，且斑点清晰，分离效果好。结果表明该法鉴别甘草专属性强。
试验例4
关于方中金荞麦的薄层色谱鉴别研究：参照《中国药典》2005年版一部“金荞麦”鉴别(2)项下方法，以金荞麦对照药材代表方中金荞麦进行薄层色谱鉴别方法的试验研究。
供试品溶液的制备取本品10g，加三氯甲烷30ml，浸渍30分钟，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备取金荞麦对照药材1g，加三氯甲烷30ml，同法制成对照药材溶液。
阴性对照溶液的制备取按处方同法制备不含金荞麦的样品10g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
结果对照药材在溶剂前沿处有一荧光斑点，而供试品及阴性样品均在此处有荧光斑点显示。
喷以10％硫酸乙醇溶液加热显色后，对照药材、供试品及阴性样品均无斑点显示。
换展开剂为：正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.02)，置紫外光灯(365nm)下检视，结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显一黄色的荧光斑点，阴性对照色谱相应的位置上也显相同颜色的斑点，说明阴性对照有干扰，该法专属性差。
结果分析：本品中其它药味含有与金荞麦特征成分一致或性质相似的成分，致使阴性对照样品有干扰，该法鉴别金荞麦专属性差，故未将其薄层色谱鉴别列入质量检测
试验例5
关于方中蜜枇杷叶的薄层色谱鉴别研究
供试品溶液的制备取本品10g，加三氯甲烷40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
阴性对照样品溶液的制备取按处方同法制备不含枇杷叶的样品10g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取上述对照药材溶液4μl、供试品及阴性样品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.02)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液，加热显色，分别在日光及紫外光灯(365nm)下检视。
结果，供试品及阴性样品色谱中，均在与对照药材色谱相应的位置处，无斑点显示。
喷5％香草醛硫酸溶液，加热显色，供试品及阴性样品色谱中，仍与对照药材色谱相应位置处，无斑点显示。
换展开剂为：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)，紫外光灯(365nm)下检视，阴性干扰。喷10％硫酸乙醇加热显色后，日光下检，对照药材有一紫色斑点，供试品及阴性样品均无此斑点。
结果分析：本品中，蜜枇杷叶的工艺为水煮，脂溶性成分含量较低，较难检出，因此未将琵琶叶的薄层色谱鉴别列入质量检测。
试验例6颗粒剂和微生物检测
按中国药典2005年版一部附录I C颗粒剂项下规定，对三批颗粒剂样品(批号：071201、071202、071203)进行检查，结果见表1。
表1 检查项检查结果
照微生物限度检查法(中国药典2005年版一部附录XIII C)检查，三批样品检查结果见表2。
表2 微生物限度检验结果
试验例7含量测定
本品是由黄芩、浙贝母、金荞麦、虎杖、枇杷叶、甘草制成的复方制剂，具有清肺化痰，止咳利咽的功效。方中黄芩为君药，且黄芩苷为黄芩中的主要有效成分，故选择黄芩苷为含量测定的指标成分，采用HPLC法对其进行含量测定，结果黄芩苷分离效果好，阴性样品未见干扰，专属性强，且该法操作简单，精密度好，重复性、回收率良好。色谱柱采用Agilent HC-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长为278nm，流动相为甲醇-0.4％磷酸(50∶50)，流速：1.0ml/min，进样量为10μl。
1检测波长的选择
配制适宜浓度的黄芩苷对照品溶液，在200～400nm之间做紫外扫描，从紫外光谱图可以看出，在278.3nm处黄芩苷有最大吸收值，故选择本品含量测定的检测波长为278nm。
2流动相选择
选择甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)，黄芩苷峰与其它杂质峰完全分离，且峰形对称，保留时间适中，故选择甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为本品含量测定流动相。
3供试品溶液制备
3.1提取溶媒的选择本品在热水中振摇即溶，为了保证提取完全，故选择超声提取的方法，采用①稀乙醇、②70％乙醇、③甲醇三种溶媒进行提取，比较各溶液中黄芩苷含量，优选最佳的提取溶媒，实验方法如下，结果见表3。
供试品溶液制备取装量差异项下的本品内容物3份，每份约0.2g，精密称定，分别置50ml量瓶中，加①稀乙醇、②70％乙醇、③甲醇约45ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放冷，加相应的溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
表3 提取溶剂选择结果
结果表明，以上三种溶媒提取，以70％乙醇为溶媒时，溶液中黄芩苷含量高，甲醇和稀乙醇提取液中黄芩苷含量稍低，故选择70％乙醇为供试品溶液制备提取溶剂。
3.2提取时间选择称取本品约0.2g，共3份，分别置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，超声处理，分别在20分钟、30分钟、40分钟取出，放至室温，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液进行测定，计算黄芩苷的含量，结果见表4。
表4 提取时间选择结果
结果，三个提取时间，溶液中黄芩苷含量相差不大，表明超声提取20分钟，样品中黄芩苷基本提取完全，为保证提取完全，故选择超声处理提取30分钟。
供试品溶液制备取装量差异项下的本品内容物0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放至室温，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
4系统适用性试验及专属性考察
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放至室温，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
阴性对照溶液的制备按处方中各药味的比例取不含黄芩苷的群药，按制备工艺自配阴性对照样品后，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，进行测定。
由以上测定结果可知，供试品色谱图中呈现与黄芩苷对照品保留时间相一致的色谱峰，阴性对照在此处未见色谱峰，说明阴性对照无干扰，表明该法测定本品中黄芩苷含量的专属性强。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
5线性关系的考察
精密称取黄芩苷对照品7.54mg，加70％乙醇溶解制成每1ml含0.3016mg的对照品溶液，作为贮备液；精密量取贮备液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2ml，分别置于10ml量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为6.032μg/ml、12.064μg/ml、24.128μg/ml、36.192μg/ml、48.256μg/ml、60.32μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10μl，依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，黄芩苷对照品溶液浓度(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，并求其回归方程，测定结果见表5。
表5 黄芩苷标准曲线测定数据
经计算黄芩苷的回归方程为y＝39279.36x+10776.90，r＝0.9999，结果表明黄芩苷在6.032μg/ml～60.32μg/ml范围内线性关系良好。
6精密度试验
取黄芩苷对照品溶液(30.16μg/ml)，连续测定6次，结果见表6。
表6 精密度试验
结果，峰面积RSD％小于2％，表明仪器精密度良好。
7供试品溶液稳定性试验
取本品(071201批)适量，研细，取约0.2g，精密称定，按正文供试品溶液制备方法制备，并分别在0、2、4、8、24、48小时测定黄芩苷峰面积，结果见表7。
表7 供试品溶液稳定性试验
结果表明，供试品溶液在24小时内基本稳定。
8重复性试验
取本品(071201批)适量，研细，取6份，每份约0.2g，精密称定，按正文供试品溶液制备方法制备并测定，结果见表8。
表8 重复性试验
结果：RSD％小于2％，表明本法重复性良好。
9回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的样品(批号：071201，含量：31.01mg/g)0.1g，共6份，精密称定，分别置50ml量瓶中，再分别精密加入浓度为0.3068mg/ml的黄芩苷对照品溶液10ml，再加70％乙醇约35ml，按正文供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表9。
表9 黄芩苷回收率试验
结果，平均回收率＝99.7％，RSD＝1.23％，表明该法回收率良好。
10样品含量测定
取本品三批样品，按正文供试品溶液制备方法制备并测定，结果见表10。
表10 小儿黄金止咳颗粒中黄芩苷含量测定结果
根据样品测定结果，三批小儿黄金止咳颗粒中黄芩苷含量的平均值为94.1mg/袋。
根据《中国药典》2005年版一部“黄芩”含量测定项下要求“本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于8.0％”，并根据本品处方量及转移率，考虑到药材水分、投料、加工、测量等误差，故本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于52mg。
Claims (9)
1.一种小儿止咳药物的质量检测方法，其特征在于：其药物原料组成为：
黄芩500g 金荞麦444g 蜜枇杷叶444g
浙贝母333g 虎杖333g 甘草167g，
对其中的浙贝母、虎杖、甘草进行薄层鉴别，对黄芩苷进行高效液相色谱法含量测定。
2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：
浙贝母、虎杖、甘草的薄层鉴别方法为：
(1)取药物10g，研细，加氨水10-20ml，拌匀，加三氯甲烷30-200ml，置水浴中加热回流1-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取浙贝母对照药材1g，加氨水10-20ml，拌匀，加三氯甲烷30-200ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取药物10g，研细，加三氯甲烷20-100ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)20-80分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.5g，加三氯甲烷20-100ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取药物5g，研细，加乙醇20-100ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)10-60分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：
浙贝母、虎杖、甘草的薄层鉴别方法为：
(1)取药物10g，研细，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷50ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取浙贝母对照药材1g，加氨水5ml，拌匀，加三氯甲烷30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷以5％亚硝酸钠的70％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取药物10g，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.5g，加三氯甲烷20ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取药物5g，研细，加乙醇40ml，超声处理(功率250W，频率40KHz)15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液2μl，分别点于同-硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：黄芩苷高效液相色谱法含量测定方法为：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为278nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加20％-95％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取药物适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加20％-95％乙醇约45ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40KHz)20-80分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：黄芩苷高效液相色谱法含量测定方法为：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为278nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇加热使溶解，制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取药物适量，研细，取约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加70％乙醇约45ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；每3g药物含黄芩以黄芩苷(C21H18011)计，不得少于52.0mg。
6.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：所述药物为颗粒剂。
7.如权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于：所述药物为颗粒剂，其制备方法为：以上六味，加12倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30(80℃)的稠膏，60℃真空干燥成干浸膏，粉碎成细粉，加入蔗糖粉240g、阿斯巴甜5g、枸橼酸3g及糊精适量，混匀，用85％乙醇适量过16目筛制成颗粒，干燥，14目筛整粒，加入香精适量，混匀，制成1000g，即得。
8.如权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于：所述药物为棕黄色至棕褐色的颗粒；气香，味甜、微苦。
9.如权利要求6所述的质量检测方法，所述药物应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IC)。
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