CN101716254B - 一种复方血栓通中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复方血栓通中药制剂及其制备方法，由下列原料制得的活性成分和/或药学上可接受的附加剂组成：三七200-1000克，黄芪50-400克，丹参40-250克，玄参60-400克，三七药渣粉100-800克，本发明的产品具有活血化瘀，扩张血管，增加血流量，改善血液循环和微循环，益气养阴的作用。主要用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等；以及用于血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛，症见胸闷痛、心悸、心慌、气短乏力、心烦口干者。

Description

一种复方血栓通中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种复方血栓通中药制剂及其制备方法，更特别的涉及一种含三七药渣的中药制剂及其制备方法；通过加大处方中的活性成分，制备一种对血瘀兼气阴两虚引起的稳定性劳累型心绞痛临床疗效更好的中药制剂。

背景技术

三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的根。《本草纲目》云：“味微甘而苦，颇似人参之味”、“能治一切血病”；《本草新编》云：“三七根，止血之神药也”；《本草纲目拾遗》云：“三七补血第一”、“为中药之最珍贵者”；《玉楸药解》云：“和营止血，通脉行瘀”、“凡产后、经期、跌打、痈肿，一切淤血皆破；凡吐衄、崩漏、刀伤、箭射，一切新血皆止”。

三七具有散瘀止血，消肿定痛之功效。主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌仆肿痛。三七主要药理作用有：①止血，三七有“止血神药”之称，散瘀血，止血而不留瘀，对出血兼有瘀滞者更为适宜。三七具有较强的止血作用，对不同动物，不同给药途径，不同制剂，均显示明显止血作用。②抗血栓，三七中含具有活血散瘀功效的活性成分三七皂苷，能抗血小板聚集，抗凝血酶和促进纤维蛋白溶解，从而抵抗血栓的形成。③促进造血，三七“祛瘀生新”，现代研究证实三七具有补血作用。经60CO-γ射线照射小鼠，PNS腹腔连续注射6天，对多能造血干细胞的增殖具有明显的促进作用，脾结节中，粒、红二系细胞有丝分裂活跃，脾脏重量增加。对环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少，PNS也有促进恢复作用。在大鼠急性失血性贫血，三七注射液可显著促进红细胞、网织红细胞、血红蛋白的恢复。④对心血管系统的作用，三七中的三七总皂苷(PNS)具有降低心肌收缩力，减慢心率，扩张外周血管，降低外周阻力的作用。PNS能扩张冠脉，抑制心肌收缩力，抗脂质过氧化和提高耐缺氧能力来抗心肌缺血。PNS还具抗动脉粥样硬化作用。三七、三七总黄酮及三七绒根提取物能对抗脑垂体后叶素引起的家兔急性心肌缺血所致的T波升高。此外，三七抗脑缺血作用，除与扩张脑血管，增加局部血流量有关外，尚与延缓缺血组织ATP的分解，改善能量代谢，以及抑制脂质过氧化，提高脑组织中SOD活性，清除氧自由基等作用有关。而三七抗心律失常的作用与其含有活性成分PNS、三七二醇苷(PDS)和三七三醇苷(PTS)有关。⑤其他作用，包括抗炎、抗肿瘤、镇痛、镇静、延缓衰老、对免疫功能及代谢的影响等。

活血化瘀系三七最为重要的药理作用之一，现代药理学研究表明三七不但具有良好的止血、活血化瘀双向药理作用，还具有明显的补血作用，能促进血液中红细胞、白细胞、血小板等各类血液细胞分裂生长，增加数目，并保持正常水平。人参皂苷能防止血液凝固、促进纤维蛋白溶解，降低红细胞的聚集性，增加血液的流动性，改善组织灌注。

据研究，三七温浸液及水溶性成分三七素可表现促凝血作用。此外，三七中的钙离子和槲皮苷等亦是止血活性物质。中医认为三七是具有化淤作用的止血药，能止血而不留瘀，因此对出血症兼有瘀滞者尤为适宜。三七注射液能促使家兔和人的眼前房、眼结膜和玻璃体内瘀血的吸收。三七总皂苷(PNS)能抑制血小板聚集，降低血液黏度，其主要有效成分为三七中人参皂苷Rg1及其他原人参三醇型皂苷(PTS)，它们可能通过提高血小板cAMP含量、减少血栓素A2的生成而抑制其聚集功能。三七总皂苷(PNS)对家兔、大白鼠实验性血栓形成均有明显抑制作用；静脉注射可以明显抑制凝血所致弥漫性血管内凝血、动物血小板数目的下降和纤维蛋白降解产物的增加。PNS还可以升高血浆蛋白C活性，而蛋白C是一种由肝脏合成的纤维素依赖性蛋白质，在人体内被激活后，具有抗凝活性和促纤溶活性，可明显降低冠心病患者的血小板黏附和聚集，亦可改善微循环，抗血栓形成。PTS可抑制ADP、花生四烯酸、血小板活化因子、凝血酶、胶原等诱导的血小板聚集，且呈量效关系，血小板CA2+浓度也随三七皂苷剂量增加而显著减少。R1和Rd能显著促进或改善去甲肾上腺素(NA)所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓的微循环，也可延长血浆复钙时间。三七中人参皂苷Rg₁可通过纤溶系统，促进血管内皮细胞释放NO而发生抗栓作用。另外，三七中的黄酮类也有活血功效。可见三七止血(促凝)和活血化瘀(抗凝)双向调节功效是其所含多种活性成分综合作用的结果。三七能促进各类血细胞分裂生长和增殖，因而具有显著的造血功能。三七总皂苷(PNS)能够促进人骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖，说明三七Rg₁和Rb₁是促进造血的有效单体。有报道三七的水提物能抑制大鼠红血球溶血的作用。以原人参三醇为苷元的皂苷具有溶血作用，而以原人参二醇为苷元的皂苷却对抗其他皂苷引起的溶血效应，故PNS对红细胞无溶血现象，也无血细胞粘集现象，具良好的安全性。由此可见，三七发挥药理药效在于其各种活性成分共同协同作用的充分发挥。

复方血栓通制剂是由三七、丹参、玄参和黄芪四味中药制备而成的纯中药制剂，三七为方中君药。具有活血化瘀，扩张血管，增加血流量，改善血液循环和微循环，益气养阴的作用。复方血栓通制剂药效学研究表明：①对实验性急性心肌缺血有明显的保护作用，特别是缺血的第8-10分钟尤为显著。②能缩小心肌梗塞的范围，减轻心肌缺血的程度。③降低急性心肌梗塞后犬血浆的乳酸含量及LDH、MDA含量，升高SOD含量，具有抗氧化作用。④能增强实验性心肌缺血犬心脏收缩能力。⑤降低小鼠心肌耗氧量，改善心肌代谢，提高对缺氧的耐受，延长小鼠寿命。⑥降低实验动物的血黏度。另外，复方血栓通制剂可增加青蛙外周血管灌流量，改善大鼠肠系膜微循环；可抑制热板法和醋酸扭体法所致的小鼠疼痛反应，减轻蛋清所致大鼠足拓肿，使小鼠的耐缺氧能力增强。

复方血栓通制剂发挥其活血化瘀，益气养阴的关键在于处方中含有三七，而三七发挥药理作用在于其含有三七皂苷、三七素、三七多糖、黄酮类、氨基酸等活性成分。有报道，一种复方血栓通中药制剂能扩张冠脉，增加冠脉血流量，三七总皂苷能增加心肌营养血流量，改善心肌微循环，明显降低心肌耗氧量；三七总皂苷还被证明是三七治疗缺血性心脏病的基础。推测三七中起主要作用的成分可能是G-Re和G-Rb₁。三七有扩张血管、降低血压作用。目前普遍认为三七总皂苷是钙通道阻滞剂。同时，三七中人参二醇组皂苷能扩张脑血管，降低脑血管阻力，增加脑血流量，改善脑血循环。

复方血栓通制剂目前包括复方血栓通胶囊、复方血栓通软胶囊、复方血栓通颗粒、复方血栓通片、复方血栓通滴丸、复方血栓通合剂等。在公布授权的专利02121219.8和专利02103920.8中提到的药材提取工艺均为三七粉碎，以乙醇浸渍，提取液浓缩成稠膏，稠膏烘干粉碎成细粉过筛；黄芪、丹参、玄参以乙醇回流提取，提取液浓缩成稠膏，稠膏喷雾干燥成细粉过筛；两种浸膏细粉按一定的投料量比例混合，加入聚乙二醇4000或6000制成滴丸，加入精制大豆油制成软胶囊。采用此方法提取三七后产生大量三七药渣，这些药渣均被废弃，得不到合理的使用，本发明试验证明，三七药渣中仍含大量的活性成分，如三七皂苷、三七素、三七多糖、黄酮类、氨基酸等。这些成分具有与复方血栓通制剂的功能主治一致的药理活性，因而制剂中使用三七药渣将对复方血栓通制剂的临床疗效产生协同作用。

通过对《中国药典》及国家中成药制剂标准、卫生部部颁标准中使用一种复方血栓通中药制剂进行查询，未发现现有中药品种三七采用醇提取(或水提取)成三七浸膏、三七药渣干燥粉碎成细粉同时入药的工艺；通过专利及文献检索，未见有将三七醇提取(或水提取)后的三七药渣烘干，粉碎成细粉过筛后与浸膏一同入药的相关专利及文献报道。2005年版《中国药典》三七大部分制剂均采用三七生粉直接入药(如三七片、人参再造丸、冠心丹参胶囊等)，还有一些品种采用三七水煎煮后入药(如复方丹参滴丸、脂脉康胶囊)、三七醇提取后入药(如少林风湿跌打膏、红药贴膏、麝香祛痛气雾剂等)，血栓通注射液采用提纯的三七总皂苷入药。口服三七生粉，临床研究证实生三七粉能较好改善血液流变指标，使血浆纤维蛋白原降低，从而降低血浆粘滞度，红细胞聚集指数及血小板凝集，有利于预防心、脑血管疾病的发生。但由于口服生三七粉时，消化液破坏作用及胃肠道吸收不完全等多种因素，影响了药物的吸收利用，限制了三七药性的发挥，降低了临床疗效，从而影响制剂的治疗效果；三七水煎煮后入药或三七醇提取后入药，大大提高了三七的生物利用度，具有可迅速被人体吸收、吸收率高的特点，使三七各种活性成分协同作用充分发挥，从而提高三七的临床疗效。三七生粉入药，活性成分需要先通过细胞壁进行透壁释放，而三七质地坚实，有“铜皮铁骨”之称，导致活性成分溶出有限，提取2～3次，三七皂苷不能提取完全，提取后的三七药渣被废弃，其中含大量的活性成分，未能得到合理利用，造成了较大的资源浪费。

目前上市的产品复方血栓通胶囊除用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞外，还用于治疗血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛，处方由三七250g、黄芪80g、丹参50g、玄参80g制成1000粒胶囊，用量为每天3次，每次3粒；另外，已经上市的复方血栓通软胶囊、复方血栓通片、复方血栓通滴丸等品种每天、每次用量的活性成分均与复方血栓通胶囊相同。在药效学实验研究中，通过对小鼠抗缺氧能力的影响、大鼠活血化瘀作用研究、对实验性犬心肌梗塞心外膜心电图的影响、对实验性犬心肌缺血时心脏血流动力学的影响、对实验性犬心肌缺血时心肌及血液生化指标的影响等实验，证实在目前已上市的复方血栓通制剂基础上加大处方中的活性成分1倍量及加入三七药渣，达到在血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛的临床上更好的疗效作用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种复方血栓通中药制剂及其制备方法。

本发明的这个以及其他目的将通过下列详细描述和说明来进一步体现和阐述。

本发明的一种复方血栓通中药制剂，由下列原料制得的活性成分和/或药学上可接受的附加剂组成：

三七  200-1000克    黄芪  50-400克    丹参  40-250克

玄参  60-400克      三七药渣粉  100-800克。

制成1000粒或片。

进一步的，本发明的一种复方血栓通中药制剂，由下列原料制得的活性成分和/或药学上可接受的附加剂组成：

三七    500克    黄芪  160克    丹参  100克

玄参    160克    三七药渣粉  300-400克

剂型为胶囊，制成1000粒。

可以选择的是，本发明的一种复方血栓通中药制剂，由下列原料制得的活性成分和/或药学上可接受的附加剂组成：

三七    500克    黄芪  160克    丹参  100克

玄参    160克    三七药渣粉  300-400克

剂型为片，制成1000片。

在本发明的一种复方血栓通中药制剂中，所述的药学上可接受的附加剂为淀粉、滑石粉或羧甲淀粉钠、硬脂酸镁。

本发明的一种复方血栓通中药制剂的制备方法，是将三七粉碎，加50-90V/V％乙醇浸渍(或超声提取或加热回流或渗漉)二次，第一次3-6天，第二次1-3天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.30，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛；其余黄芪等三味，加50-90V/V％乙醇加热回流二次，第一次2-5小时，第二次1-3小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.30，与上述浓缩液、细粉及辅料适量混匀，干燥，制成胶囊剂或片剂。

可以选择的是，本发明的一种复方血栓通中药制剂的制备方法，是将三七粉碎，加50V/V％乙醇浸渍二次，第一次5天，第二次2天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛；其余黄芪等三味，加50V/V％乙醇加热回流二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)，与上述浓缩液、细粉及辅料适量混匀，干燥，制成胶囊剂或片剂。

本发明三七粉碎醇提浸膏入药，保证了三七各活性成分的迅速吸收利用，而三七药渣干燥粉碎成细粉入药，在一定程度上增加了一种复方血栓通中药制剂中的活性成分，相关成分产生协同作用，提高了三七的生物利用度，同时也避免了资源的浪费，在当今倡导节约型社会经济中具有很大的社会意义和经济意义。

本发明通过将三七提取，药渣干燥粉碎成细粉，过筛后与浸膏一同入药制备含三七药渣的复方血栓通制剂，通过三七药渣的有效成分检测、与复方血栓通胶囊功能主治有关的主要药效学试验及复方血栓通胶囊动物长期毒性试验证实，制剂中加入三七药渣粉及加大处方中的活性成分1倍量是安全有效的，提高了三七的有效利用，为提高三七的生物利用度提供了一种新的方法，也为三七药渣的再利用带来新的解决办法，该发明具有很好的临床疗效，解决患者的疾病，同时为企业更好的发展提供有力保障，为环境保护做出一定的贡献。

本发明的产品具有活血化瘀，扩张血管，增加血流量，改善血液循环和微循环，益气养阴的作用。主要用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等；以及用于血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛，症见胸闷痛、心悸、心慌、气短乏力、心烦口干者。

本发明的产品通过药理实验，加入三七药渣及加大处方中的活性成分1倍量的复方血栓通胶囊(复方血栓通胶囊2组)，具有比原活性成分处方量及不加三七药渣的复方血栓通胶囊(复方血栓通胶囊1组)在小鼠抗缺氧作用的研究中小鼠存活时间延长，与对照组比较能明显延长小鼠存活时间；对大鼠活血化瘀作用研究，复方血栓通胶囊均能改善血液流变学的作用，其低切、高切血粘度都有显著的改善，能降低血粘度，减少冠心病等心血管系统疾病的发病；对实验性犬心肌梗塞心外膜心电图的影响研究，复方血栓通胶囊1组、复方血栓通胶囊2组均能显著减轻心肌缺血程度(∑-ST)以及心肌缺血范围(N-ST)，与缺血组相比，相应时点的∑-ST、N-ST均明显减小，且复方血栓通胶囊2组比复方血栓通胶囊1组的∑-ST、N-ST更为减低；对实验性犬心肌缺血时心脏血流动力学的影响研究，通过犬急性心肌缺血模型，观察药物抗心肌缺血作用，重点是对心功能的影响。用药组犬在心肌缺血后，其+dp/dt max和-dp/dt max下降幅度明显小于缺血组，表明复方血栓通胶囊有增强心肌收缩力，较好的维持心脏的正常功能；用药组犬的心输出量在心肌缺血后下降幅度小于缺血组，而且收缩压与舒张压的下降幅度均小于缺血组，表明复方血栓通胶囊具有维持心输出量和防止血压下降的作用，结果说明复方血栓通胶囊具有抗心肌缺血作用；对实验性犬心肌缺血时心肌及血液生化指标的影响研究，研究表明急性心肌梗塞后缺血区心肌有氧氧化严重受阻，无氧酵解增强，糖原极度消耗，乳酸堆积，因而缺血组缺血区心肌糖原含量显著低于正常组，乳酸含量则显著高于正常组；用药后糖原含量升高，其中复方血栓通胶囊2组显著高于缺血组，而乳酸含量则降低，其中复方血栓通胶囊2组显著低于缺血组，说明复方血栓通胶囊2组能改善缺血心肌的能量代谢。正常组与用药组犬血浆的乳酸含量和LDH含量均低于缺血组，表明用药后，可以缓解缺血对心肌造成的损害，同时还发现，缺血3h的心肌组织，在正常组与用药组其MDA含量低于缺血组，SOD含量高于缺血组；在血浆中也有同样的结果，即用药组血浆MDA低于缺血组，SOD含量则高于缺血组，表明复方血栓通胶囊具有清除自由基的作用。综合本实验结果，复方血栓通胶囊具有明确抗心肌缺血的作用，而复方血栓通胶囊2组较复方血栓通胶囊1组在降低乳酸含量及改善缺血心肌的能量代谢方面作用更强。

通过药理实验证明，加入三七药渣及加大处方中的活性成分1倍量的复方血栓通胶囊(复方血栓通胶囊2组)，具有比原活性成分处方量及不加三七药渣的复方血栓通胶囊(复方血栓通胶囊1组)以下几方面的优势：在小鼠抗缺氧作用中小鼠存活时间延长；减轻心肌缺血程度(∑-ST)以及心肌缺血范围(N-ST)；改善缺血心肌的能量代谢；降低乳酸含量及改善缺血心肌的能量代谢。多方面的综合作用，达到在血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛的临床上更好的疗效作用。

通过长期毒性试验表明，复方血栓通胶囊加入三七药渣及加大处方中的活性成分1倍量后，而且用药剂量达到临床用药剂量的16、32倍，大鼠连续给药90天试验后，各项指标正常，说明三七药渣的加入以及在原来复方血栓通制剂的基础上加大1倍量的活性成分是安全的。

以下通过具体实施例来进一步说明本发明，但实施例仅用于说明，并不能限制本发明范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、量、百分比均为重量单位，所有的原料均可以从市场购得。

具体实施方式

实施例1

一、三七药渣各成分含量测定研究

本发明通过对三七药渣各成分含量进行测定研究，证实了三七药渣仍含大量活性成分，与三七发挥其药理药效的各化学成分相对应，说明了三七药渣入药的可行性。下面列举本发明试验数据予以支持：

1.三七药渣中的三七总皂苷

采用香草醛-高氯酸比色法测定三七中总皂苷含量，结果见表1，试验表明三七药材中三七总皂苷的含量为9.81％-11.64％、三七药渣中为1.25％3.68％，说明三七药渣中仍含有较多的皂苷类成分，三七总皂苷是中药三七的主要成分，具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用。这类成分在复方血栓通制剂中起到了相当关键的作用。

表1三七样品总皂苷含量测定结果

说明：*为三七药材，**为三七醇提干浸膏。

2.三七药渣中的氨基酸成分

《本草新编》上说：“三七根止血神药也”。止血有效成分是三七素(三七氨酸)，是从三七根中分离的一种特殊氨基酸。能缩短小鼠的凝血时间，并使血小板数量明显增加；电镜观察发现：参三七注射液能使血小板发生伪足伸展、聚集、变型、脱颗粒反应，这些超微结构的改变近似于凝血酶对血小板超微结构的改变，故推测三七能使血小板释放ADP、血小板因子III和CA²⁺等止血活性物质，最终表现为促凝血作用。

三七中含有多种氨基酸类成分，目前，从文山三七中分离出19种以上的氨基酸，有7种是体内必需的，其中一种特殊氨基酸称为三七素(dencichine)，具有非常好的止血作用。本发明试验采用HPLC法测定三七样品中三七素含量，结果三七素在三七药材中含量为0.37％，三七药渣中为0.13％，而三七浸膏中在相应保留时间处均无色谱峰出现，因此可知三七素在三七浸膏粉末中含量极低。结果见表2。采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生法测定三七中十八种游离氨基酸的含量，结果见表3。

表2三七样品中三七素含量

说明：*为三七药材。

表3三七中氨基酸含量测定结果

说明：*为三七药材，**为三七醇提干浸膏。

3.三七药渣中的糖类成分

三七含有单糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖以及低聚糖和多糖。多糖往往具有生理活性，部分多糖具有提高机体免疫功能和抗肿瘤活性，如人参多糖、茯苓多糖、灵芝多糖。研究表明，从三七中分离的三七多糖A和三七茎叶多糖，可以增强有机体免疫能力，促进巨噬细胞和抗体分泌细胞活性，对自然杀伤细胞和抗原结合细胞无明显影响。

采用DNS(3，5-二硝基水杨酸)显色测定三七中总多糖含量，结果在三七浸膏粉末中三七总多糖含量为10.5％，三七药材与三七药渣中总多糖含量相当。试验结果见表4。

表4三七样品多糖含量测定结果

说明：*为三七药材，**为三七醇提干浸膏。

4.三七药渣中的黄酮类成分

黄酮类化合物是三七有效活性成分。三七黄酮可以分离出槲皮素，大量药理研究表明槲皮素具有祛痰、镇咳、平喘、降压、强心、增加冠脉流量、降血脂、增强肾上腺素、增加毛细血管抵抗力和降低毛细血管渗透性的作用。三七黄酮与皂苷合用，生理活性最强，分开使用则证明黄酮能显著增加心肌冠脉流量。三七茎叶总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖有抑制作用，呈时间和剂量的依赖性；改变SMMC-7721细胞的周期分布，即G1期细胞百分率有所下降，S期百分率增加，这种作用呈剂量依赖性。三七总黄酮还能明显抑制体外培养心肌细胞病变，对柯萨奇B₃病毒所致小鼠病毒性心肌炎具有一定治疗作用。此外，三七黄酮还具有活血的功效。

试验选用芦丁为对照品，紫外分光光度法测定三七中总黄酮含量，结果在三七药材中含有黄酮类成分为0.047％^-0.057％、三七药渣为0.02％。试验结果见表5。

表5三七总黄酮测定结果

说明：*为三七药材，**为三七醇提干浸膏。

通过对三七药材、三七药渣及三七醇提干浸膏的各成分含量测定研究，结果表明，三七醇提取后，三七药渣中仍含有大量的活性成分，如三七皂苷、三七素、三七多糖、黄酮类、氨基酸等，这些成分与复方血栓通制剂的功能主治相一致，将三七药渣烘干，粉碎过筛后与浸膏一同入药是可行的。

二、与复方血栓通胶囊功能主治有关的主要药效学试验

复方血栓通胶囊具有活血化瘀，扩张血管，增加血流量，改善血液循环和微循环的作用，制剂中不加三七药渣与制剂中加入三七药渣以及在原来复方血栓通制剂的基础上加大1倍量的活性成分，通过与复方血栓通胶囊功能主治有关的主要药效学试验研究，观察了复方血栓通胶囊对小鼠抗缺氧能力的影响、对大鼠活血化瘀作用研究、对实验性犬心肌梗塞心外膜心电图的影响、对实验性犬心肌缺血时心脏血流动力学的影响、对实验性犬心肌缺血时心肌及血液生化指标的影响，并与对照组或缺血模型组比较，结果如下。(说明：复方血栓通胶囊1组：为原活性成分处方量及制剂中不加三七药渣；复方血栓通胶囊2组：为制剂中加入三七药渣以及处方量加大1倍量的活性成分)

1、复方血栓通胶囊对小鼠抗缺氧能力的影响

(1)常压耐缺氧实验

昆明小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，即空白对照组(简称对照组)，灌生理盐水1ml；复方血栓通胶囊1组(简称血栓通(1)，57.5mg/20g)；复方血栓通胶囊2组(简称血栓通(2)，57.5mg/20g)。

实验动物灌胃1h后，在20℃常压的条件下，放入250ml装有钠石灰10g的磨砂广口瓶中(1只/瓶)，凡士林密闭，观察记录各组动物在瓶内存活的时间。进行统计学处理，结果见表6。

表6.药物对小鼠常压耐缺氧的影响(X±SD)

与对照组相比▲P＜0.05

(2)复方血栓通胶囊对异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的耐缺氧试验

用昆明种小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，分组、灌胃处理同上。于缺氧前10min腹腔注射异丙肾上腺素(10mg/kg)，灌胃1h时，在20℃常压的条件下，放入250ml(内有10g钠石灰)的磨砂广口瓶中，密闭，用秒表记时，观察各组动物在瓶内存活时间，结果见表7。

表7.药物对异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的耐缺氧的影响(X±SD)

▲表示与对照组比较P＜0.05

(3)对小鼠心肌缺氧的保护作用的影响

昆明种小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，试验前一小时灌胃，剂量同上，实验前用0.3％戊巴比妥，10ml/kg麻醉，分离气管，用动脉夹夹闭气管，秒表记时，用心电图II导仪描计心电图，观察心电波消失时间，依数据，进行统计学处理，结果见表8。

表8.药物对小鼠夹闭气管存活时间影响(X±SD)

与对照组相比▲P＜0.05

以上三种方法研究了复方血栓通胶囊对缺氧的耐受情况，结果表明该药在常压情况下，复方血栓通胶囊1组与复方血栓通胶囊2组均可使小鼠存活时间明显延长(P＜0.05)；在使用异丙肾上腺素增加心肌耗氧的条件下，观察药物对缺氧的影响，结果表明复方血栓通胶囊2组、复方血栓通胶囊1组都能明显延长存活时间；而复方血栓通胶囊1组与复方血栓通胶囊2组有差异的趋势，但无显著性的差异；从给药后夹闭小鼠气管观察小鼠的存活时间看，复方血栓通胶囊1组、复方血栓通胶囊2组均能明显延长其存活时间。上述结果表明：复方血栓通胶囊抗缺氧的作用是显著的，复方血栓通胶囊2组比复方血栓通胶囊1组的小鼠存活时间长。

2、复方血栓通胶囊活血化瘀作用研究

方法：Wister大鼠，全雄，体重300g，随机分为4组，即(1)空白对照组(简称对照组，n＝10，双蒸水，10ml/kg)；(2)血瘀模型组n＝8；(3)复方血栓通胶囊1组(简称血栓通(1)，184mg/200g)；(4)复方血栓通胶囊2组(简称血栓通(2)，184mg/200g)。

实验过程：(1)空白对照组：每天双蒸水灌胃3ml/只，连续七天，第七日禁食，次晨取血检测；(2)血瘀模型组：每天双蒸水灌胃3ml/只，连续七天，于第七天皮下注射ADR 0.08ml/100g体重，共2次，两次间隔4小时。在两次注射ADR之间(前后各间隔2小时)将大鼠浸入冰水内5分钟，处置后禁食，次晨取血检测；(3)药物组(血栓通(1)剂量组61.3mg/ml，血栓通(2)剂量组，61.3mg/ml，连续灌胃七天，每天3ml/200g，于第七天按上述方法复制血瘀模型，禁食后次晨取血检测。

上述各组动物从颈动脉取血时皆不麻醉，使血自然流入含少量肝素钠的20ml小烧杯内，边流边摇使血抗凝。采用血液粘度计及其实验方法，分别测定高切全血比粘度，低切全血比粘度，血浆比粘度；采用Wintrobe法测定红细胞比积。

结果：按上述方法采集实验数据，进行统计学分析，结果见表9。

表9药物对大鼠急性血瘀模型的血液流变的影响(X±SD)

注：*与模型组比较P＜0.05

复方血栓通胶囊能改善血液流变学的作用，其低切、高切血粘度都有显著的改善。血粘度的增高是冠心病等心血管系统疾病的重要的发病因素之一，而复方血栓通胶囊能降低血粘度，将有助于减少心血管系统疾病的发生，因此，该药在防治心血管系统疾病方面可发挥积极作用。

3、复方血栓通胶囊对实验性犬心肌梗塞心外膜心电图的影响

实验分组及给药方法：健康成年杂种犬，雌雄不拘，体重10-15kg。将动物随机分为单纯缺血组(简称缺血组，单纯结扎左冠状动脉前降支)，复方血栓通胶囊1组(简称血栓通(1)，138mg/Kg)，复方血栓通胶囊2组(简称血栓通(2)，138mg/Kg)。每组5-6只。药物组均于实验前三天连续给药，1次/天，末次给药在麻醉后经胃管给药(距结扎约2小时)。

急性心肌缺血模型制作及指标的观测：将麻醉(3％的戊巴比妥钠1ml/Kg)好的犬固定，行气管插管，并联接呼吸机.胸骨正中开胸，作心包吊床，分离左冠状动脉前降支(LAD)中段，以备结扎。在左心室游离壁表面放置“固定多点式”心外膜心电极，经四道生理记录仪，记录13个标测点在结扎前及结扎后30min、60min、120min及180min的心外膜心电图(定标1mv/mm，纸速25mm/s)。计算ST段抬高≥2mv的点数(即N-ST)，和ST段抬高的总电压值(即∑-ST)，分别作为观察心肌缺血范围和程度的指征。计算每只动物自身结扎前后差值并进行相应统计学分析。

结果：复方血栓通胶囊1组、复方血栓通胶囊2组均能不同程度显著减轻心肌缺血程度(∑-ST)以及心肌缺血范围(N-ST)，与缺血组相比，相应时点的∑-ST、N-ST均明显减小，且复方血栓通胶囊2组比复方血栓通胶囊1组的∑-ST、N-ST更为减低。结果详见表9、表10。

表9.复方血栓通胶囊对心肌缺血程度的影响(X±SD)

与同一时点缺血组相比*P＜0.05

表10.复方血栓通胶囊对心肌缺血范围的影响(X±SD)

与同一时点缺血组相比*P＜0.05

4、复方血栓通胶囊对实验性犬心肌缺血时心脏血流动力学的影响

方法：健康成年犬，性别不拘，体重10-15kg。将健康杂种犬雌雄各半，随机分为4组，分别为对照组行开胸术，冠脉假结扎；缺血组仅于实验时结扎前降支(第二对角支)；复方血栓通胶囊1组、复方血栓通胶囊2组，各组剂量为：复方血栓通胶囊1组(简称血栓通(1)，138mg/kg)、复方血栓通胶囊2组(简称血栓通(2)，138mg/kg)。给药组均于实验前三天给药，末次给药在麻醉以后灌胃(距结扎约2小时)，用3％戊巴比妥钠溶液(1ml/kg)将犬麻醉，固定，分离气管切开后插管，连接sc-2型电动呼吸器，维持人工呼吸，开胸，暴露心脏，剪开心包并缝制心包床。游离主动脉根部并安置电磁流量计探头，(根据主动脉外经粗细选择不同型号的探头)以备测取心输出量(CO)将一根6号下心导管经左侧颈总动脉向心插入至主动脉根部，以备测动脉压；另用一根6号下心导管于心尖部直接插入左心室以测量左室内压(LVP)等指标。各心导管内均充以肝素溶液，在左冠脉前降支(LAD)第2分支分离冠状动脉以备结扎，造成心肌缺血。对照组在上述准备的基础上，平衡相关的指标，记录有关数据，用假结扎的方法(冠脉分离穿线不结扎)处理；缺血组及药物组则分离冠脉并结扎。

各组均于结扎前，结扎后30min、60min、120min、180min用四道生理记录仪分别记录各项指标。

观测指标：

(1)心脏收缩、舒张期左室内压变化速率(+dp/dt max)/(-dp/dt max)。

(2)心输出量结扎前后差值比较，即每只动物结扎后的流量被结扎前的流量减去。

(3)各组收缩/舒张压差值。

将所测指标进行统计学处理：分别将各组动物的不同时点作比较。

结果：药物对犬+dp/dt max和-dp/dt max差值百分率(％)的影响，用单因素方差分析，比较见表11、表12。

表11药物对+dp/dt max的影响(X±SD)

注：*表示与缺血组比较P＜0.05

表12药物对-dp/dt max的影响(X±SD)

注：*表示与缺血组比较P＜0.05。

从+dp/dt max和-dp/dt max看，复方血栓通胶囊能改善缺血时心肌血流动力学指标。

表13药物对血流量差值百分率的影响(ml/min)(X±SD)

注：*表示与缺血组比较P＜0.05。

表14药物对收缩压差值百分率的影响(mmHg)(X±SD)

注：*表示与缺血组比较P＜0.05。

表15药物对心肌舒张压差值百分率的影响(mmHg)(X±SD)

注：*表示与缺血组比较P＜0.05。

本实验通过犬急性心肌缺血模型，观察药物抗心肌缺血作用，重点是对心功能的影响。发现用药组犬在心肌缺血后，其+dp/dt max和-dp/dtmax下降幅度明显小于缺血组，表明复方血栓通胶囊有增强心肌收缩力，较好的维持心脏的正常功能；用药组犬的心输出量在心肌缺血后下降幅度小于缺血组，而且收缩压与舒张压的下降幅度均小于缺血组，表明复方血栓通胶囊具有维持心输出量和防止血压下降的作用，研究结果说明复方血栓通胶囊具有抗心肌缺血作用。

5、复方血栓通胶囊对实验性犬心肌缺血时心肌及血液生化指标的影响

方法：健康成年杂种犬，性别不拘，体重10-15kg。将健康杂种犬，雌雄各半，随机分为4组，分别为对照组行开胸术，冠脉假结扎；缺血组仅于实验时结扎前降支(第二对角支)；复方血栓通胶囊1组(138mg/kg)、复方血栓通胶囊2组(138mg/kg)组均于实验前三天给药(正常及缺血组不给药物)，末次给药在3％戊巴比妥钠溶液(1ml/kg)麻醉以后灌胃(距结扎约2小时)，将麻醉犬固定，分离气管插管，并连接呼吸机，静脉补液(20滴/min)开胸暴露心脏，剪开心包并缝制心包床。分离冠脉前降支，以备结扎。

观测指标：各组均于结扎前，结扎后30min、60min、120min、180min分别采血测定糖源、乳酸、LDH、MDA、SOD；并于180min取心肌组织，测定组织的糖原、乳酸、LDH、MDA、SOD；MDA用TBA法测定；S0D用邻苯三酚法测定；糖源测定采用蒽酮比色法测定；乳酸用酶偶联四唑盐比色法测定；乳酸脱氢酶用酶活性比色法测定。

统计学处理：实验数据用单因数方差分析进行处理。

结果：(1)结扎冠脉左前降支3小时后，取犬缺血区心室肌测糖原含量，结果见表16：药物对缺血心肌糖原的影响(X±SD)

注：▲与缺血组相比P＜0.05

(2)结扎冠脉左前降支不同时点狗血乳酸含量的变化，结果见表17：

表17药物对犬缺血心肌不同时点血乳酸含量的影响(mmol/L)(X±SD)

注：▲与同一时点缺血组比较P＜0.05

(3)扎冠脉左前降支3小时犬心肌乳酸含量的变化，结果见表18：

表18药物对犬3小时缺血心肌乳酸含量的影响(X±SD)

注：▲与缺血组相比P＜0.05

(4)结扎冠脉左前降支不同时点犬血SOD活性的变化，结果见表19：

表19药物对犬缺血心肌不同时点血SOD活性的影响(u/ml)(X±SD)

注：▲与缺血组比较P＜0.05

(5)结扎冠脉左前降支3小时犬狗心肌SOD活性的变化，结果见表20：

表20药物对犬缺血心肌SOD活性的影响(X±SD)

注：▲与缺血组相比P＜0.05

(6)结扎冠脉左前降支不同时点犬血LDH含量的变化，结果见表21：

表21药物对犬缺血心肌不同时点血LDH含量的影响(umol/ml)(X±SD)

注：▲与缺血组比较P＜0.05，△与正常组比较P＜0.05

(7)结扎冠脉左前降支3小时犬狗心肌LDH含量的变化情况，结果见表22：

表22药物对犬缺血心肌LDH含量的影响(X±SD)

注：▲与缺血组相比P＜0.05

(8)结扎冠脉左前降支不同时点犬血MDA含量的变化，结果见表23：

表23药物对犬缺血心肌不同时点血MDA含量的影响(nmol/ml)(X±SD)

注：▲与缺血组比较P＜0.05

(9)结扎冠脉左前降支3小时犬狗心肌MDA含量的变化，结果见表24：

表24药物对犬缺血心肌MDA含量的影响(X±SD)

注：与缺血组相比▲P＜0.05

本研究表明：急性心肌梗塞后缺血区心肌有氧氧化严重受阻，无氧酵解增强，糖原极度消耗，乳酸堆积，因而缺血组缺血区心肌糖原含量显著低于正常组，乳酸含量则显著高于正常组；用药后糖原含量升高，其中血栓通(2)组显著高于缺血组，而乳酸含量则降低，其中血栓通(2)组显著低于缺血组，说明血栓通(2)组能改善缺血心肌的能量代谢。正常组与用药组犬血浆的乳酸含量和LDH含量均低于缺血组，表明用药后，可以缓解缺血对心肌造成的损害，同时还发现，缺血3h的心肌组织，在正常组与用药组其MDA含量低于缺血组，SOD含量高于缺血组；在血浆中也有同样的结果，即用药组血浆MDA低于缺血组，SOD含量则高于缺血组，表明复方血栓通胶囊具有清除自由基的作用。

综合本实验结果，复方血栓通胶囊具有明确抗心肌缺血的作用，而复方血栓通胶囊2组较复方血栓通胶囊1组在降低乳酸含量及改善缺血心肌的能量代谢方面作用更强。

三、制剂中加入三七药渣后的动物长期毒性试验研究

复方血栓通胶囊动物长期毒性试验：复方血栓通胶囊中加入三七药渣，进行动物长期毒性试验90天，试验结果如下：

选用SD大鼠80只，随机分为4组，每组20只，给予不同浓度(0.6、1.2、2.4g/kg)的复方血栓通胶囊，每天灌胃一次，连续90天，末次给药后24小时各组活杀10只动物(雌雄各半)，其余10只动物继续观察2周后活杀。试验期间观察动物的外观、一般行为、体重变化，给药后90天和停药2周进行血液学(WBC；HGB；PLT；NEU；NEU％；LYM；LYM％；HCT；MPV；MONO；MONO％；MCV；PCT；EOS；EOS％；MCH；PDW；BASO；BASO％；MCHC；RBC；RDW；Ret；PT)和血清生化(Glu、AST、ALT、ALP、Crea、ALB、GP、A/G、BUN、TB、TCH、TG、TP、CK、Na⁺、K⁺、Cl^-)、脏器系数、病理组织学等指标检查。试验结果表明：各组动物一般状态良好，外观体征、行为活动、体重增长均无异常变化；三个剂量组及对照组血液学检查、血液生化学检查均在正常范围，组间无显著差异；各组主要脏器组织未见与药物相关的病理学变化。上述指标停药2周后也未见改变。本试验用药剂量分别为临床用药剂量的8、16、32倍，根据试验结果表明：复方血栓通胶囊低、中、高三个剂量(0.75/1.5/3.0g/kg)连续90天给药对大鼠无明显影响，无明确的毒性靶器官和敏感指标，恢复期观察也未见延迟性毒性反应，提示本品临床应用的剂量安全性较高。复方血栓通胶囊中加入三七药渣，而且用药剂量达到临床用药剂量的16、32倍，大鼠连续给药90天试验后，各项指标正常，说明三七药渣的加入以及在原来复方血栓通制剂的基础上加大处方中的活性成分1倍量是安全的。

实施例2

复方血栓通胶囊

按照下述配比称取原料(克)

三七500g  黄芪160g  丹参100g  玄参160g  三七药渣粉300-400g

将上述药物制成本发明药物的制备方法是：

(1)三七粗碎，加50％乙醇浸渍二次，第一次5天，第二次2天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛；(2)黄芪、丹参和玄参三味药材，加50％乙醇加热回流二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)；(3)两种浓缩液浸膏、三七药渣细粉及淀粉、滑石粉各适量混匀，制粒干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例3

复方血栓通片

按照下述配比称取原料(克)

三七500g  黄芪160g  丹参100g  玄参160g  三七药渣粉300-400g。

将上述药物制成本发明药物的制备方法是：

(1)三七粗碎，加50％乙醇浸渍二次，第一次5天，第二次2天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛；(2)黄芪、丹参和玄参三味药材，加50％乙醇加热回流二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20(30℃)；(3)两种浓缩液浸膏、三七药渣细粉及淀粉适量混匀，制粒干燥，整粒，加入羧甲淀粉钠、硬脂酸镁适量，混匀，制成1000片，包薄膜衣，即得。

Claims (9)

1.一种复方血栓通中药制剂，其特征在于由下列原料制得的活性成分组成或由

下列原料制得的活性成分加药学上可接受的附加剂组成：

三七200-1000克  黄芪50-400克  丹参40-250克

玄参60-400克    三七药渣粉100-800克；

其中的三七药渣粉是将三七粉碎，加50-90V/V％乙醇浸渍或超声提取或加热回流或渗漉二次，第一次3-6天，第二次1-3天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.30，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛即得三七药渣粉。

2.根据权利要求1所述的复方血栓通中药制剂，其中的三七药渣粉是将三七粉碎，加50V/V％乙醇浸渍二次，第一次5天，第二次2天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度在30℃时为1.15～1.20，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛即得三七药渣粉。

3.根据权利要求1或2所述的复方血栓通中药制剂，其中各原料的重量为：

三七500克  黄芪160克  丹参100克

玄参160克  三七药渣粉300-400克

剂型为胶囊，制成1000粒。

4.根据权利要求1或2所述的复方血栓通中药制剂，其中各原料的重量为：

三七500克  黄芪160克  丹参100克

玄参160克  三七药渣粉300-400克

剂型为片，制成1000片。

5.根据权利要求3所述的复方血栓通中药制剂，其特征在于所述的药学上可接受的附加剂为淀粉和滑石粉。

6.根据权利要求4所述的复方血栓通中药制剂，其特征在于所述的药学上可接受的附加剂为淀粉、羧甲淀粉钠和硬脂酸镁。

7.一种复方血栓通中药制剂的制备方法，其特征在于：所述中药制剂由下列原料制得的活性成分加药学上可接受的附加剂组成：

三七200-1000克  黄芪50-400克  丹参40-250克

玄参60-400克  三七药渣粉100-800克；

其中将三七粉碎，加50-90V/V％乙醇浸渍或超声提取或加热回流或渗漉二次，第一次3-6天，第二次1-3天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.30，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛即得三七药渣粉；其余黄芪等三味，加50-90V/V％乙醇加热回流提取二次，第一次2-5小时，第二次1-3小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05-1.30，与上述浓缩液、三七药渣粉及药学上可接受的附加剂适量混匀，干燥，制成胶囊剂或片剂。

8.根据权利要求7所述的复方血栓通中药制剂的制备方法，其中将三七粉碎，加50V/V％乙醇浸渍二次，第一次5天，第二次2天，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度在30℃时为1.15～1.20，药渣烘干，粉碎成细粉，过筛即得三七药渣粉；其余黄芪等三味，加50V/V％乙醇加热回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度在30℃时为1.15-1.20，与上述浓缩液、三七药渣粉及药学上可接受的附加剂适量混匀，干燥，制成胶囊剂或片剂。

9.根据权利要求7或8所述的复方血栓通中药制剂的制备方法，其中各原料的重量为：

三七500克  黄芪160克  丹参100克

玄参160克  三七药渣粉300-400克

制成1000粒胶囊或1000片。