CN106063791B - 连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在制备抗炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在制备缓解或/和治疗炎症药物中的新应用。试验证明，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物治疗炎症的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的治疗炎症药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为预防和治疗炎症及其并发症提供了一种新的药物来源。

Description

连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在制备抗 炎药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，涉及一种治疗炎症的药物或保健食品，特别涉及一种中药连翘及 连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在缓解和/或治疗炎症药物或保健食品中 的应用。

背景技术

炎症(inflammation)是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御性反应。它包 括致炎因子引起的损伤、机体防御性反应和组织损伤恢复三个方面。白细胞是机体中的重要 炎性细胞，它的粘附、穿越血管内皮向炎症部位移行是炎症反应的重要特征，其分子基础是 位于白细胞和血管内皮细胞上的粘附分子之间的相互作用，以及各种细胞因子对粘附分子表 达的调节。白细胞粘附是一个多步骤的复杂的级联反应过程，多种粘附分子及细胞因子参与 了这一复杂的过程。

细胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)是泛指一类介导细胞与细胞或细胞与细胞 外基质间相互结合，起粘附作用的膜表面或膜外糖蛋白。它们在胚胎的发育和分化、正常组 织结构的维持、炎症与免疫应答、淋巴细胞归巢、伤口修复、凝血与血栓形成以及肿瘤的浸 润和转移等多种生理、病理过程中均具有重要作用。它的种类很多，目前根据CAMs的化 学结构和功能特点将其分为：(1)选择素家族(selectin family)；(2)整合素家族(intergrin family)； (3)免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily，IgGSF)；(4)钙粘附素家族(cadherin family)；(5)其它粘附分子等。它们主要位于血管内皮细胞和各种白细胞表面，常参与炎症反 应。细胞粘附分子具有广泛的生物学活性，不同的粘附分子其功能各异但具有某些共同特点： ①通过受体与配体相结合的形式发挥作用，同一黏附分子可与不同配体结合；②粘附分子几 乎无多态性，同一种属不同个体的同类黏附分子基本相同；③同一细胞表面可表达多种不同 类型粘附分子；④粘附分子的作用往往通过多对受体和配体共同作用而完成；⑤同一粘附 分子在不同细胞表面可能发挥不同作用，同一生物学功能也可能由不同粘附分子所介导；⑥ 粘附分子在介导粘附作用的同时往往也启动信号传递，粘附和信号传递效应粘附分子密度及 其与配体的亲和力有关。

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis)是一种原因不明的多发性关节炎，主要表现在上肢 以手、腕、肘、肩关节，下肢以足、躁、膝、骸关节，脊柱以寰枢关节为主的慢性关节炎、 滑膜炎，一般是慢性发病，年龄在40-70岁之间，女性为男性的3-4倍，病情进展很慢，病 程较长，关节强直，变形严重，功能受损，并导致终身残废，临床药物治疗控制效果不好，是严重威胁人类身体健康的一种常见病、多发病:故有人称之为.“亚癌”。现代医学主要治疗方 法是以药物治疗为主，目的在于控制病情，缓解症状，保护关节，使用的药物可分为三类:非 幽体类抗炎药、调节性抗类风湿性药和糖皮质类激素，由于药物副作用严重，引起的肝肾损 害，肺纤维化等病人难以坚持长期服药；另外药物对于人体正常免疫功能大大降低，从而使病 人易患各种感染症。外科治疗主要是关节固定和人工关节，由于正常免疫功能低下，人工关 节的术后感染率高于正常的数倍。中医学则采取祛风除湿、散寒止痛的治疗方法，利用中药 对人体毒副作用较低的特点，在长期的医疗实践中积累了丰富的临床经验。

连翘是中药临床常用传统药物之一，应用广泛，用量巨大，临床上常与其他的中草药制 成配方。近年研究发现，连翘水提物对胃癌、肝癌、肠癌、食管癌细胞具有增殖抑制作用， 但是，其中具体活性成分尚不清楚，发明者经过艰苦探索，制备提取了其中活性单体化合物 连翘苷，并经化学合成，制备了相应的衍生物，进行了一系列的药理活性研究，发现连翘苷、 连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物具有抑制炎症，增强人体免疫功能活性，为炎症 患者开辟了新的治疗途经。

本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从连翘及连翘叶中提 取其治疗炎症的有效成分连翘苷，并经进一步研究合成制备了连翘苷衍生物。可以为炎症患者提供一种高效低毒的药物。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述现有的预防或治疗炎症药物存在的技术问 题，提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(即连翘苷/连翘脂 素)抗炎症的性能和功效，并提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组 合物新的药用用途，即在抗炎药物中的新应用。

为实现上述目的，本发明一方面提供一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘 苷/连翘脂素组合物在制备抗炎症药物中的应用。

在筛选具有抗炎症作用的天然活性成分的过程中，发明人发现连翘的化 学成分中连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物具有强烈的抗炎症作 用。

其中，所述药物由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷/连翘脂素组合物和药 学上可接受的载体组成。

特别是，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷 (33-Hydroxyphillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷 (9-Hydroxyphillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡 萄糖醛酸苷(33,34-Methylenedioxy phillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、连翘脂素 葡萄糖醛酸甲酯((2R,3R,4R,5S)-methyl 6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyph enoxy)-3,4,5-trihydroxyte tra hydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸 钠(sodium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4- (3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸钾 (potassium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4- (3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-tri hydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸 ((2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H- pyran-2-carboxylic acid)；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡 萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

特别是，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配 比为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步 优选为90:10或10:90，更进一步优选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

其中，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为≥30％，进一 步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷 与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一 步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量为1％～98％；优选为30～ 80％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量为1％～98％；优选为30～80％。

特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为 药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》 (Handbook ofPharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑； AmericanPharmaceutical Association出版， Washington and The Pharmaceutical Press，London，1994)等工具书中找到。

尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁 等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、 糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等；

其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂形式存 在。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量≥1％，优选为≥30％，进一 步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷 与连翘脂素组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步 优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

本发明另一方面提供一种具有抗炎作用的药物，该药物含有连翘苷、连 翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素的组合物。

其中，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基 -连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂 素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂 素葡萄糖醛酸；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄 糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸 甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

其中，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比 为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步优 选为90:10或10:90，更进一步优选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为≥30％，进 一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘 苷与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进 一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

尤其是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为1％～98％； 优选为30～80％，更进一步优选为60％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量≥ 1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％。

特别是，所述连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷/连翘脂素组合物的重量与 所述药物的总重量之比为0.01-10：100，优选为0.1～10：100，进一步优选为1～ 10：100。

其中，所述连翘苷/连翘脂素组合物以连翘苷、连翘脂素单体组成、或采 用溶剂加热提取方法制备而成的连翘脂素-连翘苷提取组合物，或连翘脂素和连 翘苷与环糊精或环糊精的衍生物组合而成连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物。

特别是，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物选择连翘脂素和连翘苷与α -、β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素和连翘苷与α-、 β-或γ-环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。

其中，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物中连翘苷和连翘脂素重量与环 糊精或环糊精的衍生物的重量之比为1：1-50。

特别是，所述环糊精为α-或β-、γ-环糊精；所述环糊精衍生物为羟乙 基-环糊精、2,6-二甲基-环糊精、2,3,6-三甲基-环糊精、2,6-二乙基-环糊精、2,3,6- 三乙基-环糊精、麦芽糖基-环糊精或磺丁醚β-环糊精、对甲基苯磺酰氯(p-TsCl) 取代的β-环糊精、6-位取代的β-CD对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-6-OTs)、2-氧 羟丙基-β-环糊精、2-位单取代的对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-2-OTs)、β-环糊 精对甲基苯磺酸酯(Tosyl-β-CD)、β-环糊精的星形大分子PCL-(Tos)7-β-CD。

特别是，所述药物中还包括三七提取物、雷公藤提取物、柴胡提取物、 粉防己取物、黄芩提取物、苦参提取物、草木樨提取物、葡萄子提取物、石榴 子提取物、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物中的一种或多种。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

1、本发明对已知化合物连翘苷发掘了新的药用价值，将其用于缓解、治疗炎症，并可制 备成缓解和/或治疗炎症的药物或保健食品，从而为连翘及连翘叶药材的应用开拓了一个新的 领域。

2、本发明的系列试验研究证明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(即连 翘苷/连翘脂素)抗具有显著的缓解、治疗炎症的功效。

3、本发明的连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(即连翘苷/连翘脂素) 抗炎药理作用强，用于缓解、调理和治疗炎症的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好， 能够长期服用，具有良好的药用前景。

4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型， 且服量小，使用方便，因此易于推广。

5、本发明既可采用单一成分的连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(即连 翘苷/连翘脂素)抗炎活性成分制备缓解和治疗炎症的药物，又可采用连翘苷、连翘苷衍生物、 连翘苷与连翘脂素组合物抗炎与其它活性成分(例如与三七提取物、雷公藤提取物、柴胡提 取物、粉防己取物、黄芩提取物、苦参提取物、草木樨提取物、葡萄子提取物、石榴子提取 物、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物)共同组方，制备治疗炎症的复方药物。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包括了本 发明的连翘苷、连翘苷衍生物的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅是范例 性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明 的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改 和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明中所述连翘苷衍生物33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛 酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷与专利申请(申请号：201510319303.4，优 先权号：201510164294.6)中所述连翘苷衍生物相同；连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素 葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸与专利申请(申请号： 201510320579.4，优先权号：201410825547.5)中的相同。

实施例1连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成 10000片。

实施例2连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度60％) 200g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例3连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例4连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、雷公藤提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，再加入滑石粉和硬脂 酸镁混匀后压制成10000片。

实施例5连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、黄芩提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例6连翘苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、粉防己提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例7连翘苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取连翘苷、草木樨提取物、柴胡提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离 子水至100ml，即得。

实施例8 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂 酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例9 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 200g

淀粉 1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例10 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度90％) 500g

淀粉 1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例11 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、柴胡提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒， 加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例12 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊， 制成10000粒。

实施例13 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成 颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例14 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、柴胡提取物，用乙醇溶解后加入 葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例15 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂 酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例16 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％) 200g

淀粉 1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例17 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例18 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、柴胡提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒， 加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例19 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊， 制成10000粒。

实施例20 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成 颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例21 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、三七提取物，用乙醇溶解后加入 葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例22 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑 石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例23 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％) 200g

淀粉 1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000 粒。

实施例24 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000 粒。

实施例25 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均 匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例26 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均 匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例27 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、维生素C和蔗糖粉混 合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例28 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、维生素C和蔗糖粉混 合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例29 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、草木樨提取物、三七提取物，用乙醇 溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例30连翘苷和连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸 镁混合均匀后压制成10000片。

实施例31连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 100g

微晶纤维素 10000g

2、取连翘苷98g、连翘脂素2g与微晶纤维素混匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例32连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 250g

淀粉 2500g

2、取连翘苷245g、连翘脂素5g与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例33-36连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

实施例33-36中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与淀粉混合均匀后装胶囊， 各制成10000粒胶囊。

实施例:37-40连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

实施例37-30中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与微晶纤维素混合均匀后， 制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例41连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、称取连翘苷490g、连翘脂素10g与苦参提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后 制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例42连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷245g、连翘脂素5与黄芩提取物、苦参提取物粉末混合均匀，再与微晶纤 维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例43连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷245g、连翘脂素5g与粉防己提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物粉末混合 均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例44连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与葡萄子提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后 制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压，制成10000片。

实施例45连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷900g、连翘脂素100g与上述提取物(柴胡、三七)粉末混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例46连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷1880g、连翘脂素120g与上述提取物(三七、雷公藤、葡萄子)粉末混合均匀， 再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实验例1连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞系 RAW264.7后细胞上清液中亚硝酸盐含量的影响

1材料及方法

1.1药品与试剂

连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相 色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.5％，并用 中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99.5％。批号：20130303。

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A，含量＞98％)，白色粉末，大连富生 天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸 发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.5％。

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物B，含量＞98％)，白色粉末，大连富生 天然药物开发有限公司生产，批号：20130302。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸 发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.2％。

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C，含量＞98％)，白色粉末， 大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检 测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.7％。

连翘苷/连翘脂素组合物A，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发 有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为98：2。

连翘苷/连翘脂素组合物B，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发 有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为90：10。

阳性对照药：布洛芬(哈药集团世一堂制药厂生产，批准文号：H10950286，规格：0.2g， 批号：20140503)。

脂多糖(LPS，批号：20140105)，Sigma公司；RPMI 1640培养基，Invitrogen公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；其余试剂为国产分析纯。

1.2细胞株

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系RAW264.7，购于大连医科大学典型培养物保藏中心。

1.3主要仪器

多元定量仪(美国MJRESEARCH公司)；多功能荧光酶标仪(瑞士Tecan公司)；EDC-810 基因扩增仪(东盛创新生物科技有限公司)；Napco5410型二氧化碳孵箱，美国NAPCO公司； BCN-1360型超净工作台，北京东联哈尔仪器制造有限公司。

2试验方法

RAW264.7细胞株培养于含10％胎牛血清100U/ml青霉素的RMPI1640培养基中，在37℃5％二氧化碳条件下培养。细胞悬液以每孔1×10⁵/100μl接种于96孔板，培养24h，空白对照组采用含0.1％DMSO的RMPI1640培养细胞；模型组采用LPS(1mg/L)刺激细胞；药 物组采用向细胞培养液中添加相应剂量的药物，刺激细胞，其中添加连翘苷15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘苷低、中、高剂量组；连翘苷衍生物A 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为 连翘苷衍生物A低、中、高剂量组；连翘苷衍生物B 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘 苷衍生物B低、中、高剂量组；连翘苷衍生物C 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘苷衍 生物C低、中、高剂量组；连翘苷/连翘脂素A 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘苷/连翘 脂素A低、中、高剂量组；连翘苷/连翘脂素B 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘苷/连翘 脂素B低、中、高剂量组；阳性药组采用布洛芬50mg/L；连翘脂素组采用添加60mg/L；用 上述剂量处理细胞，同时加入终浓度为1mg/L LPS，各组分别刺激细胞24h，48h后，吸取96 孔板中的培养液100μl到另一孔板中，加入等体积的Griess reactin试剂，室温放置10min，用 酶标仪读取540nm处吸光度(A)，计算各剂量组在不同处理时间对细胞上清液中亚硝酸盐 抑制率，试验结果如表1所示。

抑制率＝(模型组A-药物组A)/(模型组A-空白对照组A)×100％

3实验结果

采用SPSS 11.5软件统计分析，采用方差分析，结果用表示，P<0.05有统计学意义。

表1连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素对LPS刺激RAW264.7细胞生成NO的影响(n＝3)

由表1的测定结果可知：LPS刺激RAW264.7细胞可产生大量的NO，模型组细胞上清液 中NO产物亚硝酸盐含量显著提高，与空白对照组相比有显著性差异。连翘脂素组细胞试验 结果与模型组无差别，说明连翘脂素不能抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量，说明其不具有 抗炎的药理作用；连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素不同剂量在不同时间点均能显著 抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量，并呈现良好的剂量依赖关系；而且连翘苷与连翘脂素组 合使用，具有协同增效作用，显著抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量，提高了抗炎效率。

实验例2连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对LPS刺激RAW264.7细胞上清 液中TNF-α和IL-6含量的影响

1材料及方法

1.1药品与试剂

连翘苷、33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖 醛酸苷(连翘苷衍生物B)、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C)、 连翘苷/连翘脂素组合物A、连翘苷/连翘脂素组合物B与试验例1相同；

阳性对照药：布洛芬(哈药集团世一堂制药厂生产，批准文号：H10950286，规格：0.2g， 批号：20140503)。

脂多糖(LPS，批号：20140105)，Sigma公司；RPMI 1640培养基，Invitrogen公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素 -6(IL-6)ELISA试剂盒，美国R&D公司；其余试剂为国产分析纯。

1.2细胞株

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系RAW264.7，购于大连医科大学典型培养物保藏中心

1.3主要仪器

与试验例1相同

2试验方法

RAW264.7细胞株培养于含10％胎牛血清100U/ml青霉素的RMPI1640培养基中，在37℃5％二氧化碳条件下培养。将细胞随机分为空白对照组，模型组(即LPS刺激组)和连翘苷低、中、高剂量组；连翘苷衍生物A低、中、高剂量组；连翘苷衍生物B低、中、高剂量 组；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组；连翘苷/连翘脂素组合物A低、中、高剂量组；连 翘苷/连翘脂素组合物B低、中、高剂量组；每组设个3复孔，空白对照组用RPMI1640完全 培养液常规培养；模型组采用LPS(1mg/L)刺激细胞，药物组采用不同剂量药物刺激细胞， 其中，连翘苷15mg/L、30mg/L、60mg/L，作为连翘苷低、中、高剂量组；连翘苷衍生物A 15mg/L、 30mg/L、60mg/L，作为连翘苷衍生物A低、中、高剂量组；连翘苷衍生物B 15mg/L、30mg/L、 60mg/L，作为连翘苷衍生物B低、中、高剂量组；连翘苷衍生物C 15mg/L、30mg/L、60mg/L， 作为连翘苷衍生物C低、中、高剂量组；连翘苷/连翘脂素A 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作 为连翘苷/连翘脂素A低、中、高剂量组；连翘苷/连翘脂素B 15mg/L、30mg/L、60mg/L，作 为连翘苷/连翘脂素B低、中、高剂量组；阳性药组采用布洛芬50mg/L；连翘脂素组采用添 加60mg/L；同时加入终浓度为1mg/L LPS。37℃5％CO2孵育12h，收集上清液，用ELISA 法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6含量，操作步骤按试剂盒说明书进行，试验结果见表2。 3实验结果

采用SPSS 11.5软件统计分析采用方差分析，结果用表示，P<0.05差异有统计学意义。

表2连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素对LPS刺激RAW264.7细胞上清液中TNF-α和IL-6含量的影响(ng/L,n＝3)

表2的试验结果表明：连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物对LPS诱导的 RAW264.7细胞产生TNF-α和IL-6的影响明显，空白对照组仅有少量TNF-α和IL-6表达，LPS模型组TNF-α和IL-6含量明显增加，连翘脂素组TNF-α和IL-6含量亦明显增加，与LPS 模型组无差别，说明连翘脂素不具有抗炎的作用，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂 素组合物各剂量组与LPS刺激组相比，TNF-α和IL-6蛋白含量明显减少，说明连翘苷、连翘 苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物可显著抑制TNF-α和IL-6的表达；而且连翘苷与连翘脂素组合使用，具有协同增效作用，显著抑制细胞TNF-α和IL-6的表达，具有明显的抗炎作用。

试验例3连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物对小鼠耳肿胀的影响

1试验材料

1.1药品与试剂

连翘苷、33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖 醛酸苷(连翘苷衍生物B)、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C)、 连翘苷/连翘脂素组合物A、连翘苷/连翘脂素组合物B与试验例1相同；

阳性对照药：地塞米松，郑州卓峰制药有限公司，国药准字H41020055，批号：20140701

1.2实验动物

清洁级昆明小鼠，体重18～22g，雌雄各半，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格 证号：SCXK2014-0002。

2试验方法：

2.1剂量选择

根据受试物的人体推荐用量及样品的最大可能灌胃剂量设置3个连翘苷实验组，即连翘 苷低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷衍生物A、B、C分别设置9个连翘苷衍生物实验组，即连翘苷衍生物A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷衍生物B低、中、高剂量组，剂量分别为3、 6、12mg/kg；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷/连翘脂素组合物A、B分别设置6个连翘苷/连翘脂素实验组，即连翘苷/连翘脂 素A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷/连翘脂素B低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg。

另设一个连翘脂素组(连翘脂素，12mg/kg)、空白对照组和阳性药物对照组(地塞米松， 20mg/kg)。

2.2分组与给药

取清洁级昆明小鼠210只，各组雌雄各半，随机分为21组，每组10只，即空白对照组、 连翘苷药组(低，中，高三个剂量组)、连翘苷衍生物A、B、C(低，中，高三个剂量组)、连翘苷/连翘脂素组合物A、B(低，中，高三个剂量组)、连翘脂素组、阳性药对照组(地塞米松组)。给药60min后，每鼠左侧耳廓正反面均匀涂抹二甲苯0.05ml，右耳作对照。30min后脱臼处死，沿耳廓对称剪下小鼠两耳，用打孔器在左右耳廓相同部位打下圆耳片取材，精密电子天平称量，以每鼠的左右耳片重量之差作为肿胀度，并计算抑制率，试验结果如表3所示。

肿胀抑制率(％)＝[(空白对照组肿胀度-给药组肿胀度)/空白对照组肿胀度]×100％。

3实验结果

采用SPSS 11.5软件统计分析采用方差分析，结果用表示，P<0.05差异有统计学意义。

表3连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物对小鼠耳肿胀的影响(n＝10)

表3的试验结果表明：连翘脂素不具有抗急性炎症的作用，连翘苷组、连翘苷衍生物、 连翘苷/连翘脂素均具有抗急性炎症的作用，而且作用效果明显；而且连翘苷与连翘脂素组合 使用，具有协同增效作用，显著抑制肿胀度，抗炎作用明显。

结论：动物体内实验可知，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物可明显 抑制由二甲苯引起的小鼠耳肿胀，说明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素有明显的抗 炎作用。连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物能显著抑制NO，TNF-α和IL-6 的生成与释放，能显著降低TNF-α和IL-6mRNA的表达。由此可推测连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物可能通过调节巨噬细胞产生NO，TNF-α和IL-6等炎症因子来发挥抗炎作用；尤其是，连翘苷/连翘脂素组合物中由于连翘苷与连翘脂素组合使用，协同增 效，使得抗炎效果明显增强。

Claims (8)

1.33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷在制备抗炎药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药物由33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和药学上可接受的载体组成，或由9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和药学上可接受的载体组成，或由33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和药学上可接受的载体组成。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征是，所述药学上可接受的载体是环糊精。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征是，所述药学上可接受的载体是α-或β-或γ-环糊精。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂形式存在。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征是，33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷的重量与所述药物的总重量之比为0.01-10：100。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征是，33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷的重量与所述药物的总重量之比为0.1～10：100。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征是，33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷或33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷的重量与所述药物的总重量之比为1～10：100。