CN101695573A - 一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法及其伪狂犬病活疫苗产品。该方法包括如下步骤：用传代细胞培养伪狂犬病病毒弱毒株；收获得到的细胞培养毒液；再加入稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到传代细胞源伪狂犬病活疫苗。传代细胞为猪睾丸传代细胞ST、猪肾传代细胞PK15或IBRS-2。本发明用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法具有生产工艺简单且稳定、易操作、病毒含量高、批间差异小、质量易控、可显著提高疫苗产量和质量、减少过敏反应等优点。利用本发明的生产方法得到的伪狂犬病活疫苗安全性好、免疫效力高、对伪狂犬病强毒攻击具有较好的免疫保护作用。

Description

一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
技术领域
本发明属于兽用生物制品技术领域，更具体是涉及一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品。
背景技术
伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起多种动物的一种急性传染病。该传染病遍布世界主要养猪国家。免疫接种是防制伪狂犬病的主要策略。
我国目前生产伪狂犬病活疫苗所用的细胞为鸡胚成纤维细胞。因每批鸡胚原材料的差异，鸡胚成纤维原代细胞的批间差异较大；用鸡胚成纤维细胞培养伪狂犬病病毒，产毒滴度不高，给疫苗产量、效力的提高带来困难，而且细胞碎片与杂蛋白多，易引起过敏反应。
发明内容
为克服上述技术缺陷，本发明的目的是提供一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法及伪狂犬病活疫苗产品。
为实现上述目的，本发明首先提供了一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法。该方法包括如下步骤：
(1)用传代细胞培养伪狂犬病病毒弱毒株；
(2)收获所述步骤(1)得到的细胞培养毒液；
(3)在所述步骤(2)得到的细胞培养毒液中加稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到传代细胞源伪狂犬病活疫苗。
优选的，所述步骤(1)包括如下步骤：
(1a)制苗用细胞的传代与培养：所述传代细胞经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，用细胞生长液继续培养，形成传代细胞单层；
(1b)细胞毒种的繁殖：将所述伪狂犬病病毒弱毒株接种至所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，用细胞维持液继续培养；2～3日后收获细胞培养毒液作为生产用毒种；
(1c)制苗毒液的繁殖：取所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，弃去所述细胞生长液，接种所述步骤(1b)中得到的含毒的细胞维持液，继续培养。
优选的，所述步骤(1a)、(1b)和(1c)中的细胞培养所用的温度为36℃～37℃。
优选的，所述步骤(1b)和(1c)中的接种时的接种量为1％～2％体积百分比的生产用细胞毒种的维持液。
优选的，所述步骤(1a)中的细胞生长液含90％～92％体积百分比的MEM液、抗菌素和8％～10％体积百分比的犊牛血清，所述细胞生长液的pH值为7.0～7.2。
优选的，所述步骤(1b)和(1c)中的细胞维持液含95％～98％体积百分比的MEM液、抗菌素和2％～5％体积百分比的犊牛血清，所述细胞维持液的pH值为7.2～7.4。
优选的，所述步骤(2)包括如下步骤：接毒后2～3日收获细胞培养毒液，收获的毒液置-15℃以下保存。
优选的，所述传代细胞为猪睾丸传代细胞ST、猪肾传代细胞PK15或猪肾传代细胞IBRS-2。
本发明的目的之二是提供一种伪狂犬病活疫苗制品，该伪狂犬病活疫苗制品通过上述方法得到。
与现有技术相比，本发明的用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法具有生产工艺简单且稳定、易操作、病毒含量高、批间差异小、质量易控、可显著提高疫苗产量和质量、减少过敏反应等优点。利用本发明的生产方法得到的伪狂犬病活疫苗安全性好、免疫效力高、对伪狂犬病强毒攻击具有较好的免疫保护作用。
具体实施方式
为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。
用传代细胞(细胞系)生产伪狂犬病活疫苗的生产工艺方法，具体步骤如下：
(1)选择传代细胞作为制苗用细胞：在本实施例中，选择猪睾丸(ST)传代细胞，在另两个实施例中，分别选择猪肾(PK15)传代细胞和猪肾(IBRS-2)传代细胞。
(2)制苗用细胞的传代与培养：上述传代细胞经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于继续传代或接种病毒。
(3)细胞毒种的繁殖：将伪狂犬病病毒弱毒株接种生长良好的上述传代细胞单层，用细胞维持液继续培养；2～3日后收获细胞培养毒液作为生产用毒种。
细胞毒种鉴定：细胞毒种鉴定完全符合伪狂犬病病毒弱毒株毒种标准，对猪安全无副作用，细胞毒种每1ml含病毒≥108TCID50。
(4)制苗毒液的繁殖：取已形成良好单层的上述传代细胞培养瓶，弃去细胞生长液，接种上述含毒的维持液，继续培养；接毒后2～3日收获细胞培养毒液，收获的毒液置-15℃以下保存。
制苗毒液的检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)附录15、19页进行检验，无细菌、霉菌、支原体生长。细胞毒液对猪安全无副作用，各收次病毒培养液分别用细胞测定效价，每1ml含病毒≥108TCID50。
(5)配苗、分装及冻干：将检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。
成品检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)进行检验，符合“伪狂犬病活疫苗”的规定，对猪安全无副作用，每头份疫苗含病毒≥106TCID50。
其中，各步骤中所涉及到的具体条件如下：
步骤(2)、(3)、(4)中所述的传代细胞培养温度是36～37℃。
步骤(3)、(4)中所述的接种量为1％～2％体积百分比的生产用细胞毒种的维持液。
步骤(2)中所用生长液的配方是：90％～92％体积百分比的MEM液、8％～10％体积百分比的犊牛血清、并加适量的抗菌素，pH值调整为7.0～7.2。
步骤(3)及(4)中所用维持液的配方是：95％～98％MEM液、2％～5％犊牛血清、加适量的抗菌素，pH值调整为7.2～7.4。
按上述方法制备得到的伪狂犬病活疫苗按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)进行检验，符合“伪狂犬病活疫苗”的规定，对猪安全无副作用，每头份疫苗含病毒≥106TCID50。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)用传代细胞培养伪狂犬病病毒弱毒株；
(2)收获所述步骤(1)得到的细胞培养毒液；
(3)在所述步骤(2)得到的细胞培养毒液中加入稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到传代细胞源伪狂犬病活疫苗。
2.根据权利要求1所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括如下步骤：
(1a)制苗用细胞的传代与培养：所述传代细胞经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，用细胞生长液继续培养，形成传代细胞单层；
(1b)细胞毒种的繁殖：将所述伪狂犬病病毒弱毒株接种至所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，用细胞维持液继续培养；2～3日后收获细胞培养毒液作为生产用毒种；
(1c)制苗毒液的繁殖：取所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，弃去所述细胞生长液，接种所述步骤(1b)中得到的含毒的细胞维持液，继续培养。
3.根据权利要求2所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1a)、(1b)和(1c)中的细胞培养所用的温度为36℃～37℃。
4.根据权利要求2所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1b)和(1c)中的接种时的接种量为1％～2％体积百分比的生产用细胞毒种的维持液。
5.根据权利要求2所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1a)中的细胞生长液含90％～92％体积百分比的MEM液、抗菌素和8％～10％体积百分比的犊牛血清，所述细胞生长液的pH值为7.0～7.2。
6.根据权利要求2所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1b)和(1c)中的细胞维持液含95％～98％体积百分比的MEM液、抗菌素和2％～5％体积百分比的犊牛血清，所述细胞维持液的pH值为7.2～7.4。
7.根据权利要求1～6之一所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括如下步骤：接毒后2～3日收获细胞培养毒液，收获的毒液置-15℃以下保存。
8.根据权利要求1～6之一所述的一种用传代细胞源生产伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述传代细胞为猪睾丸传代细胞ST、猪肾传代细胞PK15或猪肾传代细胞IBRS-2。
9.一种伪狂犬病活疫苗，其特征在于，所述伪狂犬病活疫苗通过权利要求1～6之一所述的方法得到。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101979518A (zh) * 2010-05-10 2011-02-23 洛阳普莱柯生物工程有限公司 一种制备伪狂犬病病毒的方法
CN102344912A (zh) * 2011-09-20 2012-02-08 哈药集团生物疫苗有限公司 猪伪狂犬病毒毒株及用其制备的猪伪狂犬病灭活疫苗
CN103060262A (zh) * 2012-09-21 2013-04-24 南京天邦生物科技有限公司 Stc细胞生产高效猪伪狂犬病活疫苗工艺
CN103948920A (zh) * 2014-04-23 2014-07-30 吉林和元生物工程有限公司 一种猪伪狂犬病活疫苗的制备方法
CN104367996A (zh) * 2013-08-15 2015-02-25 普莱柯生物工程股份有限公司 一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
CN105521487A (zh) * 2014-09-30 2016-04-27 广东永顺生物制药股份有限公司 一种利用df1传代细胞生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
WO2016150026A1 (zh) * 2015-03-20 2016-09-29 普莱柯生物工程股份有限公司 一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、及其致弱的病毒株、疫苗组合物和应用
CN107224579A (zh) * 2017-06-09 2017-10-03 广东渔跃生物技术有限公司 一种用传代细胞系生产猪伪狂犬活疫苗的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100577204C (zh) * 2007-11-30 2010-01-06 中国兽医药品监察所 用细胞系生产猪瘟活疫苗的方法

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101979518A (zh) * 2010-05-10 2011-02-23 洛阳普莱柯生物工程有限公司 一种制备伪狂犬病病毒的方法
CN101979518B (zh) * 2010-05-10 2013-08-07 普莱柯生物工程股份有限公司 一种制备伪狂犬病病毒的方法
CN102344912A (zh) * 2011-09-20 2012-02-08 哈药集团生物疫苗有限公司 猪伪狂犬病毒毒株及用其制备的猪伪狂犬病灭活疫苗
CN102344912B (zh) * 2011-09-20 2013-08-14 哈药集团生物疫苗有限公司 猪伪狂犬病毒毒株及用其制备的猪伪狂犬病灭活疫苗
CN103060262A (zh) * 2012-09-21 2013-04-24 南京天邦生物科技有限公司 Stc细胞生产高效猪伪狂犬病活疫苗工艺
CN104367996A (zh) * 2013-08-15 2015-02-25 普莱柯生物工程股份有限公司 一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
CN104367996B (zh) * 2013-08-15 2017-09-05 普莱柯生物工程股份有限公司 一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
CN103948920A (zh) * 2014-04-23 2014-07-30 吉林和元生物工程有限公司 一种猪伪狂犬病活疫苗的制备方法
CN105521487A (zh) * 2014-09-30 2016-04-27 广东永顺生物制药股份有限公司 一种利用df1传代细胞生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品
WO2016150026A1 (zh) * 2015-03-20 2016-09-29 普莱柯生物工程股份有限公司 一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、及其致弱的病毒株、疫苗组合物和应用
CN107224579A (zh) * 2017-06-09 2017-10-03 广东渔跃生物技术有限公司 一种用传代细胞系生产猪伪狂犬活疫苗的方法
CN107224579B (zh) * 2017-06-09 2019-09-06 广州渔跃生物技术有限公司 一种用传代细胞系生产猪伪狂犬活疫苗的方法

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