CN101647951A - 一种中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中药组合物及其制备方法和应用，该中药组合物由包括以组合物原料的总重量为基础计的下列药材的原料制成：金蝉花5～30％、葛根10～20％、川芎3～15％、生黄芪10～40％、黄精6～25％、积雪草5～30％。本发明提供的中药组合物对慢性肾功能衰竭的发生及发展具有明显的治疗和预防作用，动物实验表明，本发明提供的中药组合物能够改善肾功能、降低血清黄嘌呤氧化酶活性、提高血红蛋白、减少ECM的沉积、减轻肾小管－间质损伤、延缓肾间质纤维化；其药效活性相对于单用蝉花作用更强，且安全无明显毒副作用。

Description

一种中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种预防及治疗慢性肾衰竭及其他慢性肾病的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

慢性肾功能衰竭(CRF)是原发性或继发性慢性肾脏疾患引起肾功能损害和进行性恶化的结果。不同的病因引起CRF，其进展的速度和程度可有显著差别，一般认为某些原发病尚缺乏特异有效治疗的，病变难以控制，肾衰进展较快，如膜增殖性肾炎、成人紫癜性肾炎、糖尿病肾病、多发性骨髓瘤肾病、狼疮性肾炎、新月体肾炎等；反之，CRF的紧张较为缓慢，如慢性肾盂肾炎等。但从总体上讲，CRF的病情进展是缓慢的，其病程一般是不可逆的，而且在病程的某一阶段可呈进行性发展和加重，直至发展成终末期肾衰为止。因此，如何对CRF进行早期防治，并延缓CRF的病情进展，降低尿毒症的发病率，已经成为肾脏病研究中的一个重大课题。研究证实，冬虫夏草具有改善肾功能，减少细胞外基质(extracellularmatrixc，ECM)的沉积，延缓肾小球硬化和间质纤维化的作用，由于其价格昂贵，很难推广，目前许多临床及实验研究着重寻找冬虫夏草的同类科属中药以及有效成分(如虫草类多糖或菌丝)治疗CRF，以期替代药源的日益匮乏、价格昂贵的冬虫夏草，进一步开发这味名贵中药的药用价值，扩大其临床应用范围。蝉花又名蝉茸和胡蝉，其药用部分是子座及寄主昆虫的尸体(菌核)。据《证类本草》(1108年)记载蝉花性味甘寒无毒，能解痉散风热。明代李时珍《本草纲目》中已讲到蝉花可治疗“小儿天吊，惊痫瘛纵，夜啼心悸。”现代药理发现蝉花所含多糖、虫草酸和腺苷的含量与冬虫夏草相近甚至高于冬虫夏草，动物实验研究发现，蝉花具有改善肾功能，减少ECM的沉积，延缓肾小球硬化和间质纤维化的作用。

川芎是活血化瘀类药物，对多种原因导致的瘀血证有良好的治疗作用，临床也常用于肾小球疾病高凝状态的治疗。将川芎嗪加入人胎肾小球MC培养体系后，肾小球MC的数量明显低于对照组，且川芎嗪组内肾小球MC的IL-6含量也明显低于对照组，提示川芎嗪抑制肾小球系膜细胞增殖的机理是通过降低肾小球MC自分泌IL-6所致。川芎嗪其作用机制主要与抑制血小板聚集、改善微循环、促进肾小球病变恢复、增加肾血流量、保护健全肾单位等有关。

在肾脏疾病中，黄芪常用于糖尿病肾病(DN)及肾病综合征(NS)的治疗，黄芪注射液可减少早期糖尿病肾病TGF β1、Col-IV的产生，降低非酶糖化，从而保护肾脏功能，延缓DN的发展；对2型糖尿病肾组织的保护作用，可能与下调肾组织TGF-β1表达相关，黄芪能使TGF-β1诱导的内源性Smad7产生减少，从而发挥抗纤维化作用。黄芪注射液还可降低血小板黏附率，增加肾血流量，促进蛋白合成。研究发现TNF-α参与了NS的发病过程，黄芪可通过调节TNF-α产生减轻NS的免疫损害，同时能减少环磷酰胺的副作用。黄芪还能改善原发性肾病综合征的氧化应激状态。另外，黄芪可抑制肾小球系膜细胞产生IL-6，其抑制作用随剂量增加而增殖，这可能是黄芪防治肾小球硬化的作用机制之一。黄芪通过改善NS患者低蛋白血症状态对肾小管起保护作用。另外，黄芪通过改善红细胞的微循环，增强了C3b受体的表达，使其携带CIC的能力增强，加强了CIC的清除，从而增强慢性肾炎患者的红细胞免疫功能。

从临床角度考虑人群是由遗传体质各不相同的个体组成，在筛选针对慢性肾衰竭药物的时候更考虑能否多种有效成分协同作用，加强药物作用的效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药组合物，该中药组合物对慢性肾衰竭及其他慢性肾病的发生与发展具有明显治疗和预防作用，能降低血清黄嘌呤氧化酶活性。

本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供一种中药制剂。

本发明的再一目的是提供该中药组合物在制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物中的应用。

本发明的再一目的是提供该中药组合物在制备治疗及预防能降低血清黄嘌呤氧化酶活性的药物中的应用。

本发明的第一个方面，提供了一种中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由包括以组合物原料的总重量为基础计的下列药材的原料制成：金蝉花5～30％、葛根10～20％、川芎3～15％、生黄芪10～40％、黄精6～25％、积雪草5～30％。

较佳地，本发明的中药组合物，由包括以组合物原料的总重量为基础计的下列药材的原料制成：金蝉花10～20％、葛根10～20％、川芎8～15％、生黄芪15～25％、黄精6～21％、积雪草5～25％。

进一步，本发明的中药组合物的原料，可以仅由金蝉花、葛根、川芎、生黄芪、黄精和积雪草组成，也可以包括其他具有预防及治疗慢性肾功能衰竭协同作用的药材，如：生大黄、佩兰、紫苏叶等。

本发明中，所述的中药组合物由所述原料制成，是指由所述原料的提取物制成。所述的提取物可以是有机溶剂提取物，所述有机溶剂可以为乙醇、丙酮、石油醚等；也可以为水提取；或者也可以为有机溶剂和水的混合溶液提取物，如乙醇水溶液的提取物；本发明中优选为水提取物。提取方法可以采用本领域的常规方法。

本发明的第二个方面，提供了上述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将所述重量配比的葛根、川芎、黄精和积雪草加水煎煮(所用水量为葛根、川芎、黄精和积雪草总重量的4-5倍)，过滤，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花和生黄芪加水煎煮(所用水量为金蝉花和生黄芪总重量的4-5倍)，过滤，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉II；将浸膏粉I和浸膏粉II混合均匀，即得全方干燥粉。

较佳地，本发明的中药组合物的制备方法中，所述煎煮次数为2～3次，每次煎煮时间为1～2小时。

较佳地，本发明的中药组合物的制备方法中，所述煎煮后得到的煎液先过80目筛，再用帆布过滤除杂。

较佳地，本发明的中药组合物的制备方法中，所述浓缩为减压薄膜浓缩，所述干燥为喷雾干燥。

本发明的第三个方面，提供了一种中药制剂，该中药制剂含有安全有效量的上述中药组合物及药学上可接受的载体，所述中药组合物的重量百分含量为50％-99％，优选为62％-80％。

药学上可接受的载体为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于)糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素)，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油，多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化剂(如Tween)，润湿剂(如月桂基硫酸钠)，着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水，等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等；这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

本发明的中药组合物可以按照药剂学上的通用方法制成任何常规的制剂形式，包括口服制剂，也包括胃肠外给药制剂。优选的是片剂、粉剂剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、糖浆剂、透皮吸收剂以及喷雾剂，最优选为粉剂。

本发明的第四个方面，提供了上述中药组合物的用途，即该中药组合物用于制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物。所述其他慢性肾病是指以肾小管-间质损害为主的肾病，包括尿酸性肾病、慢性肾盂肾炎、药物性肾损害等。

本发明的第五个方面，提供了上述中药组合物的用途，即该中药组合物用于制备治疗及预防能降低血清黄嘌呤氧化酶活性的药物。

术语说明：本发明中所述的蝉花与金蝉花为同一种药材，蝉花又名金蝉花，拉丁名为Cordyceps Cicadae；所述葛根的拉丁名为Radix Puerariae Lobatae：所述川芎的拉丁名为Ligusticum chuanxiong Hort；所述生黄芪为黄芪晒干以后的切片，所述黄芪的拉丁名为Radix Astragali Mongolici；所述黄精的拉丁名为Rhizoma Polygonati sibirici；所述积雪草的拉丁名为Herba Centellae Asiaticae；所述大黄的拉丁名为Radix et RhizomaRhei Palmati；所述佩兰的拉丁名为Herba Eupatorii Fortunei；所述紫苏叶的拉丁名为Folium Perillae Argutae。

动物实验表明，本发明提供的中药组合物能够改善肾功能、降低血清黄嘌呤氧化酶活性、提高血红蛋白、减少ECM的沉积、减轻肾小管-间质损伤、延缓肾间质纤维化；其药效活性相对于单用蝉花作用更强，且安全无明显毒副作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1中药组合物金蝉花复方制剂1的制备

按处方比例，取金蝉花15g、葛根10g、川芎15g、生黄芪30g、黄精20g、积雪草10g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮2次，每次1小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮2次，每次1小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例2中药组合物金蝉花复方制剂2的制备

按处方比例，取金蝉花5g、葛根10g、川芎15g、生黄芪40g、黄精25g、积雪草5g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例3中药组合物金蝉花复方制剂3的制备

按处方比例，取金蝉花30g、葛根20g、川芎4g、生黄芪10g、黄精6g、积雪草30g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例4中药组合物金蝉花复方制剂4的制备

按处方比例，取金蝉花15g、葛根20g、川芎3g、生黄芪20g、黄精17g、积雪草25g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮2次，每次1小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮2次，每次1小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例5中药组合物金蝉花复方制剂5的制备

按处方比例，取金蝉花5g、葛根15g、川芎10g、生黄芪25g、黄精25g、积雪草20g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例6中药组合物金蝉花复方制剂6的制备

按处方比例，取金蝉花20g、葛根15g、川芎10g、生黄芪30g、黄精20g、积雪草5g，将所述重量配比的葛根、川芎、黄精、积雪草4味药加水共煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花、生黄芪加水单煎煮1次，每次2小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。

实施例7实施例1的复方制剂对尿酸性肾病大鼠模型的肾功能影响

受试物：

实施例1的蝉花复方制剂1，以蒸馏水溶解，稀释为0.2g/mL。

阳性对照药：别嘌醇片，上海延安万象药业股份有限公司生产，以蒸馏水溶解、稀释为5mg/mL。

实验动物：

SPF级雄性SD大鼠，体重200～230g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证号：SCXX(沪)2003-0002，标准饮食，自由饮水，每笼5只，适应性饲养3天后用于实验。

分组与造模：

取大鼠69只，随机分为5组，其中正常组15只、模型组30只、别嘌醇组8只、高剂量组8只、低剂量组8只，正常组动物给予普通全价饲料，其余动物予以含10％酵母干粉的饲料(将酵母干粉均匀拌入粉碎的大鼠颗粒饲料中，重新压制成型，酵母干粉含量为10％)喂养，控制酵母的每日摄入量为10g/kg，并予以腺嘌呤100mg/kg/d灌胃。

给药剂量：

正常组、模型组予以蒸馏水灌胃，别嘌醇组、高剂量组、低剂量组分别于造模同时予以别嘌醇(50mg/kg/d)、高剂量复方蝉花粉剂(57g(生药)/kg/d)、低剂量复方蝉花粉剂(28.5g(生药)/kg/d)灌胃，灌胃体积均为1ml/100g/d，各组动物自由饮水，共35天。

测试仪器及方法：

采用酵母加腺嘌呤的方法建立尿酸性肾病大鼠模型；观察模型大鼠肾功能及血清黄嘌呤氧化酶活性的变化；采用组织病理学、免疫组织化学方法，研究模型大鼠肾脏组织结构改变及ECM成分的沉积；采用RT-PCR法，研究模型大鼠肾组织中整合素α2、α5、β1、TGFβ1、CTGFmRNA的表达变化；以高、低剂量组的蝉花复方制剂1进行治疗干预，并以别嘌呤治疗组做对照。肌酐、尿素氮、尿酸、黄嘌呤氧化酶测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。整合素α2、α5、β1、TGFβ1、CTGFmRNA的表达：RT-PCR法，凝胶电泳结束后，FR-200紫外与可见光分析系统拍照，并进行电泳条带光密度(灰度)分析。为消除系统及定量误差，各组mRNA表达水平以相对表达量即目的基因/β-actin的灰度比值来计算。

采用SPSS Version 11.0for Windows进行数据统计，以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用One-Way ANOVA分析，统计显著性水平为P＜0.05。

试验结果：

结果发现，与正常组比较，模型大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮浓度有不同程度增高，P＜0.05或P＜0.01；黄嘌呤氧化酶活性增强，P＜0.01；肾组织出现肾小管扩张，间质炎症细胞浸润，局灶间质纤维化；肾小管-间质区域ECM沉积增加；Integrin α2、α5、β1mRNA分别于第1周末(α2)和第4周末(α5、β1)表达增加，P＜0.01；TGFβ1、CTGF mRNA表达分别于第2周和第1周末明显增加，P＜0.01；至第5周末，与模型组比较，各给药组大鼠肾功能改善，血清黄嘌呤氧化酶活性降低，P＜0.05或P＜0.01；肾脏组织结构改善，ECM成分沉积减少；Integrin α2、α5、TGFβ1mRNA表达降低，P＜0.05或P＜0.01。

表1模型大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮浓度的动态变化(x±S)

注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01

表2模型大鼠血清黄嘌呤氧化酶活性的动态变化(x±S)

注：与正常组比较**P＜0.01

予以相应药物治疗后，与正常组比较，给药组大鼠各项生化指标虽仍处于较高水平，P＜0.05或P＜0.01；但与模型组比较，已有不同程度的降低，其中，各组动物血尿酸浓度均明显降低，P＜0.01；血肌酐浓度以复方蝉花粉剂高剂量组降低更为明显，P＜0.01；黄嘌呤氧化酶活性以别嘌醇组和复方蝉花粉剂高剂量组下降更显著，P＜0.01，尿素氮浓度各组无明显变化，P＞0.05。(见表3、表4)

表3复方蝉花粉剂对大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮浓度的影响(x±S)

注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01

表4复方蝉花粉剂对大鼠血清黄嘌呤氧化酶活性的影响(x±S)

注：与正常组比较**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01

复方蝉花粉剂对大鼠肾脏病理变化的影响

正常组大鼠肾包膜为单层上皮细胞被覆，肾小球形态正常，肾小囊腔、肾小管、肾间质均无异常。模型组于第1周末即在肾小管和肾间质部位有少许尿酸盐结晶呈团块状或针状放射形沉积，肾间质有局灶炎症细胞浸润，第2周后，肾小管及肾间质尿酸盐结晶沉积增多，肾间质炎症细胞浸润明显，肾小管扩张，部分上皮细胞脱落，出现局灶性肾间质纤维化。在此过程中，大部分肾小球无明显受累，仅部分肾小球体积缩小，与肾小囊壁粘连。各给药组大鼠肾脏中尿酸盐结晶沉积均有所减少，炎症细胞浸润、肾小管扩张及局灶性肾间质纤维化均减轻，且高剂量组优于别嘌醇组和低剂量组，个别肾小管可见上皮细胞再生，肾小球无明显异常。

复方蝉花粉剂对大鼠肾脏中ECM成分沉积的影响

正常组大鼠肾组织中FN、Col-IV的沉积以肾小球毛细血管基底膜为主，肾间质及肾小管基底膜可见少量表达，随造模时间的延长，FN、Col-IV的沉积分别从第4周末、第3周末明显增多，且以肾间质中沉积增多更为明显，第5周末，各给药组大鼠肾组织中FN、Col-IV的沉积有不同程度减轻。

复方蝉花粉剂对大鼠肾组织中整合素mRNA表达变化的影响

造模后，Integrin α2、α5、β1mRNA在尿酸性肾病大鼠肾组织中的表达均有所增加，但其表达增加的时间有所不同，Integrin α2mRNA的表达在第1周末即增加，与正常组比较，P＜0.01，而Integrin α5、β1mRNA的表达在第4周末出现增加，与正常组比较，P＜0.01。(见表5)

表5模型大鼠肾组织中整合素mRNA的表达变化(x±S)

注：与正常组比较**P＜0.01

各给药组大鼠予以相应药物治疗后，整合素mRNA表达有不同程度的降低，与模型组比较，别嘌醇组大鼠肾组织中Integrin α2、β1mRNA表达明显减少，P＜0.01；高剂量组Integrinα2和低剂量组Integrin α5mRNA表达也均明显减少，P＜0.01；高、低剂量组Integrin β1mRNA表达无明显减少，P＞0.05。(见表6)

表6复方蝉花粉剂对大鼠肾组织中整合素mRNA表达的影响(x±S)

注：与正常组比较**P＜0.01；与模型组比较##P＜0.01

复方蝉花粉剂对大鼠肾组织中TGF β1、CTGF mRNA表达变化的影响

造模后，TGFβ1、CTGF mRNA在尿酸性肾病大鼠肾脏中的表达均有所增加，与正常组比较，TGFβ1mRNA的表达在第1周末无明显变化，P＞0.05，第2周后表达明显增加，P＜0.01；CTGF mRNA的表达在第1周末即出现明显增加，P＜0.01，且维持高水平表达至第5周末。(见表7)

表7模型大鼠肾组织中TGFβ1、CTGF mRNA的表达变化(x±S)

注：与正常组比较**P＜0.01

予以相应药物治疗后，与模型组比较，各给药组大鼠TGFβ1mRNA的表达均有明显降低，P＜0.01；CTGFmRNA的表达仅别嘌醇组有所降低，P＜0.05，复方蝉花粉剂高、低剂量组无明显变化，P＞0.05。(见表8)

表8复方蝉花粉剂对大鼠肾组织中TGFβ1、CTGFmRNA表达的影响(x±S)

注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01

试验结论：

动物实验研究证实：蝉花复方制剂可以改善尿酸性肾病大鼠肾功能；可以降低血清黄嘌呤氧化酶活性，可能为其降低血尿酸的机制之一；可以降低肾组织中整合素α2、α5、TGFβ1mRNA的表达；改善肾脏组织结构，减少肾组织中Col-IV、FN等ECM成分的沉积，防止肾间质纤维化。

将实施例2-6的蝉花复方制剂按照上述方法进行实验，实验结果与上述结论基本相同。实施例8天然蝉花和复方蝉花粉剂延缓大鼠慢性肾功能衰竭进程的实验

受试物：

实施例1的蝉花复方制剂1，以蒸馏水溶解，稀释为0.2g/mL。

以市售天然蝉花，按成人每公斤体重用药量40倍的生药，磨成细粉，以蒸馏水稀释至每5ml含1.6g的悬浊液备用。

实验试剂：戊巴比妥钠购于上海试剂三厂、硫喷妥钠购于上海试剂三厂、甲醛购于上海溶剂厂

实验动物及饲喂：

选用二月龄、清洁级、体重在189.6±20.8g的SD雄性大鼠70只，由上海中医药大学实验动物中心提供。实验大鼠按分组说明饲养，实验期间，全部动物自由饮水，进食市售块状颗粒普通饲料，主要成份为：淀粉59.24％，蛋白质23％，脂肪5.11％，由上海中医药大学实验动物中心提供。

GRF模型建立：

70只大鼠首先随机分为两组，假手术组(n＝18)，手术组(n＝52)，在上海中医药大学实验动物中心饲养一周后，进行手术造模。

52只SD大鼠以戊巴比妥钠(40mg/kg体重)腹腔注射麻醉取仰卧位，双下肢交叉后固定于手术台上，暴露左肾区，手术区内以8％的硫化钠脱毛，并用新洁尔灭酊局部消毒，在距左肋脊角1.5cm左右处做斜向下外方的切口，经后腹膜，暴露左肾，分离肾周围脂肪组织，游离出左侧肾脏，然后对左肾皮质进行弧形切除，直至见到肾脏的髓质部分为止，并用明胶海绵局部压迫止血。总切除肾皮质量占单侧肾重量的2/3，见切面无活动性出血后，复位残余的左肾，然后分层缝合腹膜、肌层及皮肤。术后将动物放入笼中观察，待动物清醒后送回动物房。

第一次手术后两周进行第二次手术，将其固定、消毒后，从距右肋脊角1.5cm左右处做斜向下方的切口，暴露并游离右侧肾脏，待肾蒂完全游离后予以缝线结扎，然后行右肾全切。手术时，应特别注意勿损伤肾上腺和输尿管。两次手术由一人操作，助手配合完成，共切除两肾总重量的5/6。其余18只假手术组SD大鼠采用同样步骤，麻醉、打开腹腔、暴露肾脏，但不予切除，然后关闭腹腔、缝合肌肉和皮肤。

实验动物分组：

70只SD大鼠于第二次手术后四周行眼内眦动-静脉丛采血，进行肌酐、尿素氮检查，按肌酐高低结合尿素氮分组如下(表9)：

表9实验动物分组

各组份笼饲养，每笼5～8只大鼠，从造模开始到眼内动静脉丛采血结束时，共死10只模型大鼠。

手术组大鼠随机分三组：模型组14只，蝉花组13只，复方蝉花粉剂组15只。

治疗方法及观察指标：

用19号穿刺针改制成灌胃针，从第二次手术后四周开始灌胃。蝉花组：按每5ml/200g体重灌胃，每日分两次灌入。复方蝉花粉剂组：按每3ml/200g体重灌胃，每日分两次灌入。全部实验动物在治疗八周后，行下腔静脉采血共8ml。分别作各项指标检测，并取残余肾脏作病理检查。肌酐Scr采用Jaffe法，尿素氮BUN采用动力UV法检测。

统计学处理：

全部数据参数均用均数±标准差(X±SD)表示，以方差检验及Ridit检验进行比较。

实验结果：

整个实验期间，正常组动物表现灵敏，反应较快，皮毛色白而致密，有光泽，进食、活动及生长情况均无明显异常，模型组动物表现较精神不振，营养不良，活动少，进食欠佳，皮毛枯萎无光泽，尤以对照组为甚，蝉花组和复方蝉花粉剂组在用药后明显改善。存活率和死亡率

在整个实验期间，假手术组和复方蝉花粉剂组动物无死亡，模型组死亡率最高，其次为蝉花组。(见表10)

表10存活率和死亡率

各组份笼饲养，每笼5～8只大鼠，从造模开始到眼内动静脉丛采血结束时，共死10只模型大鼠。

治疗后肾功能的比较

观察治疗后肾功能的变化，模型组肌酐、尿素氮升高最为明显，其次为蝉花组和复方蝉花粉剂组，血肌酐浓度和尿素氮浓度以复方蝉花粉剂组降低更为明显，二者与模型组相比均有显著性差异。(见表11)

表11 治疗后CRF大鼠Scr、BUN的比较(X±SD)

*与对照组相比P＜0.05

治疗后肾脏病理学变化

经HE、PAP染色后，观察肾小球组织损伤情况，发现模型组肾小球组织损伤最严重，其Col-IV、FN、LN在系膜细胞沉积明显，肾小球病变集中在II级。而蝉花组则肾小球病变较轻，细胞外基质沉积明显减少，病变多集中于I级，复方蝉花粉剂组大鼠肾脏中尿酸盐结晶沉积有所减少，炎症细胞浸润、肾小管扩张及局灶性肾间质纤维化均减轻，个别肾小管可见上皮细胞再生，肾小球无明显异常。经Ridit分析，模型组与假手术组、蝉花组和复方蝉花粉剂组分别相比均有显著性差异(P＜0.001)。

将实施例2-6的蝉花复方制剂按照上述方法进行实验，实验结果与上述结论基本相同。

实施例9毒性实验

本发明复方蝉花粉剂(按照实施例1的蝉花复方制剂1)小鼠灌胃40g/kg，观察72h，30只小鼠无1只死亡，给药后，所有动物仅活动减少，24h后均恢复正常，各试验组全部健活。36只小鼠随机分为6组，腹腔注射，LD50为10.5±3.3g/kg，毒性反应表现为扭体、活动减少、呼吸困难直至死亡。亚急性毒性实验表明，三组大鼠分别以1g/kg，3g/kg，9g/kg灌胃给药，连续28d，结果动物的血常规，肝、肾功能和心电图均未见异常改变，对心、肝、脾、肺、肾等重要脏器病理学检查也未见明显异常改变。

将实施例2-6的蝉花复方制剂按照上述方法进行毒性实验，实验结果与上述结论相同。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由包括以组合物原料的总重量为基础计的下列药材的原料制成：金蝉花5～30％、葛根10～20％、川芎3～15％、生黄芪10～40％、黄精6～25％、积雪草5～30％。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：由包括以组合物原料的总重量为基础计的下列药材的原料制成：金蝉花10～20％、葛根10～20％、川芎8～15％、生黄芪15～25％、黄精6～21％、积雪草5～25％。

3.一种中药制剂，其特征在于：所述中药制剂含有安全有效量的如权利要求1所述的中药组合物及药学上可接受的载体，所述中药组合物的重量百分含量为50％-99％。

4.如权利要求3所述的中药制剂，其特征在于：所述中药制剂含有安全有效量的如权利要求1所述的中药组合物及药学上可接受的载体，所述中药组合物的重量百分含量为62％-80％。

5.如权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将所述重量配比的葛根、川芎、黄精和积雪草加水煎煮，过滤，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的金蝉花和生黄芪加水煎煮，过滤，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉II；将浸膏粉I和浸膏粉II混合均匀，即得全方干燥粉。

6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述煎煮次数为2～3次，每次煎煮时间为1～2小时；所述煎煮后得到的煎液先过80目筛，再用帆布过滤除杂。

7.将权利要求1-4中任一权利要求所述的中药组合物用于制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物。

8.如权利要求7所述的中药组合物的用途，其特征在于：所述的其他慢性肾病是以肾小管-间质损害为主的肾病。

9.如权利要求8所述的中药组合物的用途，其特征在于：所述的以肾小管-间质损害为主的肾病包括尿酸性肾病、慢性肾盂肾炎及药物性肾损害。

10.将权利要求1-4中任一权利要求所述的中药组合物用于制备治疗及预防能降低血清黄嘌呤氧化酶活性的药物。