CN101639445A - 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法 - Google Patents

一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101639445A
CN101639445A CN200910169855A CN200910169855A CN101639445A CN 101639445 A CN101639445 A CN 101639445A CN 200910169855 A CN200910169855 A CN 200910169855A CN 200910169855 A CN200910169855 A CN 200910169855A CN 101639445 A CN101639445 A CN 101639445A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pyruvate
pyruvic acid
concentration
light signal
catalysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200910169855A
Other languages
English (en)
Inventor
王京
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN200910169855A priority Critical patent/CN101639445A/zh
Publication of CN101639445A publication Critical patent/CN101639445A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法，其特征在于：利用丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油－3－磷酸及ADP，而甘油－3－磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光；光信号的大小与丙酮酸的浓度呈正相关，即丙酮酸浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测丙酮酸的浓度；用已知浓度的丙酮酸测出的光信号，作出剂量－反应曲线，未知样品的丙酮酸含量可从该曲线推算出来。本发明用化学发光物代替显色物，能够达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用本发明的方法可以制备相应的定量测定血液中丙酮酸的商品试剂盒。

Description

一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法
技术领域
本发明涉及一种医用试剂检测方法，特别是一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法。
背景技术
利用现代生物技术所开发的超微量测定方法，极大的推动了生物和医学各领域的各项临床和科研工作的快速发展，为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。
上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光反应进行酶免分析的技术，这一技术由于灵敏度高(可达10-18mol)，快速(可在20分钟内出测定结果)、简便(可实现完全自动化)，有效期长(可达一年以上)，利于环保(无放射性和致畸物质)而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。
化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度，已发展为能检测多种生物活性物质的常规监床检测方法，从免疫反应方式分，该方法有两种基本类型，即化学发光免疫分析(CLIA)和免疫化学发光分析(ICMA)；从发光方式上看，一是将发光物质直接标记到抗体或抗原上，免疫反应后，在起动剂的作用下而发光，另一种是用酶标记抗体或抗原，免疫反应后，加入化学发光底物，在酶催作用下而发光。
该方法虽有突出的优点，但目前仅限于免疫分析，而在生化分析中还是空白，本发明就是要把化学发光这一高级技术推广到生化分析等领域。
全血丙酮酸的测定主要用于维生素B1缺乏症的诊断.维生素B1的焦磷酸酯是丙酮酸在细胞内进一步氧化分解为乙酰辅酶A时的脱羧辅酶，维生素B1缺乏时，体内丙酮酸的氧化发生障碍，使丙酮酸含量增加。
现在普遍使用的测定血液中丙酮酸的方法为比色法，该法是利用LD催化丙酮酸和NADH生成NAD+和L-乳酸。测定NADH来计算丙酮酸的含量。该法的不足之处主要有：
1.线性范围窄。由于检测光吸收，其分辨率不像化学发光那么敏感，线性范围不能完全满足临床检测的需要，对高浓度的样品需要经稀释后测定，带来一定不便。
2.灵敏度不如化学发光。化学发光是测定光信号，灵敏度要比测光吸收高出许多。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵敏、宽范围、成本低便于普及而又安全的体外检测血液丙酮酸的方法。
本发明的目的是这样实现的：一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法，其特征在于：用丙酮酸氧化酶氧化丙酮酸得到过氧化氢，后者经HRP催化使鲁米诺发光，光信号大小与丙酮酸含量成正比，记录这种光信号即推测出丙酮酸的浓度。
本发明的目的还可以这样实现：利用丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶(PK)催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油-3-磷酸及ADP，而甘油-3-磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光。光信号的大小与丙酮酸的浓度呈正相关，即丙酮酸浓度越大发出的光信号越强。记录这种光信号即可推测丙酮酸的浓度。用已知浓度的丙酮酸测出的光信号，作出剂量-反应曲线，未知样品的丙酮酸含量可从该曲线推算出来。
本发明用化学发光物代替显色物，能够达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用本发明的方法可以制备相应的定量测定血液中丙酮酸的商品试剂盒。
具体来讲，本发明与传统的方法相比有如下优点：
1.灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅，而化学发光是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。
2.线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，化学发光的检测范围高达105。
3.安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。
4.便于普及。本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。
5.巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。
具体实施方式
下面举例说明本发明的实施。
方案一：
反应原理：
丙酮酸+磷酸盐(PO)→H2O2+乙酰磷酸盐+。。。
H2O2+鲁米诺(HRP)→发光
1.试剂：
1.1.丙酮酸标准：单一或系列浓度；
1.2.底物液。
2.测定程序，按下表进行，加样单位为μl。
方案二：
反应原理：丙酮酸+ADP(PK)→ATP+。。。。
甘油+ATP(GK)→甘油-3-磷酸+ADP
甘油-3-磷酸+O2(GPO)→磷酸二羟丙酮+H2O2
H2O2+鲁米诺(HRP)→发光
1.试剂：
1.1.丙酮酸标准：单一或系列浓度；
1.2.混合酶液，含ADP和甘油；
1.3.发光底物液。
2.测定程序，按下表进行，加样单位为μl。
3.用适当方法处理作出剂量-反应曲线，根据样品的RLU值从该曲线求出其丙酮酸的浓度。或直接由公式求出：
丙酮酸浓度＝(样品RLU/标准RLU)×标准浓度
4.也可用双试剂两步法测定。

Claims (2)

1、一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法，其特征在于：用丙酮酸氧化酶氧化丙酮酸得到过氧化氢，后者经HRP催化使鲁米诺发光，光信号大小与丙酮酸含量成正比，记录这种光信号即推测出丙酮酸的浓度。
2、一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法，其特征在于：利用丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油-3-磷酸及ADP，而甘油-3-磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光；光信号的大小与丙酮酸的浓度呈正相关，即丙酮酸浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测丙酮酸的浓度；用已知浓度的丙酮酸测出的光信号，作出剂量-反应曲线，未知样品的丙酮酸含量可从该曲线推算出来。
CN200910169855A 2009-09-07 2009-09-07 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法 Pending CN101639445A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910169855A CN101639445A (zh) 2009-09-07 2009-09-07 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910169855A CN101639445A (zh) 2009-09-07 2009-09-07 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101639445A true CN101639445A (zh) 2010-02-03

Family

ID=41614534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200910169855A Pending CN101639445A (zh) 2009-09-07 2009-09-07 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101639445A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102590187A (zh) * 2011-01-12 2012-07-18 北京化工大学 用镁铝碳酸根水滑石催化鲁米诺-过氧化氢化学发光的分析方法
CN102944550A (zh) * 2012-10-15 2013-02-27 上海谱尼测试技术有限公司 面粉中过氧化钙的检测试剂盒及过氧化钙检测方法
CN103460050A (zh) * 2011-03-24 2013-12-18 学校法人庆应义塾 抗癌剂感受性的判定标记
CN105277537A (zh) * 2015-10-12 2016-01-27 江苏三联生物工程有限公司 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102590187A (zh) * 2011-01-12 2012-07-18 北京化工大学 用镁铝碳酸根水滑石催化鲁米诺-过氧化氢化学发光的分析方法
CN102590187B (zh) * 2011-01-12 2013-11-06 北京化工大学 用镁铝碳酸根水滑石催化鲁米诺-过氧化氢化学发光的分析方法
CN103460050A (zh) * 2011-03-24 2013-12-18 学校法人庆应义塾 抗癌剂感受性的判定标记
JP2016166881A (ja) * 2011-03-24 2016-09-15 学校法人慶應義塾 抗がん剤感受性の判定マーカー
CN103460050B (zh) * 2011-03-24 2017-05-17 学校法人庆应义塾 抗癌剂感受性的判定标记
US9797884B2 (en) 2011-03-24 2017-10-24 Keio University Marker for determination of sensitivity to anticancer agent
US10309957B2 (en) 2011-03-24 2019-06-04 Keio University Method for determining sensitivity to fluorouracil in a subject having colorectal cancer
CN102944550A (zh) * 2012-10-15 2013-02-27 上海谱尼测试技术有限公司 面粉中过氧化钙的检测试剂盒及过氧化钙检测方法
CN102944550B (zh) * 2012-10-15 2015-07-15 上海谱尼测试技术有限公司 面粉中过氧化钙的检测试剂盒及过氧化钙检测方法
CN105277537A (zh) * 2015-10-12 2016-01-27 江苏三联生物工程有限公司 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法
CN105277537B (zh) * 2015-10-12 2019-04-16 江苏三联生物工程有限公司 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102435749B (zh) 用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒
CN101639446A (zh) 一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法
CN1912594A (zh) 血清中肌酐的化学发光测定方法
CN101639445A (zh) 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法
CN110567948A (zh) 一种碘离子检测试剂盒
CN104596959A (zh) 一种基于dna酶检测钾离子浓度的方法
Zhang et al. Aggregation-induced emission luminogen-based fluorescence detection of hypoxanthine: a probe for biomedical diagnosis of energy metabolism-related conditions
CN1912622A (zh) 体液中葡萄糖的化学发光测定方法
CN1908628A (zh) 血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法
CN1912589A (zh) 血清中尿素的化学发光测定方法
Li et al. A novel analysis method for lactate dehydrogenase activity in serum samples based on fluorescence capillary analysis
CN104155269A (zh) 一种新型荧光蛋白Frex体外检测血乳酸的方法
CN1912621A (zh) 血清中甘油三脂的化学发光测定方法
CN1912595A (zh) 血液中血清总胆固醇的化学发光测定方法
CN105510255A (zh) 一种β-羟丁酸的测定方法及其测定试剂盒
CN1908631A (zh) 血清中脂肪酶的化学发光测定方法
CN1908629A (zh) 血清中肌酸激酶的化学发光测定方法
CN1912591A (zh) 体液中α－L－岩藻糖苷酶的化学发光测定方法
CN1912623A (zh) 血浆氨的化学发光测定方法
CN103969446A (zh) 一种检测人血清中痕量免疫球蛋白g浓度的方法
CN1912593A (zh) 血液中血清单胺氧化酶的化学发光测定方法
CN1912599A (zh) 血清中尿酸的化学发光测定方法
CN1912596A (zh) 血清中丙氨酸氨基转移酶的化学发光测定方法
CN104458728A (zh) 一种检测钠离子浓度的方法
CN1912592A (zh) 体液中淀粉酶的化学发光测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20100203