CN1912623A - 血浆氨的化学发光测定方法 - Google Patents
血浆氨的化学发光测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1912623A CN1912623A CN 200610114974 CN200610114974A CN1912623A CN 1912623 A CN1912623 A CN 1912623A CN 200610114974 CN200610114974 CN 200610114974 CN 200610114974 A CN200610114974 A CN 200610114974A CN 1912623 A CN1912623 A CN 1912623A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- plasma ammonia
- concentration
- light signal
- plasma
- ammonia
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明血浆氨的化学发光测定方法,涉及一种在生化分析中医用试剂的化学发光测定方法。它所要解决的是现有检测范围窄、灵敏度低、操作难度大、设备昂贵等技术问题。解决该技术问题的主要技术方案:血浆氨的化学发光测定方法,其特征在于血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下,经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸;而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢;过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使化学发光物氧化而发光;血浆氨浓度越大发出的光信号越强;用已知浓度的血浆氨与测出的光信号,作出剂量-反应曲线;未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来。它灵敏度更高、线性范围宽、安全适用、便于普及,适于各类医疗机构广泛应用。
Description
技术领域:本发明涉及一种医用试剂检测方法,特别涉及血浆氨的化学发光测定方法。
背景技术:利用现代生物技术所开发的超微量测定方法,极大的推动了生物和医学各领域的各项临床和科研工作的快速发展,为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。
上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光反应进行酶免分析的技术,这一技术由于灵敏度高达10-18mol,可在20分钟内快速测定出结果,可简便实现完全自动化,有效期长达一年以上,无放射性和致畸物质,利于环保而受到普遍欢迎,是目前发展最迅速的检测技术。
目前,化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度,已发展为能检测多种生物活性物质的常规监床检测方法,从免疫反应方式分,该方法有两种基本类型,即化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)和免疫化学发光分析(Immunochemiluminometricassay,ICMA);从发光方式上看,一是将发光物质直接标记到抗体或抗原上,免疫反应后,在起动剂的作用下而发光,另一种是用酶标记抗体或抗原,免疫反应后,加入化学发光底物,在酶催作用下而发光。
该方法虽有突出的优点,但目前仅限于免疫分析,而在生化分析中还是空白。
正常情况下,氨在肝脏转变为尿素.严重肝疾病时,引起血氨增高,高血氨有神经毒,引起肝性脑病(肝昏迷)。测定成人血浆氨主要用于肝昏迷的监测和处理;同时测定血浆氨对儿科诊断REYE’S综合征非常有用,该病有严重低血糖、大块肝坏死、急性肝衰等,在肝酶谱增高前,即见血氨增高;某些先天性代谢紊乱也出现高血氨。
现在普遍使用的测定血浆氨的方法为比色法,该法是利用氨与α-戊酮二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸等,NADH的下降速率与血浆氨的含量成正比,以此测定血浆氨的浓度。该法的不足之处主要有:
1、线性范围窄。由于检测对颜色的变化分辨率不像化学发光那么敏感,线性范围不能完全满足临床检测的需要,对高浓度的样品需要经稀释后测定,带来一定不便。
2、灵敏度不如化学发光。酶法是比颜色的深浅,而化学发光是测定光信号,灵敏度要高出许多。
3、只能用仪器操作。有的是测定酶促反应的速率,对时间要求十分严格,手工或半自动操作均难达到要求,只能使用全自动设备进行。
4、全自动生化仪昂贵。目前使用的全自动生化仪几乎全为进口,设备十分昂贵,大多在几十万到几百万之间,中小医院难以承受,普及使用受到限制。
发明内容:本发明所要解决的技术问题是一种提供能克服上述缺陷、且灵敏度高、线性范围宽、方便、安全的血浆氨的化学发光测定方法。解决该技术问题采用的主要技术方案:血浆氨的化学发光测定方法,其特征在于血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下,经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸;而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢;过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使化学发光物氧化而发光;光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关,即血浆氨浓度越大发出的光信号越强;记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度;用已知浓度的血浆氨与测出的光信号,作出剂量-反应曲线;未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来;所述的化学发光物为鲁米诺。本发明与现有技术相比有如下优点:用化学发光物代替显色物,达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用该方法可以制备相应的定量测定血浆氨的商品试剂盒。具体优点是:①灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅,而化学发光是测光信号,可一个一个光子计数,所测的最低限更小,因而灵敏度更高。②线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多,化学发光的检测范围高达105。③安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全,整个检测过程无有害物出现,无论是检测或处理废物都很安全,有利于环境保护。④便于普及。本发明所制备的试剂盒,可用于全自动测量,也可用于手工或半自动测量,适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。⑤巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质,可同用一台化学发光仪,不再需要进口昂贵的生化仪,节省大量资金,不只降低了成本,对医疗机构、患者及社会均大有益处。
具体实施方式:现举例说明本发明的实施例。血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下,经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸;而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢;过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使化学发光物氧化而发光;光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关,即血浆氨浓度越大发出的光信号越强;记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度;用已知浓度的血浆氨与测出的光信号,作出剂量-反应曲线;未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来;所述的化学发光物为鲁米诺;这便是本发明的血浆氨的化学发光测定方法。
一、试剂包括:
混合酶液;
血浆氨标准:单一或系列浓度;
底物液
二、测定程序,按下表进行,加样单位为μl。
标准 | 样品 | |
标准 | 20 | |
样品 | 20 | |
酶液 | 50 | 50 |
底物液 | 50 | 50 |
混匀,室温或37℃温育后测量RLU |
三、用适当方法处理作出剂量-反应曲线,根据样品的RLU值从该曲线求出其血浆氨的浓度。或直接由公式求出:
血浆氨浓度=(样品RLU/标准RLU)×标准浓度
四、也可用双试剂测定。
本发明的灵敏度更高:因为传统方法是检测颜色深浅,而本发明是测光信号,可一个一个光子计数,所测的最低限更小,因而灵敏度更高。线性范围宽:这是因为传统的测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多,本发明的化学发光检测范围高达105。安全适用:本发明的化学发光物如鲁米诺等很安全,整个检测过程无有害物出现,无论是检测或处理废物都很安全,有利于环境保护。便于普及:本发明所制备的试剂盒,可用于全自动测量,也可用于手工或半自动测量,适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。社会效益巨大:用本发明的化学发光测定方法测定生化指标或免疫物质,可同用一台化学发光仪,不再需要进口昂贵的生化仪,节省大量资金,不只降低了成本,对医疗机构、患者及社会均大有益处。本发明方法简单,适于大、中、小医疗机构广泛推广应用。
Claims (2)
1、血浆氨的化学发光测定方法,其特征在于血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下,经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸;而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢;过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使化学发光物氧化而发光;光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关,即血浆氨浓度越大发出的光信号越强;记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度;用已知浓度的血浆氨与测出的光信号,作出剂量-反应曲线;未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来。
2、根据权利要求1所述的血浆氨的化学发光测定方法,其特征在于所述的化学发光物为鲁米诺。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200610114974 CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200610114974 CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1912623A true CN1912623A (zh) | 2007-02-14 |
Family
ID=37721612
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 200610114974 Pending CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1912623A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105424620A (zh) * | 2015-04-30 | 2016-03-23 | 北京丹大生物技术有限公司 | 水解酶法测定不对称二甲基精氨酸及试剂盒 |
-
2006
- 2006-08-10 CN CN 200610114974 patent/CN1912623A/zh active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105424620A (zh) * | 2015-04-30 | 2016-03-23 | 北京丹大生物技术有限公司 | 水解酶法测定不对称二甲基精氨酸及试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Guilbault et al. | Fluorometric Procedure for Measuring the Activity of Dehydrogenases. | |
CN1912594A (zh) | 血清中肌酐的化学发光测定方法 | |
CN102435749A (zh) | 用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒 | |
CN104034891A (zh) | 酶标仪定量检测多样本中β-葡萄糖醛酸苷酶的方法和试剂盒 | |
CN102213721B (zh) | 一种发光菌毒性测定方法 | |
CN1912622A (zh) | 体液中葡萄糖的化学发光测定方法 | |
US20200063183A1 (en) | Method for detecting atp by using personal blood glucose meter | |
CN101639446A (zh) | 一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法 | |
CN1912589A (zh) | 血清中尿素的化学发光测定方法 | |
CN105203533A (zh) | 一种分析灵敏度高的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测试剂 | |
CN1908628A (zh) | 血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法 | |
CN101639445A (zh) | 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法 | |
CN107356544B (zh) | 一种脂肪酶检测试剂盒 | |
CN1912623A (zh) | 血浆氨的化学发光测定方法 | |
CN1912595A (zh) | 血液中血清总胆固醇的化学发光测定方法 | |
CN1912621A (zh) | 血清中甘油三脂的化学发光测定方法 | |
Blaedel et al. | Analytical applications of the continuous measurement of reaction rate: Lactic dehydrogenase in blood serum | |
CN1908631A (zh) | 血清中脂肪酶的化学发光测定方法 | |
Alexander et al. | Rapid-flow continuous analysis with ion-selective electrodes | |
CN1912591A (zh) | 体液中α-L-岩藻糖苷酶的化学发光测定方法 | |
CN1912593A (zh) | 血液中血清单胺氧化酶的化学发光测定方法 | |
Li et al. | A novel analysis method for lactate dehydrogenase activity in serum samples based on fluorescence capillary analysis | |
CN1912599A (zh) | 血清中尿酸的化学发光测定方法 | |
CN108593905A (zh) | 一种地高辛免疫检测试剂及其制备和检测方法 | |
CN1912596A (zh) | 血清中丙氨酸氨基转移酶的化学发光测定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20070214 |