CN1912623A - 血浆氨的化学发光测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明血浆氨的化学发光测定方法，涉及一种在生化分析中医用试剂的化学发光测定方法。它所要解决的是现有检测范围窄、灵敏度低、操作难度大、设备昂贵等技术问题。解决该技术问题的主要技术方案：血浆氨的化学发光测定方法，其特征在于血浆氨在过量的α－戊酮二酸和NADH存在下，经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸；而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢；过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使化学发光物氧化而发光；血浆氨浓度越大发出的光信号越强；用已知浓度的血浆氨与测出的光信号，作出剂量－反应曲线；未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来。它灵敏度更高、线性范围宽、安全适用、便于普及，适于各类医疗机构广泛应用。
Description
技术领域：本发明涉及一种医用试剂检测方法，特别涉及血浆氨的化学发光测定方法。
背景技术：利用现代生物技术所开发的超微量测定方法，极大的推动了生物和医学各领域的各项临床和科研工作的快速发展，为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。
上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光反应进行酶免分析的技术，这一技术由于灵敏度高达10-18mol，可在20分钟内快速测定出结果，可简便实现完全自动化，有效期长达一年以上，无放射性和致畸物质，利于环保而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。
目前，化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度，已发展为能检测多种生物活性物质的常规监床检测方法，从免疫反应方式分，该方法有两种基本类型，即化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)和免疫化学发光分析(Immunochemiluminometricassay，ICMA)；从发光方式上看，一是将发光物质直接标记到抗体或抗原上，免疫反应后，在起动剂的作用下而发光，另一种是用酶标记抗体或抗原，免疫反应后，加入化学发光底物，在酶催作用下而发光。
该方法虽有突出的优点，但目前仅限于免疫分析，而在生化分析中还是空白。
正常情况下，氨在肝脏转变为尿素.严重肝疾病时，引起血氨增高，高血氨有神经毒，引起肝性脑病(肝昏迷)。测定成人血浆氨主要用于肝昏迷的监测和处理；同时测定血浆氨对儿科诊断REYE’S综合征非常有用，该病有严重低血糖、大块肝坏死、急性肝衰等，在肝酶谱增高前，即见血氨增高；某些先天性代谢紊乱也出现高血氨。
现在普遍使用的测定血浆氨的方法为比色法，该法是利用氨与α-戊酮二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸等，NADH的下降速率与血浆氨的含量成正比，以此测定血浆氨的浓度。该法的不足之处主要有：
1、线性范围窄。由于检测对颜色的变化分辨率不像化学发光那么敏感，线性范围不能完全满足临床检测的需要，对高浓度的样品需要经稀释后测定，带来一定不便。
2、灵敏度不如化学发光。酶法是比颜色的深浅，而化学发光是测定光信号，灵敏度要高出许多。
3、只能用仪器操作。有的是测定酶促反应的速率，对时间要求十分严格，手工或半自动操作均难达到要求，只能使用全自动设备进行。
4、全自动生化仪昂贵。目前使用的全自动生化仪几乎全为进口，设备十分昂贵，大多在几十万到几百万之间，中小医院难以承受，普及使用受到限制。
发明内容：本发明所要解决的技术问题是一种提供能克服上述缺陷、且灵敏度高、线性范围宽、方便、安全的血浆氨的化学发光测定方法。解决该技术问题采用的主要技术方案：血浆氨的化学发光测定方法，其特征在于血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下，经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸；而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢；过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关，即血浆氨浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度；用已知浓度的血浆氨与测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来；所述的化学发光物为鲁米诺。本发明与现有技术相比有如下优点：用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用该方法可以制备相应的定量测定血浆氨的商品试剂盒。具体优点是：①灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅，而化学发光是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。②线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，化学发光的检测范围高达105。③安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。④便于普及。本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。⑤巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。
具体实施方式：现举例说明本发明的实施例。血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下，经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸；而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢；过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关，即血浆氨浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度；用已知浓度的血浆氨与测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来；所述的化学发光物为鲁米诺；这便是本发明的血浆氨的化学发光测定方法。
一、试剂包括：
混合酶液；
血浆氨标准：单一或系列浓度；
底物液
二、测定程序，按下表进行，加样单位为μl。
| 标准 | 样品 | |
| 标准 | 20 | |
| 样品 | 20 | |
| 酶液 | 50 | 50 |
| 底物液 | 50 | 50 |
| 混匀，室温或37℃温育后测量RLU | ||
三、用适当方法处理作出剂量-反应曲线，根据样品的RLU值从该曲线求出其血浆氨的浓度。或直接由公式求出：
血浆氨浓度＝(样品RLU/标准RLU)×标准浓度
四、也可用双试剂测定。
本发明的灵敏度更高：因为传统方法是检测颜色深浅，而本发明是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。线性范围宽：这是因为传统的测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，本发明的化学发光检测范围高达105。安全适用：本发明的化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。便于普及：本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。社会效益巨大：用本发明的化学发光测定方法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。本发明方法简单，适于大、中、小医疗机构广泛推广应用。
Claims (2)
1、血浆氨的化学发光测定方法，其特征在于血浆氨在过量的α-戊酮二酸和NADH存在下，经谷氨酸脱氢酶催下生成谷氨酸；而谷氨酸经其氧化酶(GLOD)氧化而生成过氧化氢；过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与血浆氨的浓度呈正相关，即血浆氨浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血浆氨的浓度；用已知浓度的血浆氨与测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的血浆氨含量可从该曲线推算出来。
2、根据权利要求1所述的血浆氨的化学发光测定方法，其特征在于所述的化学发光物为鲁米诺。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610114974 CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610114974 CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1912623A true CN1912623A (zh) | 2007-02-14 |
Family
ID=37721612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200610114974 Pending CN1912623A (zh) | 2006-08-10 | 2006-08-10 | 血浆氨的化学发光测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1912623A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105424620A (zh) * | 2015-04-30 | 2016-03-23 | 北京丹大生物技术有限公司 | 水解酶法测定不对称二甲基精氨酸及试剂盒 |
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2006
- 2006-08-10 CN CN 200610114974 patent/CN1912623A/zh active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN105424620A (zh) * | 2015-04-30 | 2016-03-23 | 北京丹大生物技术有限公司 | 水解酶法测定不对称二甲基精氨酸及试剂盒 |
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