CN101639446A - 一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法 - Google Patents
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Abstract
一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：利用LD催化L－乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶(PK)催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油－3－磷酸及ADP，而甘油－3－磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光。光信号的大小与乳酸的浓度呈正相关，即乳酸浓度越大发出的光信号越强。记录这种光信号即可推测乳酸的浓度。用已知浓度的乳酸测出的光信号，作出剂量－反应曲线，未知样品的乳酸含量可从该曲线推算出来。本发明用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的；可制备相应的定量测定全血、血浆、脑脊液、尿液、胃液等体液中乳酸的商品试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及一种医用试剂检测方法。特别是一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法。
背景技术
利用现代生物技术所开发的超微量测定方法，极大的推动了生物和医学各领域的各项临床和科研工作的快速发展，为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。
上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光反应进行酶免分析的技术，这一技术由于灵敏度高(可达10-18mol)，快速(可在20分钟内出测定结果)、简便(可实现完全自动化)，有效期长(可达一年以上)，利于环保(无放射性和致畸物质)而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。
化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度，已发展为能检测多种生物活性物质的常规监床检测方法，从免疫反应方式分，该方法有两种基本类型，即化学发光免疫分析(CLIA)和免疫化学发光分析(ICMA)；从发光方式上看，一是将发光物质直接标记到抗体或抗原上，免疫反应后，在起动剂的作用下而发光，另一种是用酶标记抗体或抗原，免疫反应后，加入化学发光底物，在酶催作用下而发光。
该方法虽有突出的优点，但目前仅限于免疫分析，而在生化分析中还是空白，本发明就是要把化学发光这一高级技术推广到生化分析等领域。
乳酸在下列情况活性可增高：
组织严重缺氧、肺功能不全、休克、心失代偿、血液病等；在肝脏灌流量降低的病例，亦会出现乳酸酸中毒。
现在普遍使用的测定血液中乳酸的方法为比色法，该法是利用LD催化L-乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，加入硫酸肼捕获丙酮酸使反应完成，生成的NADH与乳酸等摩尔。测定NADH来计算乳酸的含量。该法的不足之处主要有：
1.线性范围窄。由于检测光吸收，其分辨率不像化学发光那么敏感，线性范围不能完全满足临床检测的需要，对高浓度的样品需要经稀释后测定，带来一定不便。
2.灵敏度不如化学发光。化学发光是测定光信号，灵敏度要比测光吸收高出许多
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵敏、宽范围、成本低便于普及而又安全的体外检测血液乳酸的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：用乳酸氧化酶使乳酸变成丙酮酸，同时产生过氧化氢，后者在HRP催化下使鲁米诺发光，光信号的大小与乳酸含量成正比，记录这种光信号推测出乳酸的浓度。
本发明的目的还可以通过以下技术方案实现：利用LD催化L-乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶(PK)催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油-3-磷酸及ADP，而甘油-3-磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光。光信号的大小与乳酸的浓度呈正相关，即乳酸浓度越大发出的光信号越强。记录这种光信号即可推测乳酸的浓度。用已知浓度的乳酸测出的光信号，作出剂量-反应曲线，未知样品的乳酸含量可从该曲线推算出来。
本发明用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用本发明方法可以制备相应的定量测定全血、血浆、脑脊液、尿液、胃液等体液中乳酸的商品试剂盒。
具体来讲，本发明与传统的方法相比有如下优点：
1灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅，而化学发光是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。
2.线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，化学发光的检测范围高达105。
3.安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。
4.便于普及。本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。
5.巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。
具体实施方式
下面举例说明本发明的实施。
方案一：
反应原理：乳酸+O2+H2O(LO)→丙酮酸+H2O2
H2O2+鲁米诺(HRP)→发光
1.试剂：
1.1.乳酸标准：单一或系列浓度；
1.2.底物液：含HRP和LO。
2.测定程序，按下表进行，加样单位为μl。
方案二：
反应原理：L-乳酸+NAD+(LD)→NADH+丙酮酸+H+
丙酮酸+ADP(PK)→ATP+。。。。
甘油+ATP(GK)→甘油-3-磷酸+ADP
甘油-3-磷酸+O2(GPO)→磷酸二羟丙酮+H2O2
H2O2+鲁米诺(HRP)→发光
1.试剂：
1.1.乳酸标准：单一或系列浓度；
1.2.混合酶液，含ADP和甘油；
1.3.发光底物液。
2.测定程序，按下表进行，加样单位为μl。
3.用适当方法处理作出剂量-反应曲线，根据样品的RLU值从该曲线求出其乳酸的浓度。或直接由公式求出：
乳酸浓度＝(样品RLU/标准RLU)×标准浓度
4.也可用双试剂两步法测定。
Claims (2)
1、一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：用乳酸氧化酶使乳酸变成丙酮酸，同时产生过氧化氢，后者在HRP催化下使鲁米诺发光，光信号的大小与乳酸含量成正比，记录这种光信号推测出乳酸的浓度。
2、一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法，其特征在于：利用LD催化L-乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH，丙酮酸与ADP在丙酮酸激酶催化下产生ATP，ATP与甘油，在GK催化下生成甘油-3-磷酸及ADP，而甘油-3-磷酸被GPO作用得到H2O2，H2O2经HPR催化使鲁米诺发光；光信号的大小与乳酸的浓度呈正相关，即乳酸浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测乳酸的浓度；用已知浓度的乳酸测出的光信号，作出剂量-反应曲线，未知样品的乳酸含量从该曲线推算出来。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITPI20110104A1 (it) * | 2011-09-28 | 2013-03-29 | Emilia Bramanti | Determinazione di acido lattico in fluidi biologici |
| WO2013045443A1 (en) | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Emilia Bramanti | Measurement of lactic acid in biological fluids |
| CN104155269A (zh) * | 2014-06-25 | 2014-11-19 | 浙江清华长三角研究院 | 一种新型荧光蛋白Frex体外检测血乳酸的方法 |
| CN105277537A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-01-27 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法 |
| CN110426357A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-11-08 | 杭州皓阳生物技术有限公司 | 一种乳酸检测试剂及其检测方法 |
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITPI20110104A1 (it) * | 2011-09-28 | 2013-03-29 | Emilia Bramanti | Determinazione di acido lattico in fluidi biologici |
| WO2013045443A1 (en) | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Emilia Bramanti | Measurement of lactic acid in biological fluids |
| US9234887B2 (en) | 2011-09-28 | 2016-01-12 | Power Fit S.R.L. | Measurement of lactic acid in biological fluids |
| US9702848B2 (en) | 2011-09-28 | 2017-07-11 | Power Fit S.R.L. | Measurement of lactic acid in biological fluids |
| CN104155269A (zh) * | 2014-06-25 | 2014-11-19 | 浙江清华长三角研究院 | 一种新型荧光蛋白Frex体外检测血乳酸的方法 |
| CN105277537A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-01-27 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法 |
| CN105277537B (zh) * | 2015-10-12 | 2019-04-16 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法 |
| CN110426357A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-11-08 | 杭州皓阳生物技术有限公司 | 一种乳酸检测试剂及其检测方法 |
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