CN1908631A - 血清中脂肪酶的化学发光测定方法 - Google Patents

血清中脂肪酶的化学发光测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1908631A
CN1908631A CN 200610115002 CN200610115002A CN1908631A CN 1908631 A CN1908631 A CN 1908631A CN 200610115002 CN200610115002 CN 200610115002 CN 200610115002 A CN200610115002 A CN 200610115002A CN 1908631 A CN1908631 A CN 1908631A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lipase
serum
concentration
light signal
detecting method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN 200610115002
Other languages
English (en)
Inventor
王京
高淑舫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical FUJIAN HONGCHENG BIOTECHNOLOGY PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN 200610115002 priority Critical patent/CN1908631A/zh
Publication of CN1908631A publication Critical patent/CN1908631A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明血清中脂肪酶的化学发光测定方法，涉及一种在生化分析中医用试剂的化学发光测定方法。它所要解决的是现有检测范围窄、灵敏度低、试剂成份复杂等技术问题。解决该技术问题的主要技术方案：血清中脂肪酶的化学发光测定方法，其特征在于用脂肪酶催化将甘油单酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶及三磷酸腺苷将甘油磷酸化成3－磷酸甘油，3－磷酸甘油被磷酸甘油氧化酶氧化，产生的过氧化氢，经过氧化物酶作用，过氧化氢使化学发光物氧化而发光；血清脂肪酶浓度越大发出的光信号越强；用已知浓度的脂肪酶与测出的光信号，作出剂量－反应曲线；未知样品的脂肪酶含量可从该曲线推算出来。它检测方便、灵敏度高、线性范围更宽，适于广泛应用。

Description

血清中脂肪酶的化学发光测定方法
技术领域：本发明涉及一种医用试剂检测方法，特别涉及血清中脂肪酶的化学发光测定方法。
背景技术：利用现代生物技术所开发的超微量测定方法，极大的推动了生物和医学各领域的各项临床和科研工作的快速发展，为人类的科学事业和社会进步作出了非凡的贡献。
上世纪七十年代由Arakawa首先发表了应用鲁米诺——过氧化物酶的化学发光反应进行酶免分析的技术，这一技术由于灵敏度高达10-18mol，可在20分钟内快速测定出结果，可简便实现完全自动化，有效期长达一年以上，无放射性和致畸物质，利于环保而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。
目前，化学发光技术在免疫分析中已得到相当普及的程度，已发展为能检测多种生物活性物质的常规监床检测方法，从免疫反应方式分，该方法有两种基本类型，即化学发光免疫分析(CLIA)和免疫化学发光分析(ICMA)；从发光方式上看，一是将发光物质直接标记到抗体或抗原上，免疫反应后，在起动剂的作用下而发光，另一种是用酶标记抗体或抗原，免疫反应后，加入化学发光底物，在酶催作用下而发光。
该方法虽有突出的优点，但目前仅限于免疫分析，而在生化分析中还是空白。
胰腺是脂肪酶(LPS)主要来源。血清LPS增高常见于急性胰腺炎及胰腺癌，偶见于慢性胰腺炎。急性胰腺炎时，血清淀粉酶增加的时间较短，而LPS活性升高可持续10~15天。此外，总胆管结石或癌、肠梗阻、十二指肠穿孔等有时也会增高。
现在普遍使用的测定血清中脂肪酶的方法为滴定法，该法是用脂肪酶(LPS)将橄榄油水解成甘油单酯和脂肪酸，再用NaOH溶液滴定脂肪酸，根据NaOH的用量计算LPS的活力单位。该法的不足之处主要有：
1、线性范围窄。由于检测光吸收，其分辨率不像化学发光那么敏感，线性范围不能完全满足临床检测的需要，对高浓度的样品需要经稀释后测定，带来一定不便。
2、灵敏度不如化学发光。化学发光是测定光信号，灵敏度要比测光吸收高出许多。
3、试剂成份复杂，操作烦琐，容易造成误差，影响测定结果的准确性。
发明内容：本发明所要解决的技术问题是一种提供能克服上述缺陷、且灵敏度高、线性范围宽、方便、安全的血清中脂肪酶的化学发光测定方法。解决该技术问题采用的主要技术方案：血清中脂肪酶的化学发光测定方法，其特征在于用脂肪酶(LPS)催化将甘油单酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶作用，过氧化氢使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与血清脂肪酶的浓度呈正相关，即血清脂肪酶浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血清脂肪酶的浓度；用已知浓度的脂肪酶与测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的脂肪酶含量可从该曲线推算出来；所述的化学发光物为鲁米诺。本发明与现有技术相比有如下优点：用化学发光物代替显色物，达到更灵敏、更稳定、范围宽、更安全的目的。用该方法可以制备相应的定量测定血清中脂肪酶的商品试剂盒。具体优点是：
①灵敏度更高。传统方法是检测颜色深浅，而化学发光是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。
②线性范围宽。测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，化学发光的检测范围高达105。
③安全适用。化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。
④便于普及。本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。
⑤巨大的社会效益。用化学发光法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。
具体实施方式：现举例说明本发明的实施例。用脂肪酶(LPS)催化将甘油单酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶作用，过氧化氢使发光物氧化而发光；光信号的大小与血清脂肪酶的浓度呈正相关，即血清脂肪酶浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血清脂肪酶的浓度；用已知浓度的脂肪酶测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的脂肪酶含量可从该曲线推算出来；所述的化学发光物为鲁米诺；这便是本发明的血清中脂肪酶的化学发光测定方法。本发明的反应原理用式子表示如下：
一、试剂包括：
混合酶液；
脂肪酶(或替代品)标准：单一或系列浓度；
底物液
二、测定程序：
按下表进行，加样单位为μl。
  标准   样品
  标准   10
  样品   10
  酶液   50   50
  底物液   50   50
  混匀，室温或37℃温育后测量RLU
三、用适当方法处理作出剂量-反应曲线，根据样品的RLU值从该曲线求出其血清脂肪酶的浓度。或直接由公式求出：
脂肪酶浓度＝(样品RLU/标准RLU)×标准浓度
四、也可用双试剂测定。
本发明的灵敏度更高：因为传统方法是检测颜色深浅，而本发明是测光信号，可一个一个光子计数，所测的最低限更小，因而灵敏度更高。线性范围宽：这是因为传统的测颜色的深浅的分辨率比光子计数的精度要低得多，本发明的化学发光检测范围高达105。安全适用：本发明的化学发光物如鲁米诺等很安全，整个检测过程无有害物出现，无论是检测或处理废物都很安全，有利于环境保护。便于普及：本发明所制备的试剂盒，可用于全自动测量，也可用于手工或半自动测量，适宜大、中、小各层次的医疗和研究机构使用。社会效益巨大：用本发明的化学发光测定方法测定生化指标或免疫物质，可同用一台化学发光仪，不再需要进口昂贵的生化仪，节省大量资金，不只降低了成本，对医疗机构、患者及社会均大有益处。本发明方法简单，适于广泛推广应用。

Claims (2)

1、血清中脂肪酶的化学发光测定方法，其特征在于用脂肪酶(LPS)催化将甘油单酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶作用，过氧化氢使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与血清脂肪酶的浓度呈正相关，即血清脂肪酶浓度越大发出的光信号越强；记录这种光信号即可推测血清脂肪酶的浓度；用已知浓度的脂肪酶与测出的光信号，作出剂量-反应曲线；未知样品的脂肪酶含量可从该曲线推算出来。
2、根据权利要求1所述的血清中脂肪酶的化学发光测定方法，其特征在于所述的化学发光物为鲁米诺。
CN 200610115002 2006-08-10 2006-08-10 血清中脂肪酶的化学发光测定方法 Pending CN1908631A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200610115002 CN1908631A (zh) 2006-08-10 2006-08-10 血清中脂肪酶的化学发光测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200610115002 CN1908631A (zh) 2006-08-10 2006-08-10 血清中脂肪酶的化学发光测定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1908631A true CN1908631A (zh) 2007-02-07

Family

ID=37699804

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200610115002 Pending CN1908631A (zh) 2006-08-10 2006-08-10 血清中脂肪酶的化学发光测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1908631A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102621138A (zh) * 2012-04-06 2012-08-01 上海蓝怡科技有限公司 微乳液试剂盒的制备方法
CN102634565A (zh) * 2011-06-21 2012-08-15 宁波美康生物科技股份有限公司 用于临床检测血清或血浆游离脂肪酸的试剂盒及其方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102634565A (zh) * 2011-06-21 2012-08-15 宁波美康生物科技股份有限公司 用于临床检测血清或血浆游离脂肪酸的试剂盒及其方法
CN102634565B (zh) * 2011-06-21 2013-07-31 宁波美康生物科技股份有限公司 用于临床检测血清或血浆游离脂肪酸的试剂盒及其方法
CN102621138A (zh) * 2012-04-06 2012-08-01 上海蓝怡科技有限公司 微乳液试剂盒的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1912594A (zh) 血清中肌酐的化学发光测定方法
CN105241873B (zh) 一种脂肪酶检测试剂盒
CN107021953A (zh) 一种香豆素荧光探针和制备方法及其在检测次氯酸根离子上的应用
CN1912622A (zh) 体液中葡萄糖的化学发光测定方法
CN1908628A (zh) 血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法
CN101639446A (zh) 一种用化学发光法体外检测血液乳酸的方法
CN102507482B (zh) 一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）的检测方法及试剂
CN1908631A (zh) 血清中脂肪酶的化学发光测定方法
JPH06505627A (ja) 分析法
CN1912589A (zh) 血清中尿素的化学发光测定方法
CN101639445A (zh) 一种用化学发光法体外检测血液丙酮酸的方法
Zhang et al. In-situ real-time monitoring of chemical kinetics by an automated micro-reaction device
CN1912595A (zh) 血液中血清总胆固醇的化学发光测定方法
CN1912621A (zh) 血清中甘油三脂的化学发光测定方法
CN111829999A (zh) 钙钛矿荧光微球和多巴胺体系的应用方法
CN1912591A (zh) 体液中α－L－岩藻糖苷酶的化学发光测定方法
CN115287332A (zh) 一种Poly(A)聚合酶活性测定方法
CN107356544A (zh) 一种脂肪酶检测试剂盒
CN1912623A (zh) 血浆氨的化学发光测定方法
CN1908629A (zh) 血清中肌酸激酶的化学发光测定方法
CN1912592A (zh) 体液中淀粉酶的化学发光测定方法
CN1912593A (zh) 血液中血清单胺氧化酶的化学发光测定方法
CN1912599A (zh) 血清中尿酸的化学发光测定方法
CN1908630A (zh) 血液中血红蛋白的化学发光测定方法
CN101221129B (zh) 磺酸化胆汁酸酶荧光毛细分析法及酶荧光定量试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication