CN102621138A - 微乳液试剂盒的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种试剂，具体涉及一种稳定微乳液试剂盒制备的方法，包括试剂R1，以及试剂R2，其中试剂R1，包括TAPS缓冲液；Colipase；脱氧胆酸钠；氯化钠；氯化钙；牛黄脱氧胆酸；叠氮钠；试剂R1的pH值为8.0。试剂R2包括酒石酸缓冲液；胆酸钠；牛黄脱氧胆酸；防腐剂；氯化钠；稳定剂，试剂R2的pH值为3.5。本发明同现有技术相比，改良的乳化方法使试剂在不影响其他性能的基础上，改善了试剂的稳定性和批间差大的问题。

Description

微乳液试剂盒的制备方法
[技术领域]
本发明涉及一种试剂，具体涉及一种稳定微乳液试剂盒制备的方法，可用于底物比色法测定血清脂肪酶试剂的配置。 
[背景技术]
血清脂肪酶作为一项胰腺功能检测的指标，其特异性很好，1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基试卤灵酯底物比色法已在临床诊断中得到了认可，然而市场上采用的底物比色法的试剂开封稳定性差，开封的时间越长，结果越偏低，开封不到半个月质控就下降到范围之外，冷藏稳定性比较差，冷藏几个月后会有底物沉淀，另外批间差也比较大，因此在使用上给检验人员带来许多不便，结果的可信度也有所下降。 
[发明内容]
本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种微乳液试剂盒的制备方法。 
为了实现上述目的，本发明设计了一种微乳液试剂盒的制备方法，包括试剂R1的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中：
试剂R1的制备： 
取TAPS缓冲液100mM/L；Colipase0.8mg/L；脱氧胆酸钠1.6mM/L；氯化钠0.5g/L；氯化钙4mM/L；牛黄脱氧胆酸1.5mM/L；叠氮钠0.1g/L；试剂R1的PH值为8.0； 
试剂R2的制备： 
A)取酒石酸缓冲液6mM/L；胆酸钠4mM/L；牛黄脱氧胆酸7mM/L；防腐剂0.1g/L；氯化钠0.5g/L；稳定剂，占试剂R2的0.1％-3％；试剂R2的PH值为3.5； 
B)取有机溶剂a，600μl，加入溴化十二烷基三甲基铵0.0086g，再加表 面活性剂b，0.0086g，将10mg底物加入溶解在此溶剂中； 
C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3.5，并在一定温度下下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。 
所述试剂R2的制备中，有机溶剂a为乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的一种。 
所述试剂R2的制备中，表面活性剂b为吐温系列、曲拉通系列、Brij系列、司盘系列、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸或AEO系列中的一种。 
所述试剂R2的制备中，稳定剂为山梨糖醇、丝氨酸或牛血清白蛋白中的一种。 
所述试剂R2的制备中，搅拌温度最佳选择是在35-45℃之间。 
所述试剂R2的制备中，底物为1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基试卤灵酯。 
所述试剂R2的制备中，酒石酸缓冲液的PH值为3.0-4.0。 
本发明同现有技术相比，改良的乳化方法后，在不影响试剂其他性能的基础上，改善了试剂的稳定性和批间差大的问题。 
[附图说明]
图1为本发明试剂盒线性的趋势图。 
图2为本发明试剂盒与免疫浊度法比较的相关性趋势图。 
图3为本发明试剂盒与底物比色法比较的相关性趋势图。 
[具体实施方式]
下面结合附图对本发明作进一步描述。 
实施例1： 
本发明的试剂盒，包括试剂R1的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中： 
试剂R1的制备： 
取TAPS缓冲液100mM/L；Colipase0.8mg/L；脱氧胆酸钠1.6mM/L；氯化钠0.5g/L；氯化钙4mM/L；牛黄脱氧胆酸1.5mM/L；叠氮钠0.1g/L；试剂R1的PH值为8.0。 
试剂R2的制备： 
A)取酒石酸缓冲液6mM/L；胆酸钠4mM/L；牛黄脱氧胆酸7mM/L；防腐剂0.1g/L；氯化钠0.5g/L；牛血清白蛋白，占试剂R2的0.1％-3％；试剂R2的PH值为3.5。 
B)取有机溶剂a正丁醇600μl，加入溴化十二烷基三甲基铵0.0086g，再加表面活性剂b，3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸0.0086g，将10mg底物1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基试卤灵酯加入溶解在此溶剂中。 
C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3.5，并在40℃下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。 
实施例2： 
将实施例1中的有机溶剂a换成异丁醇，其他配置步骤和实施例1相同。 
实施例3： 
将实施例1中的表面活性剂b换成司盘40，其他配置步骤和实施例1相同。 
实施例4： 
将实施例1中稳定剂换成山梨糖醇，其他配置步骤和实施例1相同。 
用配置出的试剂R1，200μl；R2，100μl，血清样本，3μl。主波长，570nm；副波长，700nm，速率法，读点19-29。在日立7170生化仪上检测，用罗氏校准品和质控品来定标和做质控，放在试剂仓内做开封稳定性。一个月开封数据见下表： 
Figure BDA0000150831020000041
以上四个实施例配置的试剂开封一个月后，质控仍在靶值的±10％以内，符合体外诊断试剂在临床上的质量要求。 
重复测罗氏低值质控十次，批内精密度小于2％，其数据如下表所示： 
    实施例1   实施例2   实施例3   实施例4
  PrecinormU   55.3   55.6   54.8   54.7
  LOT：157003   55.2   54.6   54.6   55.2
  54.8(44.9-64.7)   54.8   55.3   54.6   55.4
    55   55.1   55.1   55.1
    54.7   54.3   53.7   54.9
    54.1   52.8   53.7   54.8
    55.6   55.3   54.7   54.8
    55.6   54.9   54.6   55.2
    55.6   54.7   55.1   55.3
    54.2   54.7   54.6   55.7
  MEAN   55.01   54.73   54.55   55.11
  SD   0.556677   0.781807   0.488194   0.314289
  CV   1.01％   1.43％   0.89％   0.57％
按照实施例1，重复配置三批试剂，测同一血清样本五次，测得批间相对极差小于4％，如下表所示： 
Figure BDA0000150831020000051
取一批试剂在0-300U/L范围内，用高值样本按0，1/5，2/5，3/5，4/5，5/5，的比例稀释，R2≥0.99，见附图1。用50例临床样本与市场上的免疫浊度法和底物比色法比较，结果相关性良好，分别见附图2和附图3。在4℃避光冷藏1年后仍没有沉淀，经检测各项指标都达到质量要求。说明经过改良的乳化方法后，在不影响试剂其他性能的基础上，改善了试剂的稳定性和批间差大的问题，说明此配置方法可以用于1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基试卤灵酯底物比色法R2试剂的配置。 

Claims (7)

1.一种微乳液试剂盒的制备方法，包括试剂R1的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中：
试剂R1的制备：
取TAPS缓冲液100mM/L；Colipase0.8mg/L；脱氧胆酸钠1.6mM/L；氯化钠0.5g/L；氯化钙4mM/L；牛黄脱氧胆酸1.5mM/L；叠氮钠0.1g/L；试剂R1的PH值为8.0；
试剂R2的制备：
A)取酒石酸缓冲液6mM/L；胆酸钠4mM/L；牛黄脱氧胆酸7mM/L；防腐剂0.1g/L；氯化钠0.5g/L；稳定剂，占试剂R2的0.1％-3％；试剂R2的PH值为3.5；
B)取有机溶剂a，600μl，加入溴化十二烷基三甲基铵0.0086g，再加表面活性剂b，0.0086g，将10mg底物加入溶解在此溶剂中；
C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3.5，并在一定温度下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。
2.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，有机溶剂a为乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的一种。
3.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，表面活性剂b为吐温系列、曲拉通系列、Brij系列、司盘系列、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸或AEO系列中的一种。
4.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，稳定剂为山梨糖醇、丝氨酸或牛血清白蛋白中的一种。
5.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，搅拌温度最佳是在35-45℃之间。
6.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，底物为1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基试卤灵酯。
7.根据权利要求1所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备中，酒石酸缓冲液的PH值为3.0-4.0。
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