CN101632723B - 复方荭草制剂在防治更年期疾病和延缓衰老中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂的应用，特别涉及一种复方荭草制剂在制备防治更年期疾病和延缓衰老的药物中的应用，其中复方荭草制剂由荭草和灯盏细辛两味药组成。

Description

复方荭草制剂在防治更年期疾病和延缓衰老中的用途

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的应用，特别涉及一种复方荭草制剂在制备防治更年期疾病和延缓衰老的药物中的应用。

技术背景

医学上一般把女性45-55岁、男性50-60岁这个年龄阶段，称之为更年期。更年期是人生中的一个重要阶段，这个阶段在人的生理上变化较大，抵抗疾病的免疫功能降低，神经内分泌系统的功能逐渐衰退，激素水平降低，常常带来一系列的躯体疾病和情绪上的变化，同时还承受着来自工作、学习、家庭、婚姻以及社会各方面的压力，因而在心理上也发生着明显的变化。

妇女从生育年龄过渡到老年阶段，因卵巢功能减退会给机体带来的一系列改变，会出现如高血压、面色潮红、眩晕、耳鸣、眼花、失眠、记忆力减退、焦虑、抑郁、神经过敏、易激动、情绪不稳、关节肌肉疼痛、月经紊乱等等症状，称之为更年期综合征，是妇女绝经期前后出现的一种症候群。更年期抑郁症是一种发生在更年期的常见精神障碍，抑郁症患者常有某些躯体或精神因素作为诱因，发生生理和心理方面的改变。多以消化系统、心血管系统和植物神经系统的临床症状为主要表现：食欲减退、上腹部不适、口干、便秘、腹泻、心悸、血压改变、脉搏增快或减慢、胸闷、四肢麻木、发冷、发热、性欲减退、月经变化以及睡眠障碍、眩晕、乏力等。

更年期综合征及抑郁症是常见病，发病率高、危害性大。目前研究资料表明我国更年期人口中，更年期精神神经症状发生率高达75.1％，血管舒缩功能失调发生率为40.9％，99％的妇女在更年期及更年期后可出现骨质疏松症，也称为原发性骨质疏松症。随着世界人口趋于老龄化，骨质疏松症及疏松性骨折的发病人口也逐年上升。

目前有效的治疗方法是激素替代疗法和中药方剂的治疗。西药多用钙制剂、谷维素、雌激素、雄激素以及降钙素等药来防治绝经后骨质疏松症，虽有一定疗效，但是副作用较大，长期服用易患乳腺癌、子宫内膜癌等妇科肿瘤。而中药复方含多味药，单味药含有多种成分，因此可以通过多层次、多靶点、多环节发挥作用，能够达到保养卵巢、推迟更年期、延缓衰老的效果。

复方荭草制剂由荭草和灯盏细辛两味药组成。其中荭草为蓼科植物红蓼的全草或带根全草，具有祛风除湿，活血止痛的功效；灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，具有解表散寒，活血舒筋，止痛消积的功效。荭草可用于增加心脏冠脉流量，减缓氧耗，抗心肌缺血，抗支气管痉挛等；而灯盏细辛具有抗血栓、改善微循环、抗心肌缺血、脑缺血、改善肾功能、抗肝纤维化、改善肾功能等广泛的药理作用。两者合用更能增强抗冠心病心绞痛等耗氧、缺血方面心脏疾病的作用。但未见利用复方荭草制剂对更年期疾病和衰老方面的防治作用的临床药理研究方面的报道。

专利号为CN02128066.5、名称为“治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制作方法”的发明专利和专利申请号为CN200610051009.0、名称为“一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法”的发明专利申请公开了用荭草和灯盏细辛制备的治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法。申请人在随后的研究中还意外的发现，复方荭草制剂在防治更年期疾病和延缓衰老方面具有明显的治疗效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种复方荭草制剂在制备防治更年期疾病和延缓衰老的药物方面的应用。

本发明提供了复方荭草制剂在制备预防和治疗更年期综合征药物中的应用。

本发明提供了复方荭草制剂在制备预防和治疗更年期抑郁症药物中的应用。

本发明提供了复方荭草制剂在制备预防和治疗骨质疏松药物中的应用。

本发明提供了复方荭草制剂在制备预延缓衰老药物中的应用。

所述复方荭草制剂是从荭草、灯盏细辛中提取出的具有药用价值的提取物制成的制剂。

按照重量份计算，上述复方荭草制剂是由中药原料荭草1～10份和灯盏细辛1～10份经提取制备而成。

优选的配比为：荭草3-8份    灯盏细辛1-5份

最优选的配比为：荭草5份    灯盏细辛1份

前述的复方荭草制剂为水针剂、输液剂、冻干粉针剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂或滴丸剂。优选为水针剂、输液剂和冻干粉针剂。

本发明提供的复方荭草制剂中，其荭草、灯盏细辛的有效成分提取物可以按照专利号为02128066.5中的合并煎煮、醇沉、树脂分离的方法进行提取，也可以按照专利号为200610051009.0中的单独提取分离的方法进行提取，还可以用常规的方法进行提取。

本发明所述复方荭草制剂的有效剂量根据病人的情况而定，如：30-90mg生药/kg体重/天，优选为60mg生药/kg体重/天。

为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，以下通过实验及实施例来进一步阐述本发明复方荭草制剂的组成、其制备方法及用途：

一、药物的制备

原料：荭草7500g、灯盏细辛1500g

制备方法：取荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，抽滤，取上清液过滤，滤液用醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调pH值3，用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，水洗，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；

灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达55％，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物；

将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加1800毫升注射用水，搅拌使溶解，再加入适量甘油，混匀，用饱和碳酸钠调pH值至6.8～7.8，补加注射用水至10000毫升，用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得复方荭草注射液1000支。

需要说明的是，以上仅仅是介绍一种制备提取物的方法及制备成注射制剂的方法，是为了阐释本发明，而不是限制本发明。

二、试验例

(一)复方荭草制剂对更年期大鼠的作用研究

1、材料与方法

1.1试验药物：复方荭草注射液，10ml/支，按上述方法生产；大豆异黄酮，天津尖峰天然产物公司生产，批号：20040412。

1.2试验动物：SD大鼠11-15月大，雌性，体重280-350g，经阴道细胞涂片检查呈现不规则的动情周期，确定为更年期鼠。贵阳医学院实验动物中心提供。

1.3分组与给药：设更年期模型组、复方荭草组、大豆异黄酮组，每组10只，另选4～6月龄，体重150～220g雌性SD大鼠10只作为青年对照组。复方荭草组予以60mg/kg·d，大豆异黄酮组予以500mg/kg·d，更年期模型组与青年鼠对照组均予以019％生理盐水2ml，连续6周。

1.4观察项目与方法：各组实验动物取腹主动脉血样后处死，摘除卵巢、肾上腺进行病理检查。

1.4.1血清学测定：雌激素(E2)水平测定采用免疫化学发光法。脂质过氧化物(LPO)水平测定采用TBA比色法，结果以脂质过氧化物的稳定终产物丙二醛(MDA)浓度(nmol/ml)表示。超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用化学发光法。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定采用DTNB直接显色法。

1.4.2卵巢组织学切片的光镜观察：将摘除下来的各组大鼠双侧卵巢用福尔马林固定、石蜡包埋，切片，片厚6μm，HE染色，低倍镜下观察卵巢横切面中原始卵泡、生长卵泡(包括初级卵泡和次级卵泡)、退化卵泡及黄体数目。

1.4.3肾上腺组织切片的光镜观察：将摘除下来的各组大鼠肾上腺用福尔马林固定，石蜡包埋，切片，片厚6μm，HE染色，低倍镜下观察肾上腺组织变化(包括有无结构紊乱、瘀血程度及类脂滴含量)，高倍镜下测定肾上腺皮质厚度。

瘀血程度判断标准：血窦中有少量红细胞为“+”；血窦中充满红细胞但血窦未扩张为“++”；血窦中充满红细胞，同时伴血窦扩张为“+++”。

束状带类脂滴含量判断标准：“+”，表示高倍镜下观察200个束状带细胞并计数其胞质内含4个以下类脂滴的细胞占200个细胞中70％以上者；“++”表示含529个类脂滴的细胞占200个细胞中的70％以上者；“+++”表示含10个以上类脂滴的细胞占200个细胞中的70％以上者。

球状带、束状带、网状带厚度系数：高倍镜球状带、束状带、网状带各带厚度占肾上腺皮质全厚度的百分比。

1.5数据处理：所有数据采用SPSS10.0软件处理，结果以x±s表示，两组间差异显著性分析用t检验。

2、结果

2.1各组大鼠E2测定：从表1可看出，更年鼠模型组与青年鼠对照组比较，E2水平明显降低(P＜0.01)。各用药组E2水平均有所提高(P＜0.05)，其中以复方荭草组效果较明显。

表1雌激素(E2)水平测定(x±s)

组别	只数	E2(mU/ml)
			更年鼠模型组	10	21.84±4.29△
复方荭草组	10	27.08±5.52*
			大豆异黄酮组	10	26.42±4.87*
青年鼠对照组	10	29.05±6.38*

注：*P＜0.05 vs更年鼠模型组；△P＜0.05vs青年鼠对照组

2.2各组大鼠SOD、GSH-Px及MDA测定：从表2中可知，更年期组大鼠MDA值较青年对照组明显增高(P＜0.05)，SOD值显著降低(P＜0.01)、GSH-Px值明显降低(P＜0.05)；而用药组均具有较好提高SOD、GSH-Px活性，降低MDA浓度作用(P＜0.05或P＜0.01)，复方荭草组效果与大豆异黄酮组效果相当。

表2SOD、GSH-Px及MDA测定(x±s)

组别	只数	SOD(U/ml)	GSH-Px(U/l)	MDA(mmol/ml)
					更年鼠模型组	10	1012.71±81.36△△	2958.60±447.59△	5.52±0.48△
复方荭草组	10	1161.30±127.33*	3651.70±672.93*	4.76±0.53**
					大豆异黄酮组	10	1159.20±142.26**	3627.50±628.22*	4.51±0.59**
青年鼠对照组	10	1243.60±165.87**	3726.80±1028.51*	4.43±0.71**

注：*P＜0.05，**P＜0.01vs更年鼠模型组：△P＜0.05，△△P＜0.01vs青年鼠对照组

2.3卵巢形态的改变：更年鼠模型组原始卵泡少，退化卵泡多，发育正常的卵泡少，黄体数目少；复方荭草组发育正常的卵泡较多，生长卵泡增多，退化卵泡少，黄体数目较多；大豆异黄酮组初级、次级生长卵泡增多，成熟卵泡少，黄体数目少；青年鼠组原始卵泡多，初、次级卵泡增多，黄体数目最多。

2.4肾上腺皮质形态及功能的改变：表3、4显示更年期鼠肾上腺皮质球状带、网状带较青年鼠增厚，束状带变薄且细胞索失去相互平行排列的结构特点而交叉成网，网状带内近束状带区瘀血明显，束状带细胞胞质中类脂滴含量明显减少。复方荭草组与更年期模型组比较，球状带、网状带变(P＜0.05)，束状带增厚(P＜0.01)，束状带细胞索形态基本正常，类脂滴含量接近青年鼠组，网状带未见明显瘀血；大豆异黄酮组能增加肾上腺皮质束状带厚度，但对于结构紊乱、瘀血程度的改善效果不及复方荭草组。

表3各带厚度占肾上腺皮质全厚度的百分比(x±s)

组别	只数	束状带(％)	网球状带(％)	球状带(％)
					更年鼠模型组	10	48.5±12.57△△	31.2±8.26△	18.1±3.44△
复方荭草组	10	67.6±12.73**	20.7±7.88*	10.3±4.53*
					大豆异黄酮组	10	66.0±12.87*	24.1±13.37	9.0±3.29**
青年鼠对照组	10	71.8±15.06**	19.4±12.87	8.2±3.94**

注：*P＜0.05，**P＜0.01vs更年鼠模型组；△P＜0.05，△△P＜0.01vs青年鼠对照组

表4肾上腺组织变化情况

组别	只数	结构紊乱程度	瘀血程度	类脂滴含量
					更年鼠模型组	10	+	+++	+
复方荭草组	10	-	-	+++
					大豆异黄酮组	10	-	+	++
青年鼠对照组	10	-	-	+++

3、结论

由以上试验可知，更年组大鼠较青年组肾上腺皮质束状带变薄，球、网状带增厚，皮质结构紊乱，类脂滴明显减少；同时，更年鼠组MDA浓度较青年鼠组显著上升，SOD、GSH-Px活性显著降低，说明更年期组因内分泌改变，有关器官逐渐衰老，并进而出现脂质过氧化作用增加，自由基清除酶类活性下降等变化。复方荭草制剂能够改善更年鼠卵巢、肾上腺组织功能，提高其体内雌激素水平，并对自由基损伤有一定保护作用，说明复方荭草制剂可在更年期综合症的防治中发挥作用。

(二)复方荭草制剂对更年期抑郁症大鼠神经递质的影响

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1动物与分组：SD雌性大鼠，体重220-280g，40只，贵阳医学院实验动物中心提供。随机分为正常组I；更年期抑郁症模型组II；西药治疗组III；复方荭草注射液组IV。

1.1.2试验试剂及仪器：复方荭草注射液，10ml/支，按上述方法生产；百忧解20mg/片，美国礼来公司产品；雌二醇5mg/支，上海通用药业有限公司生产。GnRH、5-HT兔抗鼠多克隆抗体，SABC免疫组化试剂盒，DAB显色液；E2、LH、FSH试剂盒。JB-42型电刺激仪(宁波科芝仪器研究所)；免疫荧光分析仪(德国拜耳公司)。

1.2试验方法

1.2.1造模：除I组外，其余各组行卵巢摘除术，然后每笼1只饲养，接受21d各种不同的应激，包括电击足底、冰水游泳、热应激、摇晃、夹尾、禁水24h、禁食48h和昼夜颠倒等刺激，平均每种刺激2次，按上述刺激顺序刺激2轮。经上述处理后的大鼠以阴道上皮角化试验验证模型，动情间期：见大量多核白细胞，少量上皮细胞。动情前期：见大量上皮细胞，胞浆呈粒状，少量角化(无核)上皮细胞，无白细胞。动情期：见大量角化上皮细胞，形状大而不规则，尚有少量上皮细胞。动情后期：见大量白细胞，尚有少量融合的角化上皮细胞。连续5天阴道监测未见动情周期证明去势成功。

1.2.2给药：在第一轮刺激结束后开始给药，IV组给予肌肉注射复方荭草90mg/kg，III组给予雌二醇(2mg/kg，肌肉注射，隔日1次)与百忧解混悬液(4mg/kg，灌胃，每日1次)。连续21d。

1.3观察指标

1.3.1行为学测定(Open-Field法)：采用敞箱为立柱体，底面由面积相等的25块组成。以动物穿越地面块数为水平活动得分(crossing)，以直立次数为垂直活动得分(rearing)，在实验的第1，7，14，21d分别进行测定。每只动物进行1次，每次时间为3min。

1.3.2糖水消耗实验：实验时所有动物均单笼饲养，每只动物给予1％蔗糖溶液120ml，同时禁食24h，计算动物饮用1％蔗糖溶液的量。

1.3.3血清E2、LH、FSH测定：大鼠经腹主动脉采血，静置4h后，离心分离血清，-70℃保存。采用免疫荧光化学法测定各激素的含量。

1.3.4下丘脑5-HT、GnRH测定：大鼠腹腔麻醉后，用生理盐水经左心室插管至主动脉逆行灌流，直到未见红色液体流出，再灌注4％多聚甲醛直至大鼠四肢僵硬为止。取出脑组织放入4％多聚甲醛中固定4-6h，再将脑组织浸入30％蔗糖溶液中，待到组织下沉时，以20μm厚度作连续冰冻切片，每只脑组织取10张切片。切片纯丙酮室温固定20min，0.5％H₂O₂的甲醇室温处理30min，滴加山羊血清(效价1∶10)封闭20min，滴加一抗(效价1∶200)，置于湿盒37℃1h，滴加二抗(效价1∶100)37℃20min，滴加SABC(效价1∶100)37℃20min，DAB显色，苏木素复染，梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。切片经SX-100计算机图像分析系统采样，每张切片在100倍下随机抽取2个不重叠视野计算阳性细胞数目，每组共取10个视野。

1.4数据处理：所有测定结果用(x±s)表示，组间比较采用单因素方差分析。

2、结果

2.1各组大鼠Open-Field评分以及糖水消耗量的比较

与I组相比，水平积分、垂直积分和糖水消耗量均显著降低；与II组比较，IV、III组水平积分、垂直积分和糖水消耗量显著增高。见表5。

表5各组大鼠Open-Field评分以及糖水消耗量的比较

组别	只数	水平积分	垂直积分	糖水消耗量(ml)
					I	10	71.67±12.05	15.72±7.26	118.63±15.76

II	10	23.60±4.56**	8.06±3.81**	74.48±17.65**
					IV	10	48.33±8.87**△△	12.30±3.16△	122.19±13.72△△
III	10	62.47±9.30△△	13.08±2.25△	118.23±10.04△△

注：与I组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与II组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

2.2各组大鼠血清E2、LH、FSH含量的比较

与I组相比，II组E2显著降低、FSH、LH显著升高；与II组相比，IV、III组FSH、LH均显著降低并接近正常，IV组E2显著升高。见表6。

表6各组大鼠血清E2、LH、FSH含量的比较(pg/μl)

组别	只数	E2	FSH	LH
					I	10	147.61±12.26	0.14±0.03	0.06±0.03
II	10	114.18±24.55**	0.46±0.09**	0.18±0.04**
					IV	10	141.30±5.27△	0.14±0.05△△	0.05±0.02△△
III	10	117.82±26.39**	0.14±0.04△△	0.13±0.05**△△

注：与I组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与II组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

2.3各组大鼠下丘脑5-HT、GnRH含量的比较

与I组相比，II组5-HT显著降低、GnRH显著升高；与II组相比，IV、III组5-HT、GnRH均有不同程度的降低。见表7。

表7各组大鼠下丘脑5-HT、GnRH含量的比较

组别	只数	5-HT	GnRH
				I	10	141.5±30.7	40.3±22.1
II	10	47.1±20.3**	168.8±45.8**

IV	10	96.4±38.7**△△	43.3±13.6△△
				III	10	148.6±54.7△△	102.2±30.2**△△

3、结论

由以上试验可以看出，本发明复方荭草制剂可以明显改善更年期抑郁症模型大鼠的行为学评分，增加糖水消耗量，在改善生殖激素方面，可以下调LH、FSH水平。在神经递质方面，本制剂能够明显上调模型鼠5-HT的水平，降低GnRH含量。故复方荭草制剂能够有效调整更年期抑郁症模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的功能，从而协调神经内分泌网络。

(三)复方荭草制剂对摘卵巢大鼠骨组织形态计量及子宫病变的影响

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1药物及饲料：复方荭草注射液，10ml/支，按上述方法生产；龙牡壮骨颗粒，5g/袋，武汉健民药业生产；低钙饲料(含钙量＜0.3％)，北京科奥协力饲料有限公司产品。

1.1.2试剂：碱性磷酸酶(ALP)试剂盒、血清降钙素(BGP)、甲状旁腺素(PTH)、雌二醇(E2)。

1.1.3动物分组和给药：普通Wistar大鼠，雌性，6月龄，体重300-330g，贵阳医学院实验动物中心提供。将动物随机分为假手术组、骨质疏松模型组、复方荭草90mg/kg组、复方荭草60mg/kg组、复方荭草30mg/kg组和阳性对照龙牡壮骨颗粒组，每组10只。除假手术组外均做卵巢摘除术。手术3月后，各用药组分别按上述剂量给药，1次/日，连续给药3个月，假手术组和骨质疏松模型组给予等量水。喂食低钙饲料(含钙量＜0.3％)，自由饮水限制进食，每周称一次体重，并按体重变化调整给药量。各组大鼠于处死前16d和3d分别腹腔注射盐酸四环素，30mg/kg体重，对骨进行荧光标记。

1.2测定指标：血清碱性磷酸梅(ALP)活性；血清降钙素(BGP)；甲状旁腺素(PTH)；雌二醇(E2)；子宫指数；子宫病理学检查。

1.3测定方法：

1.3.1骨小梁组织形态计量：

取大鼠左侧胫骨近端1/3，去除软组织，包埋块，修块后纵向不脱钙骨切5μm片，用二甲苯溶解去掉树脂，梯度乙醇至水，甲苯胺蓝染色，采用Leica Qwin图象分析系统进行骨组织形态计量。

骨小梁体积百分比(TBV％)：骨小梁体积占被测骨髓腔总体积的百分比，是骨量水平的主要标志；

骨小梁吸收表面百分比(TRS％)：不规则、凹凸不平骨小梁表面占骨小梁表面的百分比；

骨小梁形成表面百分比(TFS％)：有成骨细胞被覆的类骨质表面占骨小梁表面的百分比；活性生产表面百分比(AFS％)：有荧光标记带的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比；

1.3.2皮质内表面形态计量：

类骨质平均宽度(OSW)：皮质内表面类骨质的平均宽度；

骨皮质矿化率(mAR)：皮质内表面双标记带的平均距离除以两次标记相隔的天数。

1.3.3子宫指数：动物处死后，剪开腹壁，暴露腹腔，观察动物卵巢是否切除完全，并完整分离子宫，去除子宫周围脂肪和结缔组织，用生理盐水洗涤后，滤纸吸干子宫表面水分，

电子天平称重：子宫指数＝子宫湿重/体重；

1.3.4子宫病理学检查：将取出的子宫组织用生理盐水漂洗后，滤纸吸干表面水分，按组别置于中性甲醛溶液固定。石蜡包埋，连续切片，子宫取材时均选取两侧子宫中部宫体组织，切片5μm厚，HE染色，10*10光镜下观察大鼠子宫内膜变化情况。

2、结果

2.1复方荭草注射液可明显增加骨小梁体积百分比(TBV％)，并显著降低骨小梁吸收表面百分比(TRS％)，见表8；明显升高摘卵巢模型大鼠的血清E2和BGP水平，降低ALP和PTH水平，见表9。

表8各组大鼠胫骨TBV％和TRS％的变化

组别	TBV％	TRS％
			假手术组	27.86±4.56	4.22±0.34
模型组	8.15±3.76##	12.68±3.91##
			阳性对照组	14.26±2.10**	4.73±0.82**
复方荭草高剂量组	14.06±3.46*	7.33±3.09**
			复方荭草中剂量组	13.51±6.38*	7.14±2.69**
复方荭草低剂量组	10.22±3.65	7.83±1.50*

注：与假手术组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

表9复方荭草制剂对骨质疏松症大鼠血清E2、BGP、PTH和ALP的影响(X±SD)

组别	剂量(mg/kg)	E2(pg/ml)	BGP(ng/ml)	PTH(ng/dL)	ALP(IU/L)
						假手术组	--	33.28±3.12	13.9±2.10	18.24±1.56	148.27±26.18
模型组	--	15.17±1.13#	16.87±3.47	52.07±12.33##	268.9±32.45##
						阳性对照组	5000	17.54±1.36*	24.55±4.67**	24.83±10.22**	164.20±30.28*
高剂量组	90	18.25±3.57*	21.47±3.40	38.35±9.24*	162.68±71.5*
						中剂量组	60	21.12±2.21**	25.84±10.79*	30.75±10.24*	173.71±31.9*
低剂量组	30	21.58±5.37*	23.76±7.44	46.90±10.93	218.43±53.1

注：n＝10，与假手术组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

2.2各组大鼠体重、子宫重、子宫指数变化，见表10。

表10各组大鼠体重、子宫重、子宫指数变化

组别	n	体重(g)	子宫重(g)	子宫指数(g)
					假手术组	10	326.28±13.55	1.061±0.30	3.15±0.50
模型组	10	375.20±11.43##	0.374±0.068##	1.02±0.33##
					阳性对照组	10	357.26±21.65#	0.506±0.067*	1.73±0.22*
高剂量组	10	350.69±12.04#	0.758±0.065**	2.31±0.99**
					中剂量组	10	352.33±16.81#	0.684±0.079**	2.23±0.94**
低剂量组	10	358.75±17.37	0.587±0.046*	1.96±0.82*

注：n＝10，与假手术组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

2.3大鼠子宫病理学检查(10*10)

正常体壁由内向外分为内膜层、肌层和浆膜层。假手术组大鼠子宫内膜上皮无萎缩或增生，内膜固有层分布有单管腺状体，腺上皮为单层柱状，细胞核呈圆形，位于细胞基底部；固有层间质内细胞数量增多，间质疏松；

模型组大鼠子宫内膜及肌层明显萎缩，部分内膜上皮已萎缩至不明显；内膜固有层内腺体数明显减少，腺体腔明显减小，近于闭合，腺上皮亦明显萎缩，细胞间质体积减小，间质相对紧密；

阳性对照组子宫内膜上皮、腺上皮、间质细胞均有萎缩病变，但明显轻于模型组，在固有膜仍可见有单管状腺体分布；

本发明复方荭草高、中剂量组子宫内膜上皮、腺上皮、间质细胞萎缩病变明显减轻，固有膜可见有单管状腺体分布，间质亦较疏松；其中低剂量组效果略低，提示使用中剂量疗效较好，成本较低。

2.4大鼠腺垂体病理HE染色观察(10*10)

假手术组腺垂体由大量腺细胞组成，细胞呈团状分布，细胞团之间有窦状毛细血管；

模型组大鼠腺垂体所有腺细胞胞体明显萎缩，毛细血管窦分布亦减少；

阳性对照组、本发明制剂组腺垂体无明显萎缩现象，提示上述治疗可有效延缓去卵巢大鼠腺垂体的衰老。

3、结论

以上实验可知，复方荭草制剂可明显改善摘卵巢大鼠骨质疏松模型的骨代谢状态，提高体内雌二醇水平，有效拮抗大鼠的子宫萎缩病变，延缓去卵巢大鼠子宫的衰老和延缓去卵巢大鼠腺垂体的衰老，其治疗效果与对照组相当。可见，本发明能保护女性子宫、防止骨质疏松，有效延缓女性更年期衰老。

由以上试验可以看出，本发明复方荭草制剂可以明显改善糖尿病合并冠心病患者的糖代谢及临床症状，改善心室的舒缩功能，缓解心肌缺血缺氧状态，并通过降低血浆ET水平，升高NO水平，保护内皮功能，达到预防和治疗糖尿病方面疾病的效果。对2型糖尿病特别是2型糖尿病合并冠心病的防治效果与银杏达莫注射液几乎相当；单独使用本发明的复方荭草制剂对糖尿病肾病的治疗作用几乎相当于单独使用复方丹参对糖尿病肾病的治疗作用；另外通过试验得知荭草和灯盏细辛组方后的药理效应明显增强，复方优于单方，达到了协同增效的效果。

具体实施方式：

需要说明的是，本制备实施例仅仅是介绍一种制备提取物的方法，是为了阐释本发明，而不是限制本发明。

实施例1：注射液的制备

原料：荭草7500g、灯盏细辛1500g

制备方法：取荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，抽滤，取上清液过滤，滤液用醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调pH值3，用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，水洗，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；

灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达55％，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物；

将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加1800毫升注射用水，搅拌使溶解，再加入适量甘油，混匀，用饱和碳酸钠调pH值至6.8～7.8，补加注射用水至10000毫升，用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得复方荭草注射液1000支。对肾脏疾病有确切的疗效。

注射液的用量：60mg生药/kg体重/天。对肾脏疾病有确切的疗效。

实施例2：片剂的制备

原料：荭草1000g、灯盏细辛5000g

制备方法：取荭草，加4倍量水煎煮一次，煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05(50℃)，加乙醇使含醇量达20％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04(50℃)，用饱和碳酸钠调pH值至4.7，充分搅拌，静置1小时，取上清液滤过，滤液用1/4倍量的醋酸乙酯萃取1次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调pH值至1，用1/4倍量水饱和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用1/16倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇溶解，上聚酰胺柱(10g，直径4cm，径高比1∶2，吸附流速：0.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；

灯盏细辛加4倍量水煎煮1次，每次0.2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09(50℃)，加乙醇使含醇量达20％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10(50℃)，用盐酸调pH值至1，55℃保温2小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值至2，真空干燥，得灯盏细辛提取物；

取荭草提取物和灯盏细辛提取物，混合均匀，加入辅料，制粒，压片，即得。

用法用量：口服，50mg生药/kg体重/天。对肾脏疾病有确切的疗效。

实施例3：胶囊剂的制备

取荭草100g和灯盏细辛1000g，粉碎，混匀，加水煎煮，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，加入胶囊剂的常规辅料，按常规制剂工艺制备胶囊剂。

用法用量：口服：75mg生药/kg体重/天。对肾脏疾病有确切的疗效。

实施例4：颗粒剂的制备

取荭草1000g和灯盏细辛100g，粉碎，混匀，加水煎煮、过滤，滤液减压浓缩成浸膏，用乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调pH值至中性，放置，取上清液用乙酸乙酯提取，水层液调pH值至酸性，用正丁醇提取，减压回收正丁醇，残留物用乙醇溶解，聚酰胺柱分离，用50～95％的乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥得荭草和灯盏细辛混合提取物，加入乙醇制软材，制粒，干燥，包装，得颗粒剂。

用法用量：冲服，40mg生药/kg体重/天。对肾脏疾病有确切的疗效。

实施例5：将实施例1或2或3或4方法得到的荭草提取物和灯盏细辛提取物，用制剂学常规技术制备成丸剂。

实施例6：取荭草100g和灯盏细辛1000g，粉碎，混匀，70％乙醇回流提取3次(2h、1.5h、1h)，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏状，加入常规辅料制备成滴丸。

实施例7：将实施例1得到的荭草提取物和灯盏细辛提取物混合，用制剂学常规技术制备成输液剂。

实施例8：将实施例1或2或3或4或6得到的荭草提取物和灯盏细辛提取物混合，用制剂学常规技术制备成冻干粉针剂。

Claims (8)

1.复方荭草制剂在制备预防和治疗女性更年期综合征的药物中的应用，其特征在于：按药物的重量配比计：荭草1-10份，灯盏细辛1-10份。

2.复方荭草制剂在制备预防和治疗女性更年期抑郁症的药物中的应用，其特征在于：按药物的重量配比计：荭草1-10份，灯盏细辛1-10份。

3.复方荭草制剂在制备预防和治疗卵巢摘除导致的骨质疏松的药物中的应用，其特征在于：按药物的重量配比计：荭草1-10份，灯盏细辛1-10份。

4.复方荭草制剂在制备延缓女性更年期衰老的药物中的应用，其特征在于：按药物的重量配比计：荭草1-10份，灯盏细辛1-10份。

5.按照权利要求1-4任一所述复方荭草制剂在制备药物中的应用，其特征在于：所述复方荭草制剂是由中药原料荭草1～10重量份和灯盏细辛1～10重量份经提取得到的提取物制成的制剂，提取物的制备方法为：取荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，抽滤，取上清液过滤，滤液用醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调pH值3，用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，水洗，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇溶解，上聚酰胺柱，参数为500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速1.5BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；

灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达55％，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，药物的重量配比为：

荭草3-8份    灯盏细辛1-5份。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，药物的重量配比为：

荭草5份      灯盏细辛1份。

8.按照权利要求1-4任一所述复方荭草制剂在制备药物中的应用，其特征在于：所述制剂为水针剂、输液剂、冻干粉针剂、片剂、丸剂、胶囊剂或颗粒剂。