CN103272119A - 一种用于治疗骨质疏松的中药制剂 - Google Patents
一种用于治疗骨质疏松的中药制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,由以下重量份配比的原料制成:灵芝4-6份、黄精2.5-3.5份、熟地黄1.8-2.2份、甘松1.8-2.2份、山茱萸1.8-2.2份、肉苁蓉1.8-2.2份、玉竹0.8-1.2份、佛手0.8-1.2份、黄芪0.8-1.2份、牛膝0.8-1.2份、枸杞子0.4-0.6份、三七0.4-0.6份、当归0.4-0.6份。本发明中药制剂不仅骨质疏松症有良好的治疗效果,而且急性毒性较小安全可靠。
Description
技术领域
本发明属于中药配方技术领域,具体涉及一种用于治疗骨质疏松的中药制剂。
背景技术
骨质疏松(osteoporosis)是多种原因引起的一组骨病,骨组织有正常的钙化,钙盐与基质呈正常比例,以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。在多数骨质疏松中,骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致。发病多缓慢个别较快,以骨骼疼痛、易于骨折为特征。该病女性多于男性,常见于绝经后妇女和老年人。随着世界各国人口老龄化的增高,骨质疏松症发病率处于上升趋势,在我国乃至全球都是一个值得关注的健康问题。
骨质疏松症多见腰背酸疼,足膝无力,肢体倦怠,头晕耳鸣,少气懒言,大便溏薄,舌淡苔白,脉沉弱者。
中医的文献中虽无骨质疏松这一名词,但历代的文献记载的“骨痿、骨枯、骨蚀、骨极”等与现代之骨质疏松症状相似,其中又以骨痿的叙述较符合骨质疏松症的临床症状。“骨痿”、“骨痹”的说法最早见于《内经》《素问·痿论》曰:“肾主身之骨髓……肾气热,则腰脊不举,骨枯而髓减,发为骨痿。”《素问·痿论》:“肾者水脏也,今水不胜火,则骨枯而髓空,故足不任身,发为骨痿。”《素问·长刺节论》曰:“病在骨,骨重不可举,骨髓酸痛,寒气至,名曰骨痹。”从古代医籍的描述可以看出,“骨痿”是由于肾虚导致骨枯而髓空,病人出现肢体软弱无力之症。“骨痹”则是由于感受风寒湿外邪,导致经脉闭塞,见肢体关节疼痛等症。
中医学认为,“肾者,髓之府”,“腰者,肾之府”,并深刻认识到肾与骨存在着密切的内在联系,提出“肾主骨”学说,骨与脾、肾二脏关系密 切,肾藏精,精化髓,骨赖髓以充养。即“骨者肾之所合也”,“肾藏精,主骨,藏真阴而寓元阳,为先天之本”。故而由于先天禀赋不足加之后天失养,损伤真阴元阳,使精血不足,肾阳衰弱,不能充骨生髓,温养筋骨,使骨髓空虚。肾为先天之本,脾为后天之本。肾所藏之精包括先天之精和后天之精,肾中精气依赖脾所运化之水谷精微的培育和充养。在病理上互为因果,脾虚可引起肾虚,肾虚可导致脾虚。脾肾俱虚,骨骼失养,则骨骼脆弱无力,终致骨质疏松。《素问·上古天真论》曰:“女子……五七,阳明脉衰少,面始焦,发始堕;七七,任脉虚,太冲脉衰少,天癸竭,地道不通,故形坏而无子也。丈夫,……五八肾气衰,发堕齿槁;六八阳气衰竭于上,面焦鬓颁白;七八肝气衰,筋不能动;八八则齿发去八八天癸绝,精少,肾脏衰,形体皆极。”故骨质疏松症多发于老年人。此外“肝主筋”、“肾主骨”、“肝肾同源”,肾阴虚可导致肝阴虚,最后发展为肝肾阴虚,髓枯筋痿,而致骨痿。六淫之邪是引起骨质疏松症的外在因素,外邪可以导致各种疾病,而各种疾病皆能影响人体的气血津液,耗伤人体精气、肾气,以致影响骨质的形成,外邪乘虚而入,凝滞骨关节,导致气血痹阻,使骨质疏松症状早发。病久气血周流不畅,或脾虚湿盛,湿聚为痰或气虚失运,血行不畅,或寒凝脉涩,使血脉痹阻,瘀血痰饮,交结为患,痹阻经脉,伤筋败骨,以致病情日益加重。
发明内容
为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,不仅骨质疏松症有良好的治疗效果,而且急性毒性较小安全可靠。
为实现上述发明目的,本发明所采用技术方案如下:
一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,由以下重量份配比的原料制成:
灵芝4-6份、黄精2.5-3.5份、熟地黄1.8-2.2份、甘松1.8-2.2份、山茱萸1.8-2.2份、肉苁蓉1.8-2.2份、玉竹0.8-1.2份、佛手0.8-1.2份、黄芪0.8-1.2份、牛膝0.8-1.2份、枸杞子0.4-0.6份、三七0.4-0.6份、 当归0.4-0.6份。
进一步的,本发明的最佳配比是:灵芝5份、黄精3份、熟地黄2份、甘松2份、山茱萸2份、肉苁蓉2份、玉竹1份、佛手1份、黄芪1份、牛膝1份、枸杞子0.5份、三七0.5份、当归0.5份。
其中,灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草,是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。
其中,黄精又名老虎姜、鸡头参。为百合科植物滇黄精(Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.)、黄精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua.)的干燥根茎。黄精以根茎入药。具有补气养阴,健脾,润肺,益肾功能。
其中,熟地黄为玄参科植物地黄(学名:Rehmannia glutinosa)的块根,又名熟地黄黄或伏地,经加工炮制而成。
其中,甘松为败酱科植物甘松和宽叶甘松的根和根茎,甘松别名甘香松、香松,甘松有理气止痛、醒脾健胃的功效,甘松有治疗脘腹胀痛、不思饮食、牙痛、脚气的作用,气虚血热者忌服甘松。
其中,山茱萸(学名:Cornus officinalis),山茱萸科落叶灌木或小乔木。采实供药用,能补益肝肾,固涩精气。
其中,肉苁蓉,又称地精,是当前世界上频临灭绝的物种,药用价值极高,素有“沙漠人参”的美誉,是中国所发现的60多种补益中药中品位最高的药物,含有大量氨基酸、胱氨酸、维生素和矿物质珍稀营养滋补成份,
其中,玉竹的干燥肉质呈根状茎,为黄精属多年生草本植物,是大宗中药材。
其中,佛手又名九爪木、五指橘、佛手柑。为芸香科常绿小乔木。
其中,黄芪(Milkvetch Root),又称北芪或北蓍,亦作黄耆或黄蓍,常 用中药之一,为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根。
其中,牛膝(学名:Achyranthes bidentata)为苋科牛膝属的植物。南方在11月下旬至12月中旬,北方在10月中旬至11月上旬收获。先割会地上茎叶,依次将根挖出,剪除芦头,去净泥土和杂质。按根的粗细不同,晒至六七成干后,集中室内加盖草席,堆闷2~3d,分级,扎把,晒干。
其中,枸杞子(Barbary Wolfberry Fruit)是名贵的药材和滋补品,中医很早就有“枸杞子养生”的说法。《本草纲目》记载:“枸杞子,补肾生精,养肝……明目安神,令人长寿。
其中,三七又名田七,明代著名的药学家李时珍称其为“金不换”。
其中,当归(学名:Angelica sinensis),多年生草本植物,在中国分布于甘肃、云南、四川、青海、陕西、湖南、湖北、贵州等地,各地均有栽培。当归的根可入药,是最常用的中药之一。
骨质疏松症的发生与肾、脾、肝有关,“多虚多瘀”(肾虚、脾虚、血瘀)为其病机特点。补肾壮骨、健脾益气、活血通络为其基本原则。本方中灵芝性味甘平,归心、肝、脾、肺、肾五经。具有扶正固本等功效,被《神农本草经》称为上品。谓紫芝“主耳聋,利关节,保神益精,坚筋骨,好颜色,久服轻身不老延年。”谓赤芝“主胸中结,益心气,补中增智慧不忘,久食轻身不老,延年成仙。”中华传统医学长期以来一直视为滋补强壮、固本扶正的珍贵中草药。就中医辩证看,由于该品入五脏肾补益全身五脏之气,所以无论心、肺、肝、脾、肾脏虚弱,均可服之。以味甘、性平,归肺脾、肾经之黄精,补气健脾,补肾益精,强壮筋骨。《本经逢原》言:“黄精,宽中益气,使五藏调和,肌肉充盛,骨髓强坚,皆是补阴之功。”与灵芝相伍,补肝肾,益心气,强筋骨,利关节,疗虚损,止腰膝酸痛,共为君药。
以味甘,性微温。归肝、肾经之熟地黄。补血养阴,填精益髓。《本草从新》:“滋肾水,封填骨髓,利血脉,补益真阴,聪耳明目,黑发乌须。又能 补脾阴,止久泻。治劳伤风痹,阴亏发热,干咳痰嗽,气短喘促,胃中空虚觉馁,痘证心虚无脓,病后胫股酸痛,产后脐腹急疼,感证阴亏,无汗便秘,诸种动血,一切肝肾阴亏,虚损百病,为壮水之主药。”其质润入肾,善滋补肾阴,填精益髓,为补肾阴之要药。古人谓之“大补五脏真阴”,“大补真水”。 治疗肝肾阴虚,腰膝酸软、可补肝肾,益精髓。以酸、涩,归肝、肾经之山茱萸。补益肝肾,收敛固涩 固精缩尿止带止崩, 止汗。用于腰膝酸痛 头晕耳鸣,健忘 遗精滑精,遗尿尿频,崩漏带下月经不调,大汗虚脱 。。《名医别录》载:“山茱萸微温,无毒。主治肠胃风邪,寒热疝瘕,……耳聋,下气,出汗,益精,安五脏,通九窍,止小便利。”清代《本草新编》载:“补阴之药未有布片,胜者也惟山萸大补肝肾专而不杂,既无寒热之偏,又无阴阳之背,实为诸补阴之冠。”以甘、咸,归肾、大肠经之苁蓉。补肾阳,益精血,润肠通便。用于腰膝酸软,筋骨无力,肠燥便秘。.《本经》曰:主五劳七伤,补中,除茎中寒热痛,养五脏,强阴,益精气,妇人症瘕。《本草经疏》:“肉苁蓉,滋肾补精血之要药,气本微温,相传以为热者误也。甘能除热补中,酸能入肝,咸能滋肾,肾肝为阴,阴气滋长,则五脏之劳热自退,阴茎中寒热痛自愈。肾肝足,则精血日盛,精血盛则多子。妇人症瘕,病在血分,血盛则行,行则症瘕自消矣。膀胱虚,则邪客之,得补则邪气自散,腰痛自止。久服则肥健而轻身,益肾肝补精血之效也,若曰治痢,岂滑以导滞之意乎,此亦必不能之说也。”以苦;甘;涩;归肝;肾经之甘松,养血滋阴;润肠通便;用于肝肾阴虚之腰膝酸软;须发早白;耳鸣;遗精;肠燥便秘;久疟体虚;风疹瘙痒;疮痈;瘰疬;《本草正义》:曰甘松,专入肝肾,补养真阴,且味固甚厚,稍兼苦涩,性则温和,皆与下焦封藏之理符合,故能填益精气,具有阴阳平秘作用,非如地黄之偏于阴凝可比。四药相合,补益肝肾,补养真阴,填精益髓,滋阴益肾,助君药以补气健脾,补肾益精,强筋骨,共为臣药。
以玉竹味甘,性平。归肺;胃经。滋阴润肺;养胃生津。燥咳;劳嗽; 热病阴液耗伤之咽干口渴;内热消渴;阴虚外感;头昏眩晕;筋脉挛痛。《本经》:“主中风暴热,不能动摇,跌筋结肉,诸不足。久服去面黑野,好颜色,润泽,轻身不老。”以佛手辛、苦、甘、入肝、脾、胃三经。理气化痰、止呕消胀、舒肝健脾、和胃。《本草纲目》中记载:“佛手气味辛,温无毒;主治下气,除心头痰水;煮酒饮,治痰多咳漱;煮汤,治心下气痛。”以黄芪味甘,性微温,归肝、脾、肺、肾经。益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿。《本草逢原》载“黄芪能补五脏诸虚,治脉弦自汗,泻阴火,去肺热,无汗则发,有汗则止。”以牛膝苦酸;性平,归肝;肾经,补肝肾;强筋骨;活血通经;.《别录》:疗伤中少气,男肾阴消,老人失溺,补中续绝,填骨髓,除脑中痛及腰脊痛,妇人月水不通,血结,益精,利阴气,止发白。四药同用,滋阴,疏肝健脾,益气固表,活血通经,以助臣药补益滋阴强筋骨之效,同为佐药。
枸杞子味甘;性平,归肝;肾;养肝;滋肾;用于肝肾亏虚;腰膝酸软,《食疗本草》:坚筋耐老,除风,补益筋骨,能益人,去虚劳。三七味甘;微苦;性温。归肝经;胃经;心经;肺经;大肠经。用于散瘀止血,消肿定痛。《本草纲目》云:“三七止血,散血,定痛。”《玉楸药解》云:“三七和营止血,通脉行瘀,行瘀血而敛新血。”当归味甘;辛;苦;性温,归肝;心;脾经,用于补血;活血;《注解伤寒论》:脉者血之府,诸血皆属心,凡通脉者必先补心益血,故张仲景治手足厥寒,脉细欲绝者,用当归之苦温以助心血。朱药滋阴补益,通脉行瘀,补血活血共为使药。
诸药相合,既肝、脾、肾并补,补先天而助后天生化,补后天又以养先天之本,补益肝肾,补肾培元,强筋健骨;补血活血,通利血脉,舒筋利痹,共奏补肾健脾,强筋健骨,活血通络之功效。
通过实验可知,本发明胶囊能够升高骨折大鼠血清碱性磷酸酶ALP的含量,能够降低骨折大鼠血清Ca含量,对全血还原黏度低切、中切和高切,对血浆黏度和全血黏度高切、中切和低切均具有一定的减低作用,对骨折愈合 时间、愈合程度、断端边缘、骨膜反应、骨痂量、骨痂密度、骨痂边缘等指标均有一定的改善作用。
同时,本发明中药制剂的急性毒性较小安全可靠,具体实验如下:
【试验目的】观察本发明胶囊灌胃给药后动物的急性毒性反应和死亡情况。
【试验材料】
1.试验药物 本发明胶囊,淡黄色至黄棕色颗粒,每粒含0.3g受试药,每克受试药相当于原药材4.2克。临床成人用量为3次/日,3粒/次,临用时以蒸馏水配成所需浓度的溶液。
2.试验动物 昆明种小白鼠,由甘肃中医学院实验动物中心提供,SPF级,雌雄兼用,体重18~22g,动物实验设施合格证SYXK(甘)2012-006 ,实验动物质量合格证SCXK(甘)2012-007,发证单位甘肃省科技厅;动物按性别分笼饲养,食固体饲料,食水自由,饲料由甘肃中医学院实验动物中心提供。室温20~25℃,相对湿度45%~52%。
【试验方法及结果】
1.试验预试:小鼠18只,♀♂各半,随机分为3组,每组6只,禁食12小时后,分别灌胃给予21%、42%、84%本发明胶囊0.4ml/10g,一日2次,间隔6h。观察14天,结果无小鼠死亡,提示测不出LD50,故测定小鼠一日最大给药量。
2.正式试验:另取小鼠20只,♀♂各半,禁食12小时后,灌胃给84%(最大浓度)本发明胶囊0.4ml/10g,一日2次,间隔6h。对动物的体重变化结果用统计软件SPSS13.0进行单因素方差分析处理,见表1。饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况见表2。
表1 本发明胶囊急性毒性试验小鼠体重变化(单位:g,n=10,X±SD)
注:与对照组比较,P>0.05。
结果表明,本发明胶囊给药组与对照组小鼠体重增长方面总体均数没有差异。
表2 本发明胶囊日最大给药量试验小鼠反应情况
(注:—代表正常)
结果表明,观察期间小鼠毛发光泽,活动自如,进食及大、小便正常,未发现有其他毒性反应。14天内动物体重增加,由试验前20.2±1.1g增加到30.4±1.8g,无一只死亡。实验结束时颈椎脱臼处死小鼠,解剖肉眼观察主要脏器颜色及形态学改变,结果心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等主要脏器未见异常改变。据此,本发明胶囊小鼠灌胃给药一日最大给药量为60g/kg( 75g/100ml×40ml/kg×2次/日),未见明显急性毒性反应。
【试验结论】
本发明胶囊小鼠灌胃给药后,未发现明显急性毒性,小鼠一日最大给药量为67.2g/kg ,相当于临床成人每日用量(3粒/次×3次/日×0.3g/粒÷60kg = 0.045g/kg)的1300倍。
具体实施方式
下面将结合具体实施方法来详细说明本发明,在本发明的示意性实施及说明用来解释本发明,但并不作为对本发明的限定。
实施例1:
本实施例提供了一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,由以下重量份配比的原料制成:灵芝4克、黄精2.5克、熟地黄1.8克、甘松1.8克、山茱萸1.8克、肉苁蓉1.8克、玉竹0.8克、佛手0.8克、黄芪0.8克、牛膝0.8克、枸杞子0.4克、三七0.4克、当归0.4克。
本实施例还公开了一种上述中药复方制剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)按配方量称取甘松,然后将其加入到15倍量水提取挥发油,40℃水浴β环糊精包合、干燥;
(2)将配方量称取玉竹、黄精、熟地黄、佛手和牛膝,加6倍65%乙醇回流提取三次,每次1.5小时,合并滤液,滤液回收乙醇,
(3)将灵芝、山茱萸、枸杞子子、肉苁蓉、黄芪、三七、当归等7味加8倍水煎煮三次,每次2小时,合并滤液;
(4)将所述步骤(2)和步骤(3)所得的滤液合并后,加入辅料,经制粒、干燥、整粒、装囊即得,所述辅料为糊精。浓缩至相对密度1.10-1.15(50-60℃),加入(1)中所得与稠膏混合均匀,干燥,粉碎,制粒,装囊,即得。
为了获得更好的提取效果,所述步骤(2)进行乙醇提取时,采用质量浓 度为65%的乙醇提取三次,每次提取时间为1.5小时。
为了获得更好的药效,所述步骤(3)中每次加水量8倍煎煮三次,每次2小时。
实施例2:
本实施例提供了一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,由以下重量份配比的原料制成:灵芝5克、黄精3克、熟地黄2克、甘松2克、山茱萸2克、肉苁蓉2克、玉竹1克、佛手1克、黄芪1克、牛膝1克、枸杞子0.5克、三七0.5克、当归0.5克。
本实施例的制备方法同实施例1。
实施例3:
本实施例提供了一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,由以下重量份配比的原料制成:灵芝6克、黄精3.5克、熟地黄2.2克、甘松2.2克、山茱萸2.2克、肉苁蓉2.2克、玉竹1.2克、佛手1.2克、黄芪1.2克、牛膝1.2克、枸杞子0.6克、三七0.6克、当归0.6克。
本实施例的制备方法同实施例1。
以下以实施例2所制备的胶囊为例,进行动物实验以验证该制剂的治疗效果,具体如下:
【摘要】本发明胶囊为中药复方制剂,全方主要由灵芝、黄精、 熟地黄、甘松、山茱萸、肉苁蓉、玉竹、佛手、黄芪、牛膝、枸杞子、三七、当归等组成,具有补肾培元、舒筋健骨、活血通络之功效。临床用于骨质疏松症。症见腰背酸痛,足膝无力,肢体倦怠,头晕耳鸣,少气懒言,大便溏薄,舌淡苔白,脉沉弱者。根据本发明胶囊的功效与主治,按照《中药新药研究指南》的原则与方法,我们对本发明胶囊进行了对骨折愈合程度(包括骨折愈合时间、愈合程度、断端边缘、骨痂量)、对骨痂切片组织病理学分析、 活血化瘀作用(血液流变学)、止痛作用(扭体法、热板法)、消炎作用(组织胺 致大鼠皮肤毛细血管通透性的影响、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀)、对骨密度的影响以及对血钙(Ca)、血清碱性磷酸酶(ALP)的影响等与功能主治有关的主要药效学试验研究。
试验结果表明,按0.9、0.45、0.23g/kg(相当于临床剂量的20、10、5倍)对小鼠灌胃给药,按0.54、0.27、0.14g/kg(相当于临床剂量的12、6、3倍)对大鼠灌胃给药,大剂量给药30天能够促进大鼠股骨骨折的愈合,表现在X拍片观察骨皮质连续,骨折断端呈梭形,骨折线模糊,骨痂生长明显;本发明胶囊对骨折断端组织病理学具有明显改善作用,表现在软骨内成骨与编织骨并存,内、外骨痂将骨折端连接,残留部骨痂、骨折局部密度增高,小梁骨成熟度较高。
能够提高热板致痛法所致疼痛的阈值,能够减少冰乙酸所致的小鼠扭体反应次数和提高镇痛百分率,具有明显的镇痛作用;对肾上腺素加冷刺激法造成大鼠急性血瘀模型的血液流变学各项指标具有明显的活血化瘀作用;伊文思蓝生理盐水溶液尾静脉注射后,本发明胶囊能够增加小鼠腹腔渗入之染料量,对角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀具有抑制作用,提示具有明显的抗炎作用;本发明胶囊能够升高维A酸(70mg.kg-1.d-1)骨质疏松模型大鼠股骨的骨密度,能够升高该骨质疏松模型大鼠模型血清中钙(Ca)的含量,降低血清碱性磷酸酶(ALP)的含量,说明该制剂具有抗骨质疏松的作用。
以上结果表明,本发明胶囊同时具有促进骨折愈合和抗骨质疏松的作用。
【试验目的】采用整体动物试验和体外试验的方法,观察本发明胶囊对骨折愈合程度(包括骨折愈合时间、愈合程度、断端边缘、骨痂量)、对骨痂切片组织病理学分析、 活血作用(血液流变学)、止痛作用(扭体法、热板法)、消炎作用(组织胺致大鼠皮肤毛细血管通透性的影响、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀)、散瘀作用、对骨密度的影响以及对血Ca、血ALP等含量的影响,反映本发明胶囊的功效与主治,为临床使用提供理论依据。
【试验材料】
1.试验药物 本发明胶囊,淡黄色至黄棕色颗粒,批号20100912,临床用法 与用量,成人一次3粒,一日3次,每粒胶囊含药物0.3g,每克试验药物相当于原药材4.2g。
试验设计中本发明胶囊小鼠给药的大、中、小剂量相当于成人临床剂量的20倍、10倍和5倍,临用时将药粉分别配成浓度为4.8%、2.4%和1.2%的溶液,每只小鼠每次灌胃给药0.2ml/10g,1次/日;大鼠给药的大、中、小剂量相当于成人临床剂量的12倍、6倍和3倍,临用时将药粉分别配成浓度为5.76%、2.88%和1.44%的溶液,每只大鼠每次灌胃给药1.0ml/100g,1次/日;阳性对照药选择骨松宝胶囊,成人用量一次2粒,一日3次,每粒胶囊含药物0.5g,小鼠剂量相当于成人临床剂量的10倍,临用时将原药粉配成浓度为2.5%的溶液,每只小鼠每次灌胃给药0.2ml/10g,1次/日;大鼠灌胃骨松宝胶囊的剂量相当于成人临床剂量的6倍,用时将原药粉配成浓度为3%的溶液,每只大鼠每次灌胃给药1.0ml/100g,1次/日。
具体剂量如下:
小鼠给药剂量
大剂量:0.9g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药1.8g;
中剂量:0.45g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药0.9g;
小剂量:0.23g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药0.46g;
骨松宝胶囊:0.5g/kg。
大鼠给药剂量
大剂量:0.54g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药1.08g;
中剂量:0.27g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药0.54g;
小剂量:0.14g/kg,即每kg体重的给药量相当于原生药0.28g;
骨松宝胶囊:0.3g/kg。
2.对照药品、主要试剂 骨松宝胶囊(贵州富华药业有限责任公司,批号:20091206);维A酸片(商品名奥韦欣,山东良福集团制药有限公司,批号:090203);二甲苯(成都科龙化工试剂厂,批号:20100205);冰醋酸(天津市化学试剂六厂三分厂,批号20100326);角叉菜胶(美国Sigma公司, 批号CAS9000-07-1);戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂公司,批号:20100816);钙(Ca)、碱性磷酸酶(ALP)生化试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司,生产批号:090801、090801);阿司匹林肠溶片(陕西白鹿制药厂,批号 20100820);氨酚待因(青海制药厂有限公司,批号20100116);甲醛(上海建信化工有限公司试剂厂,批号:090212);硝酸(天津市凯通化学试剂有限公司)。
3.试验器材 双能量骨密度仪(法国,UNIGAMA Plus LPG-01-264/04);X光机(西门子,800mA);显微镜(OLYMPUSBX60);分光光度计(日本岛津,UV-2401PC);分析天平(北京Sartorius BL121SS);秒表(深圳市定尔志电子有限公司);电子数显外径千分尺(桂林广陆数字测控股份有限责任公司);载玻片(帆船牌,CAT.NO.7104型);RCY-2型热板测痛仪(冀星实验仪器有限责任公司);樱花Tissue-Tek?VIPTM5Jr全封闭组织脱水机;樱花Tissue-Tek?TECTM5组织包埋机;樱花IVS-40推拉式切片机; ALCYON 300全自动生化分析仪(美国雅培)。
4、试验动物昆明种小白鼠, SPF级,雌雄兼用,体重18~22g;SD、Wistar大鼠,SPF级,雌雄兼用,体重180~220g,由甘肃中医学院实验动物中心提供,动物实验设施合格证SYXK(甘)2004~006 ,实验动物质量合格证SCXK(甘)2004~007,发证单位甘肃省科技厅。
动物按性别分笼饲养,食固体饲料,食水自由,饲料由甘肃中医学院实验动物中心提供。室温20~25℃,相对湿度45%~52%。
【统计处理】采用SPSS13.0数理统计软件进行组间比较单因素方差分析及X2检验。
【试验项目】
1接骨作用
1.1 X线观察骨折愈合程度(愈合时间、愈合程度、断端边缘、骨痂量),共观察30天,设3个时间点,大鼠150只
1.2对骨痂切片组织病理学分析
2骨密度测定
3血Ca、血ALP
4对去卵巢致大鼠骨质疏松症的作用
5活血作用 血液流变学
6 止痛作用
6.1扭体法
6.2热板法
7消炎作用
7.1毛细血管通透性的影响
7.2角叉菜胶致大鼠足跖肿胀
【试验方法及结果】
一、抗骨质疏松作用
SD品系大白鼠共60只,随机分为6组,即空白对照组, 模型对照组,本发明胶囊大、中、小剂量组,骨松宝胶囊对照组。实验过程中每周称重一次,根据大鼠体重调节给药量。空白对照组在整个实验过程中只给等量生理盐水,模型组、骨松宝胶囊对照组、本发明胶囊各剂量组于实验第1~15天均给予维A酸(70mg.kg-1.d-1)灌胃,骨松宝胶囊对照组加服骨松宝胶囊,本发明胶囊组加服本发明胶囊各相应的剂量,第15天各组停用维A酸,空白组、模型组给予等量生理盐水,给药组继续给于所试药物,剂量不变,第29天,用戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉动物并腹主动脉取血,分离血清用全自动生化仪测定血钙、碱性磷酸酶;处死动物后,分离两侧完整的股骨进行骨密度的检测。试验结果见表1和表2。
表1 本发明胶囊对骨质疏松模型大鼠血清Ca、ALP的影响(n=10)(X±SD)
注:与模型组比较※P<0.05,※※P<0.01, ※※※P<0.001
结果表明,维A酸(70mg.kg-1.d-1)灌胃2周后,即造模2周后,大鼠血清ALP含量增高而血清Ca的含量降低,与空白组比较均具有差异性显著(P<0.05);本发明胶囊大、中剂量能够降低骨质疏松模型大鼠血清ALP的含量,能够升高骨质疏松模型大鼠血清Ca的含量,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.05)。
表2 本发明胶囊对骨质疏松模型大鼠股骨骨密度的影响(n=10)(X±SD)
注:与模型组比较※P<0.05,※※P<0.01, ※※※P<0.001
结果表明,维A酸(70mg.kg-1.d-1)灌胃2周后,即造模2周后,大鼠股骨骨密度明显降低,与空白组比较差异性显著(P<0.05);本发明胶囊能够升高骨质疏松模型大鼠股骨的骨密度,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。
二、对大鼠股骨骨折愈合的影响
取SD大鼠150只, SPF级,雌雄各半,随机分为3批,每批5组,每组10只,分别为本发明胶囊大、中、小剂量组、模型对照组和骨松宝胶囊对照组。各组大鼠借助骨折器,建立股骨闭合性骨折模型,除模型对照组每天给予生理盐水灌胃外,其余各组分别灌服相应剂量的药物,第一批给药7天,第二批给药14天,第三批给药30天。每批分别于最后一天给药后1h处死,小心取下骨折股骨,完成X线拍摄,进行拍摄后,将右侧股骨标本骨折端骨组织用10%中性甲醛固定24小时,5%的硝酸脱钙24h,自来水冲洗,石蜡包埋,切片后HE染色,显微镜下观察。
1、X线读片结果 第7天,骨折线清晰可见,各组无区别;第14天,骨折断端已有少量纤维连接,骨折线模糊,各组之间无明显差别;第30天,本发明胶囊大剂量组骨皮质连续,骨折断端呈梭形,骨折线模糊,骨痂生长明显,模型组骨折线模糊但仍可看到不连续的骨皮质。
2、 组织学观察 模型组骨松保胶囊组和本发明胶囊小剂量组均可见不同阶段骨痂形成,骨痂疏密不等,所形成的骨小梁宽窄不一,其周围见数量不等的骨母细胞围绕,后两组在骨小梁的周围还有破骨细胞围绕;本发明胶囊中剂量和大剂量组可见不同阶段骨痂形成,骨痂较致密,所形成的骨小梁较宽,且宽窄不一,其周围见数量较多的骨母细胞和破骨细胞围绕(照片附后)。
三、对去卵巢致大鼠骨质疏松症的作用
采用3月龄雌性Wistar大鼠双侧卵巢切除建立骨质疏松症模型,以骨松宝为阳性对照药物,考察本发明胶囊对卵巢切除骨质疏松大鼠的作用。方法:卵巢切除后2天,将卵巢切除大鼠随机分为6组: 假手术组(sham) ,模型组(OVX) ,骨松宝组(ESG) ,低剂量组,中剂量组,高剂量组, Sham和OVX组给予0.5%的CMC。术后2天开始给药,每日灌胃一次,连续灌胃90天。
指标测定:末次给药24 h后,收集血样、左右侧胫骨、股骨和腰椎,子宫称重,计算子宫指数。采用全自动生化分析仪测定血清中Ca、P、Mg含量和AKP的活性;称取左侧股骨干重和灰重,计算灰重与干重比值(灰重系数)。 结果: (1)与Sham组比较,OVX组大鼠股骨远端BMD和股骨灰重系数明显降低,腰椎BMD变化不明显;与OVX组比较,本发明胶囊各组均能显著增加大鼠股骨远端BMD和股骨灰重系数,防止去卵巢引起的骨质疏松骨量丢失,高剂量组对灰重系数的影响优于低剂量组;阳性对照组能明显增加股骨灰重系数。(2)与Sham组比较,OVX组血清中AKP活性含量明显升高;与OVX组比较,本发明胶囊各剂量组均能显著降低骨转换生化指标AKP、NTX;阳性对照组也能明显降低AKP和NTX。 (3)与Sham组比较,OVX组大鼠血清中Ca含量下降明显,血清P和Mg含量无变化,骨灰中Ca、P、Mg含量显著下降;与OVX组比较,本发明胶囊各组均能显著增加骨灰中Ca、P、Mg的含量,ESG组能明显升高骨灰中Ca、P、Mg的含量。结论: , 本发明胶囊能明显提高卵巢切除大鼠的骨量,改善骨组织微结构的退化,降低骨转换,增加骨矿中Ca、P、Mg含量,且具有一定的剂量依赖性。本发明胶囊对卵巢切除大鼠骨质疏松症的作用机制可能与抑制骨吸收及调节体内微量元素的含量相关。这些机制与雌激素类似,本发明胶囊对去卵巢大鼠子宫重量无明显影响,提示,本发明胶囊治疗骨质疏松具有优于雌激素的组织选择性。
四、镇痛作用
1、热板法
调节热板测痛仪温度在50℃±0.5℃,将小鼠放入热板测痛仪外罩内,记录从放入热板测痛仪外罩至出现舔后足所需时间,作为该小鼠的痛阈值,30秒内不出现舔足者,5秒内出现舔足者或跳跃者弃之不用,取预选合格的昆明小鼠50只,随机分为5组,重新测痛阈一次,将两次痛阈的平均值作为该鼠给 药前的痛阈值。5组分别为本发明胶囊大、中、小剂量组、氨酚待因组以及空白对照组。除空白对照组每天给予生理盐水外,其余各组分别给予相应剂量的药物共7天,最后一天给药后30min测定小鼠痛阈值,若小鼠在热板上60秒仍无痛觉反应,应即取出按60秒计记,然后计算痛阈提高百分率,实验结果见表3。
痛阈提高百分率=[(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值]×100%
表3 本发明胶囊的镇痛作用(热板法 X±SD)
注:与给药前比较※P<0.05,※※P<0.01, ※※※P<0.001
与空白组比较◇P<0.05,◇◇P<0.01,◇◇◇P<0.001
试验结果表明,本发明胶囊大、中、小剂量能够不同程度提高小鼠的痛阈和痛阈提高百分率,与空白组和给药前比较均有显著性差异(P<0.001或P<0.01)。
2、冰乙酸扭体法
选用体重18~22g昆明种小鼠50只,雌雄各半,设本发明胶囊大、中、小 剂量组,空白对照组和阿司匹林组。除空白对照组每天给予生理盐水外,其余各组分别给予相应剂量的药物共7天,最后一天给药后30分钟各鼠腹腔注射0.6%醋酸液0.2ml/只,观察注射后10分钟内出现扭体反应次数,并计算镇痛百分率,实验结果见表4。
镇痛百分率=[(空白组扭体次数-本发明胶囊组扭体次数)/空白组扭体次数]×100%
表4 本发明胶囊的镇痛作用(扭体法 X±SD)
注:与空白组比较 ◇P<0.05,◇◇P<0.01,◇◇◇P<0.001
结果表明,本发明胶囊大、中、小剂量能够不同程度减少冰乙酸所致的小鼠扭体反应次数,提高镇痛百分率,与空白组比较均有显著性差异(P<0.001、P<0.01和P<0.05)。
五、抗炎试验
1、毛细血管通透性试验
按Whittle法。取健康小鼠50只均分5组,设本发明胶囊大、中、小剂量组,空白对照组和阿司匹林组。除空白对照组每天给予生理盐水,其余各组分别给予相应剂量的药物共7天,阳性对照组阿司匹林给药1次,最后一天各组给药后30分,各鼠均于尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g 体重, 30分钟后脱颈椎处死,剪开腹部皮肤肌肉,用6ml生理盐水分数次洗涤腹腔,吸管吸出洗涤液,合并后加入生理盐水至10ml,3000rpm离心15分钟,取上清液于590nm比色测定,利用标准曲线和回归方程(标准曲线和回归方程利用伊文思蓝生理盐水溶液不同浓度对应的吸光度值求得)进行计算各样品的染料浓度。实验结果见表5。
表5 本发明胶囊抗炎作用(毛细血管通透性试验 X±SD)
与空白组比较◇P<0.05,◇◇P<0.01,◇◇◇P<0.001
伊文思蓝生理盐水溶液尾静脉注射后,本发明胶囊能够减少小鼠腹腔渗入之染料量,其中大剂量组与空白组比较差异性显著(P<0.05)。
2、对炎症大鼠足跖肿胀的影响
取SD大鼠60只, SPF级,雌雄各半,随机分为6组,每组10只,分别为本发明胶囊大、中、小剂量组、空白对照组、造模组和骨松宝胶囊对照组,先用电子数显外径千分尺测量各组大鼠右足垫厚度作为正常值后,各组大鼠均于右足垫部皮内注射完全角叉菜胶(FCA)复制炎性肿胀模型(0.1ml/只),各组按设定剂量开始给药,连续给药7天,在末次给药后1h、2 h、3 h、4 h、 5 h、6 h分别测量各组大鼠右足垫厚度,记录结果,并按以下公式计算肿胀率和肿胀抑制率。试验结果见表6。
肿胀率(%)=(致炎后的足垫厚度-致炎前的足垫厚度)÷致炎前的足垫厚度×100% 。
药后1h~3h,大、中、小剂量对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的抑制作用明显,与空白组比较均具有显著性差异(P<0.05);药后2h~6h,大剂量与中剂量对大鼠足跖肿胀的抑制作用明显,与空白组比较均具有显著性差异(P<0.05);以上试验的结果表明,本发明胶囊对角叉菜胶皮下注射所导致的足跖肿胀具有一定的抑制作用,说明该制剂具有一定的抗炎和消肿作用。
六、对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响
SD大鼠60只, 180~220g,雌雄各半,随机分成6组,即本发明胶囊大、中、小剂量组,骨松宝胶囊对照组、模型组和空白组,除空白组每天给予生理盐水,模型组只造模不给药,其余各组分别给予相应剂量的药物共7天,第7天,除空白对照组外,其余各组大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液(Adr)(10ug/1ml)0.08ml/100g两次,间隔4小时,在两次注射Adr之间将大鼠浸入冰水内5分钟造成急性血瘀模型,处置后停食,次日各组大鼠用乙醚麻醉,从股静脉取血,用肝素抗凝(50mg/ml,0.5ml/只),血液流变仪器快速测定大鼠血液流变学各项指标,结果见表7。
表6本发明胶囊对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响(X±SD)
续表 本发明胶囊对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响(X±SD)
续表 本发明胶囊对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响(X±SD)
注:与模型组比较 ※P<0.05,※※P<0.01, ※※※P<0.001
由表6可见,大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液(Adr)并浸入冰水内5分钟造成急性血瘀模型的方法是可靠的,其全血粘度高、中、低切、全血还原黏度以及血浆粘度与空白对照组比较差异显著(P<0.05);本发明胶囊对肾上腺素加冷刺激造成大鼠急性血瘀模型的血液流变学各项指标作用是明显的,其中大剂量组对全血粘度高、中、低切值、对血浆粘度以及全血还原黏度低切值的影响与模型组比较差异显著(P<0.05);大、中、小剂量对红细胞压积值的影响与模型组比较均具有显著性差异(P<0.05)。
七、试验结论
与本发明胶囊功能主治有关的主要药效学试验研究表明,该制剂具有补肾壮骨、活血通络的作用,对骨的修复和重建有重要作用,对促进骨形成和抑制骨吸收都具有重要意义,治疗骨质疏松具有优于雌激素的组织选择性。说明该制剂对骨折和骨质疏松均有一定的治疗作用。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍,本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理;同时,对于本领域的一般技术人员,依据本发明实施例,在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处,综上所述,本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (2)
1.一种用于治疗骨质疏松的中药制剂,其特征在于由以下重量份配比的原料制成:
灵芝4-6份、黄精2.5-3.5份、熟地黄1.8-2.2份、甘松1.8-2.2份、山茱萸1.8-2.2份、肉苁蓉1.8-2.2份、玉竹0.8-1.2份、佛手0.8-1.2份、黄芪0.8-1.2份、牛膝0.8-1.2份、枸杞子0.4-0.6份、三七0.4-0.6份、当归0.4-0.6份。
2.根据权利要求1所述的用于治疗骨质疏松的中药制剂,其特征在于由以下重量份配比的原料制成:
灵芝5份、黄精3份、熟地黄2份、甘松2份、山茱萸2份、肉苁蓉2份、玉竹1份、佛手1份、黄芪1份、牛膝1份、枸杞子0.5份、三七0.5份、当归0.5份。
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