CN101612192A - 独一味提取物、含有该提取物的药物组合物及质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种独一味提取物,它含有山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g。本发明还提供了一种检测独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法,它是以山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯为指标成分进行质量检测。本发明提取物药效稳定,可控性强。通过将山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯作为指标成分控制提取物的质量,药效明确,可控性强,本发明质量控制方法准确可靠、稳定可控,使用该方法测定独一味药材或制剂中山栀苷甲酯的含量能够有效地监控独一味药品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种独一味提取物及含有该提取物的药物组合物及质量控制方法,属药物领域。
背景技术
独一味是藏族习用药材,为唇形科植物独一味Lamio-phlomis rotata(Benth.)Kudo的根及根状茎、全草,生长于海拔3000m以上的高原或高山上。独一味性微寒,味苦,有小毒;功效:活血,行瘀消肿,止痛;主治跌伤筋骨,闪腰挫气,关节积黄水。其化学成分有:黄酮类成分,环烯醚萜类化合物,苯乙醇苷类等,报道的药理活性有,镇痛作用、止血作用、抗炎作用、抗肿瘤,对骨髓粒系祖细胞(CFU-D)的影响(见 张凤等,独一味的化学成分及药理作用,药学实践杂志2008年第26卷第3期)。
关于独一味及制剂的质量控制方法,《中国药典》2005年版一部(第184和541页)收载有独一味药材和独一味胶囊剂,规定了黄酮类成分(木犀草素和/或总黄酮)的检测项目。众所周所,从植物中获得纯的有用价值的化合物极为困难,成本很高,同时也为了避免难以预料的副作用,一般不使用植物中的有效纯化合物,而使用药用植物提取物直接作用药用原料,成本低而且应用简便。但植物提取物的一个缺陷是,由于植物采收季节和产地不同都会造成有效成分含量的波动,同时,如果主要有效成分及其含量不清楚,都会给药品的质量控制造成很大困难,因此,为了保持植物药的质量稳定,清楚知道植物中各基本药效成分及其含量是很重要的。由于黄酮类成分并非是独一味制剂中的主要活性成分之一,因此仅仅通过对黄酮类成分的质量控制,尚不能完全监控独一味制剂的质量。
山栀苷甲酯是独一味中环烯醚萜类化合物之一,张承忠等人(藏药独一味中的环烯醚萜甙.中草药.1992年第23卷第10期第509、510和560页)首次从藏药独一味中得到山栀苷甲酯。8-o-乙酰山栀苷甲酯是从独一味根的正丁醇提取物中分得4个环烯醚萜苷(见:易进海等,藏药独一味根环烯醚萜甙的研究,药学学报,1997,32(5):357-360),目前,尚没有将两个化合物同时作为质量控制的指标成分报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种独一味提取物,本发明的另一技术方案是提供了含有该提取物的药物组合物及其质量控制方法。
本发明提供一种独一味提取物,它含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g。
它含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯的总重量为6.1-19.7mg/g。
进一步优选地,山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.27-5.25。
更进一步优选地,山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.81-5.25。
本发明独一味提取物是独一味药材的水或有机溶剂提取物。
本发明还提供了一种药物组合物,它含有所述的独一味提取物为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。
本发明还提供了一种检测独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法,它是以山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯为指标成分进行质量检测。
其中,独一味提取物中含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g。
控制独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法,是以山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯为指标成分进行质量控制。
本发明提取物药效稳定,可控性强。通过将山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯作为指标成分控制提取物的质量,药效明确,可控性强,本发明质量控制方法准确可靠、稳定可控,使用该方法测定独一味药材或制剂中山栀苷甲酯的含量能够有效地监控独一味药品的质量。
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述,但并不限制本发明,本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形,只要不脱离本发明的精神,均应属于本发明所附权利要求的范围。
具体实施方式
实施例1本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加水煎煮3次,第1次2小时,第2、3次分别为1小时,每次加水量为8倍,合并煎液,滤过,滤液浓缩为相对密度1.30(85℃)的清膏,在80℃以下干燥,粉碎,得膏率为15-25%。
实施例2本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加20倍水浸渍24小时,水温为85℃,滤过,滤液浓缩为相对密度1.30(85℃)的清膏,干燥,粉碎,得膏率为12-18%
实施例3本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,在压力提取罐中加水加压提取3次,第1次2小时,第2、3次分别为1小时,每次加水量为8倍,温度为120℃,合并提取液,滤过,浓缩,干燥,粉碎,得膏率为18-25%。
实施例4本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加水煎煮3次,第1次2小时,第2、3次分别为1小时,每次加水量为8倍,合并煎液,滤过,浓缩,加乙醇至溶液含醇量为30%,静置12小时,取上清液,浓缩,干燥,粉碎,得膏率为10-18%。
实施例5本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加20倍量70%乙醇渗漉提取,提取液回收乙醇,浓缩,干燥,粉碎,得膏率为12-20%。
实施例6本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加20倍量30%乙醇渗漉提取,提取液回收乙醇,浓缩,干燥,粉碎,得膏率为12-20%。
实施例7本发明药物原料提取物的制备
取独一味药材1000g,粉碎,加8倍量70%乙醇回流提取3次,提取液回收乙醇,浓缩,干燥,粉碎,得膏率为15-23%。
实施例8本发明药物颗粒剂的制备
取独一味1000g,粉碎,加水煎煮三次,每次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成相对密度为1.30的清膏,在80℃以下干燥,加入适量的淀粉,制成颗粒,干燥,装入胶囊,制成1000粒,即得。
实施例9本发明独一味药材质量控制方法
山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为235nm。理论板数按山栀苷甲酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品适量,加甲醇制成每1ml含山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯各30μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备 取独一味药材(过三号筛)0.6g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流60分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
实施例10独一味提取物中山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯的含量测定
山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为235nm。理论板数按山栀苷甲酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品适量,加甲醇制成每1ml含山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯各30μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取独一味提取物,研细,取约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流60分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
取08070546、08080358两批药材,分别采用以上7种提取方法提取,测所得浸膏的山栀苷甲酯含量,结果如下:单位(mg/g)
方法1:取独一味药材1000g,粉碎,加水煎煮3次,第1次2小时,第2、3次分别为1小时,每次加水量为8倍,合并煎液,滤过,浓缩,加乙醇至溶液含醇量为30%,静置12小时,离心,取下层固体,干燥,粉碎即得。
方法2:直接将独一味药材超微粉碎所得粉末。
方法3:取独一味药材1000g,粉碎,加水煎煮3次,第1次2小时,第2、3次分别为1小时,每次加水量为8倍,合并煎液,滤过,浓缩,按药液体积加入0.4%的壳聚糖做澄清剂,静置12小时,取上清液,浓缩,干燥,粉碎即得。
以下通过药效学试验进行证明本发明的有益效果。
试验例1 本发明独一味提取物止血、止痛试验
1.实验目的:
采用醋酸致小鼠扭体法、小鼠断尾出血法、二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验,比较样品1-31独一味提取物的镇痛、止血、抗炎作用。
2.实验材料
(1)药物:样品1-31:独一味提取物,为棕色至棕褐色浸膏,由本实验室自制,临用前均用生理盐水配置成适当浓度备用;复方对乙酰氨基酚片:白色片剂,规格:0.3g/片,吉林省百康药业有限责任公司生产,批号:20060102,临用前用生理盐水配制成适当浓度,备用;云南白药:白色粉末,规格:4g/瓶,云南白药集团有限公司生产,批号:071054,临用前用生理盐水配制成适当浓度,备用。醋酸地塞米松片,浙江仙据制药股份有限公司,规格:0.75mg/片,批号080182。
(2)动物:昆明种小鼠,体重18~22g。由四川省中药研究所提供,动物使用许可证号:SCXK(川)2008-10。动物级别:三级。
(3)试剂:冰醋酸:规格:500ml/瓶,分析纯,由中国成都化学试剂厂产品,批号:20070503,吸取冰醋酸0.3ml加入生理盐水至50ml,配成0.6%醋酸溶液供实验用。生理盐水:规格:500ml/瓶,无色澄明液体,由四川科伦药业股份有限公司生产,批号:B070414。二甲苯,成都科龙化工试剂厂,批号20050702。
(4)仪器:FA1004型电子天平,量程:100g,精密度:0.1mg,上海良平仪器仪表有限公司生产。秒表:上海秒表厂产品。
3.实验方法和结果
3.1对醋酸致小鼠疼痛反应的影响:取昆明种小鼠330只,雌雄各半,按体重性别随机分成10组,每组10只,雌雄各半。空白对照组每鼠口服灌胃生理盐水10ml/kg体重,阳性对照组灌服复方对乙酰氨基酚0.23g/kg(按照处方中阿司匹林的含量计)体重,给药各组分别灌服样品1-31组3g(生药)/kg体重。每日给药1次,连续给药3天,末次给药后30min,各组小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/鼠,观察记录各鼠在腹腔注射醋酸后15min内扭体次数,进行组间比较其显著差异性。结果见表1。
表1 对醋酸致小鼠疼痛反应的影响
与空白对照组比较:P*<0.05,P**<0.01
表1结果表明,与空白对照组比较,样品1-31之中,除样品15、16、18、19、21、22、23,其余样品均能抑制醋酸所致小鼠疼痛,其中样品1-14、24-27有非常显著差异(P<0.01),样品17、20、28-31有显著的差异(P<0.05)。3.2对小鼠断尾出血时间的影响:取昆明种小鼠330只,按体重性别随机分成10组,每组10只,雌雄各半。阴性对照组每鼠口服灌胃生理盐水10ml/kg体重,阳性对照组灌服云南白药1.2g(生药)/kg体重,给药各组分别灌服样品1-31组3.0g(生药)/kg体重。每日给药1次,连续给药3天,末次给药后1h,用利剪将小鼠尾尖3mm处剪断,放入37℃生理盐水中,让血液自行溢出时开始计时,直到出血自行停止为止,计算出血时间,进行组间比较其显著差异性。
实验结果见表2。
表2 对小鼠断尾出血时间的影响
与空白对照组比较:P*<0.05,P**<0.01
表2结果表明,与空白对照组比较,样品1-31之中,除样品15、16、18、19、21、22、23,其余样品均能缩短断尾小鼠的出血时间,其中样品1-14、24-27有非常显著差异(P<0.01),样品17、20、28-31有显著的差异(P<0.05)。
3.3药物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
取雄性小鼠,20~24g,随机分为空白对照组、阳性对照组,样品1-31组,每组10只。各受试药物组小鼠均按表20-1设计的剂量以20ml/kg的给药容量灌胃给药,连续5天,空白对照组给予等容积蒸馏水,阳性对照组灌胃予醋酸地塞米松(77mg/kg),于末次给药后1h各组小鼠右耳廓两面均匀涂抹二甲苯,每只30μl,2h后脱颈椎处死小鼠,沿耳廓边缘剪下左、右两耳,5mm打孔器在两耳相同部位取下耳片,电子分析天平称重,用右耳片重量减去左耳片重量,即得到肿胀度,并计算耳肿胀抑制率。实验结果见表3。耳肿胀抑制率={(空白对照组肿胀度-药物组肿胀度)/空白对照组肿胀度}×100%
表3 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(x±s)
与空白对照组相比:*P<0.05,**P<0.01
表3结果表明,与空白对照组比较,样品1-31之中,除样品15、16、18、19、21、22、23,其余样品均能缩短断尾小鼠的出血时间,其中样品1-14、17、20、24-27有非常显著差异(P<0.01),样品28-31有显著的差异(P<0.05)。
4 结论
通过镇痛、止血和抗炎三个药效学试验结果表明,本发明独一味提取物含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g时,发挥了明显的药效。其中,以含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯的总重量为6.1-19.7mg/g的药效较佳。其中,山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.27-5.25时,具有显著的药效,优选地,山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.81-5.25,具有极显著的药效。
综上所述,本发明提取物药效稳定,可控性强。通过将山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯作为指标成分控制提取物的质量,药效明确,可控性强,本发明质量控制方法准确可靠、稳定可控,使用该方法测定独一味药材或制剂中山栀苷甲酯的含量能够有效地监控独一味药品的质量。
Claims (9)
1、一种独一味提取物,其特征在于:它含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g。
2、根据权利要求1所述的独一味提取物,其特征在于:它含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯的总重量为6.1-19.7mg/g。
3、根据权利要求2所述的独一味提取物,其特征在于:山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.27-5.25。
4、根据权利要求3所述的独一味提取物,其特征在于:山栀苷甲酯与8-o-乙酰山栀苷甲酯的比值范围为:0.81-5.25。
5、根据权利要求1-4任一项所述的独一味提取物,其特征在于:它是独一味药材的水或有机溶剂提取物。
6、一种药物组合物,它含有权利要求1-5任一项所述的独一味提取物为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
7、根据权利要求6所述的药物组合物,其特征在于:所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。
8、一种检测独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法,其特征在于:是以山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯为指标成分进行质量检测。
9、根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于:独一味提取物中含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯,总重量不低于5mg/g。
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