CN101857619A

CN101857619A - 一种裂环环烯醚萜新化合物及其在制备抗炎药物中的应用

Info

Publication number: CN101857619A
Application number: CN200910169795A
Authority: CN
Inventors: 陈�光
Original assignee: BEIJING FATAI TIMES PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING FATAI TIMES PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2009-09-03
Filing date: 2009-09-03
Publication date: 2010-10-13
Anticipated expiration: 2029-09-03
Also published as: CN101857619B

Abstract

本发明涉及一种裂环环烯醚萜新化合物及其在制备抗炎药物中的应用，从麻花秦艽中提取分离出的一种新的化合物，它具有式I的化学结构通式和抗炎活性。本发明还涉及该化合物或其药学上可接受的盐类在制备药物方面的用途，尤其是在抗炎药物中的用途。本发明还涉及以该化合物为主要组分的药物组合物。

Description

一种裂环环烯醚萜新化合物及其在制备抗炎药物中的应用

技术领域

本发明涉及从麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim.)中提取分离出的一种裂环环烯醚萜新化合物及其衍生物。本发明还涉及该化合物或其药学上可接受的盐类在制备药物方面的用途，尤其是在制备抗炎药物中的用途。本发明还涉及以该化合物或其药学上可接受的盐类为主要组分的药物组合物。具体而言，本发明涉及式I的化合物：

背景技术

秦艽是我国重要的传统中药，始载于《神农本草经》，列为中品，“秦艽主寒热邪气，寒湿风痹，肢节痛，下水，利小便”。临床治疗用于风湿痹痛，筋脉拘挛，骨节酸痛，日晡潮热，小儿疳积发热。《中华人民共和国药典》2005年版一部(中药)规定的秦艽药材原植物包括四种植物：大叶秦艽(Gentiana macrophyllaPall.)，粗茎秦艽(Gentiana crassicaulis Duthie.)，小秦艽(Gentiana dahuricaFisch.)，麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim.)。目前，各国学者对大叶秦艽研究较多，发现其化学成分主要为环烯醚萜类化合物。药理学研究发现秦艽及其环烯醚萜成分具有很好的抗炎活性，能够显著降低体内前列腺素，TNF-α等炎性因子的水平。这些均从分子水平证明了秦艽的临床疗效，也为今后进一步的深入研究奠定了理论基础。但是，目前为止，除了对大叶秦艽进行了较多的研究以外，对麻花秦艽还没有系统深入的研究，仅对其进行了初步的化学成分和药理活性的研究。

麻花秦艽(Gentiana Straminea Maxim.)藏药名“解吉嘎保”，性味：苦、平，根部入药，有祛风湿，清湿热，止痹痛之功能。我们在针对麻花秦艽的系统化学成分研究中，分离鉴定了一个新的环烯醚萜化合物I。药理活性研究结果表明，化合物I具有良好的抗炎作用。目前，尚未有类似本发明所述化合物及其衍生物化学结构的报道。经过试验，确定了化合物I合理的制备技术，利用该技术制备的药物可以使该化合物的含量高于90％(重量)。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种通式I的新化合物：

本发明的目的之二是提供一种化合物I的制备方法，本发明的制备方法可以使化合物I在药物中的含量高于50％(重量)，包括以下步骤：

选用龙胆属植物麻花秦艽(Gentiana Straminea Maxim.)的干燥根，用一定量的溶剂回流提取过滤；合并滤液并减压浓缩至一定密度范围的浸膏；将浸膏水溶，依次用不同极性的溶剂萃取；合并不同极性的萃取液，减压浓缩后置于真空干燥箱中干燥得干燥的不同萃取层浸膏。将干燥的正丁醇浸膏进行硅胶色谱分离，氯仿-甲醇混合洗脱剂梯度洗脱，分份收集，每份为相同的体积，真空浓缩，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；含有化合物I流份合并进行色谱分离，混合洗脱剂梯度洗脱分份收集流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，含有化合物I的流份合并，回收溶剂，甲醇洗涤既得化合物I。

上述方法获得的提取物中化合物I的含量大于90％。

本发明的方法优选包括以下：

选用龙胆属植物麻花秦艽(Gentiana Straminea Maxim.)的干燥根5kg，用8倍量体积份的70％乙醇回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，过滤；合并滤液并减压浓缩至密度为1.3左右的浸膏；将浸膏水溶，依次用石油醚(沸点为60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；合并不同极性的萃取液，减压浓缩后置50-70℃的真空干燥箱中干燥得干燥的正丁醇浸膏230g。将干燥的正丁醇浸膏进行硅胶色谱分离，即色谱分离I，氯仿-甲醇50∶1→30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱，分份收集，每份为100ml，真空浓缩，共收集873份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份376-418合并进行硅胶色谱分离，即色谱分离II，氯仿-甲醇30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱分份收集流份，每份为100ml，真空浓缩，共收集97份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份8-44合并，回收溶剂，甲醇反复洗涤，即得化合物I。

选用龙胆属植物麻花秦艽(Gentiana Straminea Maxim.)的干燥根5kg，用8倍量体积份的70％乙醇回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，过滤；合并滤液并减压浓缩至密度为1.3左右的浸膏；将浸膏水溶，依次用石油醚(沸点为60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；合并不同极性的萃取液，减压浓缩后置50-70℃的真空干燥箱中干燥得干燥的正丁醇浸膏230g。将干燥的正丁醇浸膏进行硅胶色谱分离，即色谱分离I，氯仿-甲醇50∶1→30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱，分份收集，每份为100ml，真空浓缩，共收集873份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份376-418合并进行反向硅胶ODS色谱分离，即色谱分离II，甲醇-水10∶90→20∶80→40∶60→70∶30→90∶10→100∶0混合洗脱剂梯度洗脱分份收集，每份为30ml，真空浓缩，共收集67份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份22-53合并，回收溶剂，甲醇反复洗涤，即得化合物I。

上述制备方法只是一种非限定性举例，本发明包括任何使化合物I含量大于50％的提取和制备方法。

本发明的目的之三是提供通式I的化合物或其药学上可接受的盐类在制备抗炎药物中的用途。

本发明目的之四是提供含有治疗有效量的通式I的化合物或其药学上可接受的盐类的药物组合物。本发明提供的以化合物I为主要组成的提取物可以作为有效成分与多种药用辅料(稀释剂、润滑剂、甜味剂、崩解剂等)配合，制成多种剂型的药物使用，如片剂、注射液、粉针剂、胶囊和颗粒等。

附图简介

图1：化合物I的核磁共振氢谱(¹H-NMR)谱图。

图2：化合物I的核磁共振碳谱(¹³C-NMR)谱图。

图3：化合物I的二维核磁共振谱的¹H检测的异核多键相关谱(HMBC)谱图。

具体实施方式

以下通过实施例和试验例对本发明做进一步的说明，但是本发明并不受限于这些实施例。

实施例1

实施例2

选用龙胆属植物麻花秦艽(Gentiana Straminea Maxim.)的干燥根5kg，用8倍量体积份的70％乙醇回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，过滤；合并滤液并减压浓缩至密度为1.3左右的浸膏；将浸膏水溶，依次用石油醚(沸点为60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；合并不同极性的萃取液，减压浓缩后置50-70℃的真空干燥箱中干燥得干燥的正丁醇浸膏230g。将干燥的正丁醇浸膏进行硅胶色谱分离，即色谱分离I，氯仿-甲醇50∶1→30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱，分份收集，每份为100ml，真空浓缩，共收集873份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份376-418合并进行反向硅胶ODS色谱分离，即色谱分离II，甲醇-水10∶90→20∶80→40∶60→70∶30→90∶10→100∶0混合洗脱剂梯度洗脱分份收集，每份为30ml，真空浓缩，共收集67份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份22-53合并，回收溶剂，甲醇反复洗涤，即得化合物I。化合物I的理化数据为：

分子组成：C₂₉H₃₆O₁₇；分子量：656；电喷雾质谱ESI-MS：m/z[M-H]^-655.9，m/z[M+Na]⁺ 679.7；根据附图1和附图2，核磁共振氢谱¹H-NMR(in DMSO-d₆)和核磁共振碳谱¹³C-NMR(in DMSO-d₆)数据见表1：

表1：化合物I¹H-NMR和¹³C-NMR数据表

续表1：化合物I¹H-NMR和¹³C-NMR数据表

结合附图3，即结合二维核磁共振谱的¹H检测的异核多键相关谱HMBC谱，可以看出1位和1′位，6′和1″有相关，据此可鉴定出化合物的结构为式I。

药效学试验1：对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

受试药物：化合物I，白色固体粉末，以生理盐水为溶剂配置成1％的生理盐水溶液，于4℃下密闭保存备用。

试验动物：昆明种小鼠，18-22g，80只，随机分为4组，每组20只。

试验对照药品和试剂：注射用生理氯化钠溶液(空白对照)，氢化可的松注射剂(阳性对照)，二甲苯(分析纯)。

试验方法：昆明种小鼠80只，随机分为四组，即空白对照组、氢化可的松阳性对照组和化合物I给药组。每天8:00点分别腹腔注射化合物I(5ml/kg、10ml/kg)、等体积的生理盐水和20mg/kg的氢化可的松，每天1次，连续4天，末次给药1.5小时后用二甲苯30μl均匀涂于小鼠右耳两侧，30min后处死小鼠，剪下两耳，用9mm打孔器于两耳相同部位取下两耳片，置精密天平上称重，计算肿胀度(肿胀度＝右耳片重-左耳片重)。结果见表2：

表2化合物I对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与生理氯化钠溶液相比较，^*P＜0.01

统计结果表明，本发明提供的化合物I大、中剂量组均具有明显的对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用，当用量为100mg/kg时，效果接近20mg/kg的氢化可的松。

药效学试验2：对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的影响

受试药物：化合物I，白色固体粉末，以生理盐水为溶剂配成1％的生理盐水溶液，于4℃下密闭保存备用。

试验动物：Sprague-Dawley(SD)大鼠，180-220g，40只，雌雄各半，按性别和体重随机分为4组，每组10只。

试验对照药品和试剂：注射用生理氯化钠溶液(空白对照)，氢化可的松注射剂(阳性对照)，角叉菜胶(分析纯)。

试验方法：SD大鼠40只，按性别和体重随机分为四组，即空白对照组、氢化可的松阳性对照组和化合物I给药组。每天8:00点分别腹腔注射化合物I(5ml/kg、10ml/kg)、等体积的生理盐水和20mg/kg的氢化可的松，每天1次，连续4天；末次给药后1.5小时后在大鼠右后足趾皮下注射1％的角叉菜胶，每只1ml，并与注射前和注射后0.5，1，2，3，5小时用游标卡尺测量大鼠足趾同一部位厚度。试验结果见表3：

表3化合物I对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的影响

注：与生理氯化钠溶液相比较，^aP＜0.01，^bP＜0.01。

统计结果表明，本发明提供的化合物I大、中剂量组均能够明显的抑制角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀反应，加速炎症反应的的消退，当用量为100mg/kg时，效果接近20mg/kg的氢化可的松。

Claims

1.一种通式为I的新化合物，其化学结构式如下：

2.权利要求1的化合物的制备方法，其特征在于该方法为：

以龙胆属植物麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim.)的干燥根为原料，用8倍量体积份的70％乙醇回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，过滤；合并滤液并减压浓缩至密度为1.3左右的浸膏；将浸膏水溶，依次用石油醚(沸点为60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；合并不同极性的萃取液，减压浓缩后置50-70℃的真空干燥箱中干燥得干燥的正丁醇浸膏230g。

将干燥的正丁醇浸膏进行硅胶色谱分离，即色谱分离I，氯仿-甲醇50∶1→30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱，分份收集，每份为100ml，真空浓缩，共收集873份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份376-418合并进行色谱分离，即色谱分离II，混合洗脱剂梯度洗脱分份收集流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，含有化合物I的流份合并，回收溶剂，甲醇洗涤既得化合物I。

3.根据权利要求2所述的色谱分离II，其特征在于：

色谱分离的填料为硅胶，氯仿-甲醇30∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1混合洗脱剂梯度洗脱分份收集，每份为100ml，真空浓缩，共收集97份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份8-44合并，回收溶剂，甲醇反复洗涤，即得化合物I。

4.根据权利要求2所述的色谱分离II，其特征在于：

色谱分离的填料为反向硅胶ODS，甲醇-水10∶90→20∶80→40∶60→70∶30→90∶10→100∶0混合洗脱剂梯度洗脱分份收集，每份为30ml，真空浓缩，共收集67份流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；流份22-53合并，回收溶剂，甲醇反复洗涤，即得化合物I。

5.通式I的化合物在制备抗炎药物中的应用。

6.一种药物组合物，其特征在于含有治疗有效量的通式I的化合物或其在药学上可接受的盐类以及药物辅料。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中通式I的化合物或其在药学上可接受的盐类的含量在50％以上，尤其是90％以上。