CN101134070A - 一种治疗肝炎的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗肝炎的药物及其制备方法。本发明研究人员将叶下珠与胡黄连自组一个治疗肝炎的方剂,用乙醇提取,提取液浓缩,经过大孔树脂柱分离纯化,得到有效部位,将该有效部位加入适宜的药用辅料制成制剂。经大量的药理实验研究表明,该制剂具有更强的抗病毒作用和修复肝损伤作用。本发明制备工艺选用的提取溶媒成本低,环境污染小,适合大工业生产。药理实验研究表明,本发明处方制剂具有很好的抗乙肝病毒的作用。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域,具体涉及一种治疗肝炎的药物及其制备方法。
背景技术
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种严重的传染性疾病,我国有多达7亿的人群感染过乙肝病毒,其中有一亿多人终生携带病毒,3千多万人成为乙肝患者。目前乙型肝炎的治疗,西医主要采用抗病毒、免疫调节、改善肝功能和抗肝纤维化等综合疗法,其中抗病毒是最主要、最关键的措施。但这些治疗方法存在复发率较高,不良反应大等缺点,而中医中药不良反应较小,可长期服药。近年来,中药治疗HBV感染取得良好的疗效。研究显示叶下珠、胡黄连、苦参、甘草等多种中药都具有抗肝炎病毒的作用。目前,叶下珠、胡黄连在治疗乙型肝炎疾病方面已经取得了很大进展,临床疗效确切,是治疗乙型肝炎疾病的首选良药。
叶下珠为大戟科叶下珠属植物叶下珠的干燥全草,性凉、微苦,具有平肝清热、利水解毒之功效。主要用于治疗传染性肝炎、肠炎、痢疾、肾炎水肿、小儿疳积等。研究表明,叶下珠含有黄酮、木脂素、萜类、鞣质、生物碱等多种化合物。胡黄连是玄参科植物胡黄连的干燥根茎,为我国传统中药之一,最早记载于唐《新修本草》之中,具有主骨蒸劳热,补肝胆等多方面的药理作用。研究表明,胡黄连中含有环烯醚萜苷类、葫芦素类、酚苷类等多种成分。经大量文献检索发现,针对叶下珠和胡黄连单味药的研究很多,但是对二味中药的组方并没有检索到相关信息。
发明内容
本发明人员在以往研究的基础上,将叶下珠与胡黄连自组一个治疗肝炎的方剂,用乙醇提取,提取液浓缩,经过大孔树脂柱分离纯化,得到有效部位,将该有效部位加入适宜的药用辅料制成制剂。经大量的药理实验研究表明,该制剂具有更强的抗病毒作用和修复肝损伤作用。本发明制备工艺选用的提取溶媒成本低,环境污染小,适合大工业生产。药理实验研究表明,本发明处方制剂具有很好的抗乙肝病毒的作用。
本发明的目的在于提供一种疗效确切、生物利用度高、毒副作用小的治疗肝炎的药物。
本发明的目的还在于提供一种治疗肝炎药物的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现:
一、制备工艺
1.处方的组成及重量份配比:
叶下珠20-160重量份,胡黄连20-160重量份;
2.有效部位的制备:
将叶下珠、胡黄连药材粉碎成粗粉,用40%-85%的乙醇回流提取1-3次,每次1-2小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用50%-90%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位;
3.制剂制备:
取有效部位,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
本发明制备工艺中所用的大孔吸附树脂可以是极性或者非极性的树脂,如苯乙烯型树脂、甲基苯乙稀型树脂、乙基苯乙烯型树脂、聚丙乙烯型树脂、丙烯腈型树脂,具体可采用D-101型、HP-20型、LD605型、SP-207型、AB-8型、LD-605型、HP-10型、NKA-9型、DA型。
二、成分检测
1.叶下珠总多酚的含量测定
对照品溶液的配制:取鞣云实精对照品约20mg,精密称定,置100ml量瓶中,加入甲醇2ml,溶解完全,加水稀释至100ml;摇匀,精密量取10ml,置100量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml含鞣云实精0.02mg)。
供试品溶液的制备:精密称取叶下珠总多酚提取中间体,加入甲醇2ml,超声5min,加水稀释至100ml,摇匀,过滤;精密量取续滤液10ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
测定法:分别精密量取对照品溶液、样品溶液1ml,置10ml具塞试管中,加入去离子水2ml,混匀;然后加入0.016M的K3Fe(CN)6溶液1ml,随后加入0.02M的FeCl3的0.1M的盐酸溶液1ml(与前者加入时间间隔控制在1min),混匀;反应15min,加入稳定剂5ml,混匀后测溶液在700nm处的吸光度值(水溶液做空白),计算含量,即得。
本品含总多酚按鞣云实精(C28H24O17)计,不得少于15%。
2.鞣云实精的含量测定
照高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.5%醋酸溶液(20∶80)为流动相;检测波长268nm。理论板数按鞣云实精计应不低于2000。
对照品溶液的配制:取鞣云实精对照品10mg,精密称定,置100ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,即得(每1ml含鞣云实精100μg)。
供试品溶液的配制:精密称取供试品约100mg,置100ml量瓶中,加入甲醇10ml,超声5min,用流动相定稀释至刻度,摇匀,用0.45μm滤膜滤过,即得。
测定法:分别精密吸取上述溶液20μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
本品含叶下珠以鞣云实精(C28H24O17)计不得少于3%。
三、优选实验
本发明所选用的大孔吸附树脂柱型号对主药中的叶下珠总多酚和鞣云实精的含量有很大的影响,为了确保叶下珠中的有效成分充分被提取出来,本发明实验人员针对大孔吸附树脂作了优选实验,为了比较方便,将本发明制剂组中得主药最大浓度计为100%,实验结果见表1。
表1不同型号的大孔吸附树脂对主药中有效成分的影响
树脂型号 | 叶下珠总多酚 | 鞣云实精 |
D-101HP-20LD605SP-207NKA-9DAAB-8LD-605 | 89%92%42%22%85%38%82%45% | 36%31%11%6%32%9%37%13% |
HP-10 | 35% | 7% |
本发明所选用的大孔吸附树脂柱优选D-101型、HP-20型、AB-8型、NKA-9型四种型号的树脂。
四、药理实施例
试药:本发明制剂组(按本发明制备工艺制备,由北京联合伟华药业有限公司中药实验室提供);叶下珠胶囊(阳性对照药物,市售品)。
动物:乙型肝炎病毒转基因小鼠;Wistar大鼠,体重170-250g;NIH小鼠,雄性,体重(20±2)g;ICR小鼠,体重18-22g。
1.抗乙型肝炎病毒(HBV)作用
取8-12周龄转基因小鼠随机分为:对照组、阳性对照组、本发明制剂组,每组10只。阳性对照组灌胃给予叶下珠胶囊,给药剂量2g生药/kg,本发明制剂组灌胃给予相应药物,给药剂量2g生药/kg,对照组给予生理盐水。1次/d,30d后,处死小鼠,取肝脏和血清,分别进行肝脏组织HBV表面抗原(HBsAg)、HBV e抗原(HBeAg)检测,实验结果见表2。
表2各组小鼠肝脏组织HBsAg,HBeAg的检测结果(x±s,n=10)
测定指标 | HBsAg | HBeAg |
对照组阳性对照组本发明制剂组 | 0.782±0.0410.496±0.0310.363±0.025* | 0.625±0.0580.457±0.0460.328±0.032* |
(注:与阳性对照组比较*P<0.05)
由以上试验结果得知,本发明制剂组比市售叶下珠胶囊具有更好的药理作用。
2.对CCl4所致肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和球蛋白的影响
将Wistar大鼠随机分为:对照组、模型组、阳性对照组、本发明制剂组,每组10只。除对照组外,其余各组于实验第1天皮下注射CCl45ml/kg,以后每3天皮下注射40%油剂3ml/kg,共66天,造成CCl4肝损伤模型。除模型组外,阳性对照组在造模同时灌胃给予叶下珠胶囊,给药剂量5g生药/kg,本发明制剂组在造模同时灌胃给予相应药物,给药剂量5g生药/kg,对照组灌胃给予生理盐水。测定各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和球蛋白(GLB)值,实验结果见表3。
表3各组大鼠血清ALT、AST和GLB测定结果(x±s,n=10)
测定指标 | ALT(u/l) | AST(u/l) | GLB(g/l) |
对照组模型组阳性对照组本发明制剂组 | 75.56±6.21457.15±72.34319.65±68.47228.64±49.82* | 209.14±32.65764.32±88.33637.25±29.38518.27±65.48* | 22.17±2.6916.51±3.3832.35±5.0824.18±3.07* |
(注:与阳性对照组比较*P<0.05)
由以上试验结果得知,本发明制剂组比市售叶下珠胶囊具有更好的药理作用。
3.对CCl4所致肝损伤大鼠血清的丙二醛、超氧化物歧化酶的影响
将Wistar大鼠随机分为:对照组、模型组、阳性对照组、本发明制剂组,每组10只。除对照组外,其余各组于实验第1天皮下注射CCl45ml/kg,以后每3天皮下注射40%油剂3ml/kg,共66天,造成CCl4肝损伤模型。除模型组外,阳性对照组在造模同时灌胃给予叶下珠胶囊,给药剂量2g生药/kg,本发明制剂组在造模同时灌胃给予相应药物,给药剂量2g生药/kg,对照组灌胃给予生理盐水。测定各组大鼠血清的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)值,实验结果见表4。
表4各组大鼠血清MDA、SOD测定结果(x±s,n=10)
测定指标 | MDA(nmol/ml) | SOD(nmol/ml) |
对照组模型组阳性对照组本发明制剂组 | 229.37±31.87365.14±45.83305.72±49.27230.69±35.48* | 495.72±29.57385.26±15.94428.53±25.61487.33±20.07* |
(注:与阳性对照组比较*P<0.05)
由以上试验结果得知,本发明制剂组比市售叶下珠胶囊具有更好的药理作用。
4.对小鼠免疫性肝损伤的作用
取NIH小鼠随机分为:对照组、模型组、阳性对照组、本发明制剂组,每组10只。除对照组外,其余各组小鼠尾静脉推注0.2ml内含卡介苗(BCG)2mg(约含5.0×107个活菌)的生理盐水悬液,12天后静脉推注脂多糖(LPS)10μg。阳性对照组灌胃给予叶下珠胶囊,给药剂量2g生药/kg,本发明制剂组灌胃给予相应药物,给药剂量2g生药/kg,对照组及模型组等量生理盐水灌胃。每天灌胃1次,连用12天,末次给药12h后处死,取血和肝脾组织作检测,实验结果见表5。表5对免疫性肝炎小鼠血清ALT、肝指数、脾指数的影响(x±s,n=10)
测定指标 | ALT(u/l) | 肝指数(×10-3) | 脾指数(×10-3) |
对照组模型组阳性对照组本发明制剂组 | 31.29±3.3151.46±6.9842.49±3.5833.54±2.93* | 52.69±7.6371.35±8.9863.55±6.0451.98±3.32* | 5.04±1.9610.17±2.858.56±1.975.58±1.08* |
(注:与阳性对照组比较*P<0.05)
由以上试验结果得知,本发明制剂组比市售叶下珠胶囊具有更好的药理作用。
5.小鼠急性毒性试验
取健康ICR小鼠,体重18-22g,雌雄各半。分为阳性对照组、本发明制剂组,每组20只。灌胃给药,给药剂量按照人给药剂量的50倍,每天给药1次,连续7天,观察小鼠死亡情况,记录数据,实验结果见表6。
表6小鼠急性毒性实验
组别 | 动物数(只) | 死亡数(只) | 死亡率(%) |
阳性对照组本发明制剂组 | 2020 | 32 | 1510 |
上述实验结果表明:本发明制剂组与市售叶下珠胶囊比较具有更好的安全性。
五、制备实施例
实施例1
将叶下珠药材800g、胡黄连药材100g粉碎成粗粉,用40%的乙醇回流提取1次,提取时间1小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经D101型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用50%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例2
将叶下珠药材1400g、胡黄连药材400g粉碎成粗粉,用45%的乙醇回流提取2次,每次1.5小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经HP20型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用55%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例3
将叶下珠药材1200、胡黄连药材600g粉碎成粗粉,用50%的乙醇回流提取3次,每次2小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经LD605型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用60%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例4
将叶下珠药材2000g、胡黄连药材1600g粉碎成粗粉,用55%的乙醇回流提取2次,每次1.5小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经SP207型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用65%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例5
将叶下珠药材2000g、胡黄连药材2500g粉碎成粗粉,用60%的乙醇回流提取2次,每次2小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经AB-8型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用70%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例6
将叶下珠药材900g、胡黄连药材1800g粉碎成粗粉,用65%的乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经LD-605型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用75%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例7
将叶下珠药材1200g、胡黄连药材4200g粉碎成粗粉,用70%的乙醇回流提取2次,每次2小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经HP-10型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用80%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例8
将叶下珠药材1000g、胡黄连药材8000g粉碎成粗粉,用75%的乙醇回流提取3次,每次1小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经DA型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用85%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例9
将叶下珠药材4000g、胡黄连药材3200g粉碎成粗粉,用80%的乙醇回流提取2次,每次1小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经NKA-9型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用90%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例10
将叶下珠药材2800g、胡黄连药材3500g粉碎成粗粉,用85%的乙醇回流提取2次,每次1.5小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经AB-8型大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用90%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位。
实施例11
取有效部位150g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例12
取有效部位500g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例13
取有效部位300g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例14
取有效部位400g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例15
取有效部位100g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例16
取有效部位80g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例17
取有效部位50g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例18
取有效部位200g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例19
取有效部位250g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
实施例20
取有效部位350g,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
Claims (9)
1.一种治疗肝炎的药物及其制备方法,其特征在于制剂中有效部位含叶下珠总多酚按鞣云实精计不得少于15%;有效部位含叶下珠以鞣云实精计不得少于3%。
2.一种治疗肝炎的药物及其制备方法,其特征在于制剂中有效部位含叶下珠总多酚按鞣云实精计含量为20-65%;有效部位含叶下珠以鞣云实精计含量为5-12%。
3.一种治疗肝炎的药物的制备方法,其特征包括以下步骤:
(1)处方的组成及重量份配比:
叶下珠20-160重量份,胡黄连20-160重量份;
(2)有效部位的制备:
将叶下珠、胡黄连药材粉碎成粗粉,用40%-85%的乙醇回流提取1-3次,每次1-2小时,合并提取液,减压回收乙醇,得到乙醇浓缩液,将乙醇浓缩液经大孔吸附树脂柱进一步分离,首先用蒸馏水洗脱,洗至Molish反应为阴性,再用50%-90%浓度的乙醇洗脱,回收乙醇洗脱液,减压浓缩,得到有效部位;
(3)制剂制备:
取有效部位,加入药剂学上可以接受的药用辅料,用常规制药工艺制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
4.如权利要求2所述一种治疗肝炎的药物的制备方法,其特征在于所选用的大孔吸附树脂柱可以是极性或者非极性的树脂。
5.如权利要求2所述一种治疗肝炎的药物的制备方法,其特征在于所选用的大孔吸附树脂柱为苯乙烯型树脂、甲基苯乙稀型树脂、乙基苯乙烯型树脂、聚丙乙烯型树脂、丙烯腈型树脂。
6.如权利要求2所述一种治疗肝炎的药物的制备方法,其特征在于所选用的大孔吸附树脂柱具体可采用D-101型、HP-20型、LD605型、SP-207型、AB-8型、LD-605型、HP-10型、NKA-9型、DA型。
7.如权利要求2所述一种治疗肝炎的药物的制备方法,其特征在于所选用的大孔吸附树脂柱优选D-101型、HP-20型、AB-8型、NKA-9型四种树脂。
8.如权利要求1所述一种治疗肝炎的药物,其特征在于主要用于抗病毒作用、修复肝损伤作用。
9.如权利要求1所述一种治疗肝炎的药物,其特征在于主要用于治疗乙型肝炎方面的疾病。
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Cited By (2)
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CN106806410A (zh) * | 2015-12-01 | 2017-06-09 | 戚佳奉 | 一种肝炎糖浆 |
CN111317752A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-06-23 | 广东龙帆生物科技有限公司 | 一种预防或治疗流感病毒感染的药物及用途 |
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2006
- 2006-08-28 CN CNA200610112638XA patent/CN101134070A/zh active Pending
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080305 |