CN101548999A - 人参茎叶皂苷的制备及其抗肥胖的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种人参茎叶皂苷的制备方法,适用于工业化生产。以人参茎叶皂苷为主要成分,制备减肥健康食品或药物组合物,同时阐述了人参茎叶皂苷抑制胰脂肪酶活性及减少体脂肪的作用。
Description
技术领域:
本发明涉及人参茎叶皂苷的制备工艺及其在制药领域的新用途,人参茎叶皂苷具有抑制胰脂肪酶活性的作用,可以用来预防和改善肥胖症状。
背景技术:
目前研究表明,人参皂苷是人参的主要活性成分,具有多种生理活性,已经广泛应用于临床和保健方面。据最近研究报告指出,人参根具有抗肥胖作用。人参茎叶主要含有人参皂苷、多糖、氨基酸、蛋白质和挥发油等化学成分,而且人参茎叶中含有的人参皂苷的量高于人参主根,关于人参茎叶皂苷抗肥胖作用尚未见报道。
发明内容:
本发明提供一种人参茎叶皂苷的制备方法,适用于工业化生产。
本发明公开了人参茎叶皂苷在动物体内外的减肥药理作用的实验报告。
本发明还公开了以人参茎叶皂苷为基本活性成分的减肥产品。
本发明的技术解决方案如下:干燥人参茎叶粗粉(40目)加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,减压回收乙醇,得水溶液上D101大孔树脂,依次用水和80%乙醇洗脱,收集乙醇溶液,减压浓缩,真空干燥得茎叶总皂苷。
人参茎叶总皂苷上ODS反相色谱柱,再经过硅胶柱分离,得到人参皂苷Rc,Rb1,Rb2,Rb3,Rg1,Re,Rd,Rf和拟人参皂苷Rg2。
本发明中的药物组合物,其中含有人参皂苷10~35%,还有人参多糖、蛋白质、氨基酸、微量元素等。本领域技术人员可以理解到,这些物质的存在会增强本发明的药物组合物的保健作用。
另外,应特别指出的是,可根据需要在发明的药物组合中加入一种或多种天然或合成的其它与本提取物具有协同或辅助作用的成分,这些可能被加入的天然或合成的辅助成分是本领域或技术人员已知的和可以想到的。可将所说的组合物配制成口服给药的片剂、滴丸、冲剂、液体制剂、粉末剂、丸剂、胶囊剂。
为了制备适于口服给药的片剂、粉末剂或胶囊剂,可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、微晶纤维素、滑石粉等作为载体或赋形剂。在这些适于口服给药的制剂中,还可含有其它适当的添加剂,例如崩解剂、润滑剂、吸收促进剂、防腐剂、矫味剂、稀释剂、分散剂、表面活性剂、或着色剂等。
本发明药物组合物最优选的给药途径是各种适于口服给药的剂型,例如片剂、粉末剂、胶囊剂或口服液,这些口服制剂的单位剂量一般含有20~1000mg本提取物。下列实验表明了本发明药物的药理作用:
实验例1
人参茎叶皂苷对胰脂肪酶活性的影响
人参(Panax ginseng C.A..Meyer)为五加科人参属多年生草本植物以干燥根入药,为名贵补药,在我国已有2000多年的应用历史。现代科学研究表明,人参根中主要有效成分是人参皂苷,已经广泛应用,同时发现茎叶中也含有大量皂苷并应用于临床。但人参皂苷对于胰脂肪酶作用尚未见报道。本文着重揭示人参茎叶皂苷和单体皂苷对胰脂肪酶活性的影响。
1材料与方法
1.1试剂
[3H]三油酸甘油酯([3H]triolein):购自日本东京Amersham公司;胰脂肪酶购自Sigma公司;其他化学试剂均为分析纯。
1.2植物材料
人参(Panax ginseng C.A..Meyer)茎叶采自吉林省左家特产研究所。单体皂苷:人参皂苷Rc,Rb1,Rb2,Rg1,Re,Rd,拟人参皂苷F-11由本室提供。
1.3人参茎叶皂苷和单体皂苷提取
干燥人参茎叶粗粉(40目)加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,减压回收乙醇,得水溶液上D101大孔树脂,依次用水和80%乙醇洗脱,乙醇溶液减压浓缩,真空干燥得茎叶总皂苷。
人参茎叶总皂苷上ODS反相色谱柱,再经过硅胶柱分离,得到人参皂苷Rc,Rb1,Rb2,Rb3,Rg1,Re,Rd,Rf和人参皂苷Rg2。
1.4胰脂肪酶活性的测定
按照Verger,R方法进行,利用三油酸甘油酯释放油酸的释放率来判定脂肪酶的活性。即将90μmol/L三油酸甘油酯,12.6μmol/L卵磷脂,9.45μmol/L牛磺胆酸置于9mL的0.1mol/L N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)中,pH 7.0,含有0.1mol/L NaCl,超声波处理5min。测试溶液总体积200μL,含有下列物质:50μL供试化合物,50μL胰脂肪酶,0.5μmol/L三油酸甘油酯,0.053μmol/L牛磺胆酸,0.07μmol/L卵磷脂,20μmol/L TES,20μmol/LNaCl,于37℃,pH 7.0的条件下孵化30min。油酸的释放率按Belfrage方法进行测定。
2结果
人参茎叶皂苷和单体皂苷对胰脂肪酶的作用
表1,人参皂苷在0.5g/L浓度时,对胰脂肪酶活性的抑制率分别为90%和35.2%;人参皂苷Rc,Rb1,Rb2在0.5g/L浓度时抑制率分别为100%,96%,97%。
表1参茎叶皂苷和单体皂苷对胰脂肪酶的作用
3讨论
1984年Verger等人报道,食物脂肪在消化吸收过程中,在胰脂肪酶的作用下分解,生成脂肪酸和2-酰基甘油,这些脂解产物与胆汁酸盐混合,分散形成微粒然后才能被小肠吸收。如果能抑制胰脂肪酶活性,就可以延迟和减少小肠对食物脂肪的吸收,从而达到抗肥胖作用。据文献报道,从食物中分离得到许多种皂苷都具有抗肥胖和降血脂作用。从表1得知Rc,Rb1,Rb2对胰脂肪酶抑制作用最强,它们都属于人参二醇型皂苷,人参皂苷Rg1和Re对脂肪酶的活性均没有作用,它们都属于人参三醇型皂苷。人参茎叶总皂苷具有抗肥胖作用可能是由于Rc,Rb1,Rb2,Rd作用的结果,关于这一点还需进一步实验加以证明。
实验例2
人参茎叶皂苷抗肥胖作用
人参(Panax ginseng C.A..Meyer)为五加科人参属多年生草本植物以干燥根入药,为名贵补药,在我国已有2000多年的应用历史。现代研究表明人参茎叶中也含有大量皂苷,经过药理学研究人参茎叶亦具有多种生理活性,并在临床上用来治疗心血管等疾病。如实验1体外实验研究结果表明人参皂苷对于胰脂肪酶有明显抑制作用,尤其是二醇型人参皂苷抑制作用更强。本文着重揭示人参茎叶皂苷在小鼠体内对小鼠体重、子宫周围脂肪组织的影响。
1材料与方法
1.1试剂
[3H]三油酸甘油酯([3H]triolein):购自日本东京Amersham公司;三油酸甘油酯(Triolein)购自Sigma公司;甘油三酯试剂盒购自大阪和光纯药工业公司。脂肪酸酶抑制剂Orlistat购自Roche Ltd.。其他化学试剂均为分析纯。
1.2植物材料
人参(Panax ginseng C.A..Meyer)茎叶采自吉林省左家特产研究所。单体皂苷:人参皂苷Rc,Rb1,Rb2,Rg1,Re,Rd由本实验室提供。
1.3动物
ICR系雌性小鼠(3周龄,21g)购自大阪CLEA公司,。雄性Wistar King大鼠(6-周龄)购自日本Charles River公司(Yokohama,Japan)。
1.4人参茎叶皂苷和单体皂苷提取
干燥人参茎叶粗粉(40目)加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,上清液减压回收乙醇,得水溶液上D101大孔树脂,依次用水和80%乙醇洗脱,乙醇溶液减压浓缩,真空干燥得茎叶总皂苷。
1.5方法
ICR系雌性小鼠54只,分成3组,每组18只。对照组:喂饲普通饲料;高脂组:饲料含牛脂40%,酪蛋白36%,玉米淀粉10%,糖9%,混合维生素1%,矿物质4%;人参组:高脂饲料加1%或3%人参茎叶皂苷;实验期8周之后,乙醚麻醉处死动物,迅速摘除子宫周围脂肪,供分析用。各鼠的体重每周测定一次,每只鼠的进食量每周记录3次。
1.6血浆中三酰基甘油酯的测定
大鼠空腹1夜,取2mL脂质乳胶液(由1.5mL玉米油、胆酸20mg,胆固醇酯0.5g 1.5ml生理盐水)或者取3mL脂质乳胶液加桔梗水提物[最终剂量(体重)20mg/kg]给大鼠口服。口服含有人参茎叶皂苷的脂质乳溶液或没有人参茎叶皂苷脂质乳胶液0,0.5,1,2,3,4和5h后,从大鼠尾静脉采血,离心(5500×g,5min)得血浆。血浆中的三酰基甘油酯用和光制药三甘油酯试剂盒进行测定。
1.7体重、脂肪组织重量的测定
将雌性ICR系小鼠(3周龄)70只分成5组,每组14只;1周后测量体重。高脂肪饲料:含牛脂40%,酪蛋白36%,玉米淀粉10%,糖9%,混合维生素1%,矿物质4%,水自由摄取,饲养10周。各试验组饲料组成见表1。为了防止饲料中脂肪氧化,饲料保存在-30℃,每天临时配制饲料供试验使用。各鼠的体重每周至少测量1次,每只鼠的食量每周至少记录3次。最后空腹1夜,乙醚麻醉处死,迅速摘除子宫周围脂肪并称重。
1.8统计处理
所得数据采用多因素(Super ANOVA)方差分析,结果以X±SX表示。用t检验进行显著性检验。P<0.05差异显著。
2结果
2.1人参茎叶皂苷对口服脂质乳状液大鼠血浆中三酰基甘油酯的影响
如图1所示,口服脂质乳状液同时添加人参茎叶皂苷与未添加人参茎叶皂苷只口服脂质乳状液大鼠血浆中三酰基甘油酯明显减少,但弱于脂肪酶抑制剂orlistat。
2.2人参茎叶皂苷对小鼠体重、子宫周围脂肪组织的影响
表1高脂组由于饲喂高脂肪饲料造成甘油三酯的积累小鼠体重比较正常饲料对照组明显增加。但是饲喂添加人参茎叶总皂苷饲料与高脂饲料组体重并无明显差异。但使子宫周围脂肪组织重量明显下降(表1)。
表1人参茎叶总皂苷对高脂肪食小鼠体重的影响(g)X±SX.n=11
高脂肪食物组与对照组比较有显著差异;*P<0.05
表2人参茎叶总皂苷对高脂肪食小鼠子宫周围脂肪重量的影响(g)X±SX.n=11
高脂肪食物组与对照组比较有显著差异;*P<0.05
3结论
从食物中分离得到许多种皂苷都具有抗肥胖和降血脂作用。韩立坤等从茶叶中分离得到的茶皂苷具有抗肥胖作用,其原因可能是由于茶皂苷抑制胰脂肪酶所致。小鼠由于饲喂高脂饲料造成甘油三酯的积累小鼠体重增加。我们发现西洋参总皂苷可以明显降低高脂肪食小鼠脂肪重量。添加1%人参茎叶总皂苷小鼠子宫周围脂肪组织重量(0.949g±0.11)明显低于高脂肪组(1.252g±0.04)。说明人参茎叶总皂苷具有抗肥胖作用。饲喂添加人参茎叶总皂苷饲料与高脂饲料组比较体重并无明显差异,但却使子宫周围脂肪组织重量明显下降。由此得到启示,人参茎叶总皂苷只是减少了脂肪组织,这正是人们所期待的。已经报道,用胰脂肪酶抑制剂-Ro-0647可以抑制肥胖和高血脂。为了寻找人参中降低脂肪组织重量的活性物质,我们检查了人参茎叶总皂苷、单体皂苷。发现人参茎叶总皂苷对胰脂肪酶有明显抑制作用(抑制率为35.2%),这可能是由于人参茎叶总皂苷抑制胰脂肪酶作用所致。从实验得知Rc,Rb1,Rb2对胰脂肪酶抑制作用最强,它们都属于人参二醇型皂苷,人参皂苷Rg1和Re对脂肪酶的活性均没有作用,它们都属于人参三醇型皂苷。关于这一点还需进一步实验证明。
上述实验表明,本发明对于高脂肪食小鼠具有较明显的抗肥胖作用,可以用于预防和改善肥胖的健康食品或药物。
具体实施方式:
实施例1
取人参茎叶粗粉(40目)1000g加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,减压回收乙醇,真空干燥得茎叶提取物200g。
实施例2
取桔梗根1000g加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,超声提取3次,每次30分钟,过滤,合并滤液,减压回收乙醇,真空干燥得桔梗提取物250g。
实施例3
取人参茎叶提取物20g,用适量水溶解,水溶液上D101大孔树脂,依次用水和40~80%乙醇洗脱,收集乙醇溶液,减压浓缩,真空干燥得7g,其中人参皂苷含量为15~35%。
实施例4
将实施例1人参茎叶皂苷提取物40g与实施例2桔梗提取物10g,用适量水溶解,水溶液上D101大孔树脂,依次用水和80%乙醇洗脱,收集乙醇溶液,减压浓缩,真空干燥得干物质18g。其中人参皂苷含量为10~30%,桔梗皂苷2~3%。
实施例5
抗肥胖片剂
取实施例1的提取物10g,,加入环糊精10g,混合均匀,造粒压片,制得片剂,每片0.5g,含原料提取物0.25g。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版片剂有关项目要求。
实施例6
抗肥胖片剂
取实施例1的提取物8g,实施例2的提取物2g,混合,然后加入环糊精10g,混合均匀,造粒压片,制得片剂。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版片剂有关项目要求。
实施例7
抗肥胖片剂
取实施例4的提取物10g,加入环糊精10g,混合均匀,造粒压片,制得片剂。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版片剂有关项目要求。
实施例8
抗肥胖胶囊
取实施例4的提取物40g,加入环糊精10g,混合均匀,装入胶囊,每粒0.5g,含原料提取物0.4g。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版胶囊有关项目要求。
实施例9
抗肥胖泡腾片剂
取实施例4的提取物40g,加入赋形剂适量,混合均匀,造粒压片,制成泡腾片,每片含原料提取物1g。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版泡腾片有关项目要求。
Claims (3)
1、一种人参茎叶总皂苷提取物预防治疗肥胖的医药品和保健食品。
2、人参茎叶总皂苷提取物的制备方法,包括以下步骤:干燥人参茎叶粗粉(40目)加入5~10倍量的0~40%的乙醇水溶液,浸泡6~12h,回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,减压回收乙醇,得水溶液上D101大孔树脂,依次用水和80%乙醇洗脱,乙醇溶液减压浓缩,真空干燥得茎叶总皂苷。
3、根据权利要求2所述制备方法得到人参茎叶总皂苷在制备预防治疗肥胖的品和保健食品中的应用。
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