CN102641352B - 一种柳茶有效部位提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种柳茶有效部位提取物及其制备方法和用途。柳茶有效部位提取物通过以下制备方法得到：以稀碱水热提粉碎后的柳茶，所得水提物用石油醚洗涤脱脂后浓缩至干并粉碎，然后用乙醇在加热回流条件下进一步提取，乙醇溶液浓缩至干后获得乙醇提取物，该提取物用活性炭或硅胶柱层析后就制得柳茶有效部位提取物。临床应用证明，通过本发明方法制备的柳茶有效部位提取物安全有效，可以用于减肥降脂的药物或保健食品以及作为添加剂用于饮料等健康食品。
Description
技术领域
本发明涉及中药和保健品领域，具体涉及一种柳茶有效部位提取物及其制备方法和用途。
背景技术
肥胖科技的发展社会的进步，使得人类从繁重的体力劳动中脱离出来，通过操作机器，驾驶汽车，点击鼠标，完成日常的工作和生活。而另一方面，由于物质生活的极大丰富，鸡鸭鱼肉等高能量富营养的食品成为寻常百姓家里的常见菜品。于是吃的多而动的少，让越来越多的人得上富贵病：肥胖，继而引发高血糖，高血脂以及高血压，严重危害老百姓的生命健康，尽管医学手段不断的进步和发展，三高人群依赖并通过药物维持生命活动。世界卫生组织肥胖症学会向社会发出警示：肥胖本身就是一种疾病，其危害程度高于吸烟4倍，控制肥胖症是降低慢性病发病率和病死率的一个关键因素。全球范围看，经济最为发达的美国，肥胖人群占全部人口的28.8%，高血压，高血糖，高血脂在美国50岁以上人口不作为疾病看待，人们普遍接受这样的观念：随着年龄增大，三高是伴生而来的身体不适，通过药物的控制，使得人的生命活动处于维持的状态。而经济水平相对落后的中国，肥胖人群占人口总数的6.72%，这一数字城市比例相对于农村要高出很多。根据近十年的发展变化看，中国的百姓肥胖及三高的比例正大踏步的向美国追赶，作为人口占世界19%的中国，随着城市化的进程以及物质生活的极大进步，在未来十年中以15%的比例来估算，中国将会有2亿多的人口进入肥胖者行列，这些人群带来的三高的疾病及其国民将使用的药物和付出的代价来看，那将是非常庞大的数量级。如何控制这种非原发性肥胖症，富营养化导致的三高问题，是所有健康相关领域工作者所共同关注的核心问题。社会急需健康减肥降脂的产品，主动参与机体脂肪代谢，控制人体胆固醇及血糖处于合理水平。
柳茶学名是鲜卑花属——Sibiraea Maxim的枝叶。落叶灌木，高约1.5米；小枝粗壮，圆柱形，光滑无毛，幼时紫红色，老时黑褐色；冬芽卵形，先端急尖，外被紫褐色鳞片。本属有4种，分布欧洲、前苏联西伯利亚及我国西部。我国产三种，一种为毛叶鲜卑花Sibiraea tomentosa Diels.，分布于云南西北部；另两种为鲜卑花 Sibiraea laevigata (L.) Maxim.和窄叶鲜卑花 Sibiraea angustata (Rehd.) Hand.-Mazz.，分布于青海(海晏、西宁)、甘肃(岷县、西固)、西藏(索县)。生于高山、溪边或草甸灌丛中，海拔2000—4000米的灌木丛中。苏联西伯利亚南部也有分布。柳茶为蔷薇科鲜卑花属植物鲜卑花 Sibiraea laevigata (L.) Maxim．和窄叶鲜卑花 Sibiraea angustata (Rehd.) Hand.-Mazz．的嫩枝和叶子入药，为藏族民间常用药物。因其叶型像柳叶，故称为“柳茶”，藏名为尼阿措。藏族民间常用作茶饮，用来治疗食后腹胀等诸多原因引起的消化不良等症状，藏医药文献收载，主治热病和疫病。柳茶在西藏民间作为药食同源的产品使用，由于藏民的生活饮食的牛羊肉高油腻的特点，柳茶成为生活中不可或缺的重要食品，餐后饮用，有助于消化，促进肠道蠕动，排便成形性好，以及明显的减肥。广泛的民间应用及长期的使用，充分验证了对人体的安全性。
目前文献报道了柳茶的药学研究【中西医结合消化杂志，2009，17，376；中药材，2011，34，922；中国中药杂志，1995，20，746；中草药，1995，26，473；免疫学杂志，1996，12，237；中药新药与临床药理，2010，21，148】，也有一些专利【CN1857458；CN102188515；CN101732441；CN101077881】公开了柳茶的一些提取物能够体现一定程度的减肥降脂、生发、促进消化、调节便秘等作用，但是这些提取物或者提炼工艺复杂成本高且提取率过低、没有实际生产价值且没有临床验证（CN101077881），或者活性成分纯度不够高、颜色深、疗效不够显著并有强烈的异味或若干副作用等。因此高效提取柳茶的高纯度有效活性成分，研究药理作用和临床实践具有十分重要的意义。同时有不少文献报道【热带亚热带植物学报，1999，7，248；中华实用中西医杂志，2005，18，1530；中国中药杂志，1992，17，360；药学学报，1993，28，798；华西药学杂志，2004，19，113；华西药学杂志，2004，19，178】柳茶提取物至少有60多种化学成分，其中有异阿魏酸、咖啡酸、羽扇豆酸、羽扇豆酯、咖啡酸葡萄糖醇酯、2-羟基熊果酸、熊果酸、齐墩果醇酸、阿魏酸、鲜卑花酯、十八酸等，其中大部分的报道的化学成分是已知的，特别是挥发性化学成分和上述羧酸类物质单独使用并不具有明显减肥降脂作用，而柳茶提取物中一些糖苷类化合物可能有很好的减肥降脂作用。因此，在柳茶提取物中如能够高效除去羧酸类物质（比如用稀碱水处理）和挥发性轻组分（比如利用石油醚洗涤脱脂）之后，进行快速简单的柱层析分离（兼具脱色作用），使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液，并利用糖类物质的特征显色反应，收集主要含有糖苷类溶质的淋洗液，从而获得柳茶有效部位提取物，该提取物将富集较高纯度的糖苷类化合物；使用该工艺制备富集较高纯度的糖苷类化合物的柳茶提取物，生产成本低廉，颜色好，大生产工艺容易实现，那么研究此类提取物的用途并进行动物实验以及进一步的临床实验，就更显得非常有实际意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种柳茶有效部位提取物及其制备方法和用途。
本发明的柳茶有效部位提取物，通过以下制备步骤获得：
（1）将柳茶干燥粉碎，用质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液加热回流2小时，碳酸氢钠水溶液与柳茶原料的质量比是10：1～15～1，所得水提物用石油醚洗涤脱脂后浓缩至干，即得柳茶水提膏；
（2）将步骤（1）的柳茶水提膏粉碎，用乙醇加热回流2小时，乙醇与柳茶水提膏的质量比是3：1～6:1，乙醇提取液浓缩至干后获得乙醇提取物；
(3) 将步骤（2）的乙醇提取物用活性炭或硅胶柱层析，乙醇提取物与吸附剂活性炭或硅胶的质量比是1：1～1：2，用体积浓度为20％的乙醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液和洗脱进程，喷洒体积浓度为10％硫酸的甲醇溶液作为显色剂，收集110oC下加热15分钟能显黑色斑点的淋洗液，持续进行洗脱直到洗脱物质完全消失，合并收集的显黑色斑点的淋洗液，浓缩至干，得到柳茶有效部位提取物，其中硅胶薄层色谱法的展开剂是体积浓度为50％甲醇的乙酸乙酯溶液。
一种柳茶有效部位提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将柳茶干燥粉碎，用质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液加热回流2小时，碳酸氢钠水溶液与柳茶原料的质量比是10：1～15～1，所得水提物用石油醚洗涤脱脂后浓缩至干，即得柳茶水提膏；
（2）将步骤（1）的柳茶水提膏粉碎，用乙醇加热回流2小时，乙醇与柳茶水提膏的质量比是3：1～6:1，乙醇提取液浓缩至干后获得乙醇提取物；
(3) 将步骤（2）的乙醇提取物用活性炭或硅胶柱层析，乙醇提取物与吸附剂活性炭或硅胶的质量比是1：1～1：2，用体积浓度为20％的乙醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液和洗脱进程，喷洒体积浓度为10％硫酸的甲醇溶液作为显色剂，收集110oC下加热15分钟能显黑色斑点的淋洗液，持续进行洗脱直到洗脱物质完全消失，合并收集的显黑色斑点的淋洗液，浓缩至干，得到柳茶有效部位提取物，其中硅胶薄层色谱法的展开剂是体积浓度为50％甲醇的乙酸乙酯溶液。
本发明的柳茶有效部位提取物在制备降血脂药物中的应用。柳茶有效部位提取物活性成分日剂量为1～200毫克/公斤体重，可以一次或分为2～4次施用。
本发明的柳茶有效部位提取物在制备减肥药物中的应用。柳茶有效部位提取物活性成分日剂量为1～200毫克/公斤体重，可以一次或分为2～4次施用。
本发明的柳茶有效部位提取物在制备减肥降脂保健品中的应用。柳茶有效部位提取物活性成分日剂量为1～200毫克/公斤体重，可以一次或分为2～4次施用。
本发明的柳茶有效部位提取物在制备健康食品中作为添加剂应用，柳茶有效部位提取物活性成分用量相当于食品重量的0.01～10％。
上述的健康食品是面包、面条、蛋糕、饼干、牛奶、酸奶、饮料、矿泉水、调味品（例如酱油）、食用油（例如菜籽油、麻油、茶油、玉米油和花生油）和酒（例如黄酒、啤酒、白酒）。
本发明的柳茶有效部位提取物在制备降血脂药物、减肥药物、减肥降脂保健品应用中，其剂型为医学上可以接受的各类片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或冲剂。各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。
本发明的柳茶有效部位提取过程中，1％的碳酸氢钠水溶液能够高效除去羧酸类物质，并利用石油醚洗涤脱脂可以进一步除去挥发性轻组分，乙醇提取物进行快速简单的活性炭或硅胶柱层析分离，（活性炭或硅胶兼具脱色作用），使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液，并利用糖类物质的特征显色反应，收集主要含有糖苷类溶质的淋洗液，从而获得柳茶有效部位提取物，该提取物将富集较高纯度的糖苷类化合物，因此使用该工艺获得的柳茶有效部位提取物富集了较高纯度或浓度的糖苷类活性化合物。
具体实施方法
以下实施例将有助于理解本发明，但不限于本发明的内容：
实施例1 柳茶有效部位提取物的制备
将10公斤干燥的柳茶进行粉碎，然后以100升质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液加热回流2小时提取，滤除不溶性残渣后，所得水提物用50升石油醚洗涤脱脂后浓缩至干，制得1.3公斤柳茶水提膏；用6公斤乙醇加热回流2小时提取上述粉碎的柳茶水提膏，乙醇提取液浓缩至干后获得0.54公斤乙醇提取物;该乙醇提取物用活性炭柱层析，吸附剂活性炭的用量是1公斤，用体积浓度为20％的乙醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液和洗脱进程，喷洒体积浓度为10％硫酸的甲醇溶液作为显色剂，收集110oC下加热15分钟能显黑色斑点的淋洗液，持续进行洗脱直到洗脱物质完全消失，合并收集的显黑色斑点的淋洗液，然后浓缩至干即得到77克柳茶有效部位提取物，其中硅胶薄层色谱法的展开剂是体积浓度为50％甲醇的乙酸乙酯溶液。
实施例2 柳茶有效部位提取物的安全性检查
按2010年中国药典第三部的《异常毒性检查法》：每药品各5只健康小鼠，供试品是实施例1制备的柳茶有效部位提取物，腹腔注射，按照常规的急毒性试验进行检测，结果正常饲养，观察7天内未见死亡。
实施例3 柳茶有效部位提取物作为有效添加剂的健康食品
实施例1制备的柳茶有效部位提取物可以以添加剂形式包含于食品如面包、面条、蛋糕、饼干、牛奶、酸奶以及饮料或矿泉水，调料例如酱油，油例如菜籽油、麻油、茶油、玉米油和花生油，酒例如黄酒、啤酒、白酒等。添加剂用量相当于食品重量的0.01～10％。
实施例4 柳茶有效部位提取物作为活性成分的胶囊剂的制备
将3重量份的按实施例1制备的柳茶有效部位提取物、0.2重量份的糊精和0.2重量份的硬脂酸镁充分混合。将0.25克该混合物装入一个胶壳中即得一粒胶囊。
实施例5 柳茶有效部位提取物作为活性成分的颗粒剂的制备
将4重量份的按实施例1制备的柳茶有效部位提取物、0.5重量份的糊精、0.3重量份的玉米淀粉和0.2重量份的硬脂酸镁充分混合，一步制粒，分装即得。
实施例6 柳茶有效部位提取物作为活性成分的片剂的制备
将2重量份的按实施例1制备的柳茶有效部位提取物、0.2重量份的糊精、0.3重量份的玉米淀粉和0.5重量份的硬脂酸镁充分混合，一步压成片，即得片剂，每片0.3克。
实施例7 柳茶有效部位提取物作为活性成分的口服液的制备
取适量蒸馏水，加入2克按实施例1制备的柳茶有效部位提取物、10克蔗糖粉、搅拌溶解，过滤，滤液补充蒸馏水至100毫升，加入适量食用香精，搅拌均匀，分装，每支10毫升，压盖，消毒，即得口服液。
实施例8 柳茶有效部位提取物作为活性成分的冲剂的制备
把1重量份按实施例1制备的柳茶有效部位提取物、0.1重量份的糊精、0.3重量份蔗糖粉混合，再加入适量70%的乙醇，拌合成软材，挤压过筛（12—14目）制颗粒，60°C干燥，整粒，按每袋相当于按实施例1制备的柳茶有效部位提取物0.1克分装于塑料袋中，密封，即得。
实施例9 柳茶有效部位提取物作为活性成分的减肥功能的临床应用
参照保健食品检验与评价技术规范实施手册(2003版)，不替代主食的减肥功能试验采用自身对照及组间对照试验设计。受试对象为100例单纯性肥胖志愿者，用本发明实施例4制备的胶囊，每粒0.25克，每天服用3次，每次1粒，连续服用35天后，所得的部分功能性指标见表1，试食组体重平均下降3.8±2.9千克；经试食组自身比较及试食后试食组与对照组比较，差异具有显著性；试验前后受试者运动耐力和其它健康指标没有明显变化，并已经排除膳食和运动对减肥影响。
表1
| 人数（个） | 体重（kg） | |
| 试验组（前） | 50 | 82.4±6.7 |
| 试验组（后） | 50 | 78.6±4.1 |
| 试验组前后差值 | 3.8±2.9 | |
| 对照组（前） | 50 | 82.5±6.3 |
| 对照组（后） | 50 | 82.2±6.2 |
实施例10 柳茶有效部位提取物作为活性成分的降高血脂功能的临床应用
参照《2007中国成人血脂异常防治指南》规定的高血脂症诊断标准，降高血脂功能试验采用开放性、自身对照试验设计。受试对象为至少一个月没有使用影响血脂药物的50例高血脂症志愿者，用本发明实施例6制备的片剂，每粒0.3克，每天服用3次，每次1粒，连续服用28天后，所得的部分功能性指标见表2。血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）均较治疗前明显下降，血三酰甘油 （TG）也显著降低，高密度脂蛋白胆固醇（HDL～C）明显上升。整个治疗过程未出现严重不良反应，治疗前后 肝功、肾功及肌酸激酶无显著变化。
表2
Claims (6)
1.一种柳茶有效部位提取物，其特征在于，所述提取物通过以下制备步骤获得：
（1）将柳茶干燥粉碎，用质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液加热回流2小时，碳酸氢钠水溶液与柳茶原料的质量比是10：1～15：1，所得水提物用石油醚洗涤脱脂后浓缩至干，即得柳茶水提膏；
（2）将步骤（1）的柳茶水提膏粉碎，用乙醇加热回流2小时，乙醇与柳茶水提膏的质量比是3：1～6:1，乙醇提取液浓缩至干后获得乙醇提取物；
(3) 将步骤（2）的乙醇提取物用活性炭或硅胶柱层析，乙醇提取物与吸附剂活性炭或硅胶的质量比是1：1～1：2，用体积浓度为20％的乙醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，使用硅胶薄层色谱法检测淋洗液和洗脱进程，喷洒体积浓度为10％硫酸的甲醇溶液作为显色剂，收集110oC下加热15分钟能显黑色斑点的淋洗液，持续进行洗脱直到洗脱物质完全消失，合并收集的显黑色斑点的淋洗液，浓缩至干，得到柳茶有效部位提取物，其中硅胶薄层色谱法的展开剂是体积浓度为50％甲醇的乙酸乙酯溶液。
2.权利要求1所述的柳茶有效部位提取物在制备降血脂药物中的应用。
3.权利要求1所述的柳茶有效部位提取物在制备减肥药物中的应用。
4.权利要求1所述的柳茶有效部位提取物在制备减肥降脂保健品中的应用。
5.权利要求1所述的柳茶有效部位提取物在制备健康食品中作为添加剂的应用。
6.根据权利要求5所述的柳茶有效部位提取物在制备健康食品作为添加剂，其特征在于所说的健康食品是面包、面条、蛋糕、饼干、牛奶、酸奶、饮料、矿泉水、调味品、食用油和酒。
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