CN110810445B - 利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，通过(1)备料；(2)藏药柳茶提取物制备；(3)藏药柳茶纳米银抑菌剂；(4)精制提纯；(5)大孔树脂过滤。等步骤，利用柳茶中提取的丰富抗氧化物质为还原剂，采用一步还原法制备纳米银抑菌材料，并通过柳茶本身所具有的抗菌作用达到协同提高抑菌效果，抑菌效果优异。

Description

利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法
技术领域
本发明涉及一种利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，属于天然产物提取领域。
背景技术
银是一种有着悠久的应用历史金属无机杀菌剂，纳米银(Silvernanoparticles，AgNPs)是金属银粒径做到纳米级的单质，纳米银粒径大多在25nm左右，对大肠杆菌、淋球菌、沙眼衣原体等数十种致病微生物都有强烈的抑制和杀灭作用，而且不会产生耐药性。纳米银抗菌机制为：银元素或银离子带有正电荷，可以与带负电荷的微生物细胞膜结合，改变膜的通透性，并与菌体蛋白质和核酸结合，破坏微生物分裂增殖能力，最终导致其死亡。是研究和应用最为广泛的纳米抗菌材料。
藏药柳茶(Sibraeaangustata(Rchd.)Hand-Mazz)藏文名尼阿措(音译)，系蔷薇科鲜卑花属植物，当地藏、汉族群众常以其枝叶“泡茶”饮用，用来治疗食后腹胀等诸多原因引起的消化不良等症状，故俗称“柳茶”，为青藏高原特有植物。近年来，国内外学者对柳茶的药理学研究表明：其具有调节脂代谢、抗氧化、抗肝损伤、提高免疫力、抗肿瘤等极具开发性的药用价值。现代药理研究表明柳茶抗菌消炎等作用：柳茶的主要成分柠檬酸、新绿原酸、绿原酸、多糖、阿魏酸、金丝桃苷、黄酮、异槲皮苷和1,6-山梨醇-0-二咖啡酸酯等，而芳樟醇、多糖、黄酮具有抗菌、抗病毒作用柠檬酸、新绿原酸、绿原酸、阿魏酸、金丝桃苷、异槲皮苷和1,6-山梨醇-0-二咖啡酸酯具有强抗氧化性。
藏药柳茶中富含抗氧化物质及抑菌物质然而由于其提取方法困难较难进行分离利用，使其无法发挥其强大的抗氧化及抑菌的药理作用造成极大植物资源、医药资源及经济损失浪费，柳茶纳米银的开发利用将对柳茶这种民族特有植物资源的开发利用具有重大意义及经济价值。
发明内容
基于上述背景技术中提到的问题，本发明拟提供一种采用一步还原法制备纳米银抑菌材料，并且通过柳茶本身所具有的抗菌作用达到协同提高抑菌效果的抑菌材料。
本发明是通过以下技术内容实现的：
利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，包括以下步骤：
(1)备料：采集藏药柳茶叶片清洁烘干至恒重，得到干燥柳茶叶片；
(2)藏药柳茶提取物制备：藏药柳茶叶片置于自然条件下阴干，45℃鼓风干燥箱干燥，粉碎后过40目筛，得藏药柳茶叶片粉末，精确称取200g藏药柳茶叶片粉末与70％乙醇室温下混合，100℃进行加热回流30min重复3次，合并3次提取物，35℃真空蒸发得藏药柳茶提取物浸膏，以70％乙醇将其稀释至100mg/mL；
(3)藏药柳茶纳米银抑菌剂制备：取藏药柳茶提取液与AgNO3溶液混合，混合比例按照溶液质量比为：30-50:1-5，再加入5倍体积的双蒸水，搅拌均匀，加热回流，待溶液逐渐变为黄褐色时停止加热，再采用紫外-可见光谱法鉴别吸收峰为458nm，纳米银表面吸收峰范围为400-500nm，即可判定为得到纳米银合成物；
(4)精制提纯：将步骤(3)所得抑菌剂与膨润土，硅藻土，混合加入三口烧瓶中，加热至90-110℃，回流60-90min，回流结束后的滤液和滤渣，除去滤渣，回收滤液，重复上述步骤2-3次，得到滤液备用；
(5)将步骤(4)得到的滤液置于大孔树脂进行分离除杂，控制温度为25-35℃，流速控制0.3-0.8ml/min，得到精制纯化的生物合成的纳米银抑菌剂。
作为优选，所述步骤(2)提取剂为70％乙醇溶液。
作为优选，所述AgNO3溶液浓度为0.1mol/L标准溶液。
作为优选，所述步骤(4)的膨润土，硅藻土的重量比为5:7；占抑菌剂重量的10％-20％。
作为优选，所述步骤(5)中的大孔树脂为H-60型号。
所述的纳米银抑菌剂对大肠杆菌、白色念珠菌有抑制作用。
本发明的有益效果为：
(1)通过对藏药柳茶与AgNO3溶液的混合得到的抑菌材料有协同作用，其抑菌效果要比单独的藏药柳茶或者AgNO3溶液优秀。
(2)本发明所制备的抑菌剂具有抑菌性强、不易产生耐药性、抑菌谱广、价格低廉、
合成效率高、产物稳定、绿色环保等优点。
(3)本发明的提取纯化工艺有益于提升开发藏药柳茶的抑菌效果。
具体实施例
下面结合实例对本发明进行进一步的说明。
实施例1
(1)备料：采集藏药柳茶叶片清洁烘干至恒重，得到干燥柳茶叶片；
(2)藏药柳茶叶片置于自然条件下阴干，45℃鼓风干燥箱干燥，粉碎后过40目筛，得藏药柳茶叶片粉末，精确称取200g藏药柳茶叶片粉末与70％乙醇室温下混合，100℃进行加热回流30min重复3次，合并3次提取物，35℃真空蒸发得藏药柳茶提取物浸膏，以70％乙醇将其稀释至100mg/mL；
(3)藏药柳茶纳米银抑菌剂制备：取藏药柳茶提取液与AgNO3溶液混合，混合比例按照溶液质量比为：30:1，再加入5倍体积的双蒸水，搅拌均匀，加热回流，待溶液逐渐变为黄褐色时停止加热，再采用紫外-可见光谱法鉴别吸收峰为458nm，纳米银表面吸收峰范围为400-500nm，判定为得到纳米银合成物；
(4)精制提纯：将步骤(3)所得抑菌剂与膨润土，硅藻土，混合加入三口烧瓶中，加热至℃，回流80min，回流结束后的滤液和滤渣，除去滤渣，回收滤液，重复上述步骤2次，得到滤液备用；
(5)将步骤(4)得到的滤液置于大孔树脂进行分离除杂，控制温度为30℃，流速控制0.5ml/min，得到精制纯化的生物合成的纳米银抑菌剂。
所述步骤(2)提取剂为70％乙醇溶液。
所述AgNO3溶液浓度为0.1mol/L标准溶液。
所述步骤(4)的膨润土，硅藻土的重量比为：5:7；占抑菌剂重量的15％。
所述步骤(5)中的大孔树脂为H-60型号。
实施例2
(1)备料：采集藏药柳茶叶片清洁烘干至恒重，得到干燥柳茶叶片；
(2)藏药柳茶提取物制备：45℃鼓风干燥箱干燥，粉碎后过40目筛，得藏药柳茶叶片粉末，精确称取200g藏药柳茶叶片粉末与70％乙醇室温下混合，100℃进行加热回流30min重复3次，合并3次提取物，35℃真空蒸发得藏药柳茶提取物浸膏，以70％乙醇将其稀释至100mg/mL；
(3)精制提纯：将步骤(2)所得抑菌剂与膨润土，硅藻土，混合加入三口烧瓶中，加热至100℃，回流80min，回流结束后的滤液和滤渣，除去滤渣，回收滤液，重复上述步骤2次，得到滤液备用；
(4)将步骤(3)得到的滤液置于大孔树脂进行分离除杂，控制温度为30℃，流速控制0.5ml/min，得到精制纯化的生物合成的纳米银抑菌剂。
所述步骤(2)提取剂为70％乙醇溶液。
所述步骤(3)的膨润土，硅藻土的重量比为：5:7；占抑菌剂重量的15％。
所述步骤(5)中的大孔树脂为H-60型号。
实施例3
本抑菌剂为单独的纳米AgNO3溶液抑菌剂。
将实施例1-3所制得的纳米银进行抑菌性能测试，其结果见下表
表1.藏药柳茶提取剂及纳米银抑菌剂抑菌效果对比
Figure GDA0002985279480000051

Claims (5)

1.利用藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)备料：采集藏药柳茶叶片清洁烘干至恒重，得到干燥柳茶叶片；
(2)藏药柳茶提取物制备：藏药柳茶叶片置于自然条件下阴干，45℃鼓风干燥箱干燥，粉碎后过40目筛，得藏药柳茶叶片粉末，精确称取200g藏药柳茶叶片粉末与70％乙醇室温下混合，100℃进行加热回流30min重复3次，合并3次提取物，35℃真空蒸发得藏药柳茶提取物浸膏，以70％乙醇将其稀释至100mg/mL；
(3)藏药柳茶纳米银抑菌剂制备：取藏药柳茶提取液与AgNO3溶液混合，混合比例按照溶液质量比为：30-50:1-5，再加入5倍体积的双蒸水，搅拌均匀，加热回流，待溶液逐渐变为黄褐色时停止加热，采用紫外-可见光谱法鉴别吸收峰为458nm，纳米银表面吸收峰范围为400-500nm，即可判定为得到纳米银合成物；
(4)精制提纯：将步骤(3)所得抑菌剂与膨润土，硅藻土，混合加入三口烧瓶中，加热至90-110℃，回流60-90min，回流结束后的滤液和滤渣，除去滤渣，回收滤液，重复上述步骤2-3次，得到滤液备用；
(5)将步骤(4)得到的滤液置于大孔树脂进行分离除杂，控制温度为25-35℃，流速控制0.3-0.8ml/min，得到精制纯化的生物合成的纳米银抑菌剂。
2.根据权利要求1所述的藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，其特征在于：AgNO3溶液浓度为0.1mol/L标准溶液。
3.根据权利要求1所述的藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，其特征在于：步骤(4)的膨润土，硅藻土的重量比为5:7；占抑菌剂重量的10％-20％。
4.根据权利要求1所述的藏药柳茶提取液生物合成纳米银抑菌剂的方法，其特征在于：步骤(5)中的大孔树脂为H-60型号。
5.一种如权利要求1所述方法制备的纳米银抑菌剂。
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