CN101538315A - 一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种固相法和液相法结合合成亮丙瑞林的新工艺，包括步骤：1)由Fmoc－Pro－OH和HMPB－AM树脂为起始原料，得到Fmoc－Pro－HMPB－AM树脂；2)逐一偶联合成侧链全保护亮丙瑞林前体肽－HMPB－AM树脂；3)对其进行切割，得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽；4)对侧链全保护亮丙瑞林前体肽乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；5)对侧链全保护亮丙瑞林经脱侧链保护基团反应，获得亮丙瑞林的粗品；6)亮丙瑞林的粗品经过分离纯化、冻干得到亮丙瑞林精肽。本发明具备大规模化生产能力，操作简易、工艺稳定、生产成本低，总收率超过50％，具有极为可观的经济实用价值和广泛的应用前景。

Description

一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法
技术领域
本发明属于制药技术领域，尤其是涉及一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的新工艺。
背景技术
亮丙瑞林，制剂中文名称为醋酸亮丙瑞林、抑那通或者简称亮丙瑞林，英文名称为Leuprorelin acetate、Enanton，Lucrin等，其结构为：
Figure A20091010499300051
分子式：C59H84N16O12
分子量：1209.41
CAS登录号：53714-56-0
亮丙瑞林属于GnRH类似物，作用同布舍瑞林。重复给予大剂量的促黄体生成释放激素(LH-RH)或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林，在首次给药后能立即产生一过性的垂体-性腺系统兴奋作用(急性作用)，然后抑制垂体生成和释放促性腺激素。它还进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应，从而降低雌二醇和睾丸酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促黄体生成激素(LH)释放活性约为LH-RH的100倍，它的抑制垂体-性腺系统功能的作用也强于LH-RH。醋酸亮丙瑞林是高活性的LH-RH衍生物，由于它对蛋白分解酶的抵抗力和对LH-RH受体的亲和力都比LH-RH强，所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。此外，醋酸亮丙瑞林又是一种缓释制剂，它恒定地向血液中释放醋酸亮丙瑞林，故能有效地降低卵巢和睾丸的反应，产生高度有利的垂体-性腺系统的抑制作用。对子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌患者，每4周1次皮下注射醋酸亮丙瑞林，使血清中雌二醇下降到接近绝经期的水平。因此本品有卵巢功能抑制作用，可抑制正常排卵和使月经停止。对前列腺癌患者皮下注射醋酸亮丙瑞林，每4周1次，使血清睾丸酮浓度降至去势水平之下，表明本品有药理学的去势作用。对患有中枢性性早熟的男孩和女孩每4周1次，皮下注射醋酸亮丙瑞林后，血清中促性腺激素的水平降至青春期前的水平，表明对第二性征有进行性抑制作用。
亮丙瑞林的适应症为子宫内膜异位症；伴有月经过多、下腹痛、腰痛及贫血等的子宫肌瘤；绝经前乳腺癌，且雌激素受体阳性患者；前列腺癌；中枢性性早熟症。临床主要用于前列腺癌及子宫内膜异位症。
亮丙瑞林是1974年由日本武田化工的Fujino Masahiko等人首先发现促黄体激素释放激素的九肽酰胺类似物具有很好的活性，并且发明合成工艺。其先后在日本、德国、美国等国家申请专利，专利号分别为JP19740027442、DE2446005、US4008209等。随后，又有一些研究机构和个人发表了一些合成工艺，专利号为EP1088555、EP1777232、US5480868、CN1865280等。
目前已经公布的亮丙瑞林制备工艺都有着一定的缺陷，不能在操作复杂性、危险性、生产周期、产品总收率、产品成本和污染环境等方面达到一种较好的结合；应用价值不高。
发明内容
本发明的目的是提供了一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、有利于实现产业化的亮丙瑞林的固-液结合的合成工艺，解决现有技术存在的缺陷。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征是，包括如下步骤：
1)由Fmoc-Pro-OH和替代度为0.2mmol/g～1.2mmol/g的HMPB-AM树脂为起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂；
2)将Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂采用Fmoc/tBu固相法逐一偶联的方式依次连接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂；
3)对侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂进行切割，得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽；
4)对侧链全保护亮丙瑞林前体肽经过乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；
5)对侧链全保护亮丙瑞林经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗肽；
6)对亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到亮丙瑞林精肽。
优选的方案是：所述HMPB-AM树脂替代度为0.6mmol/g。
更为优选的方案是：所述保护的Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂，是Fmoc-Pro-OH与HMPB-AM树脂以有机溶剂作反应溶剂，在有机碱的作用下生成；所述有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，或者是二氯甲烷(DCM)，或者是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亚砜(DMSO)；所述有机碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺(TEA)，或者是N-甲基吗啡啉(NMM)，或者是2，4，6-三甲基吡啶(TMP)。
更为优选的方案是：所述有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；所述有机碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)。
更为优选的方案是：所述的具有保护基团的氨基酸采用Fmoc基团保护，各种氨基酸分别以Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu的形式应用。
更为优选的方案是：所述的Fmoc保护基通过20％六氢哌啶的DMF溶液处理来除去。
更为优选的方案是：所述逐一偶联时氨基酸相对于合成规模的投料比为1-6倍；所述逐一偶联剂体系是DCC/HOBt，或者是EDC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt；偶联反应溶剂是四氢呋喃(THF)，或者是二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，或者是二氯甲烷(DCM)，或者是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亚砜(DMSO)；偶联反应的有机碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺(TEA)，或者是N-甲基吗啡啉(NMM)，或者是2，4，6-三甲基吡啶(TMP)；偶联反应时间为1-3小时。
更为优选的方案是：所述逐一偶联时氨基酸相对于合成规模的投料比为2倍，偶联剂体系是DCC/HOBt，偶联反应溶剂是二氯甲烷(DCM)，偶联反应的有机碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，偶联反应时间为2小时。
更为优选的方案是：所述的逐一偶联时偶联反应结束和脱去Fmoc保护后经过Kaiser Test检测。
更为优选的方案是：所述的裂解体系是三氟乙酸的二氯甲烷溶液，或者是三氟乙醇的二氯甲烷溶液。
更为优选的方案是：所述的裂解体系是1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液。
更为优选的方案是：所述的对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应，乙胺化试剂是乙胺/乙酸乙酯溶液，或者是乙胺/乙醇溶液，或者是乙胺/二氯甲烷溶液，或者是乙胺/四氢呋喃溶液和乙胺盐酸盐；偶联试剂或者是DCC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是EDC.HCl/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt；乙胺的用量是相对于亮丙瑞林的全保护肽摩尔数的1-10倍；乙胺化反应的温度是0-40摄氏度；乙胺化反应的时间是12-24小时。
更为优选的方案是：所述的对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应，乙胺化试剂是乙胺/乙酸乙酯溶液，偶联试剂是DCC/HOBt，乙胺的用量是相对于亮丙瑞林的全保护肽摩尔数的8倍；乙胺化反应的温度是30摄氏度；乙胺化反应的时间是18小时。
更为优选的方案是：所述在对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应结束后，对反应液进行后处理时采用萃取方式，顺序为1M盐酸洗、水洗、10％碳酸氢钠洗、水洗、饱和氯化钠洗。
更为优选的方案是：所述侧链全保护亮丙瑞林粗肽经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗品的实验过程中，使用的裂解液体系是三氟乙酸∶水(95∶5v/v)，或者是三氟乙酸∶水∶三乙基硅烷(90∶5∶5v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶水∶苯酚∶1，2-乙二硫醇(82.5∶5∶5∶5∶2.5v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶水∶苯酚∶1，2-乙二硫醇∶三异丙基硅烷(82.5∶5∶5∶5∶2.5∶1v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶苯甲醚∶1，2-乙二硫醇(90∶5∶3∶2v/v)；裂解反应时间是1-4小时。
更为优选的方案是：所述侧链全保护亮丙瑞林粗肽脱侧链保护基团的反应，使用的裂解液是三氟乙酸∶水∶三乙基硅烷(90∶5∶5v/v)体系，裂解反应时间是2小时。
更为优选的方案是：所述亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到亮丙瑞林精肽，在使用高压液相柱分离纯化粗品的过程中填料采用C18反相填料。
与已有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
本发明提供了一种反应条件温和、环境污染小、有利于实现产业化的亮丙瑞林的固-液结合的合成工艺，具有反应操作简单、后处理容易、原料投入少、成本低、收率高等特点，具有可观的经济实用价值，同时在多肽药物设计合成领域具有广泛的应用前景。
附图说明
图1是本发明总的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明：
说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列如表1所示：
表1  缩略词表
  Fmoc   9-芴甲氧羰基
  HBTU   O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HATU   O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
  TBTU   O-(苯并三唑-1-氧)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟硼酸盐
  PyBOP   (苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐
  DIC   二异丙基碳二亚胺
  HOBt   1-羟基苯并三唑
 HOAt   1-羟基-7-偶氮苯并三唑
 DIPEA   二异丙基乙胺
 TMP   2，4，6-三甲基吡啶
pbf   2，2，4，6，7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl
 Trt   三苯甲基
 tBu   叔丁基
 DMF   N，N-二甲基甲酰胺
 DCM   二氯甲烷
 TFA   三氟乙酸
 TFE   三氟乙醇
 DBLK   六氢吡啶/DMF溶液
 pGlu   焦谷氨酸
 HMPB-AM树脂   4-(4-Hydroxymethyl-3-methoxyphenoxy)butyryl-AM-polystyrene
具体实施方式
实施例1  Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂的制备
采用替代度为0.2mmol/g的HMPB-AM树脂进行反应，得到的Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂检测替代度为0.15mmol/g，完成同样摩尔量的生产过程耗费树脂量大，溶剂量大，不经济且不利于环保，不宜使用；采用替代度为1.2mmol/g的HMPB-AM树脂进行反应，得到的Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂检测替代度可达0.87mmol/g，虽然完成同样摩尔量的生产过程耗费树脂量小，但因得到的粗肽纯度降低30％，使得下游纯化收率降低60-70％。
本实施例更为优选的方案为将HMPB-AM树脂111.0g，替代度为0.9mmol/g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DCM溶胀树脂30分钟后，将77.6g Fmoc-Pro-OH，加入上述装有树脂的反应柱中反应2小时。反应结束，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，用甲醇封闭30分钟，后用甲醇收缩得到Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂，检测替代度为0.6mmol/g。
实施例2  侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂的制备
称取100g Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂(0.6mmol/g，60mmol)加入反应器中，用DMF洗涤一次，用DCM溶胀0.5小时。溶胀结束，用20％DBLK去除Fmoc保护，后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。将77.76g Fmoc-Arg(pbf)-OH(120mmol)，24.315g HOBt(180mmol)，37.8g DCC溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，加入固相反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准)。重复以上步骤，依次完成Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu等剩余氨基酸的连接。当pGlu偶联结束后，将树脂用DMF洗涤3次，DCM洗3次，后用甲醇收缩，放置在真空干燥器中干燥过夜。第二天，称重得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂201.082g(树脂增重率99.1％)。
实施例3  侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂的制备
称取1111.1g Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂(0.45mmol/g，500mmol)加入反应器中，用DMF洗涤一次，用DCM溶胀0.5小时。溶胀结束，用20％DBLK去除Fmoc保护，后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。将648.8g Fmoc-Arg(pbf)-OH(1000mmol)，202.7g HOBt(1500mmol)，568.8g HBTU(1500mmol)溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，加入固相反应器中，接着将523.0ml(3000mmol)DIPEA导入反应柱，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准)。重复以上步骤，依次完成Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu等剩余氨基酸的连接。当pGlu偶联结束后，将树脂用DMF洗涤3次，DCM洗3次，后用甲醇收缩，放置在真空干燥器中干燥过夜。第二天，称重得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂1921.2g(树脂增重率95.3％)。
实施例4  pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH的制备(侧链全保护亮丙瑞林前体肽的制备)
将201.082g侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂(60mmol)加入到3000ml圆底烧瓶中，配制裂解试剂2000ml(三氟乙醇1800ml，DCM 200ml)，将裂解试剂倒入树脂中，室温反应1小时。反应结束，过滤树脂，收集滤液。用少量DCM洗涤树脂，合并滤液，将滤液减压蒸干，并且真空干燥，得到侧链全保护亮丙瑞林前体粗肽104.2g(HPLC纯度86.5％，收率92.04％，MS 1889)。
实施例5  pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH的制备(侧链全保护亮丙瑞林前体肽的制备)
将1921.2g侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂(500mmol)加入到30L反应釜中，配制裂解试剂300L(三氟乙酸3L，DCM297L)，将裂解试剂倒入树脂中，室温反应4小时。反应结束，过滤树脂，收集滤液。用少量DCM洗涤树脂，合并滤液，将滤液减压蒸干，并且真空干燥，得到侧链全保护亮丙瑞林前体粗肽880.3g(HPLC纯度89.7％，收率93.2％，MS 1889)。
实施例6  pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-NHCH2CH3的制备(侧链全保护亮丙瑞林)
将104.2g侧链全保护亮丙瑞林前体粗肽(55.2mmol)加到2000ml的三口烧瓶中，加入500ml二氯甲烷使其完全溶解。称取115.9g DCC和74.25g HOBt(552mmol)加入到上述反应瓶中，剧烈搅拌反应30min。30min后再反应瓶中加入550ml 1mol/L乙胺的二氯甲烷溶液，室温反应过夜。反应结束，用1M盐酸洗、水洗、10％碳酸氢钠洗、水洗、饱和氯化钠洗，然后用无水硫酸镁干燥1小时。干燥结束，过滤滤液浓缩蒸干，减压干燥得侧链全保护亮丙瑞林105.2g(HPLC纯度80.5％，收率99.5％，MS 1916)。
实施例7  pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Trt)-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(pbf)-Pro-NHCH2CH3的制备(侧链全保护亮丙瑞林)
将880.3g侧链全保护亮丙瑞林前体粗肽(466.0mmol)加入到30L的反应釜中，加入10LDMF将固体完全溶解。10min后加入969.8g PyBOP(1864mmol)和251.6g HOBt(1864mmol)，同时加入379.8g乙胺盐酸盐，反应过夜。反应结束，将反应液倒入10L冰水中，过滤，干燥，称重得侧链全保护亮丙瑞林878.6g(HPLC纯度84.2％，收率98.4％，MS 1916)。
实施例8  亮丙瑞林粗肽的制备
将19.2g侧链全保护亮丙瑞林(10mmol，纯度80.5％)加入到250ml反应瓶中，将配制好的裂解试剂200mL(三氟乙酸190ml，水10ml)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时。反应结束，将反应液倒入至2000ml冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得亮丙瑞林粗肽11.872g(HPLC纯度85.7％，收率98.2％，MS 1209)。
实施例9  亮丙瑞林精肽的制备
将11.872g亮丙瑞林粗品使用高效液相制备色谱纯化，流动相：A相：0.1％-0.3％磷酸水溶液用三乙胺调pH至2.0-3.0；B相：乙腈和甲醇(V乙腈∶V甲醇＝4∶1)混合液。流速：70-80ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：12％～43％(55min)，收集纯度大于98.5％以上馏分，浓缩、冻干得到7.242g亮丙瑞林的精肽(HPLC纯度＞98.5％，收率61.0％，MS 1209)，总收率56.0％。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征是，包括如下步骤：
1)由Fmoc-Pro-OH和替代度为0.2mmol/g～1.2mmol/g的HMPB-AM树脂为起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂；
2)将Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂采用Fmoc/tBu固相法逐一偶联的方式依次连接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂；
3)对侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂进行切割，得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽；
4)对侧链全保护亮丙瑞林前体肽经过乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；
5)对侧链全保护亮丙瑞林经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗肽；
6)对亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到亮丙瑞林精肽。
2.如权利要求1所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法方法，其特征在于：所述HMPB-AM树脂替代度为0.6mmol/g，所述保护的Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂是Fmoc-Pro-OH与HMPB-AM树脂以有机溶剂作反应溶剂，在有机碱的作用下生成；所述有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺，或者是二氯甲烷，或者是N-甲基吡咯烷酮，或者是二甲基亚砜；所述有机碱是N，N-二异丙基乙胺，或者是三乙胺，或者是N-甲基吗啡啉，或者是2，4，6-三甲基吡啶。
3.如权利要求1所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法方法，其特征在于：所述的具有保护基团的氨基酸采用Fmoc基团保护，各种氨基酸分别以Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu的形式应用。所述逐一偶联时氨基酸相对于合成规模的投料比为1-6倍；所述逐一偶联剂体系是DCC/HOBt，或者是EDC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt；偶联反应溶剂是四氢呋喃，或者是二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺，或者是二氯甲烷，或者是N-甲基吡咯烷酮，或者是二甲基亚砜；偶联反应的有机碱是N，N-二异丙基乙胺，或者是三乙胺，或者是N-甲基吗啡啉，或者是2，4，6-三甲基吡啶；偶联反应时间为1-3小时。
4.根据权利要求1所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述的对侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂进行切割反应中，裂解体系是三氟乙酸的二氯甲烷溶液或三氟乙醇的二氯甲烷溶液。
5.根据权利要求1所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述的对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应，乙胺化试剂是乙胺/乙酸乙酯溶液，或者是乙胺/乙醇溶液，或者是乙胺/二氯甲烷溶液，或者是乙胺/四氢呋喃溶液和乙胺盐酸盐；偶联试剂或者是DCC/HOBt，或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是EDC.HCl/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt；乙胺的用量是相对于亮丙瑞林的全保护肽摩尔数的1-10倍；乙胺化反应的温度是0-40摄氏度；乙胺化反应的时间是12-24小时；所述在对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应结束后，对反应液进行后处理时采用萃取方式，顺序为1M盐酸洗、水洗、10％碳酸氢钠洗、水洗、饱和氯化钠洗。
6.根据权利要求1所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述侧链全保护亮丙瑞林粗肽经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗品的实验过程中，使用的裂解液体系是三氟乙酸∶水＝95∶5(v/v)，或者是三氟乙酸∶水∶三乙基硅烷＝90∶5∶5(v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶水∶苯酚∶1，2-乙二硫醇＝82.5∶5∶5∶5∶2.5(v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶水∶苯酚∶1，2-乙二硫醇∶三异丙基硅烷＝82.5∶5∶5∶5∶2.5∶1(v/v)，或者是三氟乙酸∶苯甲硫醚∶苯甲醚∶1，2-乙二硫醇＝90∶5∶3∶2(v/v)；裂解反应时间是1-4小时。
7.如权利要求1-6任一所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述的脱侧链保护基团的反应中，Fmoc保护基通过20％六氢哌啶的DMF溶液处理来除去。
8.如权利要求7所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述的逐一偶联时偶联反应结束和脱去Fmoc保护后经过Kaiser Test检测。
9.根据权利要求8所述固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征在于：所述的高压液相柱分离纯化粗品的过程中填料采用C18反相填料。
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