CN102850437A - 一种组氨瑞林的合成方法 - Google Patents

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CN102850437A CN2012103348686A CN201210334868A CN102850437A CN 102850437 A CN102850437 A CN 102850437A CN 2012103348686 A CN2012103348686 A CN 2012103348686A CN 201210334868 A CN201210334868 A CN 201210334868A CN 102850437 A CN102850437 A CN 102850437A
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徐红岩
张旭光
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Glbetter Biochemical (shanghai) Co Ltd
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Abstract

本发明涉及组氨瑞林的一种合成方法，主要解决现有的组胺瑞林合成方法接肽收率低，三废污染多的技术问题。本发明的技术方案：一种组氨瑞林的合成方法，包括如下步骤：a.以CTC树脂为起始原料，在碱性条件下与Fmoc-Pro-OH的羧基相连，得到Fmoc-Pro-CTC树脂；b.其余8个氨基酸按照组氨瑞林依次合成；c.全保护切肽：用全保护切割试剂裂解得：yr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro9肽片段；d.用乙胺与全保护9肽片段在HOBT的作用下获得全保护组氨瑞林片段；e.裂解全保护组氨瑞林片段获得组氨瑞林粗品。

Description

一种组氨瑞林的合成方法
技术领域
本发明涉及组氨瑞林的合成方法 ，特别涉及到固液相合成组氨瑞林的方法
背景技术
组氨瑞林 又称LHRH-Hydrogel implant，RL 0903，结构式为                                                
Figure 481115DEST_PATH_IMAGE001
分子式是：C66H86N18O12    分子量是 :1323.5
  组氨瑞林是一种人工合成的九肽，用于治疗中枢性性早熟症。
组氨瑞林是一种促黄体激素释放激素（LHRH）激动剂，美国学者萧尔（Shore）等报告，对于晚期前列腺癌患者，每年一次给予组氨瑞林长效埋植剂皮下埋植，能长期稳定地抑制睾酮，使其保持去势水平。
现有的合成方法均存在着一定得缺点，每一次脱保护均需用三氟乙酸，故三废污染多，接肽收率低，生产成本高 ，限制了组氨瑞林的大规模生产和应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种组氨瑞林的合成方法，主要解决现有的组胺瑞林合成方法接肽收率低，三废污染多的技术问题。
本发明的技术方案：一种组氨瑞林的合成方法，包括如下步骤： a、以CTC树脂为起始原料 ，在碱性条件下与Fmoc-Pro-OH的羧基相连，得到Fmoc-Pro-CTC树脂；
b、其余8个氨基酸按照组氨瑞林依次合成；
c、全保护切肽：用全保护切割试剂裂解得：Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro 9肽片段；
d.用乙胺与全保护9肽片段在HOBT的作用下获得全保护组氨瑞林片段；
e.裂解全保护组氨瑞林片段获得组氨瑞林粗品。
具体内容如下：
1.合成Fmoc-Pro-CTC树脂
  取CTC树脂用DCM浸泡，使树脂充分溶胀，吹干，然后加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH(FW:337.4)反应1.5小时，吹干,分别用DMF和甲醇洗涤吹干，获得Fmoc-Pro-CTC 树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF(体积比)=1:15；混合物中：CTC树脂的体积浓度为5-20ml/g，Fmoc-Pro-OH摩尔数为CTC树脂的1.5-2倍。
2.制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂：
  在Fmoc-Pro-CTC 树脂中加入脱保护试剂，室温（20-30℃，后同）下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(pbf)-OH(FW:648.8),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的脱保护试剂 PIP:DMF(体积比）=1:4；所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比）=1:15；混合物中：Fmoc-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，Fmoc-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
3.制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
  在 Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Leu-OH(FW:321),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF（体积比）=1:4；混合物中：Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Leu-OH的摩尔数为Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
4.制备Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
  在Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-D-His(Bzl)-OH(FW:467)、TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF(体积比)=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF(体积比)=1:4；混合物中：Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-D-His(Bzl)-OH的摩尔数为Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
5.制备Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
 在Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Tyr(tbu))-OH(FW:459)、TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF(体积比)=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF(体积比)=1:4；混合物中：Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，       Fmoc-Tyr(tbu)-OH的摩尔数为Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，       TBTU的摩尔数为Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
6.制备Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
 在Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Ser(tbu))-OH(FW:383.4)、TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得   Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF(体积比)=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF(体积比)=1:4；混合物中：Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 树脂的体积浓度为 5-20ml/g，       Fmoc-Ser(tbu)-OH的摩尔数为Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，       HOBT的摩尔数为Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，       Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
7.制备Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
     在Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp(Boc)-OH(FW:526.5)、TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得 Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。 
所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比）=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF（体积比）=1:4；混合物中：Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Trp(Boc)-OH的摩尔数为Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，      Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
8.制备Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
  在Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH(FW:619.7),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得    Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比）=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF（体积比）=1:4；混合物中：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔数为Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，      HOBT的摩尔数为Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，   Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
9.制备Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
 在Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Pyr(FW:129),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得   Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。
所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比）=1:15；所用的脱保护试剂 PIP:DMF（体积比）=1:4；混合物中：Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Pyr的摩尔数为Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，     TBTU的摩尔数为Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，     HOBT的摩尔数为Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，     Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
本发明全保护切肽包括如下步骤：
  将Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂加入TFA和DCM(体积比1:99)中在室温下反应1-3小时，过滤，收集滤液，将滤液减压蒸馏，获得全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段。
按照本发明，用乙胺与全保护9肽片段在HOBT的作用下获得全保护组氨瑞林片段，包括如下步骤：
 将HOBT和乙胺盐酸盐加入全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段中，再加入DIC 室温下反应24小时后减压蒸馏，获得全保护的组氨瑞林片段。
按照本发明，裂解全保护氨瑞林片段获得组氨瑞林粗品步骤如下：
将全保护氨瑞林片段加入预冷至0-10℃的切肽试剂（TFA:TIS:H2O体积比 95：2.5：2.5)中 ，反应2-3小时，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次 ，真空干燥，获得组氨瑞林粗品。
本发明的有益效果是：通过固液结合合成组氨瑞林 ，避免了纯固相合成从树脂上切割不安全，不方便，缩短了合成时间，简化了纯液相片段合成的繁琐，使生产成本大大降低提高了市场竞争力。
本发明中一些常用缩写具有以下含义
CTC树脂：2-氯三苯甲基氯树脂
TBTU：O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐
DIC：二异丙基碳二亚胺
HOBT：1-羟基苯并三唑
PIP：哌啶
Fmoc：芴甲氧羰基
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5磺酰基
Trt：三苯甲基
Tbu：叔丁基
Boc：叔丁氧羰基
pGLu：焦谷氨酸
His：组氨酸
Trp：色氨酸
Ser：丝氨酸
Tyr：酪氨酸
Leu：亮氨酸
Arg：精氨酸
Pro：脯氨酸
Pyr：焦谷氨酸   
DIEA:N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DCM：二氯甲烷
TFA：三氟乙酸
EDT：乙二硫醇
Tis：三异丙基硅烷。
具体实施方式
以下参照具体实例对本发明作进一步的详细描述，但本发明不限于这具体实例。
实施例1
制备Fmoc-Pro-CTC树脂
1).取1g CTC树脂（Loading : 1.2mmol/g ，1.2mmol ) ，用15ml DCM 浸泡，使树脂充分溶胀，
2).取0.607g Fmoc-Pro-OH(FW:337.4 ,1.8mmol)，用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3)吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1).加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2)取2.4gFmoc-Arg(pbf)-OH(FW:648.8 ，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321 ，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5h，
3）吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1).加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2).取1.27g Fmoc-Leu-OH(FW:353.4，3.6mmol)，1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，  3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取1.68gFmoc-D-His(Bzl)-OH(FW:467，3.6mmol)，1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，  3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取1.65gFmoc-Tyr(tbu)-OH(FW:459，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，  3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
.制备Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取1.38gFmoc-Ser(tbu)-OH(FW:383.4，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，  3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取1.9gFmoc-Trp(Boc)-OH(FW:526.5，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol),0.5g HOBT(FW:135，  3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取2.23gFmoc-His(Trt)-OH(FW:619.7，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol) ,0.5gHOBT(FW:135，3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加15ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取0.46gPyr(FW:129，3.6mmol),1.2gTBTU(FW:321，3.6mmol),0.5g HOBT(FW:135，3.6mmol)  用15ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3)吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
全保护切割：
将3.5G Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂转移至50ml的容器中，加入预先配制好的溶剂TFA和DCM(体积比1:99)30ml 室温搅拌2.5小时，过滤，收集滤液，将滤液减压蒸馏，获得2.5g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段。
乙胺化  ：
0.2g HOBT ,0.2g 乙胺盐酸盐 加入2.5g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段中，再加入DIC 0.3ml，室温反应过夜（24小时），减压蒸馏，获得全保护的组氨瑞林片段。
裂解全保护氨瑞林片段 ：
全保护氨瑞林片段中加入预冷至0-10℃的切肽试剂（TFA/TIS/H2O 体积比为95:2.5:2.5)  30ml ，反应2-3小时，加入120ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次 ，真空干燥，获得1.1g(8.3mmol)组氨瑞林粗品，收率70.2%。
实施例2 
制备Fmoc-Pro-CTC树脂
1).取10g CTC树脂（Loading : 1.2mmol/g ，12mmol ) ，用100ml DCM 浸泡，使树脂充分溶胀，
2).取6.1g Fmoc-Pro-OH(FW:337.4 ,18mmol)，用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3)吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取23.3gFmoc-Arg(pbf)-OH(FW:648.8，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8HOBT(FW:135，36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5h，
3）吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取12.7g Fmoc-Leu-OH(FW:353.4，36mmol)，11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8gHOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3）吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取16.8gFmoc-D-His(Bzl)-OH(FW:467，36mmol)，11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8gHOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取16.5gFmoc-Tyr(tbu)-OH(FW:459，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8gHOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
.制备Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取13.8gFmoc-Ser(tbu)-OH(FW:383.4，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8gHOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取18.9gFmoc-Trp(Boc)-OH(FW:526.5，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol)4.8g HOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取22.3gFmoc-His(Trt)-OH(FW:619.7，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol) ,4.8gHOBT(FW:135，  36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加100ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取4.6gPyr(FW:129，36mmol),11.6gTBTU(FW:321，36mmol),4.8g HOBT(FW:135，36mmol)  用100ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3.)吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
全保护切割：
将34.5G Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂转移至500ml的容器中，加入预先配制好的溶剂TFA和DCM(体积比1/99) 350ml 室温搅拌2.5小时，过滤，收集滤液，将滤液减压蒸馏，获得24.5g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段。
乙胺化  ：
1.7g HOBT ,1.8g 乙胺盐酸盐 加入24.5g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段中，再加入DIC 2.5ml，室温反应过夜（24小时），减压蒸馏，获得全保护的组氨瑞林片段。
裂解全保护氨瑞林片段 ：
全保护氨瑞林片段中加入预冷至0-10℃的切肽试剂（TFA/TIS/H2O 体积比为95:2.5:2.5)  350ml ，反应2-3小时，加入1000ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次 ，真空干燥，获得12g(9mmol)组氨瑞林粗品，收率75%。
实施例3
制备Fmoc-Pro-CTC树脂
1).取150g CTC树脂（Loading : 1.2mmol/g ，180mmol ) ，用1000ml DCM 浸泡，使树脂充分溶胀，
2).取91.1g Fmoc-Pro-OH(FW:337.4 ,270mmol)，用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3)吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1).加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2)取350.1gFmoc-Arg(pbf)-OH(FW:648.8 ，540mmol),173.4gTBTU(FW:321 ，540mmol) , 72.9HOBT(FW:135，540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5h，
3）吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1).加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2)取190.8g Fmoc-Leu-OH(FW:353.4，540mmol)，173.4gTBTU(FW:321，540mmol) ,72.9gHOBT(FW:135，  540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3)吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取252.1gFmoc-D-His(Bzl)-OH(FW:467，540mmol)，173.4gTBTU(FW:321，36mmol) ,72.9gHOBT(FW:135，  36mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取247.8gFmoc-Tyr(tbu)-OH(FW:459，540mmol),173.4gTBTU(FW:321，540mmol) ,72.9gHOBT(FW:135，  540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
.制备Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取207gFmoc-Ser(tbu)-OH(FW:383.4，540mmol),173.4gTBTU(FW:321，540mmol),72.9g HOBT(FW:135，  540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取284.3gFmoc-Trp(Boc)-OH(FW:526.5，540mmol),173.4gTBTU(FW:321，540mmol) ,72.9gHOBT(FW:135，  540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂 
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取334.6gFmoc-His(Trt)-OH(FW:619.7，540mmol),173.4gTBTU(FW:321，540mmol) ,72.9gHOBT(FW:135， 540mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干,分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
制备Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
1）加1000ml脱保护试剂，室温下反应15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干，
2）取69gPyr(FW:129，540mmol),173.4gTBTU(FW:321，36mmol) ,72.9gHOBT(FW:135，36mmol)  用1000ml接肽试剂溶解，加入反应器，室温反应1.5小时，
3).吹干，分别用DMF和甲醇洗涤3次，吹干。
全保护切割：
将512.3G Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂转移至5000ml的容器中，加入预先配制好的溶剂TFA和DCM(体积比1/99) 3500ml 室温搅拌2.5小时，过滤，收集滤液，将滤液减压蒸馏，获得361.2g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段。
乙胺化  ：
26.1g HOBT ,27.2g 乙胺盐酸盐 加入512.3g全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段中，再加入DIC 39ml，室温反应过夜（24小时），减压蒸馏，获得全保护的组氨瑞林片段。
裂解全保护氨瑞林片段 ：
全保护氨瑞林片段中加入预冷至0-10℃的切肽试剂（TFA/TIS/H2O 体积比为95:2.5:2.5)  3500ml ，反应2-3小时，加入10000ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次 ，真空干燥，获得202g(151mmol)组氨瑞林粗品，收率84.1%。 

Claims (7)

1.一种组氨瑞林的合成方法 ，包括以下步骤： 
a.以2-氯三苯甲基氯树脂为起始原料 ，在碱性条件下与芴甲氧羰基保护脯氨酸的羧基相连，得到芴甲氧羰基保护脯氨酸-2氯三苯甲基氯树脂；
b.其余8个氨基酸按照组氨瑞林依次合成；
c.全保护切肽：用全保护切割试剂裂解得全保护9肽片段；
d.用乙胺与全保护9肽片段在1-羟基苯并三唑的作用下获得全保护组氨瑞林片段；
e.裂解全保护组氨瑞林片段获得组氨瑞林粗品。
2.根据权利要求 1所述的合成方法，其特征在于步骤a具体内容如下：
取2-氯三苯甲基氯树脂用二氯甲烷浸泡，使树脂充分溶胀，吹干，然后加入接肽试剂溶解的芴甲氧羰基保护脯氨酸反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤吹干，获得芴甲氧羰基保护脯氨酸2-氯三苯甲基氯树脂；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15，2-氯三苯甲基氯树脂的体积浓度为5-20ml/g，芴甲氧羰基保护脯氨酸摩尔数为2-氯三苯甲基氯树脂的1.5-2倍。
3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于步骤b具体内容如下：
  a.制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂：
   在芴甲氧羰基保护脯氨酸-2氯三苯甲基氯树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的芴甲氧羰基保护精氨酸、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂，所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：芴甲氧羰基保护脯氨酸-2氯三苯甲基氯树脂的体积浓度为 5-20ml/g，芴甲氧羰基保护精氨酸的摩尔数为芴甲氧羰基保护脯氨酸-2氯三苯甲基氯树脂的2-3倍，芴甲氧羰基保护脯氨酸-2氯三苯甲基氯树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
b.制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
   在 Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Leu-OH、 O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂，所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Leu-OH的摩尔数为Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
c.制备Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
  在Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-D-His(Bzl)-OH、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-D-His(Bzl)-OH的摩尔数为Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
d.制备Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
  在Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Tyr(tbu))-OH、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Tyr(tbu)-OH的摩尔数为Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
e.制备Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂
 在Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Ser(tbu))-OH、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：   Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 树脂的体积浓度为 5-20ml/g，       Fmoc-Ser(tbu)-OH的摩尔数为Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，Fmoc-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
f.制备Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
     在Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Trp(Boc)-OH、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得 Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：     Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Trp(Boc)-OH的摩尔数为Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，      Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
g.制备Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
   在Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得 Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：      Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔数为Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，      Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂；
h.制备Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂  
  在Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Pyr、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸盐和1-羟基苯并三唑的混合物，反应，吹干，分别用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗涤，吹干，获得 Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂；所用的脱保护试剂 哌啶: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:4；所用的接肽试剂N,N-二异丙基乙胺: N,N-二甲基甲酰胺体积比=1:15；混合物中：     Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Pyr的摩尔数为Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的2-3倍，     Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于所述的步骤a-h中，脱保护反应温度为室温，反应时间5-15分钟，接肽反应温度为室温，反应时间为1-1.5小时。
5.根据权利要求１所述的合成方法，其特征在于，所述的全保护切肽步骤如下：
 将Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂加入体积比为1:99的三氟乙酸和二氯甲烷中反应1-3小时，过滤，收集滤液，将滤液减压蒸馏，获得全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段。
6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述的步骤d具体内容如下：
 将1-羟基苯并三唑加入全保护的Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro片段中，再加入二异丙基碳二亚胺室温下反应24小时后减压蒸馏，获得全保护的组氨瑞林片段。
7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述的步骤e具体内容如下：
将全保护氨瑞林片段加入预冷至0-10℃的切肽试剂中，反应2-3小时，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次 ，真空干燥，获得组氨瑞林粗品；所述的切肽试剂为下述混合物：三氟乙酸：三异丙基硅烷：水体积比为:95:2.5:2.5。
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