CN101530393A

CN101530393A - 一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101530393A
Application number: CN200910019999A
Authority: CN
Inventors: 王明
Original assignee: Individual
Current assignee: Hainan Lingkang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-04-07
Filing date: 2009-04-07
Publication date: 2009-09-16
Anticipated expiration: 2029-04-07
Also published as: CN101530393B

Abstract

本发明涉及一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂及其制备方法。本发明的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于各组分及重量份为：克林霉素磷酸酯15－25份，双肉豆蔻酸卵磷脂10－40份，胆固醇1－10份，抗氧剂1－5份，冻干支持剂5－25份。

Description

一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂质体药用制剂，具体涉及一种克林霉素磷酸酯脂质体的冻干制剂及其制备方法。

背景技术

克林霉素磷酸酯，其化学名称为(2S-反式)-6-(1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷碳酸胺基)-1-硫代-甲基-7-氯-6，7，8-三脱氧-L-苏式-α-D-半乳糖吡喃糖苷-2-二氢磷酸酯，分子式为C₁₈H₃₄ClN₂O₈PS，结构式为：

克林霉素磷酸酯为克林霉素的衍生物，临床上多用来治疗革兰阳性球菌与厌氧菌的感染，对青霉素、四环素、红霉素耐药的细菌本品也有效，对各种厌氧菌作用突出是本品特色，也是金黄色葡萄球菌骨髓炎的首选治疗药物，临床上广泛用于厌氧菌引起的腹腔、妇科感染、敏感的革兰阳性菌引起的呼吸道、关节、软组织、骨组织、胆道感染及败血症、心内膜炎等疾病。

目前该品种上市销售的剂型有水针剂、输液剂、冻干粉针剂和无菌分装粉针剂。克林霉素磷酸酯稳定性较差，尤其对热非常敏感，而水针和输液剂都要进行高温灭菌，致使分解破坏，严重影响的本品的长期质量稳定性，即使加入各种附加剂，效果也不明显，而且副作用较大。冻干粉针剂配液过程中克林霉素磷酸酯溶于水也会导致分解，而且成品溶解性差，用生理盐水或葡萄糖稀释时常出现混浊或结晶，临床使用安全性差，无菌分装剂对原料要求较高，精制成本较大，很难达到无菌要求。

CN1338258A公开了一种制备克林霉素磷酸酯粉针剂的方法，用表面活性剂泊洛沙姆188或吐温80作为辅料，加快了克林霉素磷酸酯的溶解并保持澄清。其缺点在于泊洛沙姆188或吐温80具有很强的溶血性，对人体有很强的毒副作用，不适于作为静脉注射用辅料。

CN1602889A公开了一种克林霉素磷酸脂粉针剂的制备方法，包括：取克林霉素磷酸脂加入乙醇溶液至溶解；加入活性炭脱色后，进行粗滤、精滤，放置析晶，过滤去掉上清夜，得克林霉素磷酸脂结晶体；再进行第二次转溶、重结晶一次，过滤得到重结晶的克林霉素磷酸脂结晶体；烘干，粉碎，在无菌环境下分装，轧盖，包装即得。其采用了活性碳，增加了注射的危险性，更为重要的是第二次克林霉素磷酸脂的结晶是在60-80℃下烘干，将导致其大量分解，失去了药理学活性，同时其分解产物还具有不可预知的严重副作用。

CN 1969875A公开了一种克林霉素磷酸酯注射液的制剂，其在空气洁净度为全室百级条件下，先将一定量的克林霉素磷酸酯原料溶于注射用水，克林霉素磷酸酯和适最的氢氧化钠交替投入，维持pH值在6.0-6.4之间，搅匀，用注射用水定容至注射药液的浓度，将药液中加入0.0S％的针用活性炭吸附，然后用0.45um微孔滤膜或相应筒式滤器粗滤，再以0.22μm微孔滤膜或相应筒式滤器精滤除菌，在百级条件下灌装封日即得本成品注射液。制备过程中，在水存在下，克林霉素磷酸酯和强碱的交替加入导致其分解加剧，活性成分含量低下。

CN 101301278 A公开了一种克林霉素磷酸酯冻干粉针及其制备方法，由克林霉素磷酸酯溶液中加入NaOH后冻干而得。制备工艺中同样由于使用了大量的水和强碱，也造成了克林霉素磷酸酯的大量分解。

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层泡囊，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约4nm，后来将这种类似生物膜结构的双分子小囊成为脂质体。脂质体研究是当前一个十分活跃的领域，脂质体最早是指天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，现在也可以由人工合成的磷脂化合物来制备。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

CN 101095659A公开了一种脂质体组合药物及其制备方法，所述脂质体组合药物是包裹有克林霉素与氟罗沙星、左氧氟罗沙星、环丙沙星中的任意一种或几种的任意比例混合物的脂质体。其为了增加氟罗沙星在水中的溶解度，采用羟丙基-β-环糊精对其进行包合，但是环糊精冻干之后，再次用水重建溶液导致粒径变大，溶液混浊，甚至不能用于静脉注射。

CN 1520808A公开一种莫司汀的前体脂质体粉针制剂及其制备方法，其组分和含量为：卡莫司汀3-12％、磷脂19-25％、固醇3.5-6.5％、支持剂54-73％。将卡莫司汀、磷脂类、固醇类配制成溶液，将该溶液分次加入到支持剂晶体性粉末中混合，真空干燥后行成卡莫司汀粉针剂。CN101129361A，公开了一种西罗莫司脂质体冻干粉针及其制备工艺，选用脂质体成分、缓冲液、有机溶剂、抗氧化剂和冻干保护剂，采用薄膜分散法，经高压乳匀或超声波分散法处理制成均匀的包裹西罗莫司的脂质体混悬液。上述制备方法中将活性成分、磷脂类、固醇类一起加入乙醇，导致脂质体包封不完全，容易渗漏，降低了其生物利用度，而且乙醇/氯仿在冻干过程中清除不完全，获得的注射液中含有大量有机溶剂残留，特别是氯仿残留严重影响患者的健康。

CN 101249074 A公开了一种氨曲南脂质体冻干制剂，将氨曲南用含有抗氧剂的由中性磷脂、负电荷磷脂和胆固醇形成的质脂体包封得到的冻干制剂。同样采用氯仿-甲醇的溶剂体系，未能很好解决冻干过程的塌陷以及复溶之后的渗漏问题。

以上脂质体制剂最终为液体制剂，制剂的稳定性常常无法解决，表现以下多个方面：例如，脂质体属于热力学不稳定的分散系，脂质体混悬于水相时，常常会出现聚集、融合等现象，导致粒径变大，严重时可能出现分层，并且由于粒径的变化，还可能导致用于静脉给药的制剂无法使用。由于磷脂本身的特性，磷脂存在于水相时，很容易出现水解、氧化等现象，并且磷脂水解后会形成溶血磷脂，一方面增加制剂的毒性，另一方面也容易使脂质体解体，造成被包封药物的渗漏。药物的包封率发生变化，必定要影响制剂的疗效。

发明内容

针对目前的克林霉素磷酸酯溶液稳定性差，目前的上市制剂难以达到有效期的质量要求问题。因此，本发明的目的在于提供一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，并且克服了常见脂质体冻干制剂的上述缺点。

本发明的目的还在于提供一种制备解决了以上技术问题的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的方法。

本发明解决的技术方案如下：

一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于主要由克林霉素磷酸酯、双肉豆蔻酸卵磷脂、胆固醇、抗氧剂、冻干支持剂经冻干制成。双肉豆蔻酸卵磷脂、胆固醇形成的脂质体对克林霉素磷酸酯具有更好的包封效果。

其中，抗氧剂选自二丁甲苯酚、没食子酸丙酯、特丁基对苯二酚、甲醛合亚硫酸氢钠、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚中的一种或多种。

冻干支持剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸的一种或多种，优选自重量比1:1:1的甘氨酸/山梨醇/葡萄糖的三元冻干支持剂。

本发明所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，作为优选，所述的组分及重量百分比为：克林霉素磷酸酯15-25份，双肉豆蔻酸卵磷脂10-40份，胆固醇1-10份，抗氧剂1-5份和冻干支持剂5-25份，优选是双肉豆蔻酸卵磷脂和胆固醇的重量比是5:1。

本发明所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，所述的组分还可包括缓冲溶液，缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种，优选是磷酸盐缓冲液。

本发明还提供了一种制备克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的方法，步骤包括：

(1)将双肉豆蔻酸卵磷脂、胆固醇和抗氧剂溶于有机溶剂中，加入缓冲盐溶液，蒸除有机溶剂，转移至高速搅拌设备，搅拌10-30分钟，过滤，灭菌、超声；

(2)在无菌条件下，加入无菌的克林霉素磷酸酯和冻干支持剂并溶解，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得冻干脂质体制剂。

上述所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备方法，有机溶剂选自乙醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇中的一种或多种的组合，优选自体积比1:1的叔丁醇和异丙醇的混合物。

冷冻干燥过程对于脂质体冻干粉针的质量具有重要影响，现有技术中所述的脂质体的冻干工艺，由于未对冻干工艺付出创造性的研究，直接导致冻干过程中脂质体膜破坏，活性成分渗出以及水化复溶之后，脂质体融合，变大等严重不良后果。

本发明的冻干过程采用了优选的冻干支持剂，可以保证样品最大程度实现玻璃化，形成的小结晶对脂质体膜破坏作用更小，更好保证了水化重建之后的脂质体的结构完整。

本发明提供的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，进行稳定性试验考察，在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。

本发明提供的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。

本发明提供的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，与现有技术相比，具有意想不到的效果，主要优点如下：

(1)克林霉素磷酸酯被包裹于脂质体内，大大提高了稳定性，保证了产品质量；

(2)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；

(3)采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产，产品质量稳定，是一种独特和普遍适用的，低成本的工业化制备方法。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。

实施例1 克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备

处方(100瓶)：克林霉素磷酸酯 30g

双肉豆蔻酸卵磷脂 80g

胆固醇 20g

维生素E 10g

甘露醇 40g

制备工艺

(1)称取75g双肉豆蔻酸卵磷脂、20g胆固醇和10g维生素E溶于800ml叔丁醇中，加热熔融，加入pH值6.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除去叔丁醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌20分钟，过滤，灭菌，超声10分钟；(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的克林霉素磷酸酯30g和甘露醇40g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得克林霉素磷酸酯脂质体冻干剂。

实施例2 克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备

处方(100瓶)：克林霉素磷酸酯 60g

双肉豆蔻酸卵磷脂 30g

胆固醇 6g

没食子酸丙酯 15g

甘氨酸 20g

山梨醇 20g

葡萄糖 20g

制备工艺

(1)称取30g双肉豆蔻酸卵磷脂、6g胆固醇和没食子酸丙酯15g溶于500ml的体积比1:1的叔丁醇和异丙醇的混合物中，加热熔融，加入pH值6.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除叔丁醇和异丙醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌10分钟，过滤，灭菌，超声20分钟；

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的克林霉素磷酸酯60g和三元冻干支持剂甘氨酸20g、山梨醇20g、葡萄糖20g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得克林霉素磷酸酯脂质体冻干剂。

实施例3 克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备

处方(100瓶)：克林霉素磷酸酯 90g

双肉豆蔻酸卵磷脂 120g

胆固醇 25g

叔丁基对羟基茴香醚 12g

甘氨酸 40g

山梨醇 40g

葡萄糖 40g

制备工艺

(1)称取120g双肉豆蔻酸卵磷脂、25g胆固醇和12g叔丁基对羟基茴香醚溶于1000ml的体积比1:1的叔丁醇和异丙醇的混合物中，加热熔融，加入pH值6.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除丙酮，转移至组织捣碎机中，高速搅拌10分钟，过滤，灭菌，超声10分钟；

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的克林霉素磷酸酯90g、三元冻干支持剂甘氨酸40g、山梨醇40g、葡萄糖40g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得克林霉素磷酸酯脂质体冻干剂。

实施例4 克林霉素磷酸酯冻干脂质体的制备

处方(100瓶)：克林霉素磷酸酯 120g

双肉豆蔻酸卵磷脂 80g

胆固醇 50g

抗坏血酸棕榈酸酯 35g

氯化钠 200g

制备工艺

(1)称取80g双肉豆蔻酸卵磷脂、50g胆固醇和抗坏血酸棕榈酸酯35g溶于1000ml的体积比1:1的叔丁醇和异丙醇的混合物中，加热熔融，加入pH值6.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除叔丁醇和异丙醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌20分钟，过滤，灭菌，超声20分钟；

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的克林霉素磷酸酯120g和氯化钠200g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得克林霉素磷酸酯脂质体冻干剂。

实施例5 质量研究

将以上各实施例制备的样品与上市的克林霉素磷酸酯冻干制剂(珠海亿邦制药有限公司生产，批号20080912)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表1；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表2；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表3。

表1 影响因素结果

表2 加速试验结果

表3 长期试验结果

由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时上市的克林霉素磷酸酯冻干粉针澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明制备的样品外观性状没有明显变化，为白色块状物，复溶良好，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。

同时，经检测，本发明的产品水化重建之后，脂质体未发生融合渗漏，效果远远优于现有产品。

实施例6 安全性试验

异常毒性检查依据2005年版药典附录XIC异常毒性检查法，将本发明制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。

热源检查依据2005版药典附录XID热源法进行检查，结果符合规定。

Claims

1、一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于主要由克林霉素磷酸酯、双肉豆蔻酸卵磷脂、胆固醇、抗氧剂和冻干支持剂经冻干制备而成。

2、根据权利要求1的克林霉素磷酸酯冻干脂质体制剂，其特征在于各组分及重量份为：克林霉素磷酸酯15-25份，双肉豆蔻酸卵磷脂10-40份，胆固醇1-10份，抗氧剂1-5份和冻干支持剂5-25份。

3、根据权利要求1-2任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于所述的抗氧剂选自二丁甲苯酚、没食子酸丙酯、特丁基对苯二酚、甲醛合亚硫酸氢钠、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚中的一种或多种。

4、根据权利要求1-3任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于所述的冻干支持剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸的一种或多种。

5、根据权利要求1-4任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于所述的冻干支持剂选自重量比1:1:1的甘氨酸/山梨醇/葡萄糖的三元冻干支持剂。

6、根据权利要求1-5任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂，其特征在于所述的组分还可包括缓冲溶液，缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

7、一种克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备方法，制备步骤包括：

(2)在无菌条件下，加入无菌的克林霉素磷酸酯和冻干支持剂并溶解，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得冻干脂质体粉针剂。

8、根据权利要求7所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备方法，其特征在于有机溶剂选自乙醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇中的一种或多种的组合。

9、根据权利要求7-8任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂的制备方法，其特征在于有机溶剂优选自体积比1:1的叔丁醇和异丙醇的混合物。

10、权利要求1-9任一项所述的克林霉素磷酸酯脂质体冻干制剂在制备治疗革兰阳性球菌与厌氧菌的感染的药物中的应用。