CN102258487B - 一种美罗培南脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种美罗培南脂质体注射剂，其特征在于主要由美罗培南、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、聚醚188、抗氧剂和支持剂制成，其中各组分的重量份优选为美罗培南1份、磷脂酰乙醇胺2-8份胆固醇1-5份、聚醚1880.2-1份、抗氧化剂0.1-0.4份、支持剂5-10份。本发明制得的脂质体注射剂复溶性好，稳定性好，包封率高，副作用小，提高了制剂产品质量，减少了毒副作用，提高了生物利用度，疗效更显著。

Description

一种美罗培南脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种美罗培南脂质体注射剂的制法，属于医药制剂领域。

背景技术

美罗培南(Biapenem)，属于培南类抗生素，为白色至微黄色结晶性粉末，其化学名称为：(-)6-[[(4R，5S，6S)-2-羧基-6[(1R)-1-羟乙基]-4-甲基-7-氧代-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-3-基]硫]-6，7-二氢-5H-吡唑[1，2-a][1，2，4]三唑-4-鎓内盐，分子式为：C₁₅H₁₈N₄O₄S，分子量：350.40，结构式为：

美罗培南通过抑制细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用，美罗培南容易穿透大多数革兰氏阳性和阴性细菌的细胞壁，而到达其作用靶点青霉素结合蛋白。

美罗培南对革兰阳性菌、革兰阴性菌均敏感，尤其对革兰阴性菌有很强的抗菌活性。美罗培南对约90％肠杆菌属的最小抑菌浓度为0.08-0.15mg/L；90％以上的铜绿假单胞菌菌株对其高度敏感，最小抑菌浓度＜4mg/L；全部嗜血菌(包括耐氨苄西林菌株)对其高度敏感，最小抑菌浓度为0.06-1mg/L；淋球菌对美罗培南也高度敏感，表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌和其它凝固酶阴性葡萄球菌对美罗培南敏感；粪肠球菌的大多数菌株对美罗培南高度或中度敏感；美罗培南可抑制几乎全部的脆弱拟杆菌；厌氧菌如消化链球菌属、丙酸杆菌属、放线菌属等也对美罗培南敏感。美罗培南临床上主要适用于敏感菌引起的下列感染：呼吸系统感染，腹内感染，泌尿、生殖系统感染，骨、关节、皮肤、软组织感染，眼及耳鼻喉感染及其它严重感染如脑膜炎、败血症等。

目前上市的美罗培南药物的产品主要是注射剂，其仅仅是将美罗培南进行简单冻干，这种剂型的美罗培南生物利用度低。

脂质体(liposomes)最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。Banghan等发现，当磷脂分散在水中时形成多层囊泡，而且每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开。后来将这种由脂质双分子组成，内部为水相的闭合囊泡称为脂质体。

人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。

为了提高美罗培南的生物利用度，增强其靶向性，本发明人对美罗培南的脂质体冻干粉针剂进行研究，取得了预料不到的效果，克服现有的美罗培南制剂存在的一系列问题，提高药物的溶解性和稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种美罗培南脂质体注射剂，通过美罗培南和特定组合的磷脂酰乙醇胺、胆固醇、聚醚188、抗氧化剂和支持剂，制得美罗培南脂质体，再冷冻干燥，无菌分装，制得脂质体注射剂。

本发明制得的美罗培南脂质体注射剂复溶性好，稳定性好，包封率高，提高了制剂产品质量，减少了毒副作用，生物利用度大大提高，疗效更显著。

脂质体的制备方法虽然属于现有技术的部分，但是选择适当的脂质体组成成分和制法，却给不同的药物带来了巨大挑战。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物物化性质直接地密切相关，因此，选择适合的支持剂制备具有良好品质的美罗培南脂质体是本发明付出创造性劳动的成果。

本发明提供一种美罗培南脂质体注射剂，主要是由下列重量份的成分制成：

作为本发明的一个优选实施方案中，美罗培南脂质体注射剂各组分重量份数为：

抗氧化剂可以防止脂质体基质的氧化，增加空白脂质体的稳定性，是制备脂质体的一种常用辅料。本发明的优选实施方案中，抗氧化剂优选叔丁基对羟基茴香醚。

当冻干制品外型不饱满或萎缩成团粒时，有时加入支持剂，起固体支持作用，使干燥残留物能基本保持原来的体积，并维持足够的强度，避免贮存时破碎。使用的支持剂除必须具备注射用辅料的一般要求外，还应具备引湿性小，共熔点高、溶解速度快、冻干后外观洁白、均匀、细腻、廉价易得等。本发明优选为PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。

本发明脂质体的粒径在10nm-380nm之间，进一步地可控制在60-300nm之间，包封率可达到85％以上。同时，使用冷冻干燥技术进行冷冻干燥，制成冻干粉针，除去脂质体中的水相，进一步增强了美罗培南脂质体的稳定性，保存条件也更加宽泛。此外，复水后脂质体的各种理化性质与冻干前基本相同。

本发明还提供了一种制备埃索美拉唑钠脂质体注射剂的方法，具体包括以下步骤：

(1)将美罗培南、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、聚醚188和抗氧剂加入适量有机溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)加入适量缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入支持剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂。

本发明所述的制备方法中，有机溶剂可选自氯仿、乙醇、正丁醇、丙酮和中的一种或几种，优选体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂。

本发明所述的制备方法中，缓冲溶液选自枸橼酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液和碳酸盐缓冲溶液中的一种或几种，优选为PH为5.6的碳酸盐缓冲溶液。

作为本发明的一个优选实施方案，所述的美罗培南脂质体注射剂的制备方法包括如下步骤：

(1)将美罗培南、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、聚醚188和抗氧剂加入体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去乙醇和丙酮，制得磷脂膜；

(2)加入pH为5.6的碳酸盐缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入支持剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂。

与现有技术相比，本发明提供的美罗培南脂质体注射剂及其制备方法，具有以下优点：包封率高，稳定性高，提高了药物的治疗指数，降低了药物的毒性，减少了毒副作用，提高了制剂产品质量；本发明方法制备工艺简单，适合于工业化大生产。

具体实施方式

下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行对其进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1  美罗培南脂质体注射剂

处方(1000瓶)：

生产工艺：

(1)将25g美罗培南、100g磷脂酰乙醇胺、125g胆固醇、5g叔丁基对羟基茴香醚和25g聚醚188加入800ml体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去乙醇和丙酮，制得磷脂膜；

(2)加入800ml pH为5.6的碳酸盐缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得美罗培南脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入250g的PVP，保温40-50℃搅拌20-30分钟，使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂。

实施例2  美罗培南脂质体注射剂的制备

处方(1000瓶)：

制备工艺：

(1)将50g美罗培南、300g磷脂酰乙醇胺、150g胆固醇、10g叔丁基对羟基茴香醚和40g聚醚188加入1000ml体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去乙醇和丙酮，制得磷脂膜；

(2)加入1000ml的pH为5.6的碳酸盐缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得美罗培南脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入300g的PVP，保温40-50℃搅拌20-30分钟，使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂。

实施例3  美罗培南脂质体注射剂的制备

处方(1000瓶)：

制备工艺：

(1)将100g美罗培南、200g磷脂酰乙醇胺、100g胆固醇、10g叔丁基对羟基茴香醚和20g聚醚188加入800ml体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去乙醇和丙酮，制得磷脂膜；

(2)加入800ml的pH为5.6的碳酸盐缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得美罗培南脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入500g的PVP，保温40-50℃搅拌20-30分钟，使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂。

实施例4  对比例1-3的制备

采用实施例1的工艺完成对比例的制备。

试验例1  粒径的测定

室温条件下，取实施例和对比例的美罗培南脂质体制剂，以生理盐水配成0.1％的溶液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果如表1：

表1  粒径检测结果

由以上结果可知，实施例1-3制得的固体脂质纳米粒粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的固体脂质纳米粒粒径不均匀，形状不定，大小不一。

试验例2  包封率的测定

将实施例和对比例制备的美罗培南脂质体注射剂加水溶解稀释成0.1％的溶液，高速离心，5000r/min，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测定美罗培南含量，计算包封率，结果如表2：

表2  包封率测定结果

由以上结果可知，实施例1-3制备的脂质体制注射剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体注射剂的包封率，说明本发明的产品具有预料不到的效果。

试验例3  稳定性考察

将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品和上市注射用美罗培南(批号：H20090314阿斯利康制药有限公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果如表3：

表3  加速试验结果

由以上结果可知，加速6月时，上市制剂和对比例的样品变成淡黄色粉末，含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4  渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，分别室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果见表4

表4  渗漏率试验结果

由以上试验结果可知，本发明实施例制备的样品在长期储存过长中渗漏率变化不大，而对比例的样品渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的美罗培南脂质体注射剂具有较高的稳定性。

试验例5  生物利用度的测定

将24只1岁左右比格犬随机分成4组，静脉给予实施例1和对比例1-3的美罗培南0.5g，给药结束后0，0.25，0.5，1，1.5，2.5，3.5，5.5和7.5h采集静脉血1ml，注入取血管中，高速离心分离血清，精确吸取血清样品190μL置于1.5mL Eppendorf微量离心管中，加入10μL内标饱和甲氨喋呤溶液，再加入甲醇400μL，涡旋混合1min，16000rpm高速离心5min，取上清液200μL加入200μL水，2500rpm涡旋30s混匀，进行HPLC-MS分析，用WinNonline version5.2程序进行药动学数据处理。试验结果如下表：

有关药动学参数

由以上实验数据可以看出，本发明实施例制备的美罗培南脂质体注射剂和对比例相比，生物利用度大大提高，充分说明了本发明由于赋形剂和活性成分的制成的美罗培南脂质体注射剂，具有协同作用，制备的注射剂大大地提高生物利用度，获得了预料不到技术效果。

Claims (3)

1.一种美罗培南脂质体注射剂，其特征在于主要由下列重量份的成分制成：

2.根据权利要求1所述的美罗培南脂质体注射剂，其特征在于所述重量份的成分为：

3.一种制备权利要求1或2任一项所述的美罗培南脂质体注射剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将美罗培南、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、聚醚188和叔丁基对羟基茴香醚加入有机溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)加入缓冲溶液，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液；

(3)向上述脂质体混悬液中加入聚乙烯吡咯烷酮，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，得美罗培南脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，粉碎，在无菌条件下分装，制得美罗培南脂质体注射剂；

其中有机溶剂选自体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂；

其中缓冲溶液选自pH为5.6的碳酸盐缓冲溶液。