CN101495636B

CN101495636B - 锦鲤疱疹病毒（khv）病用dna疫苗

Info

Publication number: CN101495636B
Application number: CN2007800128639A
Authority: CN
Inventors: 青木宙; 广野育生
Original assignee: University of Tokyo NUC
Current assignee: University of Tokyo NUC
Priority date: 2006-04-13
Filing date: 2007-01-30
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2027-01-30
Also published as: EP2011876A4; CN101495636A; JP5239023B2; WO2007119279A1; EP2011876B1; JPWO2007119279A1; IL194474A0; EP2011876A1; US8052977B2; US20090060951A1; TW200842189A

Abstract

本发明提供一种鱼类用DNA疫苗，该疫苗用于诱导针对鲤鱼的锦鲤疱疹病毒(KHV)病的防御免疫。上述DNA疫苗含有包含核苷酸序列的DNA、或者含上述DNA的表达载体作为有效成分，其中上述核苷酸序列编码针对鲤鱼的锦鲤疱疹病毒(KHV)的免疫原性多肽。

Description

锦鲤疱疹病毒(KHV)病用DNA疫苗

技术领域

本发明涉及一种DNA疫苗，该DNA疫苗用于诱导锦鲤疱疹病毒(Koiherpesvirus；KHV)对鱼类的感染症的防御免疫。

背景技术

锦鲤疱疹病毒病是一种由于感染锦鲤疱疹病毒(KHV)而在黑鲤鱼或锦鲤中发生的疾病，发病时行动变得缓慢，不再吃鱼食，但是显著的外部症状则比较少，能够看到鳃的褪色或糜烂(溃烂)等，由幼鱼到成鱼均有发生，是一种死亡率比较高的病。

上述锦鲤疱疹病毒病，最早是在1998年5月，在以色列发出了发病报告。之后，同样是在以色列，该年秋及翌年春2次发病，包含出口用鲤鱼在内的约600吨鲤鱼死亡。受损总额超过400万美元。之后，世界各国(以色列、英国、德国、荷兰、比利时、美国、印度尼西亚、台湾)等纷纷发出了发病报告。

在我国，自2003年(平成15年)11月农林水产省发表报告确认茨城县霞浦疑似感染锦鲤疱疹病毒的鲤鱼以来，青森、山梨、三重、冈山、宫崎等各地均报发生锦鲤疱疹病毒病。农林水产省也正在进行以感染途径的确定为首的、关于防止该疾病扩散的研究。

关于细菌感染，虽然已经开发出若干鱼贝类用疫苗，但是对病毒性疾病或寄生性疾病有效的疫苗几乎没有什么开发，仅开发出了针对鲑鱼科鱼类的一部分及鲈鱼目虹彩病毒的疫苗(例如，参照专利文献1)。

在病毒感染症的预防或治疗中，通常使用疫苗。疫苗有非活化疫苗(日本脑炎、韦尔氏病等)、类毒素(破伤风、白喉等)、减毒疫苗(BCG、脊髓灰质炎等)、基因重组疫苗(B型肝炎病毒等)等。使得非活化疫苗及外毒素无毒化的类毒素，是诱导针对这些的抗体的比较安全的疫苗。基因重组疫苗与非活化疫苗相比，因为不含有杂质，因此被认为是更为安全的疫苗。此外，目前在我国作为水产用疫苗，获得允许的仅有弧菌病非活化疫苗、α溶血性链球菌症非活化疫苗、虹彩病毒感染症非活化疫苗、β溶血性链球菌症非活化疫苗。

但是，这些疫苗虽然能够诱导产生抗体，却存在难于诱导细胞免疫的缺点。此外，非活化疫苗及减毒疫苗，需要以工业化方式大量获得作为抗原的病毒，必须确保适当的细胞。而且，通过减毒疫苗获得的免疫效果，大多能够长期维持，但是另一方面，又被指出有副作用、危险性。非活化疫苗及基因重组疫苗，被认为在宿主内抗原的持续性短，需要辅药等。这些现有的疫苗，从制造到接种到受试体为止的期间，需要冷藏保存，因此存在成本增加和效力降低的问题。

最近，疫苗的研究开发有所推进，开发出一种新的疫苗种(DNA疫苗)，该疫苗种通过给予对免疫原性蛋白质进行编码的质粒DNA而带来免疫诱导，由此，如下所述的现有疫苗的缺点得到了改善。即DNA疫苗具备如下优点：不仅能够诱导体液免疫应答，而且能够强力地诱导细胞免疫，因此，能够赋予针对感染症的防御能力；此外，能够高度纯化；即使在室温或者高温下都稳定，不需要冷藏保存就能够长期储存；通过基因工程学的手段，能够容易地对DNA疫苗进行迅速改良；且能够缩短疫苗开发所需时间等。

例如，关于通过肌肉注射编码弹状病毒(Rhabdovirus)的组成蛋白的糖蛋白的基因来刺激虹鳟的免疫应答(例如，参照非专利文献1。)和DNA疫苗(例如，参照非专利文献2。)已经有报道。此外，也提出了如下内容等，即一种针对比目鱼的病毒性出血性败血症的DNA疫苗(例如，参照专利文献2。)；一种针对病毒的DNA疫苗(例如，参照专利文献3。)，其中该病毒对传染性造血器官坏死症(IHN)病毒的凋亡诱导蛋白进行编码；一种养殖种用DNA疫苗(例如，参照专利文献4。)，其中该疫苗使用了可诱导免疫原性多肽的表达的基因表达体系。但是，用于刺激对鲤鱼锦鲤疱疹病毒病的防御免疫的DNA疫苗，一直没有提出。

专利文献1：特开平9-176043号公报

专利文献2：特开2005-112726号公报

专利文献3：特开2002-125674号公报

专利文献4：特开平9-285291号公报

非专利文献1：P.Boudinot et.al，Virology，(USA)，1998，Vol.249，p.297-306

非专利文献2：McLauchlan et.al，Fish and Shellfish Immunology，England，2003，Vo1.15，p.39-50

发明内容

本发明的课题在于提供一种鲤鱼用DNA疫苗，该鲤鱼用DNA疫苗用于诱导对锦鲤疱疹病毒(KHV)病的防御免疫。

本发明的发明人为了开发出对锦鲤疱疹病毒(KHV)病有效的疫苗，进行了锐意研究，确定了日本、美国、以色列、印度尼西亚的各锦鲤疱疹病毒(KHV)基因DNA的全碱基序列，从约180个基因中，选择出对锦鲤疱疹病毒(KHV)的糖蛋白进行编码的5种基因和对膜蛋白进行编码的5种基因，将装配了这些基因的质粒DNA接种(肌肉注射)到鲤鱼上之后，发现其对于鲤鱼的锦鲤疱疹病毒(KHV)具备免疫效果，从而完成了本发明。

即本发明涉及：

(1)一种对如下(a)、(b)或(c)的蛋白质进行编码的DNA，

(a)由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的糖蛋白、

(b)由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质、或者

(c)由与序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列具有至少80％以上的同源性的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(2)一种由序列号1、3、5、7或9所示碱基序列或其互补序列组成的DNA；

(3)一种DNA，该DNA由序列号1、3、5、7或9所示碱基序列中1个或数个碱基缺失、取代或者添加而成的碱基序列组成、且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(4)一种DNA，该DNA在严格条件下和由与序列号1、3、5、7或9所示碱基序列互补的序列组成的DNA进行杂交，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(5)一种对如下(d)、(e)或(f)的蛋白质进行编码的DNA，

(d)由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的膜蛋白；

(e)由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；或者

(f)由与序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列具有至少80％以上的同源性的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质。

另外，本发明涉及：

(6)一种由序列号11、13、15、17或19所示碱基序列或其互补序列组成的DNA；

(7)一种DNA，该DNA由序列号11、13、15、17或19所示碱基序列中1个或数个碱基缺失、取代或添加而成的碱基序列组成，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(8)一种DNA，该DNA在严格条件下和由与序列号11、13、15、17或19所示碱基序列互补的序列组成的DNA进行杂交，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(9)一种由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的糖蛋白；

(10)一种由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列中1个或数个氨基酸缺失、取代或添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；

(11)一种由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的膜蛋白；

(12)一种由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质。

进而，本发明涉及：

(13)一种包含从上述(1)～(8)中任一项所述DNA中选出的1种或2种以上DNA的重组载体；

(14)一种包含从上述(1)～(8)中任一项所述DNA中选出的1种或2种以上DNA的鲤鱼用DNA疫苗；

(15)一种包含上述(13)所述重组载体的鲤鱼用DNA疫苗；

(16)一种锦鲤疱疹病毒(KHV)病的预防或治疗方法，其特征在于：向鲤鱼进行上述(14)或(15)所述鲤鱼用DNA疫苗的给药；

(17)一种将上述(14)或(15)所述鲤鱼用DNA疫苗用于诱发对鲤鱼的锦鲤疱疹病毒(KHV)病的免疫应答的方法；

(18)一种抗体，其特征在于特异性识别上述(9)～(12)中任一项所述蛋白质；

(19)一种对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有抵抗性的转基因鲤鱼，其特征在于：其通过基因导入上述(9)～(12)中任一项所述蛋白质的基因表达载体而得到。

附图说明

图1显示针对KHV感染症使用DNA疫苗的试验结果的图。(A)分别进行5种糖蛋白基因给药情况下的试验结果，(B)分别进行3种膜蛋白基因给药情况下的试验结果。

图2显示针对KHV感染症使用DNA混合疫苗的试验结果的图。纵轴表示累计死亡率，横轴表示KHV感染后的天数。组1表示阴性对照试验区，组2表示膜蛋白试验区，组3表示糖蛋白试验区。

具体实施方式

本发明中的DNA，只要是如下DNA即可，没有特殊限制。即(a)对由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的糖蛋白进行编码的DNA、(b)对蛋白质进行编码的DNA，其中该蛋白质由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列中1个或数个氨基酸缺失、取代或添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性、(c)对蛋白质进行编码的DNA，其中该蛋白质由与序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列具有至少80％以上的同源性的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性；由序列号1、3、5、7或9所示碱基序列或其互补序列组成的DNA；一种DNA，该DNA由序列号1、3、5、7或9所示碱基序列中1个或数个碱基缺失、取代或者添加而成的碱基序列组成，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；一种DNA，该DNA在严格条件下和由与序列号1、3、5、7或9所示碱基序列互补的序列组成的DNA进行杂交，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质、(d)对由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的膜蛋白进行编码的DNA、(e)对蛋白质进行编码的DNA，其中该蛋白质由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性、(f)对蛋白质进行编码的DNA，其中该蛋白质由与序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列具有至少80％以上的同源性的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性；由序列号11、13、15、17或19所示碱基序列或其互补序列组成的DNA；一种DNA，该DNA由序列号11、13、15、17或19所示碱基序列中1个或数个碱基缺失、取代或添加而成的碱基序列组成，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；一种DNA，该DNA在严格条件下和由与序列号11、13、15、17或19所示碱基序列互补的序列组成的DNA进行杂交，且编码对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质。另外，本发明中的蛋白质，只要是如下蛋白质即可，并无特殊限制。即：由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的糖蛋白；或者由序列号2、4、6、8或10所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质；或者由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列组成的锦鲤疱疹病毒(KHV)的膜蛋白；或者由序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列中1个或者数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成，且对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质。在本发明中，对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质是指：在进入鲤鱼生物体内的情况下能够在生物体内刺激、诱导对锦鲤疱疹病毒(KHV)的免疫应答(包括体液免疫应答及细胞免疫应答)的蛋白质。

上述“1个或数个氨基酸缺失、取代或添加而成的氨基酸序列”是指：例如1～20个，优选1～15个，更为优选1～10个、进一步优选1～5个的任意数目的氨基酸缺失、取代或添加而成的氨基酸序列。此外，上述“1个或数个碱基缺失、取代或添加而成的碱基序列”是指：例如1～20个，优选1～15个，更为优选1～10个、进一步优选1～5个的任意数目的碱基缺失、取代或添加而成的碱基序列。

例如，这些由1个或数个碱基缺失、取代或添加而成的碱基序列组成的DNA(变异DNA)，也可通过化学合成、基因工程学方法、突然变异诱发等本领域普通技术人员已知的任意方法进行制备。具体而言，针对由序列号1、3、5、7或9所示碱基序列组成的DNA、或者由序列号11、13、15、17或19所示碱基序列组成的DNA，利用与作为变异原的药剂接触作用的方法、照射紫外线的方法、基因工程学的方法等，通过向这些DNA导入变异，能够获得变异DNA。作为基因工程学方法之一的部位特异性变异诱发法，由于是能够在特定位置导入特定变异的方法，所以是有效的，可依照Molecular Cloning：A Laboratory Mannual，3rd Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY.，2001.(以下简称为“Molecular Cloning第3版”)、CurrentProtocols in Molecular Biology，Supplement 1～38，John Wiley & Sons(1987-1997)等记载的方法进行。通过利用适当的表达体系对该变异DNA进行表达，能够得到由1个或数个氨基酸缺失、取代或添加而成的氨基酸序列组成的蛋白质。

上述“在严格条件下进行杂交的碱基序列”是指：使用DNA或者RNA等的核酸作为探针，利用菌落杂交法、噬菌斑杂交法或者DNA印迹(Southern blot)杂交法等而得到的碱基序列，具体而言，是采用源于菌落或者噬菌斑的DNA、或将该DNA的片段固定化后的过滤器，在0.7～1.0M的NaCl存在的条件下，65℃下进行杂交后，使用0.1～2倍左右的SSC溶液(1倍浓度的SSC溶液的组成为150mM氯化钠、15mM柠檬酸钠)，在65℃条件下通过洗涤过滤器，可提高能够鉴定出的DNA。杂交可依照Molecular Cloning第3版等记载的方法进行。

即严格条件下是指形成所谓的特异性杂交、而不形成非特异性杂交的条件。具体可以举出具有50～70％以上的同源性的DNA彼此之间进行杂交、而与其相比同源性低的DNA彼此之间不杂交的条件，或者作为通常的DNA印迹杂交法的洗涤条件，在相当于65℃、1×SSC、0.1％SDS、或者0.1×SSC、0.1％SDS的盐浓度下进行杂交的条件。例如，作为可以在严格条件下进行杂交的DNA，可以举出作为探针使用的DNA的碱基序列和具有一定以上的同源性的DNA，例如可举出具有60％以上，优选70％以上，更优选80％以上，进一步优选90％以上，尤其优选95％以上，最优选98％以上的同源性的DNA。

本发明中的DNA的获得方法或制备方法，并无特殊限制，可基于本说明书中公开的序列号1、3、5、7或9、或者11、13、15、17或19所示碱基序列信息，或者序列号2、4、6、8或10、或者12、14、16、18或 20所示氨基酸序列所表示的氨基酸序列信息，制备适当的探针或引物，使用这些，通过对锦鲤疱疹病毒(KHV)的DNA文库进行筛选，由此分离出目标基因，可通过常规方法，采用化学合成制备得到。

本发明中的蛋白质的获得方法或制备方法，并无特殊限制，使用来自天然的蛋白质、化学合成的蛋白质，利用基因重组技术制备得到的重组蛋白质均可。在获得来自天然的蛋白质时，通过适当组合蛋白质的分离、纯化方法，能够从表达这样的蛋白质的细胞或者组织中获得本发明的蛋白质。利用化学合成制备蛋白质时，可根据例如Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等的化学合成法合成本发明的蛋白质。此外，也可以利用各种市售的肽合成机合成本发明的蛋白质。利用基因重组技术制备蛋白质时，可以将由对该蛋白质进行编码的碱基序列组成的DNA导入适当的表达体系，由此制备得到本发明的蛋白质。其中，优选采用操作比较容易、且能够进行大量制备的基因重组技术进行制备。

例如，通过基因重组技术制备本发明的蛋白质时，为了从细胞培养物中将这样的蛋白质回收纯化，采用包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸萃取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水相互作用色谱法、亲和色谱法、羟磷灰石层析法及凝集素色谱法在内的公知方法，优选采用高速液体色谱法。尤其是用于亲和色谱法的色谱柱，通过例如使用结合了针对本发明蛋白质的单克隆抗体等抗体的色谱柱，或者在向上述本发明的蛋白质添加通常的标签肽(peptide tag)时，使用在该标签肽上结合了具备亲和性物质的色谱柱，能够得到这些蛋白质的纯化物。此外，在细胞膜表达本发明的蛋白质时，使细胞膜分解酶作用后，通过上述纯化处理，能够得到纯化的试样。

进而，由序列号2、4、6、8或10、或者序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列中1个或数个氨基酸缺失、取代或者添加而成的氨基酸序列组成的蛋白质，或者由与序列号2所示氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列组成的蛋白质，只要是本领域的普通技术人员，就能够根据分别表示对序列号2、4、6、8或10、或者序列号12、14、16、18或20所示氨基酸序列进行编码的碱基序列的1例的序列号1、3、5、7或9、或者序列号11、13、15、17或19所示碱基序列的信息，适当地制备或者获得。

本发明中的重组载体，只要是包含上述本发明的基因DNA、且能够在鲤鱼的生物体内对锦鲤疱疹病毒(KHV)具有免疫原性的蛋白质进行表达的重组载体即可，没有特殊的限制，本发明的重组载体，可以通过将本发明的基因DNA适当整合到表达载体中而构建得到。作为表达载体，优选为能够在宿主细胞中自主复制的物质、或者能够装配到宿主细胞的染色体中的物质，此外优选使用在能够表达本发明的基因的位置上含有启动子、增强子、终止子等控制序列的物质。作为表达载体，优选使用了动物细胞用表达载体、尤其是使用了鱼类细胞用表达载体的重组载体。可用于本发明的表达载体的构建的步骤及方法，可以使用基因工程学领域惯用的步骤及方法。

作为可在本发明中使用的控制序列，可举出组成型启动子、诱导型或者可变启动子、组织特异性启动子、或者来自于表达的抗原的基因的启动子等，只要是能够在鱼类的细胞内进行表达的即可，没有特殊限制。作为组成型启动子，可举出来自于巨细胞病毒(CMV)的启动子序列、或者劳斯肉瘤病毒(RSV)、猿猴病毒-40(SV-40)、肌肉β-肌动蛋白启动子或者单纯疱疹病毒(HSV)等强启动子等。作为组织特异性启动子，可举出例如胸苷激酶启动子等。作为诱导型或者可变启动子，可举出例如生长荷尔蒙调控型启动子、在乳糖操纵子序列调控下的启动子、或者锌诱导型金属硫蛋白启动子。上述转录调控序列能够在编码免疫原性多肽的核苷酸序列上以可操作的方式(即以能够调节上述核苷酸序列的表达的方式)结合。

上述控制序列，可以包含含启动子(例如上述诱导型或组成型启动子)DNA序列的表达控制序列，根据要求，还可以包含下述物质中的一个或者一个以上：增强子因子、在用于转录或多聚腺苷酸化信号[例如来自于猿猴病毒-40(SV-40)或者来源于牛体生长荷尔蒙]的剪接的内含子序列、或者作为CpG基序而公知的免疫刺激DNA序列。

此外，表达载体可根据要求，包含例如细菌复制起点序列、或者用于选出的抗生物质耐性(例如卡那霉素等)基因或非抗生物质耐性基因(例如，β-半乳糖基因等)等的选择性标记。

本发明中的鲤鱼用DNA疫苗，只要是包含从上述本发明的DNA中选出的1种或2种以上的DNA的组合物、或者包含上述本发明的重组载体的组合物即可，没有特殊限制。但是优选由序列号1、3、5、7及9所示碱基序列组成的5种DNA的混合液、或由序列号11、13、15、17及19所示碱基序列组成的5种DNA的混合液、这10种DNA的混合液、或能够表达这些DNA混合液的重组载体。另外，可以向本发明的鲤鱼用DNA疫苗中添加、配合辅药。辅药是用于刺激免疫系统提高对抗原的免疫反应的物质，主要是作为辅助剂添加到疫苗中。代表性的辅药，有例如铝化合物、多核苷酸或者细菌的菌体成分等，但是优选举例给出鲤鱼IL-1β或ZEBRA IFN-α等，这些以可在鲤鱼的体内表达的方式制备出插入了IL-1β基因或ZEBRAIFN-α基因的质粒，能够和本发明的疫苗一起接种到鱼类上。

通过对鲤鱼进行本发明的鲤鱼用DNA疫苗的给药，能够诱发针对鲤鱼的锦鲤疱疹病毒(KHV)病的免疫应答，可以对锦鲤疱疹病毒(KHV)病进行预防或治疗。作为可适用本发明的鲤鱼用DNA疫苗的鱼类，只要是有可能感染锦鲤疱疹病毒(KHV)病的鱼类即可，并无特殊限制，例如可具体举出黑鲤鱼或锦鲤。

作为特异性结合在本发明的蛋白质上的抗体，可具体给出单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合体抗体、单链抗体、人化抗体等的免疫特异性的抗体，这些可利用上述糖蛋白或膜蛋白作为抗原，依照常规方法制备得到。其中，单克隆抗体从其特异性方面出发较为优选。这样的单克隆抗体等，是在本发明的蛋白质上特异性结合的抗体，其在本发明的蛋白质的分离、定量、或明确本发明的蛋白质的分子机构方面，是有用的。

针对本发明蛋白质的抗体，采用惯用的操作规程，通过在动物(优选除人以外)上给予包含该蛋白质或者表位的片断、或者在膜表面表达该蛋白质的细胞而产生，例如，为了制备单克隆抗体，可以采用带来利用连续细胞系的培养物所产生的抗体的杂交瘤(Hybridoma)法(Nature256，495-497，1975)、三瘤体(trioma)法、人B细胞杂交瘤法(Immunology Today 4，72，1983)及EBV-杂交瘤法(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，pp.77-96，Alan R.Liss，Inc.，1985)等任意的方法。

此外，通过在上述本发明的单克隆抗体等的抗体上，使用将例如FITC(荧光素异硫氰酸酯)或异硫氰酸四甲基玫瑰红等的荧光物质，或者¹²⁵I、 ³²P、¹⁴C、³⁵S或³H等的放射性同位素、碱性磷酸酶、过氧化物酶、β-半乳糖苷酶或藻红素等的酶标记的物质，或者绿色荧光蛋白质(GFP)等的荧光发光蛋白质等融合而成的融合蛋白质，能够进行上述蛋白质的功能解析。此外，作为免疫学测定方法，可以举出RIA法、ELISA法、荧光抗体法、噬菌斑(plaque)法、斑点(spot)法、血球凝集反应法、Ouchterlony法等的方法。

作为对本发明的锦鲤疱疹病毒具有抵抗性的转基因鲤鱼类，只要是基因导入1种或2种以上的本发明蛋白质的基因表达载体而得到的转基因鲤鱼类即可，并无特殊限制，在鲤鱼类中构建导入1种或2种以上的本发明蛋白质基因的表达载体的情况下，优选制备连接到启动子下游的表达载体，其中该启动子能够有效地在鲤鱼类细胞内对本发明的蛋白质基因进行表达。作为这样的启动子，可举例给出β-凝集素启动子、脂肪细胞P2(aP2)启动子、Mylz2(Danio rerio myosin light polypeptide 2skeletalmuscle mylz2)启动子、UCP启动子、SV40启动子、巨细胞病毒启动子、EF1α启动子、金属硫蛋白启动子、热休克启动子等，但是其中，青鳉β-凝集素启动子、以及my1z2启动子从表达效率的观点出发优选使用。此外，为了稳定mRNA，优选在本发明的蛋白质基因的下游连接牛体生长荷尔蒙多聚腺苷酸化序列等的多聚腺苷酸化序列。此外，根据需要，也可以使用具备增强基因表达功能的内含子序列或增强子序列、用于命令转录终止的终止子序列。所构建的表达载体向鲤鱼类的导入，可以通过针对卵母细胞或者受精卵的显微注射法、病毒载体感染法、粒子枪法、电气穿孔法而进行。另外，本发明的转基因鲤鱼类中，除包含导入了本发明的蛋白质基因的鲤鱼成体、其后代外，还可以根据需要包含鲤鱼受精卵细胞、鲤鱼胚细胞等。

以下，通过实施例对本发明进行详细说明。本发明并不限于这些实施例。

实施例1

通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction：PCR)，对5种糖蛋白基因和5种膜蛋白基因从翻译起始密码子到翻译终止密码子为止进行了扩增，其中上述5种糖蛋白基因和5种膜蛋白基因编码在进行了基因组解析的、在日本、美国以及以色列分离出的KHV的基因组上。使用的引物组如表1所示。进行PCR时的DNA模板，使用在日本分离的KHV-J。PCR的条件为：95℃下30秒、55℃下30秒、72℃下30秒为1个周期，进行30个周期。

[表1]

KHV-g1-F	序列号21	5′-ATGCCTGCCACCTTTGGCAG-3′
			KHV-g1-R	序列号22	5′-TCACCCCGCAGAGGTACCAT-3′
KHV-g2-F	序列号23	5′-ATGTACCAGCAGCAATACCA-3′
			KHV-g2-R	序列号24	5′-TCAGTTGTGAAGAGTAGATT-3′
KHV-g3-F	序列号25	5′-ATGAGCCACAGACAGCCAGC-3′
			KHV-g3-R	序列号26	5′-TCAGTAATAGTAATAGTTGT-3′
KHV-g4-F	序列号27	5′-ATGCCGTCGAGCATGACTGG-3′
			KHV-g4-R	序列号28	5′-TCAGAGTTCGTCTCTGATGG-3′
KHV-g5-F	序列号29	5′-ATGTCTATGCGCCCGCACAA-3′
			KHV-g5-R	序列号30	5′-CTACCGAGTGAGCCGTCTCT-3′
KHV-m1-F	序列号31	5′-ATGACGGAGCGGGCAGCGCT-3′
			KHV-m1-R	序列号32	5′-TTAGAAGACGAGCAAGCCCT-3′
KHV-m2-F	序列号33	5′-ATGTCTCCTTTGTGCGGTCT-3′
			KHV-m2-R	序列号34	5′-CTATACGCGCTCATAACCCC-3′
KHV-m3-F	序列号35	5′-ATGAGCGCGTATAGGTACAA-3′
			KHV-m3-R	序列号36	5′-TCAGACGAGCTCGTTGAGGA-3′
KHV-m4-F	序列号37	5′-ATGGCAGTCACCAAAGCTCA-3′
			KHV-m4-R	序列号38	5′-TCACCACATCTTGCCGGTGT-3′
KHV-m5-F	序列号39	5′-ATGGATGCACCGGTCTTCTC-3′
			KHV-m5-R	序列号40	5′-TCAGGCGGCTGTCTTCCTCT-3′

将PCR扩增DNA克隆化为基因表达载体pcDNA3.1，导入到大肠杆菌中。大量培养该转化大肠菌，萃取、纯化质粒DNA。质粒的纯化，通过使用氯化铯的超离心法(Molecular Cloning第3版)进行。

实施例2

疫苗试验中，针对每1尾鲤鱼，使用注射器，将50μg的DNA与100μL的磷酸缓冲液(phosphate buffered saline：PBS)一起，向鲤鱼的背部肌肉接种。此时，分别接种各种糖蛋白基因和膜蛋白基因。作为阴性对照，仅接种载体质粒DNA。接种疫苗后30天期间，在23℃下于循环过滤式水槽内培养。

感染实验是在PBS中将KHV感染的鲤鱼鳃均质化，使用0.22μm过滤器进行过滤，将过滤后的液体，每1尾鲤鱼，接种100μL。病毒液接种后，在23℃下将鲤鱼在循环过滤式水槽中培养。

KHV感染后，连续观察鲤鱼12天，计算鲤鱼的累计死亡率，其结果如图1所示。试验结果显示，对照区的鲤鱼为约50％的累计死亡率，而疫苗试验区的累计死亡率为约13～40％(糖蛋白)、14～40％(膜蛋白)，由此可知DNA疫苗对于KHV感染的感染防御的有效性，即可明确得知疫苗效果。

实施例3

与上述方法相同，进行疫苗试验。此时，分别混合5种糖蛋白基因(组2)和5种膜蛋白基因(组3)，进行接种。作为阴性对照，仅接种载体质粒DNA(组1)。接种疫苗后30天期间，在23℃下于循环过滤式水槽内培养。与上述同样地进行感染试验。

KHV感染后，连续观察鲤鱼3周，计算鲤鱼的累计死亡率，其结果如图2所示。试验结果显示，对照区的鲤鱼为约60％的累计死亡率，而疫苗试验区的累计死亡率为约10～20％，由此可知DNA疫苗对于KHV感染的感染防御的有效性，即可明确得知疫苗效果。

工业实用性

使用本发明的鲤鱼用DNA疫苗，能够赋予针对锦鲤疱疹病毒(KHV)引起的锦鲤疱疹病毒病的免疫能力。进一步详细地说，使用本发明的鲤鱼用DNA疫苗，能够诱导针对锦鲤疱疹病毒病的免疫应答(包括体液免疫应答及细胞免疫应答)，因此，对于锦鲤疱疹病毒(KHV)感染的预防或者锦鲤疱疹病毒病的治疗有效。

序列表

<110>国立大学法人东京海洋大学

<120>锦鲤疱疹病毒(KHV)病用DNA疫苗

<130>F2006-004

<150>JP2006-111414

<151>2006-04-13

<160>40

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>1350

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>1

atgcctgcca cctttggcag gcgccctgac ggggatgacc aagtgtacct ggaagaggac 60

acggatgacg ggggattcag tggcagagca ccagcaccac cccaggtggc cctggccctg 120

gacctggact ttagggacag gcttactcag tttcctcacc actctgctgc agtcaggggt 180

ggcctgagag gctgcctggg caaggtactg agcatctcca ggggcaggct gctgatgggg 240

gtggtgggcc taggcctgct gctggccttc atcgtgttca tggtggagaa gacggactcc 300

aggctgctgg acgaggccaa gtgtccagac caggcccgtg tgtactaccc tctgaggacg 360

cacaggcgca agttcagctt catgttctgc tgccactgct gtgccctcaa gcagccccac 420

atctgctacg aggacatgtt caagtggctt gaccactggt acaacgacac gctgtcccaa 480

gaggagcaga tgggctttgc ccaacatgtg tgggcagccg gcgtggtgag aggccacctg 540

gagcgcaagg ctgctcccct gtctcagcag gaccaggact cttggcctca gaacctgcgc 600

cagatggtca aacgcacgcg ctgggttgag tggctggtgg gggagcacta cgccaagagc 660

ctcaaccaca cgctggctgg tacagaggac tacgagcacc tgagcaagca caccatcttt 720

gacgactccg agcagctcag gcccatcaac agcacgcaca acggtactgc caagacctac 780

aagctggaga ccttggtggt ggacaatgtg tacgcagcgg acgagctggt ggccttcatg 840

gtggagtctg ggcacgctca ggacactacc atgttcagga tggccttcaa ccagtactac 900

ggcgcctaca acgtgtacga cgagctgttc cacaaggcgc tggacctcgc cggcgtggtg 960

gactctgtcg cctacatgcc ctctgcggct gaggtgctga tcgaggctgc catggacgag 1020

gccttctcgt acaaccctga cgaggaggat gccaggctca acgcttccag ggccaacgca 1080

accagcaaca gcaccctgat gaacggcacc tgctctctgg agcagctgtg caaggcctat 1140

gatgttgctg cgactaccat gccgtctccc tctgctctcc tcagcaccag tgacgtcaca 1200

acacccagca tcaggcccag gaccagtgac gtcaccgcgc ccagcagcag gaccagtcac 1260

accacgcccc cttctggtac ccatgatggc tccaccgtgt ggactgttgg taacattaca 1320

atgactgcta atggtacctc tgcggggtga 1350

<210>2

<211>449

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>2

Met Pro Ala Thr Phe Gly Arg Arg Pro Asp Gly Asp Asp Gln Val Tyr

1 5 10 15

Leu Glu Glu Asp Thr Asp Asp Gly Gly Phe Ser Gly Arg Ala Pro Ala

20 25 30

Pro Pro Gln Val Ala Leu Ala Leu Asp Leu Asp Phe Arg Asp Arg Leu

35 40 45

Thr Gln Phe Pro His His Ser Ala Ala Val Arg Gly Gly Leu Arg Gly

50 55 60

Cys Leu Gly Lys Val Leu Ser Ile Ser Arg Gly Arg Leu Leu Met Gly

65 70 75 80

Val Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Ala Phe Ile Val Phe Met Val Glu

85 90 95

Lys Thr Asp Ser Arg Leu Leu Asp Glu Ala Lys Cys Pro Asp Gln Ala

100 105 110

Arg Val Tyr Tyr Pro Leu Arg Thr His Arg Arg Lys Phe Ser Phe Met

115 120 125

Phe Cys Cys His Cys Cys Ala Leu Lys Gln Pro His Ile Cys Tyr Glu

130 135 140

Asp Met Phe Lys Trp Leu Asp His Trp Tyr Asn Asp Thr Leu Ser Gln

145 150 155 160

Glu Glu Gln Met Gly Phe Ala Gln His Val Trp Ala Ala Gly Val Val

165 170 175

Arg Gly His Leu Glu Arg Lys Ala Ala Pro Leu Ser Gln Gln Asp Gln

180 185 190

Asp Ser Trp Pro Gln Asn Leu Arg Gln Met Val Lys Arg Thr Arg Trp

195 200 205

Val Glu Trp Leu Val Gly Glu His Tyr Ala Lys Ser Leu Asn His Thr

210 215 220

Leu Ala Gly Thr Glu Asp Tyr Glu His Leu Ser Lys His Thr Ile Phe

225 230 235 240

Asp Asp Ser Glu Gln Leu Arg Pro Ile Asn Ser Thr His Asn Gly Thr

245 250 255

Ala Lys Thr Tyr Lys Leu Glu Thr Leu Val Val Asp Asn Val Tyr Ala

260 265 270

Ala Asp Glu Leu Val Ala Phe Met Val Glu Ser Gly His Ala Gln Asp

275 280 285

Thr Thr Met Phe Arg Met Ala Phe Asn Gln Tyr Tyr Gly Ala Tyr Asn

290 295 300

Val Tyr Asp Glu Leu Phe His Lys Ala Leu Asp Leu Ala Gly Val Val

305 310 315 320

Asp Ser Val Ala Tyr Met Pro Ser Ala Ala Glu Val Leu Ile Glu Ala

325 330 335

Ala Met Asp Glu Ala Phe Ser Tyr Asn Pro Asp Glu Glu Asp Ala Arg

340 345 350

Leu Asn Ala Ser Arg Ala Asn Ala Thr Ser Asn Ser Thr Leu Met Asn

355 360 365

Gly Thr Cys Ser Leu Glu Gln Leu Cys Lys Ala Tyr Asp Val Ala Ala

370 375 380

Thr Thr Met Pro Ser Pro Ser Ala Leu Leu Ser Thr Ser Asp Val Thr

385 390 395 400

Thr Pro Ser Ile Arg Pro Arg Thr Ser Asp Val Thr Ala Pro Ser Ser

405 410 415

Arg Thr Ser His Thr Thr Pro Pro Ser Gly Thr His Asp Gly Ser Thr

420 425 430

Val Trp Thr Val Gly Asn Ile Thr Met Thr Ala Asn Gly Thr Ser Ala

435 440 445

Gly

<210>3

<211>1518

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>3

atgtaccagc agcaatacca gcagacgagg gaccagagga gcctgctgtg tctggggcgg 60

gctcccctca cgctcacgct cgcctcacag cccatcactc gccgcctcgt ggcgtctggt 120

gagtacagca actctcctgc atcagcatca gtacccacag cagcatctgc agcatcagta 180

cccacagcag caccagtacc agtggagtac cagcgccgtc ctgtggctgc actggagtac 240

tgcaacgggg agagtggcgc aagcatcgag agtggacttt cgctgctggc caggcgtcct 300

ctcaagaggg caaggagggc tgctgaggtg gaggctgaag gggctgaagg ggctaaaggg 360

gctgaagggg ccgtagagga agacgctgaa ggggccgtag aggaagacgc tgaggggacc 420

gtcgaggagg acactgtcga ggacgaggca gaaatggcgc aagcaccgtt ggtcaagaga 480

aagaggcgca agagacgtgc gtcgtgctgg ggcaccaaga agagaaggac caccgcctct 540

cactctgtgg cagaggactc tgtggcagag gtggcagagg acaccaccac agtgaccgtc 600

gaggaggagg acggcgggga gtcacaaatg gcgcaagcac taattgtgac aatggggcac 660

aacggcgctg agggtactgt ggacactgct gtgaccactt acactgtgga cactgaggac 720

actgctgtgg acattgacac tgtgaccact gctgaggaca ctgatgtggt catggttgac 780

gctgaggagg acactgagga ggacactgag gaggacactg aagtgaccat tgaaaccaat 840

gacaaaggtg ttgtcgaaac ttatggaaaa aacgcaacta cccttggtag tgatgacgaa 900

cagggtggtg acaaacggaa agagggtgca gctgccgttg gcgccggggg tgaagattgc 960

gcaaatatcg cgtgtgaaag ggagggggca gtatctgaca aacaaatgtt cccggtacag 1020

tcaccgcaca cacccaaact cctcccctct gaatcacgcc aaaggggagt ggtaaccaat 1080

cagaagccaa tttccacaga aggggtgggg ttattgagca ataacgggaa tgactgttcc 1140

caacatactg gtttactggc aaccacgccc cataccggtt tggtttcgtc cacaccccat 1200

atggggtata agaaccctga ctctggagag gttcggcatt ctaccactga cactgccact 1260

gccactgtct ccgttgacac cgtctttgac tctgttaccg ttgatactgt ctttgactct 1320

gttgactccg acgacttgtc gctactcttt gacactttgg tccagcaaaa gactctcgaa 1380

ctcagacaga gactcaagag catctacgaa cacagcacca gcttctgcac tccagacttc 1440

acccagagag cccacagcct cctgctagac tacaaggact ttgccctcaa agaactgcaa 1500

tctactcttc acaactga 1518

<210>4

<211>505

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>4

Met Tyr Gln Gln Gln Tyr Gln Gln Thr Arg Asp Gln Arg Ser Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gly Arg Ala Pro Leu Thr Leu Thr Leu Ala Ser Gln Pro Ile

20 25 30

Thr Arg Arg Leu Val Ala Ser Gly Glu Tyr Ser Asn Ser Pro Ala Ser

35 40 45

Ala Ser Val Pro Thr Ala Ala Ser Ala Ala Ser Val Pro Thr Ala Ala

50 55 60

Pro Val Pro Val Glu Tyr Gln Arg Arg Pro Val Ala Ala Leu Glu Tyr

65 70 75 80

Cys Asn Gly Glu Ser Gly Ala Ser Ile Glu Ser Gly Leu Ser Leu Leu

85 90 95

Ala Arg Arg Pro Leu Lys Arg Ala Arg Arg Ala Ala Glu Val Glu Ala

100 105 110

Glu Gly Ala Glu Gly Ala Lys Gly Ala Glu Gly Ala Val Glu Glu Asp

115 120 125

Ala Glu Gly Ala Val Glu Glu Asp Ala Glu Gly Thr Val Glu Glu Asp

130 135 140

Thr Val Glu Asp Glu Ala Glu Met Ala Gln Ala Pro Leu Val Lys Arg

145 150 155 160

Lys Arg Arg Lys Arg Arg Ala Ser Cys Trp Gly Thr Lys Lys Arg Arg

165 170 175

Thr Thr Ala Ser His Ser Val Ala Glu Asp Ser Val Ala Glu Val Ala

180 185 190

Glu Asp Thr Thr Thr Val Thr Val Glu Glu Glu Asp Gly Gly Glu Ser

195 200 205

Gln Met Ala Gln Ala Leu Ile Val Thr Met Gly His Asn Gly Ala Glu

210 215 220

Gly Thr Val Asp Thr Ala Val Thr Thr Tyr Thr Val Asp Thr Glu Asp

225 230 235 240

Thr Ala Val Asp Ile Asp Thr Val Thr Thr Ala Glu Asp Thr Asp Val

245 250 255

Val Met Val Asp Ala Glu Glu Asp Thr Glu Glu Asp Thr Glu Glu Asp

260 265 270

Thr Glu Val Thr Ile Glu Thr Asn Asp Lys Gly Val Val Glu Thr Tyr

275 280 285

Gly Lys Asn Ala Thr Thr Leu Gly Ser Asp Asp Glu Gln Gly Gly Asp

290 295 300

Lys Arg Lys Glu Gly Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Gly Glu Asp Cys

305 310 315 320

Ala Asn Ile Ala Cys Glu Arg Glu Gly Ala Val Ser Asp Lys Gln Met

325 330 335

Phe Pro Val Gln Ser Pro His Thr Pro Lys Leu Leu Pro Ser Glu Ser

340 345 350

Arg Gln Arg Gly Val Val Thr Asn Gln Lys Pro Ile Ser Thr Glu Gly

355 360 365

Val Gly Leu Leu Ser Asn Asn Gly Asn Asp Cys Ser Gln His Thr Gly

370 375 380

Leu Leu Ala Thr Thr Pro His Thr Gly Leu Val Ser Ser Thr Pro His

385 390 395 400

Met Gly Tyr Lys Asn Pro Asp Ser Gly Glu Val Arg His Ser Thr Thr

405 410 415

Asp Thr Ala Thr Ala Thr Val Ser Val Asp Thr Val Phe Asp Ser Val

420 425 430

Thr Val Asp Thr Val Phe Asp Ser Val Asp Ser Asp Asp Leu Ser Leu

435 440 445

Leu Phe Asp Thr Leu Val Gln Gln Lys Thr Leu Glu Leu Arg Gln Arg

450 455 460

Leu Lys Ser Ile Tyr Glu His Ser Thr Ser Phe Cys Thr Pro Asp Phe

465 470 475 480

Thr Gln Arg Ala His Ser Leu Leu Leu Asp Tyr Lys Asp Phe Ala Leu

485 490 495

Lys Glu Leu Gln Ser Thr Leu His Asn

500 505

<210>5

<211>4587

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>5

atgagccaca gacagccagc caagagccag ggccagggcc agggcaaggg caagggcaag 60

ccagccaaga ggcctgcacc tgctgcactc agcgcctttg actcttctga tgaggaggag 120

gataccacca ccactgttgc tccaaccaga cccaagaagc agcctgccaa acccaagtcc 180

aaggaggtcg tggaggtgtc ctctgcctcc tctgtctctg agtcctctgc ctcagattct 240

gagtctgagg cctcctctgc ctcctctgcc tcctctgcct cctctgcctc ctctgcctct 300

tcctctgaat cctcagcctc tgattctgac tctgacaacg gcggtgacaa gtacaacaag 360

gacgagccac catcctctga tccagaatct gaacacgaga atgcccctgc accacccatc 420

aaccgcaaga tcaaaggcag aaccgctctg gcaccctcca agggcaaggc caaggccacc 480

aagaagcagc cagagtcctc ctcctcgtcc tcttctgcat cctcctcttc tgcctcttca 540

gactctgaag actctgaaga cgaaccacct gcacccagaa ccaaggtaat gcttgtcaaa 600

aaagctgctc ctgctcctgc taaaactgtt cctgtgtctg tacctgtacc tgcaaaaccc 660

agcaagactg ttcctgtgcc tgtgcctgcc aagaagacta cacaaacact tgaaaaaacc 720

atccagaaac caaccactac tcaaacccct caaaaaccca agactgctcc tcctgctact 780

gttcctgttc ctgccaagac tgccaagaca actcaacctc aacccaaggt accacagcag 840

ccaccacctg ccaagaccaa taccacatca caacccaaac ccaaaaatcc cgcaagcaca 900

cagaggagag tgaccctgga cgaggaggac gactcaccct ttgtcaggtc caagagcagg 960

acgcctgtga aggcgccttc caagtcgcca cctgctcccc atgctgcacc catcactgcc 1020

aacatccctg tcattgaaga gtacgatccc accctgcctc agctgcctgc aggtaagacc 1080

atttctaaat cattagcacc cacacctgtg cctgtacctg ttgttgtaga tgatgttaat 1140

gataatggta atgatagtga cgctaaggct aatgagactg agactctgga tactctaacc 1200

gctgatatac ccatgtctga ctctgaggat gaggatgaga ctcaagttga gattgctgat 1260

gataaagata atgatgttaa ggataatgac gatgttaatg atgttgagat gagagagatg 1320

cagcagatga taaactctga catgatggtc aggccagtca gccctctgcc tgctgatgat 1380

gcttctgatg agggatgcca agcagcctct cagagcatcc ttgataatga taatggtaat 1440

ggtgatgata atggtaataa taatgatgat gaggaggagg aggaggagga ggaggaggag 1500

gaaatggagc aagcatcacc ttcacctgct ctcgctgtcc tggccgctat ggctggagac 1560

ttaccatgca ctgctcaacc tgagcctcag ccagagccag aaccagaacc agagcctcag 1620

cctcagcctc agcctcccaa acagcagcct ctagactttt tgacttctct gatctgcctc 1680

acatccaaac cctccatcac agtctgtgag gcagaggcgg tcactgcttc tatcaatgca 1740

gacaactcta aaaatggtgc aagcacaggt gtgagtgata atgttttttg caatcctgag 1800

cctcctgcat cacccacttc agtcacacca ccaccacctg ccaccatggt ctctatgatc 1860

atcccaggct tgggtgacat agaagaaatg attgttgtag acactgctgc tgatgctgat 1920

gctgatgctg atgctgatgc tgatgctgat aatggtgagg atgagactga agtggctgat 1980

gtgctggagc tcagtgctgg gcaagagttt gagcccttgg aacctgcaag cagcaagacg 2040

cctaaaaccc ctaaagaaat aaagaaacct gagcagccca agccaagaac ccataaagac 2100

agagacacca gagacaccag agagagagag cagagagagg aacaggtggt gagacccaaa 2160

gaacgtagag aaaaggacaa gaaggagaga gagagggagg agaggagaag ggagaaatcg 2220

agcaaacaca gcagcaggtg cacgatggtg tgtgagactg tggcagagac tgccacgccg 2280

cctccaagcc gtcgctcacc caacatgccc acttcatcac ccacaactac tcccgcaacg 2340

gtgcagtctg tggtggtgca gcccacaccc tcaccctcag cctctcacag accctccaag 2400

gccaagcagc agcaagagga cctcaagcag agtgctgaag cggccagact tgccatgatg 2460

gagagggaga gggagagacg tcgcagagac agacagaggg ctgatgcaga cgccgaggtt 2520

gccgcactca gagacgtggc ccttgaaaga cgcagacaag agagacagcg cgaggctgag 2580

gagctggagg aggctgcact cagagacgtc gcactcgccg ccaagcaaaa aggtaagaca 2640

aagagcacca gcagcaagac gcctgaaact cagcaaaacg ttgcagctgt tccagtcact 2700

ccaacaaccc ttcaaaacac tcacacttct tctccctctt ctgcagcagc acagcggcca 2760

agaacagact cttctgcagc cagcagcaaa gactcaagca aagacaccaa gaaggacaag 2820

aaggccacca agagagagag gtgcagggag gatgagactc catcctccag acgcagagac 2880

aggtctccca caccaccacc caagagaagg tcacctgcac cctcttcttc ttcacactct 2940

cactcacact cacagcagca gcagcctcag cccatcatgc cacagggtca gaggatgtcc 3000

tacgatgagc agctcagcat cctcaagcag gtcaaggata gagtcatgca ggcgtctgcc 3060

aagctgcccg cactgacttc tgtagactac aacctgagaa tggctgccct gagcgagtgt 3120

aggaagaaca gcctggccgt ctttgtgaat gccctgcaag tgtgtggagc tgagacgctc 3180

tggaactcta gggctgccct ccaagcctcc atcatgcaag accaagaagt tgaaccccta 3240

ccagcctccg tggtcactct gcacatcatc atgcagcacg ccttcaacaa gcacgagttc 3300

acactgtgcg ccaagttcct accagtggtg aacagcctcc tgaccaggat gtccccagca 3360

gacgttgtgt cctacatgat ggccagagag cgcaaaaaca ggggagatga tgtgcacgag 3420

acgtctgacc ccatgcagtt tgagtctccc attgagaggg agctgtctga ggcctccagt 3480

accctgctgt gcgaactgta ccacgcaaac ctctctggct acaggcagca caccgccacc 3540

atgtatccct ggctgctcaa gtgcctgaac ggcatcctgg actctgtgta cggcaaggct 3600

ggtggcactg cagccatggc tgctgacctc ttggtggccc tgcagaaatc acccgagctg 3660

cccgccactg atggtgccgt cattggcgca agcaccacgt ccatggaggt gactgtgatg 3720

gagatgattg gggtcatcat ggctgcaaga cacagggagg ccaagctcct ggccgagatt 3780

gtgtccatgg actttacagg tacagactgg gccaagttca ccactctgtc ttccctgcag 3840

ctgctgcact acgcctccat ggtgcaggtc tggggcaaca accctccaga ggtgctgatg 3900

gtcagagaag agcccctgag atggatgttt gcagtcaaga accgcaagct gccctacact 3960

ccgtttgtac cctccatcac ctctctggtc tgcaccctca ggtggctaca ctccttcaga 4020

cccaggagat gcctgactgc agtcactgag cactatgtca atcagcacaa ggctgtggag 4080

aggggagaca tgaccgctga cgaggtcaag atgtggcgtc tggacgatga ctttagcggt 4140

gaggtgaggt ctgtggccct gagaaacgtg tcctacctct gcacccagaa accctttgcc 4200

actggctcct cacacgctgt cagggcagag attgaacccc tggtggaaga cctcagagtc 4260

cagcagagaa ccactgcctc caaggtacca cgcaagtctg cactcaagac acctgaaccc 4320

accactgcca ccgctgcagc caccacagga ggagactctt ctgatgatga gcagcctcag 4380

cagcagcaga ggggaaggag agtgagggtc agcgcaccca gctccagaag aagcagcaga 4440

gtgaggtcca ggtccaggtc cagagtggac tctgactctg atgatggcct gtccacacgc 4500

agcggagcca gcagcttctc ctctagaagg tacagtttaa tccattatgt tttttttata 4560

caatgttaca actattacta ttactga 4587

<210>6

<211>1528

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>6

Met Ser His Arg Gln Pro Ala Lys Ser Gln Gly Gln Gly Gln Gly Lys

1 5 10 15

Gly Lys Gly Lys Pro Ala Lys Arg Pro Ala Pro Ala Ala Leu Ser Ala

20 25 30

Phe Asp Ser Ser Asp Glu Glu Glu Asp Thr Thr Thr Thr Val Ala Pro

35 40 45

Thr Arg Pro Lys Lys Gln Pro Ala Lys Pro Lys Ser Lys Glu Val Val

50 55 60

Glu Val Ser Ser Ala Ser Ser Val Ser Glu Ser Ser Ala Ser Asp Ser

65 70 75 80

Glu Ser Glu Ala Ser Ser Ala Ser Ser Ala Ser Ser Ala Ser Ser Ala

85 90 95

Ser Ser Ala Ser Ser Ser Glu Ser Ser Ala Ser Asp Ser Asp Ser Asp

100 105 110

Asn Gly Gly Asp Lys Tyr Asn Lys Asp Glu Pro Pro Ser Ser Asp Pro

115 120 125

Glu Ser Glu His Glu Asn Ala Pro Ala Pro Pro Ile Asn Arg Lys Ile

130 135 140

Lys Gly Arg Thr Ala Leu Ala Pro Ser Lys Gly Lys Ala Lys Ala Thr

145 150 155 160

Lys Lys Gln Pro Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Ser Ser

165 170 175

Ser Ala Ser Ser Asp Ser Glu Asp Ser Glu Asp Glu Pro Pro Ala Pro

180 185 190

Arg Thr Lys Val Met Leu Val Lys Lys Ala Ala Pro Ala Pro Ala Lys

195 200 205

Thr Val Pro Val Ser Val Pro Val Pro Ala Lys Pro Ser Lys Thr Val

210 215 220

Pro Val Pro Val Pro Ala Lys Lys Thr Thr Gln Thr Leu Glu Lys Thr

225 230 235 240

Ile Gln Lys Pro Thr Thr Thr Gln Thr Pro Gln Lys Pro Lys Thr Ala

245 250 255

Pro Pro Ala Thr Val Pro Val Pro Ala Lys Thr Ala Lys Thr Thr Gln

260 265 270

Pro Gln Pro Lys Val Pro Gln Gln Pro Pro Pro Ala Lys Thr Asn Thr

275 280 285

Thr Ser Gln Pro Lys Pro Lys Asn Pro Ala Ser Thr Gln Arg Arg Val

290 295 300

Thr Leu Asp Glu Glu Asp Asp Ser Pro Phe Val Arg Ser Lys Ser Arg

305 310 315 320

Thr Pro Val Lys Ala Pro Ser Lys Ser Pro Pro Ala Pro His Ala Ala

325 330 335

Pro Ile Thr Ala Asn Ile Pro Val Ile Glu Glu Tyr Asp Pro Thr Leu

340 345 350

Pro Gln Leu Pro Ala Gly Lys Thr Ile Ser Lys Ser Leu Ala Pro Thr

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Gly Asp Asp Asn Gly Asn Asn Asn Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu

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ccccagacgc ccatcgtgca gggccagccg tcgacctccg gcacccgcac cacgttggtc 480

ttattcgggc ttgtctgctt tgtgagctac attgcctgga cggccgtctc gcccccgtgc 540

gagtggtaca tctacatcat accggcgctg gtcttctgga agatcctcta ctggctcgtg 600

ggcacctgcg taagctccta caggtactcg cagcgctaca aggacgtgga gagcatcgtc 660

aacgacacgc tgtcccaacg gggttatgag cgcgtatag 699

<210>14

<211>232

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>14

Met Ser Pro Leu Cys Gly Leu Phe Lys Phe Val Leu Arg Phe Ala Phe

1 5 10 15

Asp Val Leu Ile Ala Gly Val Gly Val Tyr Leu Ala Thr Ser Cys Leu

20 25 30

Tyr Asp Lys Gly Met Phe Arg Arg Cys Pro Asn Ser Val Cys Tyr Gly

35 40 45

His Leu Ser Val Trp Leu Thr Val Cys Val Ile Pro Thr Ile Leu Gly

50 55 60

Ala Ile Gly Trp Thr Lys Gln Phe Met Tyr Trp Val Thr Leu Arg Thr

65 70 75 80

Ser Ala Arg Arg Arg Ala Gly Val Pro Pro Arg Lys Gly Cys Cys Gly

85 90 95

Ser Tyr Arg Glu Val Leu Leu Asp Asp Val Asp Asp Glu Leu Ile Glu

100 105 110

Ala Glu Gln Leu Glu Gln Gln Gln Gln Gly Ile Ala Ser Val Val Asn

115 120 125

Gly Arg Arg His Lys Lys Gln Gln Arg Ile Pro Ala Pro Gln Thr Pro

130 135 140

Ile Val Gln Gly Gln Pro Ser Thr Ser Gly Thr Arg Thr Thr Leu Val

145 150 155 160

Leu Phe Gly Leu Val Cys Phe Val Ser Tyr Ile Ala Trp Thr Ala Val

165 170 175

Ser Pro Pro Cys Glu Trp Tyr Ile Tyr Ile Ile Pro Ala Leu Val Phe

180 185 190

Trp Lys Ile Leu Tyr Trp Leu Val Gly Thr Cys Val Ser Ser Tyr Arg

195 200 205

Tyr Ser Gln Arg Tyr Lys Asp Val Glu Ser Ile Val Asn Asp Thr Leu

210 215 220

Ser Gln Arg Gly Tyr Glu Arg Val

225 230

<210>15

<211>966

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>15

atgagcgcgt ataggtacaa caggttgagg gacgagggcg agggcgaaga gggcgagggc 60

gagggcgagg ggccccgaga cggcggcgac gagagacggg atgggggcgg cggcggaggc 120

ggcggcgagg gcaagggccc ccgctactac tacaacagcc ggggcaggct caagcgcgcg 180

gaccggcccg ggctggacgt gatcctcacg ggcctcttca ccttcggctg ggtcctcgtg 240

accatcagcg tgtttgtgct cgatcgctct cacccccacc acgacggcgg cggcggcggc 300

gacaacccgc acgccgtggc ctcggtggtg cagggggtca tcggcctgct cggggagaac 360

ggctcctccg acaacatcag cggcatcagc atcggcggca acggaggcgc tgcggcggac 420

cctccgctcc actgtttcga cggcggcatc tcggccatga gggcgacgat gctatcggtg 480

tgcctggcca acctggccac ctacctcttc aagctcaccg tgttttttca gtttgtggtc 540

gcctccgtca aggagtacgc ggcgctgcac tcggacgggg ccatcatgtc gaccgctgcg 600

ggcctccgcg aggacacgct cgagcacatg cagagggccc gctgggtcgc gctcgccctg 660

gtccggatag cccttttccc gatggccctg gctcatctgg ccgcagcggc caccctgcag 720

cgcatgaacc ctcacatgcg agcctacgcg agcgccaccg agagcgaccc gtcccagcgc 780

agcttctgct tcagagtgta cctcttctac accctcgtgt gcgggcaggc ctgcgtgagc 840

ctctttgccg ggatcctggc cgtcatcaag acggtcagcg gcgtggacga caagagcacc 900

cggagacaga tcaggaaccg tctcgagaac caaaacatta cccgcatcct caacgagctc 960

gtctga 966

<210>16

<211>320

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>16

Ser Ala Tyr Arg Tyr Asn Arg Leu Arg Asp Glu Gly Glu Gly Glu Glu

1 5 10 15

Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Pro Arg Asp Gly Gly Asp Glu Arg Arg

20 25 30

Asp Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Gly Lys Gly Pro Arg Tyr

35 40 45

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Arg Leu Lys Arg Ala Asp Arg Pro Gly Leu

50 55 60

Asp Val Ile Leu Thr Gly Leu Phe Thr Phe Gly Trp Val Leu Val Thr

65 70 75 80

Ile Ser Val Phe Val Leu Asp Arg Ser His Pro His His Asp Gly Gly

85 90 95

Gly Gly Gly Asp Asn Pro His Ala Val Ala Ser Val Val Gln Gly Val

100 105 110

Ile Gly Leu Leu Gly Glu Asn Gly Ser Ser Asp Asn Ile Ser Gly Ile

115 120 125

Ser Ile Gly Gly Asn Gly Gly Ala Ala Ala Asp Pro Pro Leu His Cys

130 135 140

Phe Asp Gly Gly Ile Ser Ala Met Arg Ala Thr Met Leu Ser Val Cys

145 150 155 160

Leu Ala Asn Leu Ala Thr Tyr Leu Phe Lys Leu Thr Val Phe Phe Gln

165 170 175

Phe Val Val Ala Ser Val Lys Glu Tyr Ala Ala Leu His Ser Asp Gly

180 185 190

Ala Ile Met Ser Thr Ala Ala Gly Leu Arg Glu Asp Thr Leu Glu His

195 200 205

Met Gln Arg Ala Arg Trp Val Ala Leu Ala Leu Val Arg Ile Ala Leu

210 215 220

Phe Pro Met Ala Leu Ala His Leu Ala Ala Ala Ala Thr Leu Gln Arg

225 230 235 240

Met Asn Pro His Met Arg Ala Tyr Ala Ser Ala Thr Glu Ser Asp Pro

245 250 255

Ser Gln Arg Ser Phe Cys Phe Arg Val Tyr Leu Phe Tyr Thr Leu Val

260 265 270

Cys Gly Gln Ala Cys Val Ser Leu Phe Ala Gly Ile Leu Ala Val Ile

275 280 285

Lys Thr Val Ser Gly Val Asp Asp Lys Ser Thr Arg Arg Gln Ile Arg

290 295 300

Asn Arg Leu Glu Asn Gln Asn Ile Thr Arg Ile Leu Asn Glu Leu Val

305 310 315 320

<210>17

<211>771

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>17

atggcagtca ccaaagctca actggccaag agagccaaaa aaatcggcac cgccctgatg 60

aacaaggtgc ccactgcgtc ggcgagcaag ctcctcgtca agcttcccgt agacgctgag 120

cgattcaaga tactcgtcgc aactgtcacg caggtcatct gtccaatgtt tgccccgctg 180

acgatgggca ttgcgcacgc catgtactcc aacgatccca actttgatct caacggcgcc 240

ttcatcggca tcggaatctt cggtgccctc gtcttcctcg tcctcctcgg aaccttcatc 300

atgctctgct accggtgcgt gaagggaggc cacagcatgt tcatgctgat gaggcccgtg 360

ttggcgctgt ttatcctcaa catcttcctc ttcctgatcg gggtcatcta cgccggcatc 420

aacctgctgt gcaagacggt cacctactcg aagacggcgg tgtgcgtgtc tcagaacgcc 480

atgtccctgg ccgtgctgga gctcttcacc gcctgcctga tcctcctcaa agagaccctt 540

tacagcggcc tgcgcatggc cgagatcaag gcccgcgtga gcggcggcgc tatggagtac 600

gaaggaagcg acgacgaata ctactacaac tcctaccaga acgtagcgga gggcctccag 660

aggtctatgc gcgactatca ggacgacgag gatttttctg acccagacac tgagagcgtc 720

atcggtcagg cctccaaaat cccacgcaag tacaccggca agatgtggtg a 771

<210>18

<211>646

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>18

Leu Lys Arg Leu Leu Cys Phe Val Val Leu Ala Ser Thr Val Gly Trp

1 5 10 15

Trp Trp Trp Arg Arg Leu Arg Glu Ala Ser Glu Ser Pro His Leu Ala

20 25 30

Gly Val Leu Ala Trp Asp Phe Gly Gly Leu Thr Asp Asp Ala Leu Ser

35 40 45

Val Trp Val Arg Lys Ile Leu Val Val Leu Ile Val Ala His Arg Pro

50 55 60

Leu Glu Ala Leu Arg Tyr Val Leu Val Gly Val Val Val Val Phe Val

65 70 75 80

Val Ala Ser Phe Val Leu His Ser Ala Ala Ala His Ala Gly Leu Asp

85 90 95

Leu Gly His Ala Gln Ala Ala Val Lys Gly Leu Phe Glu Glu Asp Gln

100 105 110

Ala Gly Gly Glu Glu Leu Gln His Gly Gln Gly His Gly Val Leu Arg

115 120 125

His Ala His Arg Arg Leu Arg Val Gly Asp Arg Leu Ala Gln Gln Val

130 135 140

Asp Ala Gly Val Asp Asp Pro Asp Gln Glu Glu Glu Asp Val Glu Asp

145 150 155 160

Lys Gln Arg Gln His Gly Pro His Gln His Glu His Ala Val Ala Ser

165 170 175

Leu His Ala Pro Val Ala Glu His Asp Glu Gly Ser Glu Glu Asp Glu

180 185 190

Glu Asp Glu Gly Thr Glu Asp Ser Asp Ala Asp Glu Gly Ala Val Glu

195 200 205

Ile Lys Val Gly Ile Val Gly Val His Gly Val Arg Asn Ala His Arg

210 215 220

Gln Arg Gly Lys His Trp Thr Asp Asp Leu Arg Asp Ser Cys Asp Glu

225 230 235 240

Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Val Tyr Gly Lys Leu Asp Glu Glu Leu Ala

245 250 255

Arg Arg Arg Ser Gly His Leu Val His Gln Gly Gly Ala Asp Phe Phe

260 265 270

Gly Ser Leu Gly Gln Leu Ser Phe Gly Asp Cys His Glu Asp Glu Asp

275 280 285

Ser His Asn Leu Thr Ser Val Glu Met Asp Ala Pro Val Phe Ser Ser

290 295 300

Ala Ala Leu Lys Cys Gly Asn Gly Glu Leu Pro Arg Ala Val Val Glu

305 310 315 320

Pro Gly Ser Arg Asp Val Gly Ile Thr Lys Asn Leu Ser Tyr Leu Tyr

325 330 335

Pro Thr Ser Ser Leu Tyr Arg Ala Lys Gln Arg Ile Pro Ile Lys Leu

340 345 350

Glu Ile Asp Gly Leu Gln Gln Asp Val Ser Glu Arg Leu Ala Lys Ile

355 360 365

Leu Gln Gly Arg Ile Trp Thr Lys Pro Gln Leu Ser Thr Glu Leu Leu

370 375 380

Lys Gln Leu Pro Glu Ala Cys Arg Asp Arg Ala Glu Asp Leu Ala Asp

385 390 395 400

Ser Ala Ala Glu Val Leu Ser His Ala Ala Pro Phe Thr Val His Ser

405 410 415

Val Arg Gln Ala Leu Ile Arg Ser Leu Phe Tyr Val Arg Val Gly Thr

420 425 430

Leu Val Asp Thr Leu Val Lys Arg Glu Phe His Ser Arg Arg Gly Pro

435 440 445

Ile Val Ala Ser Leu Tyr Arg Ser Tyr Gly Trp Arg Pro Ile Asp Ala

450 455 460

Gly Ile Ala Val Thr Ser Arg Arg Pro Gln Gly His Arg Cys Arg Val

465 470 475 480

Cys Gly Asp Val Ser Pro Ala Ala Phe Asp Gly Asn His His Gly Thr

485 490 495

Glu Leu Asp Gly Val Ala Thr Asp Ala Glu Gly Asn Phe Ile Leu Val

500 505 510

Glu Ile Lys Thr His Gly Gly Ala Thr Val Ser Ala Ala Leu Leu Asn

515 520 525

Arg Tyr Lys Thr Gln Thr Trp Ile Gly Glu Cys Met Phe Arg His Thr

530 535 540

Phe Gly Leu Cys Cys Ser Ser Asn Val His Ser Tyr Ile Val Phe Val

545 550 555 560

Ser Pro Ser Thr Tyr Thr Ile Asp Ser Val Ile Gln Val Pro Ala Val

565 570 575

Pro Lys Arg Leu His Pro Arg Leu Phe Ser Val Phe Pro Ser Leu Pro

580 585 590

Asn Leu Cys Phe Val Arg Arg Thr Gln Lys Pro Lys Arg Pro Ala Ala

595 600 605

Ala Gln Arg Pro Ala Lys Thr Pro Gly Asp Arg Pro Ala Arg Pro Ser

610 615 620

Ser Ser Ala Gly Gln Thr Ala Ala Lys Gln Tyr Pro His Arg Tyr Tyr

625 630 635 640

Lys Arg Lys Thr Ala Ala

645

<210>19

<211>1053

<212>DNA

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>19

atggatgcac cggtcttctc ctccgctgct ctcaagtgcg gcaacggcga gctacctagg 60

gcggtggtgg aacctggctc ccgcgatgtg ggtatcacca agaatctttc gtacctttac 120

ccgacgtcta gcttgtacag ggccaagcag cggattccga ttaaacttga gatcgacggt 180

ctccaacaag atgtgtccga gcgcctggct aaaattttac aaggtcggat ttggactaaa 240

ccacaattaa gtacggagct cctcaagcag ctaccggagg cgtgcaggga tagggccgag 300

gacctggccg atagcgccgc cgaggtcctg tcccacgcgg cgcccttcac cgtccactcg 360

gtccgccagg ccctcatcag gtccctcttc tacgtgagag tggggacgct ggtggacacg 420

ctcgtcaagc gcgagttcca tagcaggagg ggacccatcg tcgccagcct ctaccgctcc 480

tacggctgga gacccatcga cgccggcatc gccgtcacct ccaggagacc tcagggacac 540

cgctgcagag tttgtggaga cgtctccccg gcagccttcg acggtaacca ccacggcaca 600

gagctggacg gcgtcgccac cgacgcggag ggcaacttta tcctcgtcga gatcaagacc 660

cacggaggcg ccaccgtcag cgccgctctc ctcaaccgct acaagaccca gacctggata 720

ggcgagtgca tgttcaggca cacgttcggc ctctgctgct ccagcaacgt ccacagctac 780

atcgtctttg tcagccccag cacctacacc atcgacagcg tgatccaggt ccccgctgtg 840

cccaagcgcc tccaccccag actcttctcc gtgttccctt ccctccccaa cctctgcttc 900

gtcaggcgga ctcagaaacc caagaggcct gctgctgcgc agagacctgc gaaaactcct 960

ggagacagac ccgctcgacc ttcctcctca gcaggacaga cggcggcgaa gcagtacccg 1020

caccgctact acaagaggaa gacagccgcc tga 1053

<210>20

<211>350

<212>PRT

<213>锦鲤疱疹病毒

<400>20

Met Asp Ala Pro Val Phe Ser Ser Ala Ala Leu Lys Cys Gly Asn Gly

1 5 10 15

Glu Leu Pro Arg Ala Val Val Glu Pro Gly Ser Arg Asp Val Gly Ile

20 25 30

Thr Lys Asn Leu Ser Tyr Leu Tyr Pro Thr Ser Ser Leu Tyr Arg Ala

35 40 45

Lys Gln Arg Ile Pro Ile Lys Leu Glu Ile Asp Gly Leu Gln Gln Asp

50 55 60

Val Ser Glu Arg Leu Ala Lys Ile Leu Gln Gly Arg Ile Trp Thr Lys

65 70 75 80

Pro Gln Leu Ser Thr Glu Leu Leu Lys Gln Leu Pro Glu Ala Cys Arg

85 90 95

Asp Arg Ala Glu Asp Leu Ala Asp Ser Ala Ala Glu Val Leu Ser His

100 105 110

Ala Ala Pro Phe Thr Val His Ser Val Arg Gln Ala Leu Ile Arg Ser

115 120 125

Leu Phe Tyr Val Arg Val Gly Thr Leu Val Asp Thr Leu Val Lys Arg

130 135 140

Glu Phe His Ser Arg Arg Gly Pro Ile Val Ala Ser Leu Tyr Arg Ser

145 150 155 160

Tyr Gly Trp Arg Pro Ile Asp Ala Gly Ile Ala Val Thr Ser Arg Arg

165 170 175

Pro Gln Gly His Arg Cys Arg Val Cys Gly Asp Val Ser Pro Ala Ala

180 185 190

Phe Asp Gly Asn His His Gly Thr Glu Leu Asp Gly Val Ala Thr Asp

195 200 205

Ala Glu Gly Asn Phe Ile Leu Val Glu Ile Lys Thr His Gly Gly Ala

210 215 220

Thr Val Ser Ala Ala Leu Leu Asn Arg Tyr Lys Thr Gln Thr Trp Ile

225 230 235 240

Gly Glu Cys Met Phe Arg His Thr Phe Gly Leu Cys Cys Ser Ser Asn

245 250 255

Val His Ser Tyr Ile Val Phe Val Ser Pro Ser Thr Tyr Thr Ile Asp

260 265 270

Ser Val Ile Gln Val Pro Ala Val Pro Lys Arg Leu His Pro Arg Leu

275 280 285

Phe Ser Val Phe Pro Ser Leu Pro Asn Leu Cys Phe Val Arg Arg Thr

290 295 300

Gln Lys Pro Lys Arg Pro Ala Ala Ala Gln Arg Pro Ala Lys Thr Pro

305 310 315 320

Gly Asp Arg Pro Ala Arg Pro Ser Ser Ser Ala Gly Gln Thr Ala Ala

325 330 335

Lys Gln Tyr Pro His Arg Tyr Tyr Lys Arg Lys Thr Ala Ala

340 345 350

<210>21

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g1-F

<400>21

atgcctgcca cctttggcag 20

<210>22

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g1-R

<400>22

tcaccccgca gaggtaccat 20

<210>23

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g2-F

<400>23

atgtaccagc agcaatacca 20

<210>24

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g2-R

<400>24

tcagttgtga agagtagatt 20

<210>25

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g3-F

<400>25

atgagccaca gacagccagc 20

<210>26

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g3-R

<400>26

tcagtaatag taatagttgt 20

<210>27

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g4-F

<400>27

atgccgtcga gcatgactgg 20

<210>28

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g4-R

<400>28

tcagagttcg tctctgatgg 20

<210>29

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g5-F

<400>29

atgtctatgc gcccgcacaa 20

<210>30

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-g5-R

<400>30

ctaccgagtg agccgtctct 20

<210>31

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m1-F

<400>31

atgacggagc gggcagcgct 20

<210>32

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m1-R

<400>32

ttagaagacg agcaagccct 20

<210>33

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m2-F

<400>33

atgtctcctt tgtgcggtct 20

<210>34

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m2-R

<400>34

ctatacgcgc tcataacccc 20

<210>35

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m3-F

<400>35

atgagcgcgt ataggtacaa 20

<210>36

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m3-R

<400>36

tcagacgagc tcgttgagga 20

<210>37

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m4-F

<400>37

atggcagtca ccaaagctca 20

<210>38

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m4-R

<400>38

tcaccacatc ttgccggtgt 20

<210>39

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m5-F

<400>39

atggatgcac cggtcttctc 20

<210>40

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>KHV-m5-R

<400>40

tcaggcggct gtcttcctct 20

Claims

1.一种包含对锦鲤疱疹病毒(KHV)的蛋白质进行编码的如下(a)或(b)的DNA的鲤鱼用DNA疫苗：

(a)编码5种KHV的糖蛋白的5种DNA，所述KHV的糖蛋白的氨基酸序列分别如序列号2、4、6、8和10所示；

(b)编码5种KHV的膜蛋白的5种DNA，所述膜蛋白的氨基酸序列分别如序列号12、14、16、18和20所示。

2.权利要求1所述的疫苗，其中DNA是以下的(c)或(d)：

(c)5种DNA，所述DNA的碱基序列分别如序列号1、3、5、7和9或其互补序列所示；

(d)5种DNA，所述DNA的碱基序列分别如序列号11、13、15、17和19或其互补序列所示。

3.权利要求1或2所述的疫苗，其特征在于，DNA被整合在表达载体中。

4.权利要求3所述的疫苗，其是以下的(A)或(B)：

(A)把包含编码由序列号2所示的氨基酸序列组成的KHV的糖蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号4所示的氨基酸序列组成的KHV的糖蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号6所示的氨基酸序列组成的KHV的糖蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号8所示的氨基酸序列组成的KHV的糖蛋白的DNA的表达载体、以及包含编码由序列号10所示的氨基酸序列组成的KHV的糖蛋白的DNA的表达载体混合的疫苗；

(B)把包含编码由序列号12所示的氨基酸序列组成的KHV的膜蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号14所示的氨基酸序列组成的KHV的膜蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号16所示的氨基酸序列组成的KHV的膜蛋白的DNA的表达载体、包含编码由序列号18所示的氨基酸序列组成的KHV的膜蛋白的DNA的表达载体、以及包含编码由序列号20所示的氨基酸序列组成的KHV的膜蛋白的DNA的表达载体混合的疫苗。

5.权利要求3所述的疫苗，其是以下的(C)或(D)：

(C)把包含由序列号1所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号3所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号5所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号7所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、以及包含由序列号9所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体混合的疫苗；

(D)把包含由序列号11所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号13所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号15所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、包含由序列号17所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体、以及包含由序列号19所示的碱基序列或其互补序列组成的DNA的表达载体混合的疫苗。