CN101461819A

CN101461819A - 芒果苷钙盐作为过氧化物酶增殖物激活受体激动剂的用途

Info

Publication number: CN101461819A
Application number: CNA2007100328196A
Authority: CN
Inventors: 徐广爱
Original assignee: Hainan Deze Drug Research Co Ltd
Current assignee: Hainan Deze Drug Research Co Ltd
Priority date: 2007-12-20
Filing date: 2007-12-20
Publication date: 2009-06-24

Abstract

本发明提供了一种芒果苷钙盐作为PPARs激动剂的用途。其结构式如右式。

Description

芒果苷钙盐作为过氧化物酶增殖物激活受体激动剂的用途

技术领域

本发明涉及一种芒果苷钙盐作为过氧化物酶增殖物激活受体激动剂的用途。

背景技术

过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activatedreceptors，PPARs)是一种细胞核内受体，属II型核受体超家族成员。PPARs由激活剂活化后可调控多种核内靶基因的表达，从而在许多生理和病理过程中，如能量平衡、糖脂代谢、改善胰岛素抵抗、调节炎症与免疫反应、细胞分化、抑制肿瘤生成等方面，发挥着非常关键的作用。

PPARs包括PPAR-α、PPAR-β/δ、PPAR-γ三种表型。其中PPAR-α主要分布在代谢活性较高的组织，如肝、肾、心脏、肌肉组织，在血管内皮细胞、平滑肌细胞、单核巨噬细胞及淋巴细胞内也有表达。PPAR-α受体经配体活化后，能够增加高密度脂蛋白(HDL)合成，降低甘油三酯(TG)，调控脂肪酸过氧化物酶氧化和线粒体氧化，同时还能调节脂质的摄取和贮存。另外，PPAR-α也通过调控NF-κB、激活蛋白-1、JNK-Fos/Jun信号转导等途径来参与调控炎症反应。

PPAR-γ表达于成纤维细胞、平滑肌细胞、乳腺细胞、脾脏的红白髓质、骨髓前体细胞、单核细胞和巨噬细胞、肺泡及气道上皮细胞和血管皮皮细胞等细胞中。PPAR-γ通过JAK-STAT、激活蛋白-1、NF-κB、活化T细胞核因子信号通路来抑制炎症反应；通过抑制泡沫细胞的分化、炎症反应以及细胞增殖来抑制动脉粥样硬化的发生发展；通过磷脂酰肌醇-3激酶、瘦素、脂链素等信号通路来参与糖稳态的调节；通过细胞周期的调控来影响肿瘤生长；参与脂肪细胞分化并与肥胖密切相关【荆丹清，尹士男，母义明。PPARα/γ双重激动剂研究进展。中国药物应用与监测，2007，(4)：46—49；陈永熙，王伟铭，周同，等。PPAR-γ作用及其相关信号转导途径。细胞生物学杂志，2006，28：382—386；姜鹏，王建春，钱桂生。过氧化物酶增殖体激活受体与炎症及免疫反应。生命的化学，2005，25(3)：232—235】。

以PPARs为靶标开发药物受到药物研发人员的青睐，其中以PPAR-α为靶标开发的氯贝丁酯类药物因具有较好的降脂作用而已广泛应用于临床。以PPAR-γ为靶标开发的噻唑烷二酮类药物具有明显增强靶组织对胰岛素的敏感性，改善葡萄糖的代谢的作用，该类药物作为一类新的胰岛素增敏剂亦已得到临床疗效的认可。近年来，很多研究机构致力于PPAR-α/γ双重激动剂的研究，期望这种兼有PPAR-α/γ双重激动的药物能更好地调整糖代谢、脂代谢，达到一石二鸟的作用。但伴随着以上各类药物研究的逐渐深入，现有药物表现出这样或那样的不良反应，而使现有药物临床应用受限，故寻找与开发新的PPARs激动剂具有重大的临床及市场价值。

Tom Hsun-Wei Huang等【Tom Hsun-Wei Huang，Gang Peng，George Qian Li，etal.Salacia oblonga root improves postprandial hyperlipidemia and hepatic steatosisin Zucker diabetic fatty rats：Activation of PPAR-α.Toxicology and AppliedPharmacology，210(2006)：225-235】报道芒果苷(mangiferin)体外具有PPAR-α的激动作用，但芒果苷对PPAR-γ是否具有激动作用，及芒果苷是否具有PPAR-α/γ双重激动作用，却未见报道。Abira Sarkar等【Abira Sarkar，Yashin Sreenivasan，Govindarajan T，et al.β-D-Glucoside Suppresses Tumor Necrosis Factor-inducedActivation of Nuclear Transcription Factor κB but Potentiates Apoptosis。The journalof biological chemistry，2004，279(32)：33768-33781】报道芒果苷体外可以抑制TNF、SA—LPS、PMA、神经酰胺诱导的NF-κB的活性。

发明内容

为了寻找与开发新的PPARs激动剂，本发明人对其发明的化合物芒果苷钙盐(结构式如下)进行体内外的活性研究，结果发现：

1、芒果苷钙盐不但具有PPAR-α的激动作用，而且对PPAR-γ亦具有激动作用，即芒果苷钙盐具有PPAR-α/γ双重激动作用。

2、芒果苷钙盐对PPAR-α、PPAR-γ的激动活性远远高于芒果苷。

3、芒果苷钙盐对NF-κB的抑制活性远远高于芒果苷。

4、在几种具代表性的疾病模型中，芒果苷钙盐的药理活性优于芒果苷。

为此，本发明提供以下技术方案：

本发明提供芒果苷钙盐(结构式如下)作为PPARs激动剂的应用。

本发明提供的上述芒果苷钙盐在制备PPARs激动剂中的应用中，所述PPARs激动剂可以为PPAR-α激动剂或PPAR-γ激动剂或PPAR-α/γ双重激动剂。

如前所述芒果苷钙盐作为PPARs激动剂亦可用以下调NF-κB。

鉴于现代医学对PPARs、NF-κB在糖脂代谢紊乱性疾病、炎性相关性疾病、肿瘤三大类疾病发生发展中所起重要作用的揭示【姜鹏，王建春，钱桂生。过氧化物酶增殖体激活受体与炎症及免疫反应。生命的化学，2005，25(3)：232—235；吴曙光，张洪泉，魏伟，等。抗炎免疫药理学进展。上海，第二军医大学出版社：25—36；宋祖军，王少波，王琦，等.。NF-κB的研究进展。世界急危重病医学杂志，2007，4(1)：1693—1696等】，故如前所述芒果苷钙盐作为PPARs激动剂可用以治疗上述三大类疾病，具体可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

所述芒果苷钙盐作为PPAR-α激动剂可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

所述芒果苷钙盐作为PPAR-γ激动剂可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

所述芒果苷钙盐作为PPAR-α/γ双重激动剂可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

所述芒果苷钙盐用以下调NF-κB时，可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：肿瘤、青光眼、视网膜疾病、白内障、葡萄膜炎、创伤、脑卒中、心肌缺血、败血症、移植排斥反应、心力衰竭、阿尔茨海默病、精神分裂症、抑郁症、癫痫、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、炎性手腕疾病、糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化。

本发明提供的芒果苷钙盐用作上述各种PPARs激动剂的有效剂量范围为50—800mg/日/人。以上用量是根据体外试验及动物实验结果推算的，因动物与人体之间的差异，各疾病间差异、体内外差异，故允许实际临床应用剂量有所调整。用法可根据具体疾病进行选择，各种给药途径皆可。

下面给出具体实施方式对本发明作进一步说明，但不限于此。

具体实施方式

本发明所述的芒果苷可以采用市售品(具有相应提取设备的厂家均可以生产，如广西昌洲天然产物开发有限公司)，亦可以由知母或芒果叶等植物中提取分离后得到。碳酸钠、氯化钙、乙醇等均采用市售品。芒果苷对照品(供含量测定用)由中国生物制品所提供。

实施例1：芒果苷的制备

100kg知母饮片加80％乙醇回流提取两次，每次1小时，减压回收乙醇，大孔树脂吸附，水洗后，用20％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得粗品新芒果苷；再用40％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得粗芒果苷。粗品芒果苷经重结晶精制获得芒果苷纯品，芒果苷样品经与芒果苷对照品进行鉴别，确定所获得样品为芒果苷，纯度经HPLC测定大于90％。实施例2：芒果苷钙盐的制备

按照本发明人申请的专利【PCT/CN2007/071112】中所载制备方法皆可制备芒果苷钙盐。本处仅提供一种方法用以说明芒果苷钙盐的获得。

在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水100ml、乙醇900ml充分混悬，将碳酸钠5.30g(0.05mol)加水制成0.1％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入丙酮适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，静置，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钠盐34.5g，收率为81.7％。样品纯度经HPLC测定为95％。

将芒果苷钠盐4.44g(0.01mol)水1500ml制成的水溶液，将无水氯化钙0.44g(0.004mol)加水100ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加氯化钙溶液，使产生沉淀，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄绿色固体芒果苷钙盐3.07g，收率为69.2％。经HPLC测定纯度大于98％。

芒果苷钠盐结构鉴定：

¹³CNMR(DMSO-d₆)(δppm)：161.7(C-1)，106.9(C-2)，146.6(C-3)，93.2(C-4)，155.9(C-4a)，100.6(C-4b)，102.7(C-5)，153.7(C-6)，177.5(C—9)，73.5(C-1’)，70.5(C-2’)，79.0(C-3’)，70.3(C-4’)，81.2(C-5’)，61.1(C-6’)。

参考文献【洪永福，韩公羽。西陵知母中新芒果苷的分离与结构鉴定。药学学报，1997；32(6)：473—475】中芒果苷¹³CNMR数据：

¹³CNMR(DMSO-d₆)(δppm)：161.6(C-1)，107.3(C-2)，163.6(C-3)，93.9(C-4)，156.1(C-4a)，101.2(C-4b)，102.5(C-5)，153.6(C-6)，143.7(C-7)，108.1(C-8)，118.7(C-8a)，150.7(C-8b)，179.0(C—9)，73.0(C-1’)，70.5(C-2’)，78.8(C-3’)，70.3(C-4’)，81.3(C-5’)，61.4(C-6’)。

参照芒果苷结构鉴定相关文献【洪永福，韩公羽。西陵知母中新芒果苷的分离与结构鉴定。药学学报，1997；32(6)：473—475】进行结构分析，C-3位信号向高场区显著位移，C-2、C-4、C-4a、C-4b、C-9均向高场位移，而C-8、C-8a、C-8b由于化学位移发生改变，在本次试验中未找到独立碳谱数据，可能与C-2、C-4a、C-4b碳谱数据发生重合。

综合制备方法和以上波谱数据，推断芒果苷钠盐是由芒果苷C₃位羟基与钠离子结合形成的。

芒果苷钙盐结构鉴定：

ESI-MSm/z：442[M/2+H]⁺，423[M_mgf+H]⁺，推测分子量为882；IR(KBr)cm^-：3411，3180(肩峰，OH)，2926，2900，1650，1620(共轭羰基)，1474(芳环)。

¹HNMR(DMSO-d₆)(δppm)中，4.60(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.23(1H，s)、6.32(1H，s)和7.09(1H，s)3个芳香质子的信号。

¹³CNMR(DMSO-d₆)(δppm)：161.5(C-1)，106.8(C-2)，146.9(C-3)，93.1(C-4)，155.8(C-4a)，100.8(C-4b)，103.1(C-5)，153.4(C-6)，177.5(C—9)，73.4(C-1’)，70.4(C-2’)，79.0(C-3’)，70.2(C-4’)，81.2(C-5’)，61.1(C-6’)。

参照芒果苷结构鉴定相关文献【洪永福，韩公羽。西陵知母中新芒果苷的分离与结构鉴定。药学学报，1997；32(6)：473—475】进行结构分析，C-3位信号向高场区显著位移，C-2、C-4、C-4a、C-4b均向高场位移，而C-8、C-8a、C-8b由于化学位移发生改变，在本次试验中未找到独立碳谱数据，可能与C-2、C-4a、C-4b碳谱数据发生重合。

综合制备方法和以上波谱数据，推断芒果苷钙盐是由芒果苷C₃位羟基与钙离子结合形成的。结构式如下：

实施例3：芒果苷钙盐冻干粉针的制备

称取40g甘露醇，置于适当容器内，加入1000ml注射用水，加针用炭0.2g(0.1％w/v)，加热至80℃，搅拌30min，0.22μm微孔滤膜过滤，滤液备用。

称取10g芒果苷钙盐，加入甘露醇溶液中，搅拌使完全溶解。补加注射用水至2000ml，检测含量及pH值后，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，装量为每支含G10mg，冷冻干燥。真空压塞，轧盖，贴签，包装即得。

为了说明发明内容中所述芒果苷钙盐的药理活性，本发明人采用体内外相结合、以具代表性的疾病模型作为各类疾病代表的方式进行实验研究。即用体外方式研究芒果苷钙盐对PPAR-α、PPAR-γ的激动作用，用体内方式研究芒果苷钙盐对NF-κB的下调作用，又分别以ZDF(Zucker diabetic fatty)大鼠、急性胰腺炎大鼠、肝癌大鼠来代表糖脂代谢紊乱性疾病、炎症相关性疾病、肿瘤来研究芒果苷钙盐作为PPAR-α、PPAR-γ激动剂、NF-κB抑制剂用以治疗各种疾病的可行性。详细阐述如下：

试验例1：芒果苷钙盐对PPAR-α、PPAR-γ的激动作用

1、材料

按实施例2制备芒果苷钙盐，按实施例1制备芒果苷，盐酸罗格列酮为浙江万马药业有限公司生产、非诺贝特购自Sigma公司。四者皆在无菌条件下用二甲基亚砜(DMSO)溶解后，—20℃保存，临用前用培养液稀释至所需浓度。

无酚红RPM I-1640培养基、胎牛血清(FBS)、DMSO，购于Sigma公司。海肾荧光素酶报告基因(PRL-CMV-Rluc)和双报告基因荧光素酶检测试剂盒，购于Promega公司。活性碳滤过的胎牛血清，购于Hyclone公司，质粒提取试剂盒，购于Sigma公司，脂质体2000和Trizol核酸提取液，购于Invitrogen公司。

RT-PCR引物和BcaBESTTM RNA PCR KitVer.1.1，宝生物工程(大连)有限公司。

HEK-293细胞(人胚肾细胞)，购于中国医学科学院细胞中心，接种在含10％FBS的RPM I-1640培养液中，在37℃和5％CO2培养箱中培养。

2、实验方法

HEK-293细胞培养于含10％活性炭滤过FBS的无酚红RPM I-1640培养基中，种96孔板，每孔100μL。当96孔板中细胞丰度达80％～90％时，把人的PPARα或PPARγ质粒(pM-hPPARα或pM-hPPARγ)和萤火虫荧光素酶报告基因(pB4-RES-tk-luc)、海肾荧光素酶报告基因(PRL-CMV-Rluc)转染入HEK-293细胞中(按脂质体2000说明书操作)。转染后24h给不同浓度的罗格列酮、非诺贝特、芒果苷、芒果苷钙盐，药物终浓度为0.001，0.01，0.1，1，10，20，100μmol/L。给药后24h，用双报告基因检测试剂盒检测荧光素酶的发光强度，并计算罗格列酮、非诺贝特、芒果苷、芒果苷钙盐对PPARα和PPARγ激动作用的半数有效浓度(EC₅₀)。

3、结果

芒果苷钙盐对PPARα和PPARγ皆有激动作用，且活性明显强于芒果苷。详见下表1。

表1 各受试物对PPARα和PPARγ激动作用的EC₅₀

试验例2：芒果苷钙盐对ZDF(Zucker diabetic fatty)大鼠的影响

1、药物：

按实施例2制备的芒果苷钙盐，按实施例1制备芒果苷，二者皆用3‰羧甲基纤维素钠混悬后使用。盐酸罗格列酮为浙江万马药业有限公司生产。

2、动物：

13-15周龄雄性ZDF大鼠。大鼠IVC笼具饲养，每笼2只，温度22℃。

3、分组及给药

将ZDF大鼠随机分为8组，即空白组(n＝10)，芒果苷低剂量组[20mg/kg，n＝10]，芒果苷中剂量组[40mg/kg，n＝10]，芒果苷高剂量组[80mg/kg，n＝10]，芒果苷钙盐低剂量组[10mg/kg，n＝10]，芒果苷钙盐中剂量组[20mg/kg，n＝10]，芒果苷钙盐高剂量组[40mg/kg，n＝10]，罗格列酮组[3mg/kg，n＝10]。每日固定时间以灌胃给药的方式进行。空白组给予等量的生理盐水。共给药30天。

4、观察指标

血糖与血脂：试验结束时腹主动脉采血标本，血糖、糖化血红蛋白(HbAlc)、血脂[包括甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)]采用GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司生产)检测。

胰岛素：放射免疫法，γ计数器计数，胰岛素放免分析试剂盒，山东潍坊市三维(3V)生物公司生产。

5、统计学分析：

计量资料值以均数标准差(x±SD)表示。两组间比较采用t检验。

6 结果

20mg/kg芒果苷未能显著改善ZDF大鼠的血糖、糖化血红蛋白、血脂等各项指标，40mg/kg对部分指标有所改善。而芒果苷钙盐10mg/kg即能显著改善ZDF大鼠的血糖、糖化血红蛋白、血脂、胰岛素等各项指标，可见芒果苷钙盐较芒果苷起效剂量降低，活性增强。具体详见下表2。

试验例3：芒果苷钙盐对急性胰腺炎动物模型及NF-κB表达的影响

1.受试物

按实施例3制备的芒果苷钙盐，按实施例1制备芒果苷，然后称取20g芒果苷，加入60％聚乙二醇400至1000ml，搅拌使芒果苷完全溶解，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，轧盖，灭菌，贴签，即得可注射用芒果苷。

2.动物

SD大鼠，SPF级，雌雄各半，250～280g。

3.实验方法：

3.1 造模：实验前禁食12h，自由饮水。腹腔内注射3％戊巴比妥钠50mg/kg麻醉后行股静脉置管，供实验中给药和补液。右颈总动脉置管，供取血。模型组以蛙皮素溶于生理盐水中，予以腹腔注射20μ/kg，4h共注射5次，制成急性胰腺炎(AP)模型。

3.2 假手术对照组处理：腹腔内麻醉，切开腹腔，仅稍翻动十二指肠后关闭腹腔，注入生理盐水1ml/100g。

3.3 分组：将AP大鼠按体重随机分为7组，每组10只。分别为模型组、芒果苷钙盐高中低剂量组、芒果苷高中低剂量组。另设对照组10只大鼠。AP模型制成后，各给药治疗组大鼠于术后10min，静脉注射芒果苷钙盐与芒果苷。各组大鼠术后均自由饮水、禁食。

4、检测指标

4.1 生化指标检测：各组动物经颈总动脉置管分别于6h和12h时段取血，立即离心，取血清，置-70℃待测。采用GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司生产)检测血清淀粉酶含量。

4.2 胰腺组织NF-κBp65蛋白检测：6h时段处死8只大鼠，制备胰腺组织匀浆，测定蛋白质浓度，取30μg样本，常规行Western blot。鼠单克隆抗体NF-κBp65(Biotechnology公司)1：200稀释，鼠单克隆抗体β-actin(Sigma公司)1：1000稀释，HRP标记的羊抗鼠IgG(Sigma公司)1：1000稀释，最后ECL发光，X线片曝光。使用SX-100专用图像分析系统，扫描蛋白条带密度，以NF-κBp65/β-actin的比值半定量。

5、统计学分析：

6、结果：

6.1 血清淀粉酶水平：诱导AP后6h和12h，模型组及各给药治疗组淀粉酶值比假手术对照组显著增高，说明造模成功。芒果苷中高剂量组及芒果苷钙盐各给药治疗组6h和12h的淀粉酶值均较模型组显著下降，其中芒果苷钙盐组下降幅度远远大于芒果苷同剂量组，说明芒果苷钙盐活性优于芒果苷。详见下表3。

6.2 胰腺组织NF-κBp65蛋白表达：诱导AP后6h和12h，模型组及各给药治疗组NF-κBp65表达相对值比假手术对照组显著增高。芒果苷中高剂量组及芒果苷钙盐各给药治疗组6h和12h的NF-κBp65表达相对值均较模型组显著下降，其中芒果苷钙盐组下降幅度远远大于芒果苷同剂量组，说明芒果苷钙盐活性优于芒果苷。详见下表3。

试验例4：芒果苷钙盐对肿瘤的化疗增效作用

1.受试物

同试验例3。

2.动物

Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，150～180g。

3.实验方法：

3.1 造模：按文献方法，将Walker256细胞系在1640培养基中培养，无菌下将细胞注射到刚断奶的Wistar大鼠腹腔中长成腹水瘤。再将腹水瘤鼠处死，收集腹水于无菌小瓶中，取腹水细胞于消毒皮肤后行皮下注射到断奶大鼠腋下制成实体瘤，无菌下取瘤组织并将其切成1mm³大小的瘤块备用。

将动物于2％戊巴比妥钠静脉注射麻醉下切开腹腔，暴露肝脏，用眼科手术镊轻轻在肝上打一遂道，将瘤块植入，压迫止血，关腹后静脉注射1ml生理盐水放回笼中饲养。

3.2 分组：将肝癌大鼠按体重随机分为11组，每组10只。分别为模型组、顺铂组、芒果苷钙盐高中低剂量组、芒果苷钙盐高中低剂量组与顺铂合用组、芒果苷高中低剂量组与顺铂合用组。按表4所示剂量和给药方式每日给药一次，连续给药10天。

4.检测指标：末次给药24小时后处死，取血，剥取瘤组织。

瘤重与抑瘤率：

抑瘤率％＝(1-给药组平均瘤重/模型组平均瘤重)×100％

根据各组抑瘤率，按Burgi修正公式对联合用药组进行疗效判断。即：Q＝联合用药组抑瘤率/(顺铂组抑瘤率+芒果苷钙盐组抑瘤率—顺铂组抑瘤率×芒果苷钙盐组抑瘤率)

若q值为0.85～1.15为单纯相加，q>1.15为增强，q<0.85为拮抗。

5.统计学分析：

6.实验结果：

实验结果见表4。结果表明，较低剂量的顺铂(0.5mg/kg)肝癌的抑瘤活性较低，抑瘤率只达24.6％。芒果苷钙盐只在20mg/kg剂量下表现出较明显的抑瘤活性，抑瘤率为30.4％。当芒果苷钙盐与顺铂联合应用时，抑瘤活性明显提高，各组与模型组比较具有显著性差异。芒果苷钙盐高中低各剂量与顺铂合用时q值分别为1.42、1.32和1.17，皆大于1.15，表明芒果苷钙盐对顺铂的抑瘤有一定的增效作用。芒果苷钙盐合用顺铂组与芒果苷合用顺铂组比较，前者疗效优于后者，活性至少提高1倍，详见表4。

Claims

1.一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述芒果苷钙盐结构式如下：

2、根据权利要求1所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-α激动剂。

3、根据权利要求1所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-γ激动剂。

4、根据权利要求1所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-α/γ双重激动剂。

5、根据权利要求1所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂可用以下调NF-κB。

6、根据权利要求1所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

7、根据权利要求2所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-α激动剂时，所述芒果苷钙盐可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

8、根据权利要求3所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-γ激动剂时，所述芒果苷钙盐可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

9、根据权利要求4所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂为PPAR-α/γ双重激动剂时，所述芒果苷钙盐可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：血脂异常、肥胖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑血管疾病、周围血管病、糖尿病及其并发症、高胰岛素血症、代谢综合征、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、心力衰竭、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、抑郁症、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、阿尔茨海默病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、肿瘤。

10、根据权利要求5所述的一种芒果苷钙盐在制备过氧化物酶增殖物激活受体激动剂中的应用，其特征在于：所述过氧化物酶增殖物激活受体激动剂用以下调NF-κB时，所述芒果苷钙盐可用于治疗下述疾病中的任何一种或几种：肿瘤、青光眼、视网膜疾病、白内障、葡萄膜炎、创伤、脑卒中、心肌缺血、败血症、移植排斥反应、心力衰竭、阿尔茨海默病、精神分裂症、抑郁症、癫痫、全身炎性反应综合征(SIRS)、脓毒血症、脓毒性休克、感染性休克、多器官功能障碍综合征、类风湿性关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、风湿性关节炎、高血压、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、硬皮病、结节病、皮肌炎、白塞氏病、银屑病、呼吸道病毒感染、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、哮喘、肺损伤、肺纤维化、前列腺炎、胰腺炎、肝硬化、炎症性肠病、获得性免疫缺陷综合征、Castleman氏病、帕金森氏症、早老性痴呆、脑脊髓炎、多发性硬化症、血管性头痛、中枢神经损伤、脑损伤、脑损伤后感染性并发症、流感病毒性脑病、慢性肾功能不全、原发性肾病综合征、返流性肾病、肾小球肾炎、失血性休克、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、心脏粘液瘤、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、坏疽性脓皮病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、牙周病、细菌感染、炎性手腕疾病、糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化。