CN101848922B - 一种新的芒果苷钙盐及其制备方法与用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种芒果苷钙盐及其制备方法与用途。该芒果苷钙盐不但具有降糖、降脂、降胰岛素作用，而且可以提高芒果苷的溶解性与口服生物利用度。

Description

一种新的芒果苷钙盐及其制备方法与用途
技术领域
本发明涉及一种芒果苷钙盐及其制备方法及作为胰岛素增敏剂用治糖尿病及其并发症的用途。 
背景技术
胰岛素抵抗(IR)是指胰岛素作用的靶器官、组织对胰岛素生物效应的反应性降低或丧失而产生的一系列病理和临床表现。大量研究表明，IR贯穿于2型糖尿病发生发展过程中，是2型糖尿病的显著特征。以IR为核心，可导致高血糖、高血压、微量白蛋白尿、炎症、高纤溶状态、脂代谢异常、内皮功能障碍、动脉粥样硬化和心血管病。所以，通过增强胰岛素作用，改善胰岛素受体的敏感性，开发胰岛素增敏剂治疗糖尿病及其并发症(糖尿病并发症具体指冠心病、动脉粥样硬化、脑血管病等大血管病变；糖尿病肾病、糖尿病性视网膜病变等微血管病变；神经病变；糖尿病足；黄斑病、白内障、青光眼、屈光改变、虹膜睫状体病变等眼的其他病变等)已成为近年来的研究热点。 
目前，已上市的胰岛素增敏剂大都价格昂贵或具有一定的不良反应而导致患者依从性较差。因此研究开发价廉高效低毒的胰岛素增敏剂具有重要的临床意义与市场价值。 
芒果苷(mangiferin)是从百合科植物知母等植物中提取的天然多酚类化合物，分子式：C19H18O11，分子量：422。其化学结构如下： 
Figure GPA00001137083100011
该成分亦可从漆树科植物芒果树、扁桃树的叶或果实、树皮中，或龙胆科植物东北龙胆、川西獐芽菜，或水龙骨科植物光石韦中提取得到。 
芒果苷是一种天然的清除自由基的抗氧化剂，芒果苷的药理研究表明其具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降糖、抗炎、利胆、免疫调 节、降脂等。其中芒果苷口服或腹腔注射皆可降低糖尿病鼠的血糖、血脂水平，其降糖的机制可能为通过增加胰岛素敏感性发挥其抗糖尿病活性【MiuraT，Ichiki H，Hashimoto I，et al.Antidiabetic activity of a xanthonecompound，mangiferin.Phytomedicine，2001，8(2)：85-87】。但芒果苷在溶解性、机体的生物利用、吸收等方面还存在着缺陷。 
发明内容
本发明人在进行芒果苷成盐的研究过程中，得到一系列芒果苷盐化合物，已申请专利【申请号：CN200710129584.2；发明名称：一种芒果苷盐及其制备方法与用途】，其中阐述的芒果苷盐均能提高芒果苷的溶解度和生物利用度，发明人进一步对芒果苷盐作为胰岛素增敏剂的药理活性进行研究时发现：芒果苷钙盐不仅解决了芒果苷的溶解性问题，提高口服生物利用度，而且所形成芒果苷钙盐具有显著的胰岛素增敏活性。 
具体技术方案如下： 
本发明提供一种芒果苷钙盐，其特征如下： 
①所述芒果苷钙盐采用高效液相色谱法测定，其色谱特征与芒果苷对照品一致。 
②所述芒果苷钙盐结构中含有钙离子。 
具有上述特征的芒果苷钙盐可以具有以下结构通式： 
Figure GPA00001137083100021
其中n＝1或2；m＝1或2。 
当结构通式(I)中n＝2，m＝1时，所述芒果苷钙盐具有以下结构通式(II)： 
Figure DEST_PATH_GSB00000843603900011
其中R1、R2、R3、R4任意一个为O-，其余为OH。 
其中最优选的化合物具有以下结构式： 
Figure DEST_PATH_GSB00000843603900012
本发明提供了上述芒果苷钙盐的制备方法： 
本发明所述的芒果苷钙盐可以是将芒果苷制备成芒果苷单钠(钾)盐，然后再与水溶性钙盐所生成的盐，可以采用的制备方法如下： 
①将芒果苷与碱性钠盐或碱性钾盐反应制备成芒果苷单钠盐或芒果苷单钾盐； 
②将芒果苷单钠盐或芒果苷单钾盐与水溶性钙盐反应生成芒果苷钙盐。 
具体地说： 
①在反应器中加入反应溶媒和芒果苷混悬得混悬液，将碱性钠(钾)盐水溶液加入混悬液中，搅拌反应至澄明，过滤，得溶液，向溶液中加入结晶溶媒适量，搅拌，大量沉淀产生，过滤，固体物60℃以下干燥，得黄色芒果苷单钠(钾)盐。 
②将芒果苷单钠(钾)盐制成适宜浓度的水溶液，将水溶性钙盐制成适宜浓度的溶液，向芒果苷单钠(钾)盐水溶液中滴加钙盐溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生，过滤，固体物60℃以下干燥，得芒果苷钙盐。 
上述制备方法中所述的芒果苷与碱性钠(钾)盐的摩尔配比为1∶0.5-1。 
上述制备方法中所述的芒果苷单钠(钾)盐与水溶性钙盐摩尔配比为1∶0.5。 
上述制备方法中所述的碱性钠(钾)盐可以选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钠、醋酸钾等中的一种或两种以上的混合物。 
上述制备方法中所述的水溶性钙盐可以选自氯化钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、戊酸钙、甘油磷酸钙、碘化钙等中的一种或两种以上的混合物。 
上述制备方法中所述反应溶媒为水与乙醇、甲醇、丙酮等可与水混溶的有机 溶剂中一种或两种以上的混合物，其中水的体积比10-90％(v/v)。 
上述制备方法中所述的结晶溶媒可以选自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷等有机溶剂中一种或两种以上的混合物。 
本发明所获得芒果苷钙盐可以是结晶水合物，具有0-9摩尔的水。 
芒果苷钙盐可以通过适宜的手段进行纯化，如过滤、水冲洗，并进行干燥。 
本发明所述的芒果苷钙盐还可以是芒果苷与碱性钙化合物所成的芒果苷钙盐，可采用的制备方法如下： 
加入芒果苷及适当溶剂溶解(所获溶液简称芒果苷溶液)，碱性钙化合物加入适当溶剂溶解(所获溶液简称碱性溶液)，在搅拌状态下缓慢向芒果苷溶液中加入碱性溶液，搅拌反应完全，获得反应液，向反应液中加入适量有机溶剂，搅拌析出大量黄色沉淀，过滤，低于60℃干燥，得黄绿色固体。 
此制备方法中所述的芒果苷与碱性钙化合物的摩尔配比为1∶0.5-2。 
此制备方法中所述的碱性钙化合物可以是氢氧化钙、碳酸氢钙、丙酸钙、醋酸钙等有机或无机碱性钙化合物中的一种或几种，优选氢氧化钙。 
此制备方法中所述的溶剂可以选自水、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇、乙醇、丙酮等溶剂中的一种或几种的混合物。 
本发明在研究过程中发现： 
1、采用上述两种制备方法制备的芒果苷钙盐采用高效液相色谱法测定，其色谱特征皆与芒果苷对照品一致。 
2、采用滴定法测定上述两种方法制备的芒果苷钙盐，其中皆含有钙离子。 
3、芒果苷与氢氧化钙所成的钙盐在水溶液中稳定性较差，两小时内有较大变化，其他碱性钙化合物如碳酸氢钙、醋酸钙等由于碱性较弱，与芒果苷反应形成钙盐较困难，收率很低； 
4、将芒果苷与氯化钙水溶液混合放置数十天或持续加热10小时，也有少量芒果苷钙盐形成，但不具备工业价值。 
5、将芒果苷与碱性钠(钾)盐反应制备成芒果苷单钠(钾)盐后，再与水溶性钙盐所成的芒果苷钙盐性质稳定，收率高。 
通过以上研究和分析，本发明优选芒果苷制备成芒果苷单钠(钾)盐后，再与水溶性钙盐形成的钙盐的方法制备芒果苷钙盐。 
化合物结构确证： 
①芒果苷单钠(钾)盐的结构确证： 
芒果苷核磁数据： 
1HNMR(DMSO-d6)(δppm)中，4.60(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.37(1H，s)、6.86(1H，s)和7.39(1H，s)3个芳香质子的信号。 
13CNMR(DMSO-d6)(δppm)：162.7(C-1)，108.4(C-2)，164.7(C-3)，94.2(C-4)，157.1(C-4a)，102.2(C-4b)，103.5(C-5)，154.9(C-6)，144.6(C-7)，108.9(C-8)，112.6(C-8a)，151.7(C-8b)，180.0(C-9)，73.9(C-1’)，71.5(C-2’)，79.8(C-3’)，71.1(C-4’)，82.4(C-5’)，62.4(C-6’)。 
芒果苷单钠(钾)盐核磁数据： 
1HNMR(DMSO-d6)(δppm)中，4.60(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.05(1H，s)、6.19(1H，s)和6.95(1H，s)3个芳香质子的信号。 
13CNMR(DMSO-d6)(δppm)：162.4(C-1)，106.95(C-2)，167.6(C-3)，94.7(C-4)，157.1(C-4a)，101.7(C-4b)，104.6(C-5)，154.1(C-6)，147.4(C-7)，108.0(C-8)，178.3(C-9)，74.4(C-1’)，71.0(C-2’)，80.0(C-3’)，71.0(C-4’)，81.9(C-5’)，61.8(C-6’)。 
芒果苷单钠(钾)盐的结构鉴定数据分析，与芒果苷比，芒果苷单钠(钾)盐的13CNMR数据中，C-3和C-7信号向低场区显著位移；1HNMR数据中，3个苯基质子信号均向高场区显著位移。 
由于芒果苷结构中1-羟基与9-羰基形成分子内氢键，其酸性很弱，不能与弱碱性的钠(钾)盐反应；3-羟基和7-羟基的酸性较强，能与弱碱性的钠钾盐反应。但由于6，7-二羟基因为相邻羟基缔合的缘故，7-羟基的酸性稍弱于3-羟基。芒果苷与碳酸氢钠(碳酸氢钾)以摩尔比1∶1反应(简称碳酸氢盐路线)时，生成3位芒果苷单钠盐(即在芒果苷碳3位羟基位置与钠相连)的数量多于7位芒果苷单钠盐(即在芒果苷碳7位羟基位置与钠相连)的数量。而芒果苷与碳酸钠(碳酸钾)以摩尔比1∶0.5反应(简称碳酸盐路线)时，由于碳酸钠(碳酸钾)碱性比碳酸氢钠(碳酸氢钾)强，所以生成3位芒果苷单钠盐与7位芒果苷单钠 盐机会均等。 
因此，可以通过芒果苷与碳酸氢钠或碳酸钠反应获得芒果苷单钠盐。 
综合以上分析和波谱数据，推断芒果苷单钠盐是由3位芒果苷单钠盐与7位芒果苷单钠盐的组合物。 
②芒果苷钙盐的结构确证： 
芒果苷钙盐核磁数据： 
ESI-MSm/z：442[M/2+H]+，423[Mmgf+H]+，推测分子量为882；IR(KBr)cm-：3411，3180(肩峰，OH)，2926，2900，1650，1620(共轭羰基)，1474(芳环)。 
1HNMR(DMSO-d6)(δppm)中，4.60(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.18(1H，s)、6.25(1H，s)和7.05(1H，s)3个芳香质子的信号。 
13CNMR(DMSO-d6)(δppm)：162.5(C-1)，106.5(C-2)，166.7(C-3)，94.9(C-4)，157.1(C-4a)，102.2(C-4b)，104.2(C-5)，154.3(C-6)，148.75(C-7)，107.99(C-8)，178.3(C-9)，74.7(C-1’)，71.1(C-2’)，80.2(C-3’)，71.1(C-4’)，82.1(C-5’)，61.8(C-6’)。 
芒果苷钙盐的结构鉴定数据分析，与芒果苷比，芒果苷钙盐的13CNMR数据中，C-3和C-7信号向低场区显著位移。1HNMR数据中，3个苯基质子信号均向高场区显著位移。 
我们的研究表明：以碳酸氢盐路线制备的芒果苷钙盐的收率显著低于以碳酸盐路线制备的芒果苷钙盐的收率。这是由于在碳酸氢盐路线中，生成3位芒果苷单钠盐多于7位芒果苷单钠盐。由于分子空间位阻的原因，芒果苷单钠(钾)盐在形成芒果苷钙盐过程中，具有以下结构式的芒果苷钙盐很难获得。 
Figure GPA00001137083100061
而易于形成具有以下结构式的芒果苷钙盐。 
Figure 968060DEST_PATH_GPA00001137082700021
因为碳酸盐路线中，生成3位芒果苷单钠盐与7位芒果苷单钠盐的机会均等，所以以碳酸盐路线制备的芒果苷钙盐的收率显著高于以碳酸氢盐路线制备的芒果苷钙盐的收率。 
综合以上分析和数据，推断采用经芒果苷单钠(钾)盐制得的芒果苷钙盐结构式如下： 
Figure 822883DEST_PATH_GPA00001137082700022
本发明的另一目的是提供该芒果苷钙盐可以与药学上可接受的药用辅料制成临床可接受的剂型，即可制成临床适用的任何一种口服制剂、外用制剂或注射剂，例如片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服溶液剂、口服混悬剂、凝胶剂、冻干粉针等。 
本发明还提供芒果苷钙盐在制备胰岛素增敏剂中的应用。其中所述胰岛素增敏剂还可以为降糖药、降脂药。其作为胰岛素增敏剂可以用于防治2型糖尿病及其慢性并发症。其中所述的2型糖尿病慢性并发症，具体指2型糖尿病并发冠心病、动脉粥样硬化、脑血管病等大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病性视网膜病变等微血管病变、神经病变、糖尿病足、黄斑病、白内障、青光眼、屈光改变、虹膜睫状体病变中的一种或几种。其作为降脂药可以用于防治高脂血症。 
本发明提供的芒果苷钙盐用作胰岛素增敏剂的大鼠有效剂量范围为10-80mg/kg/日，按照不同种类动物间剂量换算公式折到人体为100-800mg/日/人。给药途径为口服，每日3次。因动物与人体之间的差异，故允许实际临床 应用剂量与方法有所调整。 
下面给出具体实施方式对本发明作进一步说明，但不限于此。 
具体实施方式
本发明所述的芒果苷可以采用市售品(具有相应提取设备的厂家均可以生产，如广西昌洲天然产物开发有限公司)，亦可以由知母或芒果叶等植物中提取分离后得到。碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、醋酸钠、醋酸钾、碳酸氢钙、葡萄糖酸钙等均采用市售品。乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯等试剂均采用市售品。芒果苷对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供。 
制备例1：芒果苷制备 
100kg知母饮片加80％乙醇80℃提取两次，浓缩，大孔树脂吸附，水洗后，用40％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得粗芒果苷。粗品芒果苷经溶剂-二氧杂环乙烷-水重结晶精制获得芒果苷纯品，芒果苷样品经与芒果苷对照品进行鉴别，确定所获得样品为芒果苷，纯度经HPLC测定为98.5％。 
化合物鉴定： 
1HNMR(DMSO-d6)(δppm)中，4.60(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.37(1H，s)、6.86(1H，s)和7.39(1H，s)3个芳香质子的信号。 
13CNMR(DMSO-d6)(δppm)：162.7(C-1)，108.4(C-2)，164.7(C-3)，94.2(C-4)，157.1(C-4a)，102.2(C-4b)，103.5(C-5)，154.9(C-6)，144.6(C-7)，108.9(C-8)，112.6(C-8a)，151.7(C-8b)，180.0(C-9)，73.9(C-1’)，71.5(C-2’)，79.8(C-3’)，71.1(C-4’)，82.4(C-5’)，62.4(C-6’)。 
参考文献【洪永福，韩公羽.西陵知母中新芒果苷的分离与结构鉴定.药学学报，1997；32(6)：473-475】中芒果苷13CNMR数据： 
1HNMR(DMSO-d6)(δppm)中，4.68(1H，d，J＝9.8Hz)为1个葡萄糖端基质子，且为B-苷键形式存在；另有6.46(1H，s)、6.95(1H，s)和7.50(1H，s)3个芳香质子的信号。 
13CNMR(DMSO-d6)(δppm)：161.6(C-1)，107.3(C-2)，163.6(C-3)，93.9(C-4)，156.1(C-4a)，101.2(C-4b)，102.5(C-5)，153.6(C-6)，143.7(C-7)，108.1(C-8)， 118.7(C-8a)，150.7(C-8b)，179.0(C-9)，73.0(C-1’)，70.5(C-2’)，78.8(C-3’)，70.3(C-4’)，81.3(C-5’)，61.4(C-6’)。 
所得化合物的波谱数据与文献一致，故所获得的化合物为芒果苷。 
实施例1：芒果苷单钠盐的制备 
在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水1800ml、乙醇600ml充分混悬，将碳酸氢钠8.4g(0.1mol)加水制成0.5％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入无水乙醇-乙酸乙酯(1∶1.5v/v)适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷单钠盐31.2g，收率为74.0％。样品纯度经HPLC测定为98.6％。 
实施例2：芒果苷单钠盐的制备 
在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水1800ml、乙醇900ml充分混悬，将碳酸钠5.30g(0.05mol)加水制成0.5％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入丙酮适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷单钠盐31.4g，收率为74.5％。样品纯度经HPLC测定为98.5％。 
实施例3：芒果苷单钾盐的制备 
在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水200ml、甲醇1800ml充分混悬，将碳酸钾6.9g(0.05mol)加水制成0.2％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入无水乙醇-三氯甲烷(4∶1v/v)适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷单钾盐31g，收率为73.4％。样品纯度经HPLC测定为98.6％。 
实施例4：芒果苷单钾盐的制备 
在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水1000ml、甲醇1000ml充分混悬，将碳酸氢钾10.0g(0.1mol)加水制成0.1％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入无水乙醇-二氯甲烷(7∶1v/v)适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷单钾盐31.7g，收率为75％。样品纯度经HPLC测定为98.7％。 
实施例5：芒果苷单钠盐的制备 
在反应器中加入芒果苷42.2g(0.1mol)、水1800ml、甲醇900ml充分混悬， 将碳酸钠5.30g(0.05mol)加水制成5％(w/v)溶液，缓慢加入搅拌状态的混悬液中，反应至澄清，过滤，向溶液中加入乙酸乙酯适量，充分搅拌，有大量沉淀析出，静置，抽滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷单钠盐32.3g，收率为76.5％。样品纯度经HPLC测定为98.5％。 
实施例6：芒果苷钙盐的制备 
将实施例1所制得的芒果苷单钠盐4.44g(0.01mol)水500ml制成的水溶液，将无水氯化钙0.55g((0.005mol)加水150ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加氯化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生。4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钙盐2.7g，收率为61.4％。经HPLC测定纯度为98.8％。 
实施例7：芒果苷钙盐的制备 
将实施例2所制得的芒果苷单钠盐4.44g(0.01mol)水500ml制成的水溶液，将无水氯化钙0.55g(0.005mol)加水150ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加氯化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生。4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钙盐3.4g，收率为77.2％。经HPLC测定纯度为98.3％。 
实施例8：芒果苷钙盐的制备 
将实施例3制备的芒果苷单钾盐4.6g(0.01mol)水300ml制成的水溶液，将无水氯化钙0.55g(0.005mol)加水300ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加氯化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生，4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钙盐3.5g，收率为76.3％。经HPLC测定纯度为98.6％。 
实施例9：芒果苷钙盐的制备 
将实施例4制备的芒果苷单钾盐4.6g(0.01mol)水300ml制成的水溶液，将无水氯化钙0.55g(0.005mol)加水300ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加氯化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生，4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钙盐2.9g，收率为63.0％。经HPLC测定纯度为98.4％。 
实施例10：芒果苷钙盐的制备 
将实施例2制备的芒果苷钠盐4.44g(0.01mol)水1000ml制成的水溶液，将葡萄糖酸钙2.15g(0.005mol)加水150ml制成溶液，在搅拌状态下缓慢滴加葡萄糖酸钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，大量沉淀产生。4℃冷藏3小时以上，过滤，固体物低于60℃干燥，得淡黄色固体芒果苷钙盐3.18g，收率为71.7％。经HPLC测定纯度为98％。 
实施例11：芒果苷钙盐的制备 
将芒果苷4.2g(0.01mol)二甲基亚砜50ml制成的溶液，将氢氧化钙0.37g(0.005mol)加甘油80g制成溶液，芒果苷溶液在搅拌状态下缓慢滴加氢氧化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，加入适量无水乙醇搅拌，产生大量黄色沉淀，过滤，固体物低于60℃干燥，得黄绿色固体3.8g，收率为90.4％。经HPLC测定纯度为71.2％。 
实施例12：芒果苷钙盐的制备 
将芒果苷4.2g(0.01mol)二甲基亚砜80ml制成的溶液，将氢氧化钙1.48g(0.02mol)加甘油200g制成溶液，芒果苷溶液在搅拌状态下缓慢滴加氢氧化钙溶液，滴加完毕继续搅拌，使反应完全，加入适量无水乙醇搅拌，产生大量黄色沉淀，过滤，固体物低于60℃干燥，得黄绿色固体3.83g，收率为91.2％。经HPLC测定纯度为63.8％。 
制备例13：芒果苷钙盐胶囊的制备 
称取按实施例7方法制备的芒果苷钙盐400g，粉碎成细粉，加入羧甲基纤维素300g、预胶化淀粉300g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，加入粘合剂制软材，制粒，干燥后整粒，装胶囊，制成10000粒，即得，含药量为40mg/粒。 
制备例14：芒果苷钙盐片剂的制备 
称取实施例7方法制备的芒果苷钙盐500g，粉碎成细粉，加入微晶纤维素200g、药用淀粉300g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，加入粘合剂制软材，制粒，干燥后整粒，加入适量润滑剂，压片机压片，制成10000片，包衣，即得，含药量为50mg/片。 
实施例15：芒果苷钙盐颗粒的制备 
称取按实施例7方法制备的芒果苷钙盐100g，粉碎成细粉，加入羧甲基纤维素300g、预胶化淀粉100g、木糖500g，混匀，加入粘合剂制软材，制粒，干 燥后整粒，制成1000g，即得，含药量为100mg/g。 
实施例16：芒果苷钙盐凝胶剂的制备 
处方：芒果苷钙盐10g聚山梨酯802g卡波姆94010g氢氧化钠4g乙醇80g 
将卡波姆940(carbomer)与聚山梨酯80及300ml蒸馏水混合(溶液1)，将按实施例7方法制备的芒果苷钙盐10g加入适量水和乙醇中溶解(溶液2)，氢氧化钠溶于100ml水加入溶液1中，搅拌，得透明凝胶基质，将溶液2加入基质中搅拌均匀，加蒸馏水至1000g，搅匀，即得。 
实施例17：芒果苷钙盐冻干粉针的制备 
处方：芒果苷钙盐10g甘露醇40g其余为蒸馏水，共2000ml。 
称取40g甘露醇，置于适当容器内，加入1500ml注射用水，加针用炭，加热至80℃，搅拌30min，0.22μm微孔滤膜过滤，滤液备用。 
称取按实施例7方法制备的10g芒果苷钙盐，加入甘露醇溶液中，搅拌使完全溶解。补加注射用水至2000ml，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，装量为每支含10mg，冷冻干燥。真空压塞，轧盖，贴签，包装即得。 
试验例1：液相色谱法测定芒果苷钙盐： 
1100系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；包括G1312A二元泵，G1313A自动进样器； 
色谱条件色谱柱：discover ODS柱(250mm×6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％H3PO4水溶液(13∶87v/v)；流速1.0ml/min检测波长：254nm柱温：30℃。 
取芒果苷钙盐适量，精密称定，加去离子水溶解，定容，得供试品溶液。取芒果苷对照品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，定容，得对照品溶液。分别将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪中，记录数据，计算，即得。 
按照实施例7制备的芒果苷钙盐的色谱特征与芒果苷对照品一致。所得芒果苷钙盐的纯度为98.3％。 
按照实施例11制备的芒果苷钙盐的色谱特征与芒果苷对照品一致。所得芒果苷钙盐的纯度为71.2％。 
试验例2滴定法测定芒果苷钙盐中钙离子含量： 
取芒果苷钙盐细粉约25mg，精密称定，置锥形瓶中，加去离子水20ml溶解，加NH3-NH4Cl缓冲液(pH＝10.0)3ml，加铬黑T指示剂少许，用EDTA标准溶液 (0.0297mol/L)进行滴定至溶液由酒红色变为黄绿色为止，根据EDTA标准溶液消耗量计算钙离子含量。平行进行4次实验，结果如下： 
Figure GPA00001137083100131
根据以上数据计算芒果苷钙盐中芒果苷离子与钙离子的摩尔比为2∶1。 
试验例3：芒果苷钙盐溶解度测定 
精密称取研成细粉芒果苷5mg，置于50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇该溶液30秒钟，30分钟芒果苷不能溶解，其水溶解度小于0.1mg/ml，属水几乎不溶物质； 
精密称取按制备例7方法获得芒果苷钙盐50mg，置于50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇该溶液30秒钟，30分钟芒果苷钙盐可以溶解。 
另精密称取研成按制备例7方法制备的细粉芒果苷钙盐100mg，置于50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇该溶液30秒钟；30分钟芒果苷钙盐不能完全溶解。 
因此芒果苷钙盐水溶解度大于1mg/ml，属水微溶物质。 
试验例4：芒果苷钙盐与芒果苷口服药代动力学。 
1.药液配制 
称取芒果苷，加1％羧甲基纤维素钠溶液混悬，制成10mg/mL混悬液，为样A；称取按制备例7方法获得的芒果苷钙盐，加1％羧甲基纤维素钠溶液，配成浓度为10mg/mL溶液，为样B。 
2.灌胃给药方案大鼠禁食16h，自由饮水，分别灌胃给药样A、样B，剂量分别为100mg/kg。分别于给药前5min和给药后15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、、360min、480min取血，分离血清。 
3.血浆样品处理 
血浆样品的处理精密吸取血浆样品0.2mL，分别置于离心管中，精密加入冷藏的10％三氯乙酸40μL，涡旋3min，12000r/min离心10min，吸取上清液约120μL置于尖底进样瓶中，HPLC检测。 
4.样品的测定 
4.1仪器 
1100系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；包括G1312A二元泵，G1313A自动进样器， 
4.2血浆样品测定的色谱条件色谱柱：discover ODS柱(250mm×6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％H3PO4水溶液(13∶87v/v)；流速1.0ml/min检测波长：254nm柱温：30℃。 
4.3结果 
表1芒果苷钙盐与芒果苷的药代动力学参数比较 
Figure GPA00001137083100141
上述结果显示：口服芒果苷钙盐药代参数优于于口服芒果苷，表明芒果苷成盐后生物利用度有较大提高。 
试验例5：芒果苷钙盐对胰岛素抵抗糖尿病大鼠(STZ模型鼠)的影响 
1药物 
按实施例11方法制备芒果苷钙盐，按制备例1方法制备芒果苷。二者皆用3‰羧甲基纤维素钠混悬后使用。盐酸罗格列酮为浙江万马药业有限公司生产。 
2实验动物 
采用SPF级三月龄雌性Wistar大鼠，购自海南省人民医院动物实验中心。大鼠体重在180～200g之间。实验期间，动物室温控制在25～28℃，湿度70％，早6点晚6点照明。大鼠自由饮水、进食，保持垫料干燥。高脂饲料：基础饲料55％，猪油16％，蛋黄粉2％，绵白糖27％。 
3糖尿病模型的建立 
大鼠禁食12h后按每公斤体重30-35mg量一次性尾静脉注射链脲佐菌素(简称STZ)溶液(临用前以0.1mmol/L，pH 4.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制成2％浓度)造模。造模后第14天于禁食12h后称重，空腹尾静脉取血，测空腹血糖，再腹腔注射20％葡萄糖液(2mg/kg)，测定其后0.5h、1h、2h血糖，将糖耐量异常者纳入实验对象。正常组喂饲普通饲料，模型组及给药组喂饲高脂饲料。 
4实验分组 
设立正常对照组(n＝10)。糖尿病模型建立后，将大鼠随机分为7组，即糖尿病模型组(n＝10)，芒果苷组[20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg，每组10只]，芒果苷钙盐组[10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg，每组10只]，盐酸罗格列酮组[3mg/kg，n＝10]。每日以灌胃给药的方式进行。模型组及正常对照组皆给予等量的溶媒。共给药8周。 
5观察指标 
5.1大鼠胰岛素敏感性测定(葡萄糖输注率)：采用血糖钳技术，按照孔令东【孔令东，朱良争，宋菊敏，等.调脂降糖片对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的干预作用.中国中西医结合杂志，2006，26：76-79】方法于治疗8周后开始分批进行。 
5.2血糖与血脂的测定：处死大鼠后取全血，分离血清后，统一测定血糖(GLU)、胰岛素(INS)、甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)。 
血糖、甘油三酯采用GF-D800半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司生产)检测。 
游离脂肪酸采用铜比色法测定。游离脂肪酸测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。 
胰岛素：放射免疫法，γ计数器计数，胰岛素放免分析试剂盒，山东潍坊市三维(3V)生物公司生产。 
6统计学分析： 
计量资料值以均数标准差 
Figure GPA00001137083100151
表示。两组间比较采用t检验。 
7结果 
20mg/kg芒果苷未能显著改善糖尿病大鼠GLU、TG、FFA、INS、葡萄糖输注率。而芒果苷钙盐10mg/kg起即皆能显著改善糖尿病大鼠GLU、TG、FFA、INS、葡萄糖输注率，且呈显著的量效关系。具体详见下表2。 
以上结果表明：因为芒果苷钙盐较芒果苷起效剂量大大降低，说明芒果苷钙盐不但解决芒果苷溶解度问题，增加口服生物利用度，而且增强了芒果苷的药理活性。 
试验例6：芒果苷钙盐对胰岛素抵抗糖尿病大鼠(GK大鼠)的影响 
1、药物： 
按实施例7方法制备的芒果苷钙盐，按制备例1方法制备芒果苷，二者皆用3‰羧甲基纤维素钠混悬后使用。盐酸罗格列酮为浙江万马药业有限公司生产。 
2、动物： 
16周龄GK大鼠，雌雄各半，均购自上海斯莱克实验动物有限公司。大鼠IVC笼具饲养，每笼2只，温度22℃。 
3、分组及给药 
GK大鼠组(n＝10)，芒果苷组[20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg，每组10只]，芒果苷钙盐组[10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg，每组10只]，盐酸罗格列酮组[3mg/kg，n＝10]。每日以灌胃给药的方式进行。空白组给予等量的溶媒。共给药30天。 
4、观察指标 
血糖与血脂：试验结束时腹主动脉采血标本，血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)采用GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司生产)检测。 
胰岛素(INS)：放射免疫法，γ计数器计数，胰岛素放免分析试剂盒，山东潍坊市三维(3V)生物公司生产。 
5、统计学分析： 
计量资料值以均数标准差 
Figure GPA00001137083100171
表示。两组间比较采用t检验。 
6结果 
20mg/kg芒果苷未能显著改善GK大鼠GLU、TG、TC、HDL、LDL、INS，40mg/kg对TG、HDL、LDL有所改善。而芒果苷钙盐10mg/kg即能显著改善GK大鼠的TC、HDL、LDL，20mg/kg、40mg/kg能显著改善GK大鼠GLU、TG、TC、HDL、LDL、INS。具体详见下表3。 
以上结果表明：因为芒果苷钙盐较芒果苷起效剂量大大降低，说明芒果苷钙盐不但解决芒果苷溶解度问题，增加口服生物利用度，而且增强了芒果苷的药理活性。 
Figure GPA00001137083100181
Figure GPA00001137083100191

Claims (18)

1.一种芒果苷钙盐，其特征在于：所述芒果苷钙盐具有以下结构式：
Figure FSB00000843603800011
2.根据权利要求1所述的芒果苷钙盐的制备方法，其特征在于：
①将芒果苷与碱性钠盐或碱性钾盐反应制备成芒果苷单钠盐或芒果苷单钾盐；
②将芒果苷单钠盐或芒果苷单钾盐与水溶性钙盐反应生成芒果苷钙盐。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述芒果苷与碱性钠盐或碱性钾盐的摩尔配比为1∶0.5-1。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述芒果苷单钠盐或芒果苷单钾盐与水溶性钙盐摩尔配比为1∶0.5。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述碱性钠盐或碱性钾盐可以选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钠、醋酸钾中的一种或两种以上的混合物。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述水溶性钙盐可以选自氯化钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、戊酸钙、甘油磷酸钙、碘化钙中的一种或两种以上的混合物。
7.一种药物，其特征在于：所述药物由权利要求1所述的芒果苷钙盐与可药用辅料组成。
8.权利要求7所述的药物，其特征在于：所述药物可以制成临床适用的各种剂型。
9.权利要求8所述的药物，其特征在于：所述剂型为片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服溶液剂、口服混悬剂、凝胶剂、冻干粉针。
10.权利要求1所述的芒果苷钙盐在制备胰岛素增敏剂的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述胰岛素增敏剂为降糖药。
12.根据权利要求10中所述的应用，其特征在于：所述胰岛素增敏剂为降脂药。
13.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述胰岛素增敏剂用于防治2型糖尿病及其慢性并发症。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于：所述的2型糖尿病慢性并发症，具体指2型糖尿病并发大血管病变、微血管病变、神经病变、糖尿病足、黄斑病、白内障、青光眼、屈光改变、虹膜睫状体病变中的一种或几种。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于：所述的大血管病变为冠心病、动脉粥样硬化、脑血管病。
16.根据权利要求14所述的应用，其特征在于：所述的微血管病变为糖尿病肾病、糖尿病性视网膜病变。
17.根据权利要求12所述的应用，其特征在于：所述降脂药用于防治高脂血症。
18.权利要求7所述的药物在制备胰岛素增敏剂的应用。
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