CN101108869A

CN101108869A - 一种芒果苷盐及其制备方法与用途

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Publication number: CN101108869A
Application number: CNA2007101295842A
Authority: CN
Inventors: 徐广爱
Original assignee: Individual
Current assignee: Changzhou Deze Medical Science Co ltd
Priority date: 2006-07-21
Filing date: 2007-07-11
Publication date: 2008-01-23
Anticipated expiration: 2027-07-11
Also published as: CN101108869B

Abstract

本发明提供了一种芒果苷盐。具体为芒果苷与医学上可接受的碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质中的一种所成的盐。该盐可以解决芒果苷的溶解性，提高其药理活性、提高生物利用度，用以治疗或辅助治疗与氧化损伤密切相关的疾病。其结构通式如图，其中R为碱性氨基酸或有机胺或无机碱性金属离子。

Description

一种芒果苷盐及其制备方法与用途

技术领域：

本发明涉及一种芒果苷盐及其制备方法及用途。

背景技术：

芒果苷(mangiferin)是从百合科植物知母等植物中提取的天然多酚类化合物，分子式：C₁₉H₁₈O₁₁，分子量：422。其化学结构如下：

该成分亦可从漆树科植物芒果树、扁桃树的叶或果实、树皮中，或龙胆科植物东北龙胆、川西獐芽菜，或水龙骨科植物光石韦中提取得到。

芒果苷的药理研究表明其具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降糖、抗炎、利胆、免疫调节等，其中抗氧化作用被认为是芒果苷最核心的活性，其体内外抗氧化作用研究结果表明：芒果苷有确切的抗氧化活性，这归因于它们清除开始参与脂质过氧化反应的自由基的能力。如芒果苷像超氧化物歧化酶一样，10～100μmol就能清除由HX/XO和PMS-NADH系统生产的O^2-，被称为O^2-清道夫【李好文，邓家刚，邓静.芒果苷国外研究进展.广西中医学院学报，2003，6(4)：62-66】。

尽管芒果苷有广泛的药理作用，但因芒果苷几乎不溶于水，其生物利用度较低，并在药物的给药途径上受到很大限制，故迄今为止尚没有发现以芒果苷为活性成分的药物上市。经检索，现有期刊没有芒果苷有机盐或无机盐的报道。在现已公开的专利文献中与芒果苷有关的专利有：芒果苷衍生物及其制备方法，以及作为药物的用途(200510088313.8)公开了一种将芒果苷上的葡萄糖氧化裂环后经还原氧化后形成的衍生物及制备方法。

氧化应激(oxidative stress)是指机体内氧自由基的产生与清除失去平衡，或外源性氧化剂的过量摄入导致活性氧在体内堆积引起细胞毒性。作为对自由基氧化应激损伤的防御，人体内有一套完整的抗氧化防御系统，随着年龄的增长，体内抗氧化系统机能逐步降低，而氧自由基却有增无减，自由基生成与清除的失衡状态的发生几率就大大增加，由此引发各种疾病。如动脉粥样硬化、冠状动脉硬化、心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、心肌炎、脑梗死、脑缺血、脑水肿、颅脑损伤、高血压脑出血等心脑血管疾病；帕金森氏病、早老性痴呆、阿尔茨海默氏病等神经系统疾病；胃炎、消化性溃疡、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝坏死、脂肪肝、酒精肝、肝纤维化、中毒性肝脏病变、原发性肝癌、急性胰腺炎等消化系统疾病；上呼吸道感染、支气管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫综合征、阻塞性肺气肿、慢性肺源性心脏病、肺水肿等呼吸系统疾病；肾小球肾炎、肾中毒性病变、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭和肾移植后排斥反应等泌尿系统疾病；巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血、急性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统疾病；糖尿病、肝豆状核变性、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺机能亢进、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等代谢内分泌疾病；白内障、角膜炎、黄斑变性、视网膜色素变性、玻璃体浑浊、青光眼、视神经萎缩等眼科疾病；光线性皮肤病、灼伤等皮肤病；新生儿窒息、新生儿缺血缺氧性脑病、新生儿肺炎、支气管发育不良等新生儿疾病；流产、胎膜早破、子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征、子宫颈癌、子宫内膜癌等妇产科疾病；肿瘤；艾滋病等。因此，研究高效低毒的抗氧化剂已成为药物研发的热点【白绍蓓，常红.天然抗氧化维生素对中枢神经系统保护作用的研究进展.中国全科医学，2004，7(23)：1801；杨旭辉，朱敏恒，吴越.植物源性天然抗氧化成分研究进展，农垦医学，2004，26(4)：298；陈会良，顾有方，王月雷.中草药化学成份与抗氧化活性的研究进展，中国中医药科技，2006，13(1)：63等】。

发明内容：

因此，本发明的目的是开发溶解性好，药理活性更好、生物利用度更高的芒果苷衍生物以作为抗氧化剂来辅助治疗或治疗与氧化损伤密切相关的疾病。

为实现上述目的，本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种芒果苷盐为芒果苷与医学上可接受的碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质中的一种所成的盐，包括氨基酸盐、胺盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐等，优选氨基酸盐、胺盐，该芒果苷盐的结构通式如下：

R为碱性氨基酸或有机胺或无机碱性金属离子。

上述芒果苷盐不仅解决了芒果苷的溶解性问题，而且提高了芒果苷的药理活性与生物利用度。

本发明所述的芒果苷盐制备方法如下：

将芒果苷加入溶剂中溶解(简称芒果苷溶液)，将碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质中加入溶剂溶解(简称碱性溶液)，将碱性溶液加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全；向反应液中加入适量溶剂做为沉淀剂，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体。

本发明所述的芒果苷与碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质的摩尔配比为1∶0.5～4。

本发明所述的碱性氨基酸可以选自精氨酸、赖氨酸，其中精氨酸可以选自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸。

本发明所述的有机胺可以选自葡甲胺、叔丁胺等。

本发明所述的无机碱性物质可以选自碱金属的氢氧化物、碱土金属的氢氧化物如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化钙、氢氧化镁等。

上述碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质中，优选L-精氨酸。

由于精氨酸是一氧化氮(NO)合成的前体，能够在一氧化氮合酶的作用下生成NO，而NO是体内重要生物活性物质，参予体内的一系列生理、病理过程。故上述芒果苷盐中，优选芒果苷精氨酸盐。

本发明所述溶剂可以是水、乙醇、甲醇、二甲基亚砜(DMSO)、甘油、丙二醇、二甲基乙酰胺等溶剂中的一种或几种的混合物。

本发明所述向反应液中加入的做为沉淀剂的溶剂可以是无水乙醇、丙酮、异丙醇等溶剂中的一种或几种的混合物。

本发明提供芒果苷盐可以与药学载体组合，制成药学可以接受的各种剂型，包括冻干粉针、粉针剂等注射剂；口服制剂如片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂等。

本发明还提供芒果苷盐作为抗氧化剂的用途。所述抗氧化剂可以用于制备以下疾病的辅助治疗或治疗药物：动脉粥样硬化、冠状动脉硬化、心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、心肌炎、脑梗死、脑缺血、脑水肿、颅脑损伤、高血压脑出血等心脑血管疾病；帕金森氏病、早老性痴呆、阿尔茨海默氏病等神经系统疾病；胃炎、消化性溃疡、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝坏死、脂肪肝、酒精肝、肝纤维化、中毒性肝脏病变、原发性肝癌、急性胰腺炎等消化系统疾病；上呼吸道感染、支气管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫综合征、阻塞性肺气肿、慢性肺源性心脏病、肺水肿等呼吸系统疾病；肾小球肾炎、肾中毒性病变、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭和肾移植后排斥反应等泌尿系统疾病；巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血、急性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统疾病；糖尿病、肝豆状核变性、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺机能亢进、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等代谢内分泌疾病；白内障、角膜炎、黄斑变性、视网膜色素变性、玻璃体浑浊、青光眼、视神经萎缩等眼科疾病；光线性皮肤病、灼伤等皮肤病；新生儿窒息、新生儿缺血缺氧性脑病、新生儿肺炎、支气管发育不良等新生儿疾病；流产、胎膜早破、子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征、子宫颈癌、子宫内膜癌等妇产科疾病；肿瘤；艾滋病等。

芒果苷盐发挥抗氧化作用的临床剂量范围为50-200mg/日/人，给药途径可以口服，亦可静脉给药。由于该剂量是根据芒果苷精氨酸盐辅助治疗肝癌的动物试验推算而来，故鉴于动物与人体之间的差异，疾病之间的差异可以允许临床实际用量及给药途径有所调整。另因本发明获得的芒果苷盐水溶性好，可制成注射剂，且生物利用度较高，故作为抗氧化剂皆可采用口服、注射方式给药。本段对给药途径的论述仅为代表性论述。

以下具体实施方式用以说明本发明，但并不限于此。

具体实施方式：

本发明所述的芒果苷可以采用市售品(具有相应提取设备的厂家均可以生产，如广西昌洲天然产物开发有限公司)，亦可以由知母或芒果叶等植物中提取分离后得到。精氨酸包括L-精氨酸和D-精氨酸均为市售品，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化镁等均采用市售品。

制备例1：芒果苷的制备

取知母饮片100kg置多功能提取罐内，加入80％乙醇800升，回流提取1.5小时，滤出药液，再加入80％乙醇600升，回流提取1.5小时，滤出药液，合并药液，减压会收乙醇至无醇味。取适量药液，加入预处理的D101大孔树脂吸附，去离子水洗至清；再用30％乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩，减压干燥，即得，经高效液相色谱法检测，芒果苷纯度为95.4％。

实施例1：芒果苷精氨酸盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入80g二甲基亚砜中溶解，称取L-精氨酸17.4g(0.1mol)加入20g无水乙醇中溶解，将精氨酸溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量无水乙醇，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体56.2g，收率94.3％。

化合物鉴定：

MSm/z：595[M-H]⁺，421[MG-H]⁺，387，369，351，173[Arg-H]⁺。

¹³CNMR(DMSO-d₆)(δppm)：162.3(C-1)，107.8(C-2)，168.3(C-3)，93.8(C-4)，156.0(C-4a)，150.9(C-4b)，102.8(C-5)，154.2(C-6)，143.8(C-7)，108.2(C-8)，111.8(C-8a)，101.5(C-8b).179.2(C＝O)，81.6(C-1’)，73.0(C-2’)，70.8(C-3’)，70.5(C-4’)，78.1(C-5’)，61.6(C-6’)，175.5(Arg C-1’)，55.7(Arg C-2’)，29.9(Arg C-3’)，25.9(Arg C-4’)，41.9(Arg C-5’)，158.9(Arg C-6’)。

根据以上波谱数据，对照相关文献【洪永福，韩公羽.中药知母有效成分的研究[J].第二军医大学学报，1984；5(增刊)：80】进行结构解析，推断芒果苷精氨酸盐是由芒果苷C₃位羟基与L-精氨酸分子中C_2‘氨基以离子键结合形成的。

实施例2：芒果苷精氨酸盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入60％乙醇适量溶解，称取L-精氨酸52.2g(0.3mol)加入适量80％乙醇中溶解，将精氨酸溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量丙酮，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体75.8g，收率80.3％。

实施例3：芒果苷精氨酸盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入40％乙醇适量溶解，称取L-精氨酸69.6g(0.4mol)加入蒸馏水中溶解，将精氨酸溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量丙酮，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体96.2g，收率86.1％。

实施例4：芒果苷赖氨酸盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入甲醇适量溶解，称取L-赖氨酸29.2g(0.2mol)加入30g二甲基亚砜中溶解，将L-赖氨酸溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量无水乙醇，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体66.7g，收率93.4％。

实施例5：芒果苷葡甲胺盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入适量二甲基亚砜中溶解，葡甲胺19.5g(0.1mol)，加入30ml乙醇中溶解，将葡甲胺溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量无水乙醇，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得淡黄色固体56.1g，收率90.9％。

实施例6：芒果苷镁盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入适量二甲基亚砜中溶解，称取氢氧化镁3.15g(0.05mol)加入适量甘油中溶解，将氢氧化镁溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量无水乙醇，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体41.5g，收率91.6％。

实施例7：芒果苷钠盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入适量二甲基亚砜中溶解，称取氢氧化钠4.0g(0.1mol)加入30ml乙醇中溶解，将氢氧化钠乙醇溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量丙酮，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得淡黄色固体41.2g，收率89.2％。

MSm/z：595[M-H]⁺，421[MG-H]⁺，387，369，351，23[Na]⁺。

¹³CNMR(DMSO-d₆)(δppm)：162.3(C-1)，107.8(C-2)，169.2(C-3)，94.2(C-4)，156.0(C-4a)，150.9(C-4b)，102.8(C-5)，154.2(C-6)，143.8(C-7)，108.2(C-8)，111.8(C-8a)，101.5(C-8b).179.2(C＝O)，81.6(C-1’)，73.0(C-2’)，70.8(C-3’)，70.5(C-4’)，78.1(C-5’)，61.6(C-6’)。

根据以上波谱数据，对照相关文献【洪永福，韩公羽.中药知母有效成分的研究[J].第二军医大学学报，1984；5(增刊)：80】进行结构解析，推断芒果苷钠盐是由芒果苷C₃位羟基与钠离子以离子键结合形成的。

实施例8：芒果苷钾盐的制备

称取芒果苷42.2g(0.1mol)加入40％乙醇适量溶解，称取碳酸氢钾5.6g(0.1mol)加入100ml乙醇中溶解，将碳酸氢钾乙醇溶液搅拌状态下缓慢加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，向反应液中加入适量丙酮，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得淡黄色固体51.2g，收率86.8％。

实施例9：芒果苷精氨酸盐冻干粉针的制备

称取40g甘露醇，置于适当容器内，加入200ml注射用水，加针用炭0.2g(0.1％w/v)，加热至80℃，搅拌30min，0.22μm微孔滤膜过滤，滤液备用。

称取20g芒果苷精氨酸盐，加注射用水至1000ml，加入硫代硫酸钠1.0g，搅拌使芒果苷精氨酸盐完全溶解。混合芒果苷精氨酸盐溶液及甘露醇溶液，补加注射用水至2000ml，检测含量及pH值后，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，装量为每支含芒果苷精氨酸盐20mg，冷冻干燥。真空压塞，轧盖，贴签，包装即得。

实施例10：芒果苷精氨酸片剂的制备

称取实施例1方法制备的芒果苷精氨酸盐200g，过80目筛，加入微晶纤维素300g、淀粉600g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，加入粘合剂制软材，用24目筛制粒，干燥后整粒，加入适量润滑剂，压片，制成10000片，包衣，即得，含药量为20mg/片。

实施例12：芒果苷葡甲胺盐胶囊的制备

称取按实施例5方法制备的芒果苷葡甲胺盐400g，过80目筛，加入羧甲基纤维素300g、预胶化淀粉300g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，加入粘合剂制软材，用24目筛制粒，干燥后整粒，装胶囊，制成10000粒，包衣，即得，含药量为40mg/粒。

实施例13：芒果苷钠盐颗粒的制备

称取按实施例7方法制备的芒果苷钠盐100g，过80目筛，加入羧甲基纤维素300g、预胶化淀粉100g、蔗糖500g，混匀，加入粘合剂制软材，用24目筛制粒，干燥后整粒，制成1000g，即得，含药量为100mg/g。

试验例1各芒果苷盐溶解度的测定

分别精密称取研成细粉芒果苷5mg和芒果苷精氨酸盐100mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况。芒果苷仍有可见溶质颗粒，其水溶解度小于0.1mg/ml，属水几乎不溶物质；芒果苷精氨酸盐则完全溶解。另精密称取研成细粉芒果苷精氨酸盐250mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，芒果苷精氨酸盐有少量可见溶质颗粒。因此芒果苷精氨酸盐水溶解度大于2mg/ml，属水微溶物质。

精密称取研成细粉芒果苷钠盐100mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况。芒果苷钠盐则完全溶解。另精密称取研成细粉芒果苷钠盐150mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，芒果苷钠盐有少量可见溶质颗粒。因此芒果苷钠盐水溶解度大于1mg/ml，属水微溶物质。

精密称取研成细粉的芒果苷葡甲胺盐100mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况。芒果苷葡甲胺盐完全溶解。另精密称取研成细粉芒果苷葡甲胺盐200mg，置于25℃±2℃50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，芒果苷葡甲胺盐有少量可见溶质颗粒。因此芒果苷葡甲胺盐水溶解度大于1mg/ml，属水微溶物质。

试验例2芒果苷精氨酸盐与芒果苷口服生物利用度比较。

1.药液配制

称取芒果苷适量，加1％羧甲基纤维素钠溶液混悬，制成20mg/mL混悬液，为样A；称取芒果苷精氨酸盐适量，加1％羧甲基纤维素钠溶液，配成浓度为20mg/mL溶液，为样B；称取芒果苷钠盐适量，加1％羧甲基纤维素钠溶液，配成浓度为20mg/mL溶液，为样C；称取芒果苷葡甲胺盐适量，加1％羧甲基纤维素钠溶液，配成浓度为20mg/mL溶液，为样D。

2.灌胃给药方案大鼠禁食16h，自由饮水，分别灌胃给药样A、样B、样C、样D，剂量分别为100mg/kg。分别于给药前5min和给药后15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、、360min、480min取血，分离血清。

3.样品处理

血浆样品的处理精密吸取血浆便样品0.2mL精密加入冷藏的10％三氯乙酸40μL，涡旋3min，12000r/min离心10min，吸取上清液约120μL置于尖底进样瓶中，HPLC自动进样。

4样品的测定

4.1仪器

1100系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；包括G1312A二元泵，G1313A自动进样器，

4.2血浆样品测定的色谱条件色谱柱：discover ODS柱(250mm×6mm，5μm)；流动相∶甲醇-0.1％H₃PO4水溶液(30∶70)；流速1.0ml/min检测波长：254nm柱温：40℃。

4.3结果

表1芒果苷盐与芒果苷的生物利用度比较

参数	芒果苷	芒果苷精氨酸盐	芒果苷钠盐	芒果苷葡甲胺盐
参数	芒果苷	芒果苷精氨酸盐	芒果苷钠盐	芒果苷葡甲胺盐	Cmax/μg/ml	15.6±0.8	48.3±0.6	39.6±0.4	42.5±0.7
T_1/2β(min)	43.4±5.2	65.7±4.7	54.2±5.2	57.4±7.3	Cmax/μg/ml	15.6±0.8	48.3±0.6	39.6±0.4	42.5±0.7
T_1/2β(min)	43.4±5.2	65.7±4.7	54.2±5.2	57.4±7.3	AUC_0-∞/μg.h/ml	1986.3±245.7	3294.5±268.3	3058.5±213.1	3102.3±189.3

上述结果显示：口服芒果苷盐血药浓度(Cmax)远高于口服芒果苷血药浓度(Cmax)，表明芒果苷成盐后生物利用度有较大提高。

因为临床与动物疾病模型中常常通过检测血清或组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、单胺氧化酶(MAO)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等指标来评价机体的氧化应激状态，且许多疾病皆表现出氧化损伤，故我们以肝癌作为疾病代表，以芒果苷精氨酸盐作为芒果苷盐的代表，以SOD、MAO、MDA作为抗氧化指标代表，来阐明芒果苷盐的体内抗氧化作用。

试验例3芒果苷精氨酸盐体内抗氧化作用与辅助治疗肝癌的活性评价

1.受试物

按制备例9制备芒果苷精氨酸盐注射液；芒果苷注射液制备：称取20g芒果苷，加入60％聚乙二醇400至1000ml，搅拌使芒果苷完全溶解，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，轧盖，灭菌，贴签，即得。

2.动物

Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，150～180g。

3.实验方法：

3.1造模：按文献方法，将Walker256细胞系在1640培养基中培养，无菌下将细胞注射到刚断奶的Wistar大鼠腹腔中长成腹水瘤。再将腹水瘤鼠处死，收集腹水于无菌小瓶中，取腹水细胞于消毒皮肤后行皮下注射到断奶大鼠腋下制成实体瘤，无菌下取瘤组织并将其切成1mm³大小的瘤块备用。

将动物于2％戊巴比妥钠静脉注射麻醉下切开腹腔，暴露肝脏，用眼科手术镊轻轻在肝上打一遂道，将瘤块植入，压迫止血，关腹后静脉注射1ml生理盐水放回笼中饲养。

3.2分组：将肝癌大鼠按体重随机分为11组，每组10只。分别为模型组、顺铂组、芒果苷精氨酸注射液高中低剂量组、芒果苷精氨酸高中低剂量组与顺铂合用组、芒果苷注射液高中低剂量组与顺铂合用组。按表1所示剂量和给药方式每日给药一次，连续给药10天。

4.检测指标：末次给药24小时后处死，取血，剥取瘤组织。

4.1瘤重与抑瘤率：

抑瘤率％＝(1-给药组平均瘤重/模型组平均瘤重)×100％

根据各组抑瘤率，按Burgi修正公式对联合用药组进行疗效判断。即：Q＝联合用药组抑瘤率/(顺铂组抑瘤率+芒果苷精氨酸组抑瘤率-顺铂组抑瘤率×芒果苷精氨酸组抑瘤率)

若q值为0.85～1.15为单纯相加，q＞1.15为增强，q＜0.85为拮抗。

4.2血清学检测：

1)SOD：黄嘌呤氧化酶法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所；

2)MAO：化学比色法测定，试剂盒购自伊利康生物技术有限公司；

3)MDA：硫代巴比妥酸法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所；

4)TNF-α：TNF-α放免测定试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免所；

5)NK、CD4+/CD8+：采用流式细胞仪测定。

5.实验结果：

5.1芒果苷精氨酸盐注射液对顺铂抑瘤的增效作用

实验结果见表2。结果表明，较低剂量的顺铂(0.5mg/kg)肝癌的抑瘤活性较低，抑瘤率只达24.4％。芒果苷精氨酸盐注射液只在20mg/kg剂量下表现出较明显的抑瘤活性，抑瘤率为32.6％。当芒果苷精氨酸盐注射液与顺铂联合应用时，抑瘤活性明显提高，各组与模型组比较具有显著性差异。芒果苷精氨酸盐注射液10mg/kg和20mg/kg与顺铂合用时q值为1.42和1.39，大于1.15，表明芒果苷精氨酸盐注射液对顺铂的抑瘤有一定的增效作用。芒果苷精氨酸注射液与芒果苷注射液同剂量组之间比较，前者疗效优于后者，活性至少提高1倍。

5.2芒果苷精氨酸盐注射液对肝癌大鼠血生化指标的影响

试验结果表明：芒果苷精氨酸盐注射液加顺铂中高剂量组明显升高肝癌大鼠SOD、NK细胞、CD4+/CD8+水平，降低肝癌大鼠MAO、MDA、TNF-α水平。芒果苷精氨酸注射液与芒果苷注射液同剂量组之间比较，前者疗效优于后者，活性至少提高1倍。详见表3。

6结论

芒果苷精氨酸盐注射液与顺铂联用可明显增强顺铂的抑瘤活性，且芒果苷及其精氨酸盐皆表现出明显的抗氧化作用，优于芒果苷注射液。

试验4芒果苷盐体外清除超氧阴离子(O^2-·)的作用

1材料与方法

1.1试剂与仪器：黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、氯化硝基四唑氮蓝(NBT)均为Sigma产品。756MC型紫外可见分光光度计，石英比色皿。

1.2样品溶液配制

芒果苷、芒果苷精氨酸盐、芒果苷钠盐、芒果苷葡甲胺盐：皆用1％羧甲基纤维素钠溶液配制。

1.3方法：

0.1ml不同浓度的样品溶液加到含有0.4mmol/L黄嘌呤、0.24mmol/L NBT的pH＝8.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲体系中，然后再加入黄嘌呤氧化酶溶液1ml混合均匀。反应混合物在37～C水浴中反应20min。然后加入2ml 69mmol/L的十二烷基苯磺酸钠(SDS)溶液终止反应，在560nm下测其吸光度Ai，以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为A₀。每个样品做3次平行样，取其平均值。

O^2-·清除活性按下式计算：

O^2-·Scavenging(％)＝(Ai-A₀)/Amax×100％

半数抑制浓度(IC₅₀)根据实验结果计算。

1.4结果：

黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶是一组典型的释放O^2-·的酶反应体系。O^2-·可使NBT还原变成甲臢(蓝紫色)，其最大吸收峰为560nm。自由基清除剂可以清除O^2-·而抑制甲臢的形成，因此通过测定吸光度减少来求得自由基清除剂对O^2-·的清除能力。从表3可以看出，各芒果苷盐及芒果苷皆具有显著清除O^2-·的能力，且前者优于后，即芒果苷盐活性较芒果苷提高至少1倍。详见表4。

表4芒果苷盐及芒果苷对O^2-·的清除作用

	芒果苷	芒果苷精氨酸盐	芒果苷钠盐	芒果苷葡甲胺盐
	芒果苷	芒果苷精氨酸盐	芒果苷钠盐	芒果苷葡甲胺盐	IC₅₀(μmol/L)	9.78	3.78	4.12	4.09

表2各受试物对肝癌大鼠抑瘤率的影响

组别	给药方式	剂量(mg/kg)	瘤重(g)	抑瘤率(％)	Q值
组别	给药方式	剂量(mg/kg)	瘤重(g)	抑瘤率(％)	Q值	模型芒果苷精氨酸盐注射液芒果苷精氨酸盐注射液芒果苷精氨酸盐注射液顺铂芒果苷精氨酸盐注射液+顺铂芒果苷精氨酸盐注射液+顺铂芒果苷精氨酸盐注射液+顺铂芒果苷注射液芒果苷注射液芒果苷注射液	-i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.i.v.	-201050.520+0.510+0.55+0.520105	3.40±0.652.29±0.50^2.71±0.88^3.00±0.722.57±0.69^1.08±0.39^##△1.48±0.33^#△2.34±0.42^1.83±0.38^△2.15±0.31^△2.52±0.40^*△	-32.620.311.824.468.256.531.246.236.825.9	1.391.420.94

注：与模型组比较：^*，P＜0.05；^**，P＜0.01。与相应化疗药组比较：^#，P＜0.05；^##，P＜0.01。与相同剂量芒果苷精氨酸注射液组比较：^Δ，P＜0.05；^△△，P＜0.01。

表3各受试物对肝癌大鼠血清生化指标的影响

组别	剂量(mg/kg)	SOD(NU/mg·pro)	MAO(U/L)	MDA(μmol/L)	TNF-α(ng/ml)	CD4+/CD8+	NK(％)
组别	剂量(mg/kg)	SOD(NU/mg·pro)	MAO(U/L)	MDA(μmol/L)	TNF-α(ng/ml)	CD4+/CD8+	NK(％)	模型芒果苷精氨酸盐+顺铂芒果苷精氨酸盐+顺铂芒果苷精氨酸盐+顺铂顺铂芒果苷精氨酸盐芒果苷精氨酸盐芒果苷精氨酸盐芒果苷注射液芒果苷注射液芒果苷注射液	-20+0.510+0.55+0.50.52010520105	4.90±0.076.71±0.08^*##△5.92±0.10^#5.51±0.11^4.13±0.117.71±0.20^##6.10±0.11^#5.84±0.12^#6.02±0.21^#△5.63±0.10^*#△4.41±0.12^△	235.45±21.1398.49±20.28^*###△101.56±20.39^###△120.89±10.92^##△190.24±13.75108.85±20.13^###120.77±10.93^##154.31±21.09^#131.99±20.30^##△145.34±21.21^#△175.37±12.69^△	6.83±0.465.67±0.51^#△5.79±0.59^#△6.12±0.52^#△7.45±0.314.98±0.60^##5.01±0.61^##5.41±0.57^#5.08±0.61^*#△5.43±0.60^#△6.15±0.58^*#△	0.91±0.130.79±1.22^#△0.82±0.26^0 83±0.16^△0.80±0.180.79±0.19^0.80±0.15^0.61±0.05^#0.73±0.04^0.78±0.14^0.81±0.18^*△	2.78±0.234.71±2.01^*##3.66±2.03^#△3.70±2.44^#△2.98±0.414.99±2.30^##3.04±0.28^2.97±0.314.83±2.32^△3.15±0.27^3.96±0.35^*△	24.0±6.635.9+8.0^#△31.2±6.9^#△27.7±6.0^#△20.09±1.5437.34±1.67^#34.50±2.43^#33.67±2.24^#34.34±2.41^△32.49±1.64^△30.67±1.65^△

与模型组比较：^*，P＜0.05；^**，P＜0.01。与相应化疗药组比较：^#，P＜0.05；^##，P＜0.01。与相同剂量芒果苷精氨酸注射液组比较：^Δ，P＜0.05：^△△，P＜0.01。

Claims

1.一种芒果苷盐，其特征在于如下列结构式表示的盐或相应的异构体，其中结构式中的R为碱性氨基酸或有机胺或无机碱性金属离子。

2.权利要求1所述的一种芒果苷盐的制备方法，其特征在于：

1)将芒果苷加入溶剂中溶解(简称芒果苷溶液)；

2)将碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质中加入溶剂溶解(简称碱性溶液)；

3)将碱性溶液加入芒果苷溶液中，搅拌至反应完全，获得反应液；

4)向反应液中加入适量溶剂做为沉淀剂，使产生大量淡黄色沉淀，过滤，沉淀物减压干燥，得黄绿色或黄色固体。

3.权利要求2所述的一种芒果苷盐的制备方法，其特征在于，所述的芒果苷与碱性氨基酸或有机胺或无机碱性物质的摩尔配比为1∶0.5～4。

4.权利要求2所述的一种芒果苷盐的制备方法，其特征在于，所述的碱性氨基酸可以选自精氨酸、赖氨酸，其中精氨酸可以选自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸，其中优选L-精氨酸。

5.权利要求2所述的一种芒果苷盐的制备方法，其特征在于，所述的有机胺可以选自葡甲胺、叔丁胺；所述的无机碱性物质可以选自碱金属的氢氧化物、碱土金属的氢氧化物，具体为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、氢氧化钙、氢氧化镁。

6.权利要求1所述的一种芒果苷盐在制备抗氧化剂药物中的用途。

7.权利要求6所述的一种芒果苷盐在制备抗氧化剂药物中的用途，其特征在于，该抗氧化剂可以用于治疗或辅助治疗以下疾病：动脉粥样硬化、冠状动脉硬化、心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、心肌炎、脑梗死、脑缺血、脑水肿、颅脑损伤、高血压脑出血、帕金森氏病、早老性痴呆、阿尔茨海默氏病、胃炎、消化性溃疡、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝坏死、脂肪肝、酒精肝、肝纤维化、中毒性肝脏病变、原发性肝癌、急性胰腺炎、上呼吸道感染、支气管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫综合征、阻塞性肺气肿、慢性肺源性心脏病、肺水肿、肾小球肾炎、肾中毒性病变、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾移植后排斥反应、巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血、急性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、糖尿病、肝豆状核变性、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺机能亢进、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、白内障、角膜炎、黄斑变性、视网膜色素变性、玻璃体浑浊、青光眼、视神经萎缩、光线性皮肤病、灼伤、新生儿窒息、新生儿缺血缺氧性脑病、新生儿肺炎、支气管发育不良、流产、胎膜早破、子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征、子宫颈癌、子宫内膜癌、肿瘤、艾滋病。

8.一种具有抗氧化作用的药物，其特征在于该药物是由权利要求1所述的芒果苷盐与药用辅料组成。

9.权利要求8所述的药物可以为注射剂型与口服剂型，具体为冻干粉针、粉针剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂。

10.权利要求8所述的药物在制备抗氧化剂药物中的用途。