CN101437935A - 储存稳定性优良的含s-腺苷-l-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法及其产品以及口服用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明的含S－腺苷－L－甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法包括使用具有S－腺苷－L－甲硫氨酸生产能力的酵母来制备含S－腺苷－L－甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，在从酵母的菌体培养液中分离的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐后，将该浓缩物干燥。本发明还涉及由该制备方法得到的含SAMe的干燥酵母以及使用该干燥酵母成型而得到的口服用组合物。本发明确立了低成本且简便地制备含有高浓度的SAMe的储存稳定性优良的含SAMe的干燥酵母的方法，同时提供由该方法得到的含SAMe的干燥酵母以及使用该干燥酵母成型而得到的口服用组合物。

Description

储存稳定性优良的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法及其产品以及口服用组合物
技术领域
本发明涉及使用了具有S-腺苷-L-甲硫氨酸(以下记作SAMe)的生产能力的酵母的储存稳定性优良的含SAMe的干燥酵母的制备方法及使用了该制备方法的产品。更详细地说，本发明涉及储存稳定性优良的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法、由该制备方法得到的含SAMe的干燥酵母、以及使用该含SAMe的干燥酵母成型而得到的口服用组合物，该制备方法包括使用具有SAMe的生产能力的酵母来制备含该化合物的干燥酵母，其特征在于，在由酵母的菌体培养液得到的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐后，进行该浓缩物的干燥。
背景技术
作为生物体内的由各种甲基转移酶引起的甲基化反应的甲基供应体，SAMe是起重要作用的水溶性的生理活性物质，从人体的几乎全部的细胞来看，SAMe作为各种生物化学反应中的共同因子起作用，是在例如软骨的维持和脑内的化合物的生成中不可缺少的物质。通过近年来的SAMe的功能研究，也已经报道了有关对脂肪肝、高脂血症、动脉硬化症、失眠症等的治疗效果。由此，SAMe为重要的生理活性物质，在欧美各国被广泛用作抑郁症、肝病以及关节炎等的治疗药、或者保健食品。
因此，迫切需要廉价且简便地制备供应SAMe，但是，以往，SAMe的制备方法已经公开的有：使用含有作为前驱体的L-甲硫氨酸的培养基进行发酵生产的方法(例如，参照专利文献1-3，非专利文献1-7)；使用通过酵母等微生物离析并精制后的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基转移酶(methionineadenosyl transferase))，将三磷酸腺苷(ATP)和L-甲硫氨酸作为基质，酶合成SAMe的方法(例如，参考专利文献4，非专利文献7-11)；以及使用合成法的方法(例如，参考专利文献5、非专利文献12)。
酶合成法是使用从酵母等的微生物离析精制后的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基转移酶)、将三磷酸腺苷(ATP)和L-甲硫氨酸作为基质来酶合成SAMe的方法，但是，该方法与发酵法相比，具有SAMe的蓄积量多，不需要进行从菌体中的SAMe提取操作等的优点，但是，存在酶的制备复杂、得到的酶的活性弱、必须除去ATP分解酶等的干扰物质、以及作为基质的ATP价格非常高等的各种问题，不一定能成为实用的方法。
此外，根据近年的基因工程学的发展，通过使用克隆化的SAMe合成酶基因的方法可以使得该酶的制备变得更简便(例如，参考非专利文献6-9)，从而酶的制备的问题正在被解决，但是，仍然没有解决必须使用昂贵的ATP作为基质等的其它的实用上的问题。
此外，SAMe具有热不稳定、容易分解的性质，作为对策，已经作了许多以提高储存稳定性为目的的尝试。例如，通常将上述的制备方法中得到的SAMe组合物通过色谱法等精制后，形成与硫酸或对甲苯磺酸的盐、或者与丁二磺酸(Butanedisulfonic acid)的盐等，而使得SAMe稳定化的方法(例如，参考专利文献1-3、6-10)。由于需要很多的劳力、时间和费用，因此很难廉价地制备并提供作为重要的治疗药和保健食品的储存稳定性优良的SAMe。
专利文献1：特公平4-21478号公报
专利文献2：特公平6-30607号公报
专利文献3：欧洲专利第1091001号说明书
专利文献4：特开昭61-227792号公报
专利文献5：美国专利第6881837号说明书
专利文献6：特开昭59-51213号公报
专利文献7：特开昭52-48691号公报
专利文献8：特公平1-49274号公报
专利文献9：特公平1-49275号公报
专利文献10：特公平3-501970号公报
非专利文献1：Schlenk F.，DePalma R.E.，J.Biol.Chem.，229，1037-1050(1957)
非专利文献2：Shiozaki S.等人，Agric.Biol.Chem.，48，2293-2300(1984)
非专利文献3：Shiozaki S.等人，Agric.Biol.Chem.，53，3269-3274(1989)
非专利文献4：Kusakabe，H.，Kuninaka，A.，Yoshino，H.，Agric.Biol.Chem.，38，1669-1672(1974)
非专利文献5：Mudd SH.，Cantoni GL.等人，J.Biol.Chem.，231，481-492(1958)
非专利文献6：Shiozaki S.等人，J.Biotechnology.，4，345-354(1986)
非专利文献7：Thomas D.，Surdin-Kerjan Y.，J.Biol.Chem.，262，16704-16709(1987)
非专利文献8：Markham G.D.等人，J.Biol.Chem.，255，9082-9092(1980)
非专利文献9：Markham DJ.，DeParisis J.，J.Biol.Chem.，259，14505-14507(1984)
非专利文献10：Thomas D.，Cherest H.等人.Mol.Cell.Biol.，8，5132-5139(1988)
非专利文献11：Jeongho Park，Junzhe Tai，Charles A.Roessner and A.IanScott.，Bioorganic & Medical Chemistry，Vol.4，No.12，2179-2185(1996)
非专利文献12：Rose R.Mator，Frank M.Raushel，Chi-Huey Wong.，Biotechnology and Applied Biochemistry.，9，39-52(1987)
发明内容
本发明的目的是确立低成本且简便地制备含有高浓度的SAMe的储存稳定性优良的含SAMe的干燥酵母的方法，同时提供由该方法制得的含SAMe的干燥酵母以及使用该干燥酵母成型而得到的口服用组合物。
本发明的发明人为了解决上述问题，对能经济地生产含有高浓度的SAMe且在稳定的状态下长期保存的性能优良的组合物的方法进行了深入研究，结果发现：通过使用具有SAMe生产能力且能口服的酵母，在菌体内产生并蓄积高浓度的SAMe后，从培养液通过离心分离等的分离方法将酵母菌体分离，在得到的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐后干燥，可以简便且高收率地制得作为目标产物的含有高浓度的SAMe且储存稳定性优良的含SAMe的干燥酵母，从而完成本发明。
即，本发明涉及如以下(1)-(8)所示的储存稳定性优良的含高浓度的SAMe的干燥酵母的制备方法、由该制备方法得到的含SAMe的干燥酵母、以及使用该干燥酵母成型而得到的口服用组合物。
(1)一种含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，该方法包括使用具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生产能力的酵母来制备含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，在从酵母的菌体培养液中分离的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐后，将该浓缩物干燥。
(2)根据上述(1)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，使用属于酵母菌属的酵母作为所述具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生产能力的酵母。
(3)根据上述(2)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，所述属于酵母菌属的酵母为酿酒酵母。
(4)根据上述(1)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，添加的抗坏血酸类或其盐为抗坏血酸或抗坏血酸衍生物、或它们的盐。
(5)根据上述(1)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，添加的抗坏血酸类或其盐为L-抗坏血酸或L-抗坏血酸钠。
(6)根据上述(1)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，所述抗坏血酸类或其盐的添加量相对于酵母菌体浓缩物中含有的S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.05-5倍摩尔的范围。
(7)一种含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，该含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母是通过上述(1)-(6)中任意一项所述的方法制备的。
(8)一种口服用组合物，其特征在于，该口服用组合物是使用上述(7)所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母成型而得到的。
附图说明
图1表示在密闭玻璃容器中，在40℃、RH(相对湿度)75％的加速条件下的储存稳定性试验中，相对于酵母菌体浓缩物中的SAMe的L-抗坏血酸钠的添加量(摩尔比)与干燥酵母菌体中的SAMe残留率的关系；
图2表示在密闭玻璃容器中，在30℃的温度条件下的储存稳定性试验中，相对于酵母菌体浓缩物中的SAMe的L-抗坏血酸钠的添加量(摩尔比)与干燥酵母菌体中的SAMe残留率的关系。
具体实施方式
本发明中使用的酵母的种类只要是具有SAMe生产能力且能口服的酵母即可，例如，作为优选的例子可以举出属于酵母菌(saccharomvces)属的酵母。其中，属于酿酒酵母(saccharomvces cerevisiae)的酵母更优选为例如，日本酒(清酒)酵母、面包酵母、啤酒酵母、葡萄酒酵母等的发酵酵母，其中特别优选日本酒酵母。另外，在酵母菌体中含有很多5’-核苷酸、游离氨基酸、具有抗氧化作用且对改善肝功能起作用的谷胱甘肽、具有提高免疫力的作用和调整肠胃作用的β-葡聚糖和食物纤维等的有用成分，可以作为保健食品等被广泛利用。
在培养上述酵母时使用的碳源只要是能使酵母同化(資化)的碳源就没有特别的限定。例如，可以举出葡萄糖、蔗糖、淀粉、废糖蜜等的碳水化合物、乙醇等的醇、或者乙酸等的有机酸。氮源也只要是能使使用的酵母同化的氮源就没有特别的限制，可以举出例如，含有氨、硝酸、尿素等的无机含氮化合物，或酵母提取物、麦芽提取物等的有机含氮化合物的物质。此外，作为无机盐类，可以使用磷酸、钾、钠、镁、钙、铁、锌、锰、钴、铜、钼等的盐。另外，也可以添加参与SAMe的骨架结构的甲硫氨酸、腺嘌呤、腺嘌呤核苷(adenosyl ribonucleoside)进行培养。
培养温度以及培养液的pH根据使用的酵母的种类而不同，但是，培养温度可以在20-35℃的范围，培养液的pH可以在4-7的范围。此外，为了提高菌体内的SAMe的含量，优选进行有氧培养。培养槽为可以通气并根据需要能进行搅拌的培养槽即可，例如，可以使用机械搅拌培养槽、空气提升式培养槽或泡罩塔型培养槽等。
加入到培养基中的碳源、氮源、各种无机盐类、各种添加剂等的培养成分的供给方法，可以是一起或各自地连续或间歇地加入。例如，可以将蔗糖、乙醇等的基质以与其它的培养成分的混合物的方式供给到培养槽中，或者也可以与其它培养成分各自独立地供给到培养槽中。培养液的pH控制通过酸、碱溶液来调节。作为碱，优选使用以下的碱来进行pH控制：用作氮源的氨、尿素，或非氮类碱，例如，氢氧化钠、氢氧化钾等。作为酸可以使用磷酸、硫酸、硝酸或有机酸。另外，也可以使用作为无机盐类的磷酸盐、钾盐、钠盐、硝酸盐等来控制pH。
在这样的条件下进行培养，在目标量的SAMe在酵母菌体中蓄积的阶段，将培养液从培养槽中取出后，分离得到酵母菌体浓缩物。作为分离方法，菌体的分离和洗涤只要是有效的方法就没有特别的限定。作为优选的例子，可以举出逆流型的酵母分离器或使用了分离膜的超滤装置。
然后，在分离后的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐。由此，可以增加干燥酵母中的SAMe的储存稳定性，此外，也可以提高酵母的干燥工序中的收率。
本发明中使用的抗坏血酸类或其盐可以举出抗坏血酸或其盐、或者抗坏血酸衍生物或其盐。
作为抗坏血酸或其盐，可以举出L-抗坏血酸、或者L-抗坏血酸钠或L-抗坏血酸钾等碱金属盐、或者L-抗坏血酸钙等碱土类金属盐等。作为抗坏血酸衍生物或其盐，可以举出抗坏血酸-2-葡萄糖苷、抗坏血酸磷酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯或者它们的盐等。其中，优选为抗坏血酸或其盐，更优选为L-抗坏血酸或L-抗坏血酸钠，特别优选为L-抗坏血酸钠。抗坏血酸类或其盐可以以粉末状、粒状或结晶状的形状，广泛地用于医药品或食品的用途中，可以安全地使用。
作为抗坏血酸类或其盐的添加量，相对于酵母菌体浓缩物中所含的SAMe，优选添加的抗坏血酸类或其盐的摩尔比为0.05-5倍摩尔的范围的量，更优选为0.1-3.5倍摩尔的范围的量。低于0.05倍摩尔时，干燥酵母中的SAMe的储存稳定性不够，超过5倍摩尔时，不但造成浪费，而且干燥酵母中的SAMe的储存稳定性显示出用量依赖性降低的倾向。另外，作为L-抗坏血酸钠的添加量，更优选相对于酵母菌体浓缩物中所含的SAMe的摩尔比为0.1-3.0倍摩尔的范围的量，特别优选为0.2-1.0倍摩尔的范围的量。此外，作为L-抗坏血酸的添加量，特别优选所述摩尔比为1.8-3.1倍摩尔的范围的量。作为L-抗坏血酸钙的添加量，特别优选所述摩尔比为0.3-1.9倍摩尔的范围的量。作为L-抗坏血酸钾的添加量，特别优选所述摩尔比为1.5-3.5倍摩尔的范围的量。
此外，在上述的从菌体培养液中分离的酵母菌体浓缩物中并用添加硫酸和抗坏血酸类或其盐，可以长期稳定地保存含SAMe的干燥酵母。此时，作为硫酸的添加量和抗坏血酸类或其盐的添加量的组合，优选为使得上述从菌体培养液中分离的酵母菌体浓缩物的pH为2-4的硫酸添加量和使得相对于酵母菌体浓缩物中所含的SAMe的抗坏血酸类或其盐的摩尔比为0.5-3.0倍摩尔的范围的抗坏血酸类或其盐的添加量的组合，更优选为使得所述pH为2-3的硫酸添加量和使得所述摩尔比为1.0-2.0倍摩尔的范围的抗坏血酸类或其盐的添加量的组合，进一步优选为使得所述pH为2-3的硫酸添加量和使得所述摩尔比为1.0-1.7倍摩尔的范围的抗坏血酸类或其盐的添加量的组合。
如上所述进行抗坏血酸类或其盐的添加处理后，将酵母菌体的浓缩物通过用喷雾干燥机的喷雾干燥法或冷冻干燥法等的干燥方法将水分蒸发，得到干燥酵母。作为干燥条件，在喷雾干燥法中，优选在入口温度为210℃以下、出口温度为110℃以下进行干燥。在冷冻干燥法中，优选在最终搁板温度为30℃以下进行干燥。从储存稳定性的观点考虑，本发明的含SAMe的口服用组合物的水分含量优选为5.0质量％以下。
另外，将该干燥酵母破碎成粉末状后，或者在粉末状的干燥酵母中根据需要加入其它的生理活性成分或赋形剂等的添加剂后，通过压片形成片剂状的口服用组合物，还可以在该片剂的表面进行包覆。此外，也可以将粉体进行造粒形成颗粒状，或将粉体或造粒后的颗粒进行填充而胶囊化。
实施例
下面通过实施例以及比较例对本发明作更详细的说明，但是，本发明并不限定于此。
实施例1-8
(a)酵母菌体的培养
根据上述公知的培养法(Schlenk F.，DePalma R.E.，J.Biol.Chem.，229，1037-1050(1957)(非专利文献1)；Shiozaki S.等人，Agric.Biol.Chem.，53，3269-3274(1989)(非专利文献3))，在含有L-甲硫氨酸的培养基(ShiozakiS.等人，J.Biotechnology.，4，345-354(1986)(非专利文献6))中接种属于酵母菌属(saccharomyces)的酿酒酵母(saccharomvces cerevisiae)IFO2346，在培养温度27-29℃下进行有氧通气搅拌，培养6天。其结果，得到18L的菌体浓度为3.5质量％、SAMe含量为205mg/(g干燥酵母)的酵母菌体培养液。
(b)酵母菌体的集菌
用连续旋转(rotary)型离心机(日立HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)处理18L的上述酵母菌体培养液，得到3.49kg用干物换算的菌体浓度为18质量％的液状的酵母菌体浓缩物。
(c)向酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐
在上述的3.49kg的酵母浓缩物中，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为0.05、0.1、0.2、0.6、1.0、3.0、5.0或6.0倍摩尔的L-抗坏血酸钠，在室温下搅拌30分钟使之溶解，得到添加了L-抗坏血酸钠的酵母菌体浓缩物。
(d)干燥酵母的制备
将上述的添加了L-抗坏血酸钠的酵母菌体浓缩物注入到冷冻干燥器(日本真空技术株式会社制)的冷冻干燥用不锈钢制托盘中，在—50℃下冷冻后，再在最终搁板温度为25℃的条件下冷冻干燥36小时。将得到的冷冻干燥酵母粉碎，得到粉末干燥酵母。将由此得到的粉末干燥酵母装到密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下以及在30℃的温度条件下进行储存稳定性试验。表1(实施例1-1～8-1)以及图1表示在40℃、RH75％下的结果，表2(实施例1-2～8-2)以及图2表示在30℃下的结果。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表1和表2所示。
另外，SAMe残留率通过使用高氯酸的公知的方法(例如，非专利文献2)从含SAMe的干燥酵母中提取SAMe，然后通过液相色谱法来定量。另外，液相色谱法使用以下的分析条件。
色谱柱：ナカライ(nacalai tesque)COSMOSIL 4.6Φ×100mm
洗提液：0.2M的KH2PO4水溶液/甲醇＝95/5(体积比)
流速：0.7mL/min，检测器：UV(260nm)，SAMe保留时间：约150秒。
实施例9-12
除了在酵母菌体浓缩物中，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为0.6、1.8、3.1或4.3倍摩尔的L-抗坏血酸之外，与实施例1同样地进行处理，得到粉末干燥酵母。得到的含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(实施例9-1～12-1)所示，在30℃的温度条件下的储存稳定性试验的结果如表2(实施例9-2～12-2)所示。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表1以及表2所示。
实施例13-17
除了在酵母菌体浓缩物中，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为0.3、0.8、1.4、1.9或2.5倍摩尔的L-抗坏血酸钙之外，与实施例1同样地进行处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe的含量、以及得到的粉末干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(实施例13-1～17-1)所示。
实施例18-22
除了在酵母菌体浓缩物中，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为0.5、1.5、2.5、3.5或4.5当量的L-抗坏血酸钾之外，与实施例1同样地进行处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe的含量、以及得到的粉末干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(实施例18-1～22-1)所示。
实施例23、24
与实施例1相同，进行从(a)至(b)的操作，在得到的液状的酵母菌体浓缩物中，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为1.0倍摩尔的L-抗坏血酸或L-抗坏血酸钠，在室温下搅拌30分钟使之溶解，得到溶解了L-抗坏血酸或L-抗坏血酸钠的酵母菌体浓缩物。
作为将该酵母菌体微粒子化的装置，使用具有双流体喷嘴的喷雾干燥机，在干燥室的入口温度为145℃、出口温度为85℃、通液速度为1.5g/min的条件下进行喷雾干燥，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量、以及得到的含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表3(实施例23-1、24-1)所示。
比较例1
除了未向酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐之外，与实施例1进行相同的处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表1以及表2所示。得到的含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(比较例1-1)以及图1所示。在30℃的温度条件下的储存稳定性试验的结果如表2(比较例1-2)以及图2所示。
比较例2
除了在酵母菌体浓缩物中加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe的摩尔比为2.8当量的柠檬酸之外，与实施例1进行相同的处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量、以及得到的含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(比较例2-1)所示。
比较例3
除了在酵母菌体浓缩物中加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe的摩尔比为1.9当量的EDTA之外，与实施例1进行相同的处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量、以及得到的含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表1(比较例3-1)所示。
实施例25-35
除了在实施例1(c)的操作中，在通过(b)得到的酵母菌体浓缩物中添加硫酸，使得pH为2、3或4后，加入相对于该酵母浓缩物中的SAMe为0.6、1.0、1.7、2.8或3.9倍摩尔的L-抗坏血酸钠之外，与实施例1进行相同的处理，得到粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量、以及得到的粉末干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果如表4(实施例25-1～35-1)所示。
表1为含SAMe的干燥酵母在密闭玻璃容器中，在40℃、RH75％的加速条件下的储存稳定性试验的结果。
Figure A200780016214D00151
Figure A200780016214D00161
Figure A200780016214D00171
Figure A200780016214D00181
工业实用性
通过使用本发明的制备方法，可以以简便的方法制备得到含高浓度的SAMe且能稳定地保存的干燥酵母、以及使用该干燥酵母成型而得到的口服用组合物。此外，由此可以以经济的价格向市场提供作为医药和保健食品用的生理活性物质有用的SAMe。

Claims (8)

1、一种含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，该方法包括使用具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生产能力的酵母来制备含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，在从酵母的菌体培养液中分离的酵母菌体浓缩物中添加抗坏血酸类或其盐后，将该浓缩物干燥。
2、根据权利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，使用属于酵母菌属的酵母作为所述具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生产能力的酵母。
3、根据权利要求2所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，所述属于酵母菌属的酵母为酿酒酵母。
4、根据权利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，添加的抗坏血酸类或其盐为抗坏血酸或抗坏血酸衍生物、或它们的盐。
5、根据权利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，添加的抗坏血酸类或其盐为L-抗坏血酸或L-抗坏血酸钠。
6、根据权利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法，其中，所述抗坏血酸类或其盐的添加量相对于酵母菌体浓缩物中含有的S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.05-5倍摩尔的范围。
7、一种含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，该含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母是通过权利要求1-6中任意一项所述的方法制备的。
8、一种口服用组合物，其特征在于，该口服用组合物是使用权利要求7所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母成型而得到的。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2009081833A1 (ja) * 2007-12-20 2011-05-06 株式会社カネカ 安定化された（ｓｓ）−ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキス、及びその製造方法
WO2011126030A1 (ja) * 2010-04-07 2011-10-13 三菱瓦斯化学株式会社 保存安定性に優れたｓ－アデノシル－ｌ－メチオニン含有乾燥酵母組成物及びその製造方法
CN103704723A (zh) * 2013-12-11 2014-04-09 北京凯因科技股份有限公司 一种富含活性氨基酸的营养配制品

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1064212A (en) 1964-05-29 1967-04-05 Toyo Jozo Kk A process for preparing an active, dry powdery yeast
FR1509676A (fr) 1967-01-30 1968-01-12 Procédé de fabrication de levure alimentaire activée
JPS5248691A (en) 1975-10-16 1977-04-18 Yamasa Shoyu Co Ltd Method of stabilizing s-adenosyl-l-methionine
JPS57156500A (en) 1981-03-23 1982-09-27 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Composition containing s-adenosyl-l-methionine and its preparation
IT1137640B (it) 1981-08-24 1986-09-10 Bioresearch Srl Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo
IT1137892B (it) 1981-08-24 1986-09-10 Bioresearch Srl Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo
JPS5951213A (ja) 1982-09-17 1984-03-24 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニン含有組成物およびその製造法
IT1155422B (it) 1982-12-10 1987-01-28 Dox Al Italia Spa Procedimento per la preparazione di una coltura integrale di cellule di saccharomyces cerevisiae
IT1169773B (it) 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina
IT1173990B (it) 1984-05-16 1987-06-24 Bioresearch Spa Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale
EP0189322A3 (en) 1985-01-25 1986-10-08 Eli Lilly And Company Enzymatic synthesis of s-adenosylmethionine
JPH0669953B2 (ja) * 1985-08-16 1994-09-07 日産化学工業株式会社 脳脊髄系神経栄養剤
AU2538588A (en) 1987-10-09 1989-05-02 Mario De Rosa Lipophilic salts of s-adenosyl-l-methionine (sam) with acylated taurine derivatives
GB9002003D0 (en) 1990-01-29 1990-03-28 Ici Plc Stabilized cultures of microorganisms
JPH0421478A (ja) 1990-05-16 1992-01-24 Nec Corp データ印刷制御方式
JPH0630607A (ja) 1992-07-20 1994-02-08 Yanmar Agricult Equip Co Ltd い草移植機の植付爪
PT659344E (pt) * 1993-12-24 2001-12-28 Dsm Nv Composicoes de levedura seca traducao
JPH0977674A (ja) * 1995-07-07 1997-03-25 Kawashima Takaaki 薬用乾燥酵母含有機能性組成物
IT1315236B1 (it) 1999-10-05 2003-02-03 Chementecno Srl Processo per la purificazione di s-adenosil-l-metionina e per lapreparazione dei suoi sali farmaceuticamente accettabili.
US6881837B2 (en) 2001-06-07 2005-04-19 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Chemical synthesis of S-adenosyl-L-methionine with enrichment of (S,S)-isomer
JP2005229812A (ja) * 2004-02-17 2005-09-02 Kohjin Co Ltd 安定化されたｓａｍを含有する乾燥微生物又は微生物抽出物、及びその製造方法
WO2007030253A2 (en) * 2005-09-02 2007-03-15 Bunge Oils, Inc. Edible oils and methods of making edible oils
EP1982721B1 (en) * 2006-01-17 2011-11-09 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Method of stabilizing s-adenosyl-l-methionine and stabilized composition
KR101070494B1 (ko) 2006-05-10 2011-10-05 미쓰비시 타나베 파마 코퍼레이션 Ｓ-아데노실-ｌ-메티오닌 함유 건조 효모의 제조방법 및 경구 섭취용 조성물

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