CN103704723A - 一种富含活性氨基酸的营养配制品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种营养丰富并具有保肝护肝作用的营养配制品，所述营养配制品主要由富含活性氨基酸和硒元素的酿酒酵母干粉，以及营养配制品制剂中可接受的赋形剂制成。本发明所述营养配制品中，活性氨基酸更为稳定，通过利用酵母中的营养成分，在保护肝损伤上具有更好的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种营养丰富并具有保肝护肝作用的营养配制品，所述营养配制品主要由富含活性氨基酸和硒元素的酿酒酵母干粉，以及营养配制品制剂中可接受的赋形剂制成，为生物保健食品领域。
背景技术
甲硫氨酸是构成人体的必需氨基酸之一，参与蛋白质合成，与生物体内各种含硫化合物的代谢密切相关。甲硫氨酸在生物体内先从ATP接受腺苷基，变成S-腺苷酰甲硫氨酸（活性甲硫氨酸，S-adenosyl-L-Methionine，简称SAM），再进行甲基转移，失去甲基的同型半胱氨酸经胱硫醚变成半胱氨酸。如果人体甲硫氨酸缺乏，就会导致体内蛋白质合成受阻，引起食欲减退、生长减缓或不增加体重、肾脏肿大和肝脏铁堆积等现象，最后导致肝坏死或纤维化。因甲硫氨酸不能在体内自身生成，所以必须由外部获得。又由于其不能被人体直接利用，目前普遍的做法是补充其活性形式SAM，用以治疗、预防疾病。
SAM是双手性物质，有两种异构体：(R,S)-SAM和(S,S)-SAM。只有(S,S)-SAM，即(-)-SAM才具有生物活性。（S,S）-SAM结构如式I
SAM因其抗炎特性而广泛用于临床并用于治疗慢性肝病（Merck Index,1986,n.155）。在欧洲，SAM作为处方药用于治疗抑郁症和骨关节炎已有20多年。由于SAM疗效好，无明显的毒副作用，安全性好，1999年，美国FDA正式批准SAM作为保健食品，其迅速成为最畅销的营养保健食品之一，在美国销售量超过10亿美元。中国是人口大国，同时也是“肝炎大国”。据1992年全国病毒性肝炎流行病学调查，全国约有1.2亿人携带乙型肝炎病毒，丙型肝炎在一般人群中感染率为3.1%。我国现有2000万例慢性乙型肝炎患者，其中部分有可能转化为肝硬化，甚至肝癌。如果能在中国推广SAM作为保健食品使用，对于肝炎的防治将会起到非常重大的作用，。
SAM在生产和应用过程中最关键的问题是稳定性差，易降解，易消旋，这在很大程度上限制了它的应用。
SAM的失活反应主要有3种不同的机理，一种是通过氨基酸链上的羧基氧对γ-碳原子进行分子内亲核攻击，从而裂解形成5’-甲硫腺苷（MTA）和高丝氨酸内酯，随后，内酯水解；另一种是(S,S)-SAM自发消旋为非生物活性的(R,S)-SAM；还有一种是SAM进行水解，生成腺嘌呤和S-戊糖甲硫氨酸，SAM水解为腺嘌呤的机理复杂，Borchardt对SAM碱性水解机理进行研究发现，SAM及相关的锍核苷对引起糖苷键快速断裂的碱性条件极其敏感。
由于SAM有多个可解离基团，其失活反应受pH值影响很大，水解成腺嘌呤的反应可在pH6时强烈意志，在pH4.5或更低时完全消除。消旋反应表现出交底的pH依赖性，在pH7.5～1.5范围内，消旋反应速率没有明显变化。在pH1.5时消旋反应是唯一以显著速度发生的失活反应。另外，温度、湿度对SAM的失活反应也有影响，Hoffman（Hoffman JL.Chromatographic Analysis of the Chiral andCovalent Instability of S-adenosyl-L-methionine[J].Biochemistry,1986,25(15):4444）在用S-腺苷高半胱氨酸（AdoHcy）和CH3I化学合成SAM时发现，在16℃、含水量＜5%的合成体系中，消旋反应比37℃的水溶液中慢。
为了避免这些分解的难题，已经进行了许多研究并提出了几种解决方案，首选发现SAM与大阴离子形成盐明显更为稳定，因此，已经制备了许多SAM的盐，包括更为稳定的水溶液盐，诸如硫酸盐、甲苯磺酸盐（US4562149）或聚合的聚羧酸盐（EP191133）和脂溶性盐，诸如EP162324中所述的长链磺基琥珀酸盐。然而，目前市售的SAM的水溶性盐，例如焦硫酸盐甲苯磺酸盐或1,4-丁二磺酸盐吸湿性极强和/或对空气湿度敏感，这也严重地影响了其稳定性，需要严格控制环境条件加于储存及加工，这也必然会产生相关的经济及技术问题。
目前的应用多是通过酵母发酵、提取、纯化，获得SAM纯品，再加以利用，诸如CN1650886A（一种养胃、保肝、解酒的生物制品及制作方法）及CN102327259A（具有显著化学性肝损伤保护功能的符合生物制剂），即是直接用SAM作为原料，直接或与其它保肝活性成分配制。这种应用有三个问题，一是提纯SAM的成本较高，二是SAM的稳定性问题得不到有效解决，三、酵母原料利用率低，造成一定的环境污染。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的、稳定的以活性SAM及酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）粉为主要原料的保肝护肝、增强免疫力的营养配制品，生产营养成分更为丰富的酵母粉。
本发明中，所述的保肝护肝营养配制品中，SAM活性成分以富含有SAM的酿酒酵母菌体形式作为直接原料，所述的富含SAM的酿酒酵母菌菌体，以天然酿酒酵母菌发酵培养获得，胞内富含S-SAM。发酵后，收集菌体，直接干燥后即用。
本发明的一实施例，提供了一种制备本发明所述富含SAM酿酒酵母菌菌体的方法，将酿酒酵母接入培养基中，培养得到各级种子，将最后一级种子接入发酵培养基中，并补充葡萄糖水及其它营养成分，发酵一段时间后补加L-甲硫氨酸，发酵培养后得到富含SAM的酿酒酵母发酵液，再经喷雾或冷冻干燥后即可得本发明所述富含SAM的酿酒酵母菌体干粉。
进一步地，本发明所述的富含SAM的酿酒酵母粉，是一种含有有机硒元素/或者说硒离子的酿酒酵母粉，在酿酒酵母发酵过程中，加入了无机硒元素，在酵母生物转化下，最终转化为有机硒元素，更利于人体利用，安全性更高。
用于发酵含SAM的酿酒酵母菌体，是天然的酿酒酵母，富含一般酿酒酵母所具备的蛋白质、氨基酸、B族维生素，及其他众多活性物质。该酵母可以合法的从公共或商业途径得到，比如在保健品目录中所列举的适合于用在保健食品中的酿酒酵母，均可用于本发明。
本发明所述富含SAM的酿酒酵母干粉，每克干粉含SAM约10-100mg，优选为20-80mg，更优选为40-60mg。
本发明中，所述的酿酒酵母干粉，是一种每克干粉含有1-100微克，优选10-100微克的有机硒元素的酿酒酵母干粉。硒元素是人体必需的矿物质营养素，对提高免疫力和预防癌症非常重要。由于人体内硒不存在长期贮藏硒的器官，机体所需的硒应该不断从饮食中得到足够量的硒。本发明的产品将无机硒离子通过生物转化为有机硒离子，更利于人体利用，使用更安全，是非常优良的硒元素补充剂。
本发明保肝护肝营养配制品，通过发酵得到富含SAM的酵母菌体，并以此为营养品的配制原料，而不先将酵母菌体破壁及随后提取S-SAM，不但解决了SAM吸湿性强、储存不稳定、易降解和消旋、成本高以及酵母原料利用率低的问题，所述配制品在配制过程中对环境要求更低，长期的储存过程中也较SAM直接入药更为稳定。而且保肝护肝营养配制品中还保持酵母的天然活性营养成分，酵母本身是一种理想的天然营养源，酵母细胞中含有机物占细胞干重的90%-94%，其中蛋白质的含量占细胞干重的35%-60%，碳水化合物（多糖等膳食纤维）的含量在35%-60%，脂类物质的含量在1%-5%。酵母细胞中富含多种维生素、矿物质和酶类，此外还含有多种鲜为人知的活性物质，如麦角固醇、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、辅酶A等，能促进体内蛋白质合成，具有抗氧化物、抗衰老、保肝护肝、排除体内毒素等多方面的保健作用，微量元素与某些常量元素如钙、铁、锌等，对人体健康也非常有益。研究人员发现，本发明的保肝护肝营养配制品，能在营养机体的同时更好地起到保肝护肝的作用，酵母营养粉的加入可以进一步促进原料SAM对肝损伤的保护作用。
为进一步提升富含SAM菌体的稳定性，本发明的另一目的在于提供一种富含SAM菌体的乳化剂干粉，制备本发明所述的SAM剂，可以采用本领域所公知的乳化技术进行制备，如1998年黄鸿志等所提到的使用乳化剂使用方法（黄鸿志，阚建全.食用乳化剂使用方法.食品工业科技[J].1998(5):71）、以及药剂教材中的乳化剂制备技术，将这些引用作为参考。具体地，制备富含SAM菌体干粉乳化剂的方法，如可以是所得的SAM菌体干粉，加入植物油、乳化剂及稳定剂，制备SAM菌体乳化液，然后再进行喷雾干燥得到富含SAM菌体乳化液干粉，所用的植物油，可以是选自菜籽油、大豆油、橄榄油或花生油中的任意一种或多种，所述的乳化剂，可以是选自司盘、吐温、泊洛沙姆或聚乙二醇类的任意一种或多种，所述的稳定剂，如可以是EDTANa2、生育酚等。
进一步地，本发明还提供一种包含本发明富含SAM的酿酒酵母菌体干粉的乳化剂干粉，以及保健食品中可用的赋形剂制备而成的制剂，术语“酿酒酵母乳化干粉”是指，将制备而得的富含SAM菌体的酿酒酵母菌体干粉，采用本领域常用的乳化剂制备技术制备成乳化后，再经喷雾干燥而得的干粉。
本发明所述保肝营养配制品中，还包括药品食品上可接受的赋形剂，如可以是填充剂，如乳糖、糊精、微晶纤维、淀粉等；崩解剂如交联聚维酮，交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠等，粘合剂如淀粉浆、淀粉浆钠、羟丙甲纤维素、聚维酮等，表面活性剂如十二烷基磺酸钠，润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等，还可以有助悬剂、助溶剂、矫味剂、防腐剂等，具体选用什么赋形剂搭配，根据所需要制成的制剂而定，制成普通的制剂时，选用何种赋形剂是本领域技术人员根据现有技术就能知道的。
本发明用于保肝护肝的营养配制品，其最终服用的制剂单元形式为口服制剂，口服制剂可以选自干粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂，所述片剂可以是常规的素片、或者是包衣片，包衣可以是包糖衣、肠溶衣或胃溶衣，胶囊可以是硬胶囊剂，也可以是软胶囊剂，或者也可以是微囊剂。
本发明所述口服制剂包括重量配比为10%-90%的富含SAM的酵母粉或酵母乳化粉，10%-80%重量份的填充剂，0%-10%重量份的粘合剂，0%-5%重量份的润滑剂。
所述的片剂或胶囊剂中，每制剂单元含SAM约1-50mg，优选为10-50mg，更优选为10-30mg。
本发明的再一目的是提供一种制备本发明所述的稳定的保肝护肝营养配制品，如胶囊剂或片剂的制备方法，制备本发明保肝护肝营养配制品胶囊剂或片剂，可以采用本领域制备胶囊或片剂的常规技术方案而得到。如可以将处方量的富含SAM酵母菌体干粉原料或酵母菌体干粉乳化剂干粉、处方量的填充剂，混合均匀，加入处方量的粘合剂，混匀，制软材、制颗粒、干燥，加入处方量的润滑剂，装胶囊或压片即得。
制备本发明所述口服干粉剂时，可以将得到的菌体干粉，直接罐装入药，或者加少量填充剂后罐装入药。
附图说明
图1为四种不同SAM原料在40℃加速稳定性试验下所测定的中SAM含量变化图。
图2为四种不同SAM原料在40℃加速稳定性试验下所测定的S异构体含量变化图。
具体实施例
以下从具体实施方式来进一步说明本发明，需要说明的是，所列举的实施例并不是为了限制本发明的具体实施方式，本领域技术人员在本发明内容的指导下，可以容易地做出一些其它形式上的改变，这些，也都在本发明的保护范围之内。
实施例1富含SAM的酿酒酵母发酵液的制备
酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae1251）购自：中国工业微生物菌种保藏管理中心
将菌株酿酒酵母接入平板培养基BMGY中，培养温度26～30℃，6～8天后，再移至斜面培养基中BMGY，26～30℃，6～8天，得斜面孢子。
用无菌的接种环挖取0.5～1cm2的斜面孢子至一级种子培养基BMGY中，在26～30℃下培养20～30h，再将一级种子接种至下一级种子培养基BMGY中，在26～30℃下培养20～30h，每一级种子的接种量为10%。
将最后一级种子接入发酵培养基中，接种量为10%。培养基包含：葡萄糖50g/l、酵母粉15g/l、麦汁60g/l、磷酸氢二铵10g/l、硫酸镁5g/l、磷酸氢二钾1g/l、磷酸二氢钾1g/l、Zn2+10mg/l、Fe2+10mg/l、Cu2+6mg/l、Mn2+6mg/l。培养温度26～30℃，罐压0～0.05MPa，风量为体积比1：1～1：2，发酵过程中pH控制在6.0，发酵开始后即补入甘油，甘油浓度为100g/L，控制总甘油量在2.0g/100ml，添加无机硒离子，添加量为20mg/L，发酵1天后补充L-甲硫氨酸，补入量为发酵培养基重量的1.0%，发酵96h，收集菌体。每克干菌体中含有SAM约20mg。
上实施例中，所列举的酿酒酵母菌菌株，只是一种示范性的举例说明，其它很多可从商业途径或其它途径购买得到的酿酒酵母菌，比如：Saccharomycescerevisiae1337、1210，也都可以用来制备生产富含SAM的酿酒酵母菌原料，只是在所需的营养成分、中间的一些控制条件、最终得到的酿酒酵母中SAM的含量会不一样，但这些，本领域的普通技术人员，都可以通过现有技术所公开的文献、教科书、工具书等公知技术中得到，这些适合的酵母，也都在本发明的保护范围之内。
实施例2富含SAM的酿酒酵母发酵液的制备
酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae1210）购自：中国工业微生物菌种保藏管理中心
按照实施例1的步骤将最后一级种子接入发酵培养基中，接种量为10%。培养基包含：葡萄糖50g/l、酵母粉15g/l、麦汁60g/l、磷酸氢二铵10g/l、硫酸镁5g/l、磷酸氢二钾1g/l、磷酸二氢钾1g/l、Zn2+10mg/l、Fe2+10mg/l、Cu2+6mg/l、Mn2+6mg/l。培养温度26～30℃，罐压0～0.05MPa，风量为体积比1：1～1：2，发酵过程中pH控制在6.0，发酵开始后即补入甘油，甘油浓度为100g/L，控制总甘油量在2.0g/100ml，添加无机硒离子，添加量为20mg/L，发酵1天后补充三磷酸腺苷和L-甲硫氨酸，补入量分别为发酵培养基重量的2.0%和1.0%，发酵96h，收集菌体。每克干菌体中含有SAM约40mg。
实施例3富含SAM的酿酒酵母发酵液的制备
酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae1337）购自：中国工业微生物菌种保藏管理中心。菌种在10Ｗ紫外灯25cm处照射3min，关闭紫外灯，在黑暗中放置5min。所得诱变菌，具有较高的SAM生产能力。按照实施例1的步骤将最后一级种子接入发酵培养基中，接种量为15%。培养基包含：葡萄糖70g/l、酵母粉15g/l、麦汁60g/l、磷酸氢二铵10g/l、硫酸镁5g/l、磷酸氢二钾1g/l、磷酸二氢钾1g/l、Zn2+10mg/l、Fe2+10mg/l、Cu2+6mg/l、Mn2+6mg/l。培养温度26～30℃，罐压0～0.05MPa，风量为体积比1：1～1：2，发酵过程中pH控制在5.5，发酵开始后即补入甘油，甘油浓度为120g/L，控制总甘油量在3.0g/100ml，添加无机硒离子，添加量为20mg/L，发酵1天后流加补充三磷酸腺苷和L-甲硫氨酸，补加量分别为0.3g/L/h和0.9g/L/h，发酵72h，收集菌体。每克干菌体中含有SAM80mg。
实施例4富含SAM的酿酒酵母发酵液处理
将所得的富含SAM的酿酒酵母发酵液以三种方式进行处理，处理方式如下
方式一：菌体在pH4.0的缓冲液中低温清洗2h，更换新的相同缓冲液，40度自溶2h，固液分离，去除不溶物，而后喷雾干燥，获得酵母提取物。喷雾干燥进口温度约120度，进料速度1L/h，空气流速40m3/h。
方式二：菌体在pH4.0的缓冲液中低温搅拌清洗2h，而后压干酵母，加入10%重量份的海藻糖，喷雾干燥，获得酵母粉。喷雾干燥进口温度约120度，进料速度1L/h，空气流速40m3/h。
方式三：菌体在pH4.0的缓冲液中低温搅拌清洗2h，而后压干酵母，加入10%的海藻糖，喷雾干燥，获得初级酵母粉。在初级酵母粉中加入大豆油，加入量为酵母粉的10%，再加入油量约10%的乳化剂如吐温，加入少量稳定剂，EDTANa2，最后加入初级酵母粉重量20%的注射用水，乳化均匀，再次喷雾干燥，获得酵母乳化粉。两次喷雾干燥条件相同，进口温度约120度进料速度1L/h，空气流速40m3/h。
乳化油还可以是选自：菜籽油、橄榄油、花生油的一种或几种，乳化剂也可以选自司盘或泊洛沙姆。
实施例5本发明口服干粉的制备
称取含SAM的酿酒酵母乳化粉450g，淀粉50g，混合均匀，直接装袋、封口，每袋5g，每袋含SAM约150mg。
称取含SAM的酿酒酵母粉450g，淀粉50g，混合均匀，直接装袋、封口，每袋5g，每袋含SAM约180mg。
实施例6本发明颗粒剂制备
称取含SAM的酿酒酵母菌的乳化剂干粉150g，糊精50g，混合均匀，喷洒70%的乙醇，制备软材、制粒，105℃干燥、整粒，将颗粒装袋、封口，得颗粒剂，每袋装2g，每袋含SAM约为70mg。
实施例7本发明颗粒剂制备
称取含SAM的酿酒酵母菌干粉120g，乳糖80g，混合均匀，以聚维酮为粘合剂，制备软材、制粒，105℃干燥、整粒，将颗粒装袋、封口，得颗粒剂，每袋装2g，每袋含SAM约为50mg。
实施例8本发明片剂的制备
称取含SAM的酿酒酵母菌干粉250g，微晶纤维素240g，混合均匀，以淀粉浆为粘合剂制软材、制粒、干燥、整粒，加入约10g的微分硅胶，混匀、压制成1000片，每片含SAM约10mg。
实施例9本发明片剂的制备
称取含SAM的酿酒酵母菌干粉400g，微晶纤维素95g，混合均匀，以淀粉浆为粘合剂制软材、制粒、干燥、整粒，加入约5g的硬脂酸镁，混匀、压制成1000片，每片含SAM约16mg。
实施例10本发明片剂的制备
称取含SAM的酿酒酵母菌乳化剂干粉100g，淀粉385g，混合均匀，以淀粉浆为粘合剂制软材、制粒、干燥、整粒，加入约15g的硬脂酸镁，混匀、压制成1000片，每片含SAM约5mg。
实施例11本发明胶囊剂的制备
称取含SAM的酿酒酵母菌乳化剂干粉300g，淀粉50g，混合均匀，以淀粉浆为粘合剂制软材、制粒、干燥、整粒，装入硬胶囊壳1000个，每胶囊含SAM约10mg。
实施例12稳定性研究
依次取实施例2下，三种方式处理的富含SAM的酵母菌体干粉（依次记为样品A、样品B、样品C），并取从市售购买得到的SAM的丁二磺酸盐原料进行比较测试（记为样品D）。将四种样品原料各10g导入聚乙烯双层袋，对每一种原料样品各准备5份进行平行测试，样品保持在25±1℃的室温环境下，按药典II部附录XIX J药物引湿性试验指导原则项下的方法，测定药物吸水性。并在40±1℃、相对湿度百分比为75%的加速条件下，测定以上四个样品的SAM含量以及其中S活性异构体的含量。（用Karl-Fischer和HPLC测定），结果见表1及图1、图2。
表1样品引湿性实验结果
从结果看出，相比较于纯的SAM丁二磺酸盐，采用酵母细胞喷雾干燥的样品SAM含量和稳定性都比较好，加了乳化粉的活性成分稳定性更高；酵母抽提物的SAM含量低，活性成分含量低，但其稳定性较好，也可以作为低剂量添加SAM的原料使用。纯的SAM丁二磺酸盐具有典型的令人不愉快的味道，而3种酵母粉由于含有大量酵母的成分，而具有酵母的独特香味，口感很好。
另外，水含量对于纯品的稳定性有很大的影响，一般要求水含量在2.5%以下，样品才能比较稳定。而喷雾干燥的样品，水含量普遍变高，水含量在4.0-6.0%，两种喷雾干燥的酵母粉中，经乳化后的酵母干粉和直接喷雾干燥的酵母干粉均具有引湿性，但经乳化后在喷雾干乳化酵母干粉引湿性相对更低（引湿增重分别为6.%和14.8%）。SAM原料放置后已潮解，吸湿性非常严重。
实例13、富含SAM的酿酒酵母粉对CCl4所致肝损伤的保护作用
（1）.动物：SD大鼠60只，体重（200±20g），购于北京大学医学院试验动物中心，随机分为6组，分别为阴性对照组、模型组、4组给药治疗组。
（2）.药品：本发明富含SAM的酿酒酵母菌干粉、富含SAM的酿酒酵母乳化剂干粉，SAM原料、酿酒酵母粉。
（3）.试验分组阴性对照组（正常组）：大鼠10只，每三天皮下注射等剂量植物油（花生油），持续8周。50只大鼠于试验第一天起在背部皮下注射50％CCl4花生油（CCl4:花生油=1:1）溶液，0.2mL/100g体重，每3天一次，持续8周。
给药方法：在实验开始第1d，4治疗组分别给予：酿酒酵母菌体干粉组（灌胃给药170mg菌体/kg体重/天，约含SAM10mg），酿酒酵母菌乳化剂干粉组（灌胃给药500mg菌体/kg体重/天，约含SAM10mg），酵母干粉混合SAM原料组合（灌胃给予：(酵母干粉160mg+SAM原料10mg)/kg体重/天），SAM原料组（灌胃给予SAM原料10mg/kg体重/天），；灌胃给药，每日1次，阳性对照组（模型组）正常喂饲，至试验结束，8周后处死动物并采集样品。
（4）血清生化指标的检查、肝组织脂质过氧化水平及肝羟脯氨酸含量测定：丙氨酸转氨酶（ALT），天冬氨酸转氨酶（AST），赖氏法，按试剂盒说明书进行；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、羟脯氨酸（Hyp）的测定均按试剂盒说明书进行。
（5）组织学检查取肝脏左叶相同部位，置10％中性甲醛固定24-48小时后常规制片，Mallory染色。
表2本发明对CCl4所致肝损伤大鼠ALT、AST、MDA、SOD、Hyp的影响(x±s)
*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比；与SAM组相比，#P<0.05。
试验结果：由表1可知，模型组中血清AST、ALT较正常组明显升高，各治疗组的值也较正常组高，但与模型组相比，各治疗组均有所下降，其中包含由酵母和SAM成分的三个治疗组较模型组相比，ALT、AST水平下降有更为显著性（P<0.01），三个包含酵母和SAM成分的治疗组与单纯SAM组相比，ALT、AST水平下降也更为显著。说明在降低血清转氨酶方面，酿酒酵母具有促进SAM对CCl4所致肝损伤大鼠的血清ALT、AST下降作用。
与正常组相比，模型组的肝羟脯氨酸明显升高，各治疗组较正常组也均显著升高，但各治疗组较模型组相比，均显著降低，包含SAM和酿酒酵母的治疗组较单独的SAM治疗组也要相对更低，但差异无显著性。
肝组织中的MDA、SOD水平，模型组SOD水平明显低于正常组，MDA水平高于正常组；各治疗组SOD水平也较正常组要低，但与模型组相比，SOD水平均要明显升高，差异具有显著性，而且，包含SAM和酿酒酵母的治疗组较单独的SAM治疗组，其SOD水平升高更为明显，差异具有显著性（P<0.05）；各治疗组MDA水平也较正常组高，高剂量组与正常组差异无显著性，但与模型组相比，各治疗组要明显低于模型组，均具有显著性。
而单独给予大鼠酿酒酵母粉，对这些指标并无明显影响。
从上述结果可知，酿酒酵母具有促进SAM对CCl4所致肝损伤大鼠肝脏保护作用。
Mallory染色切片光镜下，正常组肝脏结构正常，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，未见明显病变。模型组肝脏病变严重，可见小叶中心大量肝细胞坏死明显，部分肝细胞脂肪变性肿胀，汇管区可见炎性细胞浸润。治疗组肝小叶内以肝细胞脂肪变性为主要表现，仅可见少量肝细胞坏死。
实施例14对小鼠免疫功能的影响
（1）实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重(18±2)g，40只，购于北京大学医学院试验动物中心。
（2）.药品：本发明富含SAM的酿酒酵母菌干粉、富含SAM的酿酒酵母乳化剂干粉
（3）.试验分组及给药：将小鼠随即分为3组，每组10只，分别为对照组、给药富含SAM的酿酒酵母菌干粉组（灌胃给予170mg/kg体重）、给药富含SAM的酿酒酵母乳化剂干粉（灌胃给予500mg/kg体重），对照组灌胃生理盐水。每天灌胃给药1次，自由采食、饮水，试验期为30d。
（4）免疫指标测定
免疫器官指数测定：分别在实验开始后11、21和31天，称重后处死小鼠，取出胸腺和脾脏分别称湿重，然后计算胸腺和脾脏指数，胸腺或脾脏指数=(胸腺重mg或脾脏重mg/体重g)。
巨噬细胞吞噬功能的测定：分别于实验开始第11、21、31天饲喂后1h，每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5mL，8-12h后处死，取腹腔液图片，37℃温孵30min，漂洗，晾干。用姬瑞氏混合液染色，并计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬指数(%)=(被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞)×100
表3小鼠器官指数变化
表4小鼠巨噬细胞吞噬功能的变化
从表3、表4结果可以看出，给予本发明富含SAM的酿酒酵母菌/或酿酒酵母菌乳化后干粉，可以明显提高小鼠的胸腺及脾脏指数，与对照组相比差异具有显著性（P<0.05），吞噬指数也明显要高于对照组（P<0.05），说明本发明营养配制品可以起到免疫增强的作用。
Claims (11)
1.一种酵母营养配制品，其特征是所述营养配制品主要由原料腺苷甲硫氨酸及酿酒酵母粉，以及食品药品中可接受的赋形剂制成。
2.根据权利要求1所述的酵母营养配制品，所述原料腺苷甲硫氨酸及酿酒酵母粉，是一种富含腺苷甲硫氨酸的酿酒酵母菌体干粉。
3.根据权利要求2所述的酵母营养配制品，其中所述酿酒酵母菌体干粉为乳化剂干粉。
4.根据权利要求1-3中任意权利要求所述的酵母营养配制品，所述富含腺苷甲硫氨酸的酿酒酵母菌体为每克酵母菌体干粉包括腺苷甲硫氨酸1-100mg。
5.根据权利要求4所述的酵母营养配制品，所述富含腺苷甲硫氨酸的酿酒酵母菌体为每克酵母菌体发酵液包括腺苷甲硫氨酸40-60mg。
6.根据权利要求4所述的酵母营养配制品，所述酿酒酵母粉是富含有机硒酿酒酵母粉，每克干酵母粉含有机硒10-100微克。
7.权利要求1-6中任意一权利要求所述的酵母营养配制品，其特征在于所述营养配制品制成的给药单元形式为口服制剂，所述口服制剂为口服干粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂。
8.权利要求7所述的酵母营养配制品，其中所述口服制剂包括重量配比为10%-90%的富含腺苷甲硫氨酸的酵母菌体干粉或酵母菌体干粉的乳化剂干粉，10%-80%重量份的填充剂，0%-10%重量份的粘合剂，0%-5%重量份的润滑剂。
9.根据权利要求8所述的酵母营养配制品，其中所述填充剂选自乳糖、糊精、微晶纤维或淀粉，所述粘合剂选自70%的乙醇、淀粉浆、淀粉浆钠、羟丙甲纤维素或聚维酮，所述润滑剂选自硬脂酸镁或滑石粉。
10.权利要求1-6中任意一权利要求所述酵母营养配制品在制备具有保肝护肝作用的药品或保健食品中的应用。
11.权利要求1-6中任意一权利要求所述营养配制品在制备具有免疫增强的药品或保健食品中的应用。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
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Applications Claiming Priority (1)
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