CN101391998B - 一种喜树碱的高效分离纯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从喜树果实、叶等组织中提取分离喜树碱的方法，其工艺步骤包括：A、喜树碱粗品的提取，B、喜树碱粗品经分离、纯化制半成品，C、喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品；本发明能将喜树碱的含量提高到99％以上，单个相关杂质如10-羟基喜树碱、20-乙烯基喜树碱和9-甲氧基喜树碱等的含量降低至0.1％以下，且产品收率高，产量大，成本较低，污染小，适合工业化生产。

Description

一种喜树碱的高效分离纯化方法
技术领域
本发明涉及一种植物单体活性成分的分离纯化方法，属医药技术领域，具体来说，本发明涉及一种从喜树的果实、叶等组织中提取分离喜树碱的方法。
背景技术
喜树Camptotheca acuminata Decne.是蓝果树科的一种古老植物，为我国特有植物，与珙桐有近缘关系，其次生代谢产物喜树碱是已知的具有广谱抗肿瘤活性的天然药物之一。喜树碱(Camptothecin，CPT)为淡黄色片状结晶，分子式为C20H16N2O4，分子量348.36，结构式如下：
Figure G200810046161901D00011
喜树碱的抗肿瘤活性已得到世界公认，但其副作用也较明显，当今基本对其进行化学结构修饰改良后再做成药剂使用。喜树碱的纯度是决定其化学合成衍生物质量好坏的重要因素之一，高纯度的喜树碱才能合成高质量的下游产品。目前，国内产品的纯度能达到98％，但其相关杂质10-羟基喜树碱、20-乙烯基喜树碱和9-甲氧基喜树碱的含量往往大于0.5％，这些杂质能与喜树碱同步反应，生成相应的下游产品杂质，且这些杂质不易去除，对产品的安全性造成隐患。下游产品的精制纯化，需要大量的有机试剂和繁琐的工艺操作，无疑增大了生产成本。
发明内容
本发明旨在克服上述缺陷，提供一种喜树碱的高效分离纯化方法。该方法能将喜树碱的含量提高到99％以上，单个相关杂质如10-羟基喜树碱、20-乙烯基喜树碱和9-甲氧基喜树碱等的含量降低至0.1％以下，且产品收率高，产量大，成本较低，污染小，适合工业化生产。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种喜树碱的高效分离纯化方法，其特征在于具体工艺步骤如下：
A、喜树碱粗品的提取：
将喜树的果实、叶等组织粉碎成粗粉原料，装入提取罐，用体积比浓度为70％的甲醇水溶液循环提取3次：按重量(Kg)/体积(L)比，第一次料液比为1∶2～3，提取时间8小时；第二次料液比为1∶1.5～2，提取时间6小时；第三次料液比为1∶1.2～1.5，提取时间4小时。合并提取液，70℃单效浓缩回收甲醇后，余下的浓缩液用浓盐酸调pH值中性，再加入浓缩液体积1/3的氯仿萃取2～3次，氯仿相经浓缩析出晶体后，过滤，收集固体，70℃干燥，得喜树碱粗品。
所述甲醇水溶液以重量比浓度为80％的氢氧化钠溶液调pH值至9。
B、喜树碱粗品经分离、纯化制半成品：
将步骤A制得的喜树碱粗品，用50倍体积的pH值9～10的氢氧化钠-氯化钙溶液溶解，过滤，滤液滴加浓度为37％的浓盐酸至中性，析出喜树碱，再过滤，收集固体；固体干燥后，用200倍体积的氯仿-甲醇试剂于50℃加热溶解，经过滤，滤液浓缩回收试剂至溶液总量的1/8～1/12，自然冷却结晶；再过滤，收集固体，重复用氯仿-甲醇结晶一次，70℃干燥后得喜树碱半成品。
所述氢氧化钠-氯化钙溶液的质量比为1∶2。
所述氯仿-甲醇的体积比为8∶1。
C、喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品：
将步骤B制得的半成品用100倍体积的无水冰乙酸于80℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收冰乙酸至溶液总量的1/8～1/12，自然冷却结晶；经过滤，收集固体，70℃干燥得喜树碱产品。
本发明的有益效果表现在：
1、采用氢氧化钠调pH值为9的70％甲醇水溶液循环提取，提取效果好，产品收率高，有机试剂充分回收，污水排放量极小，符合绿色环保的理念。
2、采用氯仿-甲醇结晶两次，冰乙酸结晶一次，产品纯度提高到99％以上，单个相关杂质如10-羟基喜树碱、20-乙烯基喜树碱和9-甲氧基喜树碱等的含量下降到0.1％以下。
3、本发明整体工艺高效，环保，得率高，适合工业化生产。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图
图2为本发明步骤A所述喜树碱粗品的高效液相色谱图
图3为本发明步骤B所述喜树碱半成品的高效液相色谱图
图4为本发明步骤C所述喜树碱产品(含量＞99％)的高效液相色谱图
具体实施方式
实施例1
一种喜树碱的高效分离纯化方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：
A、喜树碱粗品的提取：将3000kg喜树果实粉碎成粗粉，装入容积6m3的提取罐中，用pH值9、体积比浓度为70％的甲醇水溶液循环提取3次。第一次投放溶剂8000L，提取时间8小时；第二次投放溶剂7000L，提取时间6小时；第三次投放溶剂6000L，提取时间4小时。合并提取液，70℃单效浓缩回收甲醇。浓缩液加浓盐酸调pH值中性，再用2000L氯仿萃取3次，氯仿相浓缩至200L，自然冷却，静置析晶。过滤，收集固体，70℃干燥，得喜树碱粗品2kg。
B、喜树碱粗品经分离、纯化制半成品：将步骤A制得的喜树碱粗品2kg，用100L pH值9～10的氢氧化钠-氯化钙(1∶2，m/m)溶液溶解，过滤，滤液用浓盐酸调pH值中性，静置析晶，过滤，收集固体。固体干燥后，用400L氯仿-甲醇(8∶1，v/v)于50℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收试剂至40L，自然冷却结晶。过滤，收集固体，重复用氯仿-甲醇结晶一次，干燥，得半成品1.4kg。
C、喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品：
将半成品用140L冰乙酸于80℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收试剂至14L，自然冷却结晶。过滤，收集固体，70℃干燥，得成品1kg。
实施例2
一种喜树碱的分离纯化方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：
A、喜树碱粗品的提取：将3000kg喜树叶子粉碎成粗粉，装入容积6m3的提取罐中，用80％氢氧化钠溶液调pH值9、体积比浓度为70％的甲醇水溶液循环提取3次。第一次投放溶剂8000L，提取时间8小时；第二次投放溶剂7000L，提取时间6小时；第三次投放溶剂6000L，提取时间4小时。合并提取液，70℃单效浓缩回收甲醇。浓缩液加浓盐酸调pH值中性，再用2000L氯仿萃取3次，氯仿相浓缩至200L，自然冷却，静置析晶。过滤，收集固体，70℃干燥，得喜树碱粗品1kg。
B、喜树碱粗品的分离、纯化：将步骤A制得的喜树碱粗品1kg，用50L pH值9～10的氢氧化钠-氯化钙(1∶2，m/m)溶液溶解，过滤，滤液用浓盐酸调pH值中性，静置析晶，过滤，收集固体。固体干燥后，用200L氯仿-甲醇(8∶1，v/v)于50℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收试剂至20L，自然冷却结晶。过滤，收集固体，重复用氯仿-甲醇结晶一次，干燥，得半成品0.7kg。
C、喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品：
将半成品用70L冰乙酸于80℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收试剂至7L，自然冷却结晶。过滤，收集固体，70℃干燥，得成品0.5kg。

Claims (3)

1.一种喜树碱的分离纯化方法，其特征在于具体工艺步骤如下：
A、喜树碱粗品的提取：
将喜树的果实或叶粉碎成粗粉原料，装入提取罐，用体积比浓度为70％的甲醇水溶液循环提取3次：按重量/体积比，第一次料液比为1∶2～3，提取时间8小时；第二次料液比为1∶1.5～2，提取时间6小时；第三次料液比为1∶1.2～1.5，提取时间4小时；合并提取液，70℃单效浓缩回收甲醇后，余下的浓缩液用浓盐酸调pH值中性，再加入浓缩液体积1/3的氯仿萃取2～3次，氯仿相经浓缩析出晶体后，过滤，收集固体，70℃干燥，得喜树碱粗品；
所述甲醇水溶液以重量比浓度为80％的氢氧化钠溶液调pH值至9；
B、喜树碱粗品经分离、纯化制半成品：
将步骤A制得的喜树碱粗品，用50倍体积的pH值9～10的氢氧化钠-氯化钙溶液溶解，过滤，滤液滴加浓度37％的盐酸至中性，析出喜树碱，再过滤，收集固体；固体干燥后，用200倍体积的氯仿-甲醇试剂于50℃加热溶解，经过滤，滤液浓缩回收试剂至溶液总量的1/8～1/12，自然冷却结晶；再过滤，收集固体，重复用氯仿-甲醇结晶一次，70℃干燥后得喜树碱半成品；
C、喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品：
将步骤B制得的半成品用100倍体积的无水冰乙酸于80℃加热溶解，过滤，滤液浓缩回收冰乙酸至溶液总量的1/8～1/12，自然冷却结晶；经过滤，收集固体，70℃干燥得喜树碱产品。
2.按照权利要求1所述喜树碱的高效分离纯化方法，其特征在于步骤B所述氢氧化钠-氯化钙溶液的质量比为1∶2。
3.按照权利要求1所述喜树碱的高效分离纯化方法，其特征在于步骤B所述氯仿-甲醇的体积比为8∶1。
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