CN101380390A - 普洱熟茶标准提取物prc-001的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

提供一种普洱熟茶标准提取物PRC－001，其制备方法及其应用。制备方法包括：用水加热提取，柱层析分离，浓缩，干燥，即得普洱熟茶标准提取物PRC－001。该方法简单易行，生产周期短，质量稳定可控，易于规范化批量制备和工业化生产，制备的普洱熟茶标准提取物PRC－001具有生理活性，可用作保健食品，饮料、功能性化妆品、以及医药品的原料。

Description

普洱熟茶标准提取物PRC-001的制备方法及其应用

技术领域：

本发明属于化学和食品领域，具体的，涉及普洱熟茶标准提取物PRC-001的制备方法及其应用。

背景技术：

普洱熟茶为云南特产的大叶茶生产的晒青毛茶经后发酵加工制作的茶类，具有特殊的风味与生理功能。应用现代技术提取其生理活性成分可以拓展普洱熟茶的应用范围，提升普洱茶产业。普洱熟茶的生理活性物质大多具有水溶性，极性大，有吸湿性，不稳定，分离纯化困难，迄今没有规范的工业化生产制备工艺。

发明内容：

本发明的目的，旨在发明一种具有生理活性的普洱熟茶标准提取物PRC-001，提供普洱熟茶标准提取物PRC-001的批量制备和工业化生产方法及其应用。本发明提供的普洱熟茶标准提取物PRC-001的制备方法简单易行、生产周期短，具有低成本、无污染等特征。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供如下技术方案：

将普洱熟茶用水加热提取，过滤，合并滤液，提取液冷确后通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析分离，用水以及含水低级醇梯度洗脱，用薄层层析法检测指导分离，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得到普洱熟茶标准提取物PRC-001。

上述技术方案中用于提取制备具有生理活性的普洱熟茶标准提取物PRC-001的原料为由大叶茶(Camellia sinensis var.assamica)制备的晒青毛茶经后发酵生产的普洱熟茶。

上述技术方案中用于提取的溶剂是水。

上述技术方案中用于柱层析洗脱的有机溶剂为低级醇，包括但不限于工业用乙醇、甲醇、丙醇、丁醇等。

上述技术方案中用于柱层析分离的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂。包括但不限于D-101，DA-201，D1400，CAD-40，ADS-5，HPD-500，DM130，XAD-2，XAD-4，Diaion，AB-8等。大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10。以含水低级醇梯度洗脱。

上述技术方案中用于检测和指导柱层析分离的薄层层析法为硅胶薄层层析法，以苯-甲酸乙酯-甲酸(2:7:1)为展开剂，5％的三氯化铁乙醇液为显色剂。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001的干燥方法可以是减压干燥、加热干燥、微波干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001的得率可根据原料来源与原料质量的不同在15-20％之间。普洱熟茶标准提取物PRC-001的得率用重量法测定。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001中茶多酚的含量可根据原料来源与原料质量的不同在15-23％之间。茶多酚的含量用分光光度法测定。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001中没食子酸的含量可根据原料来源和原料质量的不同在10-12％之间。没食子酸的含量用高压液相色谱法测定。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001中茶多糖的含量可根据原料来源不同在7-15％之间。茶多糖的含量用分光光度法测定。

上述技术方案中所得到的普洱熟茶的标准提取物PRC-001中咖啡因的含量小于1％。咖啡因的含量用高压液相色谱法测定。

上述技术方案中得到的普洱熟茶的标准提取物PRC-001安全、无毒副作用。并具有降低血清胆固醇、降低脂质过氧化、升高超氧化歧化酶(SOD)活性、促进肠胃消化、降低血糖、抗衰老、增强免疫功能等生理作用。

上述技术方案中得到的普洱熟茶标准提取物PRC-001，可作为食品饮料、保健食品、功能性化妆品、以及医药品的原料。

本发明提供了一种食品组合物，其中含有普洱熟茶标准提取物PRC-001和食品常用辅助剂。

本发明提供的食品组合物可以应用于各种通常的食品的形式。具体的可以是各种饮料，如：茶饮料和乳酸菌饮料等；各种糖果、糕点等。也可以是各种胶囊、含片、咀嚼片等。可与食品生产中通常使用的各种添加物，包括但不限于：葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、柠檬酸、苹果酸、乳酸、维生素C类、维生素B类、果胶、琼脂、氨基酸类、色素、香料和保存剂等配合使用。普洱熟茶的标准提取物PRC-001应占保健食品组合物总重量的1.0-100％，优选5.0-20％。

本发明提供了一种保健食品组合物，其中含有普洱熟茶标准提取物PRC-001和常用辅助剂，以及维生素和其他植物提取物。

本发明提供的保健食品组合物可以应用于各种通常的功能性保健食品的形式。具体的可以是各种胶囊剂、片剂、口服液等。可以与保健食品生产中通常使用的各种添加物，以及维生素类和植物提取物等配合使用。普洱熟茶的标准提取物PRC-001应占保健食品组合物总重量的1.0-100％，优选5.0-20％。

本发明还提供了一种化妆品组合物，其中含有普洱熟茶标准提取物PRC-001和常用载体。

本发明提供的化妆品组合物可以应用于任何化妆或皮肤外用品通常使用的任何组合。具体的可以是各种局部施用的形式。包括但不限于软膏剂、霜剂、液露剂、泡沫剂、喷剂等固体以及液体的形式。普洱熟茶标准提取物PRC-001在化妆品组合物中可以是含水形式，含水的醇溶液形式，油状溶液形式，水包油或油包水或多相乳状液形式，含水或油状凝胶形式等。可以与化妆品生产中通常使用的各种添加物配合使用。包括但不限于各种胶凝剂、防腐剂、乳化剂、润湿剂、经皮吸收促进剂、表面活性剂、植物油脂、脂肪物质、香料、高级醇类、颜料、填料等。以及与各种维生素、防晒剂、皮肤增白剂、保湿剂、抗皱剂、抗炎剂、抗氧化剂、植物提取物等配合使用。普洱熟茶的标准提取物PRC-001应占化妆品组合物总重量的0.001-10％，优选0.005-5％。

更进一步地，本发明提供了一种药品组合物，其中含有普洱熟茶标准提取物PRC-001和药品常用载体。

本发明提供的药物组合物可以与药学上可接受的任何载体配合制备药物剂型。包括但不限于片剂、胶囊剂、口服剂、粉剂、颗粒剂、针剂或粉针剂等。可以与药品生产中通常使用的各种添加物配合使用。包括但不限于各种稀释剂、赋形剂、填充剂、湿润剂、吸收促进剂、润滑剂、香味剂、甜味剂等。可以通过口服、注射、粘膜、以及直肠或肠胃外给药的方式施用于患者。普洱熟茶的标准提取物PRC-001应占药品组合物总重量的0.1-90％，优选1.0-50％。

本发明提取制备普洱熟茶标准提取物PRC-001的具体步骤和检测方法如下：

(1)将普洱熟茶加入10倍量的水加热提取，共提取三次，每次提取时间为30分钟，过滤、合并滤液得普洱熟茶水提取液。

(2)将水提取液放置冷却后，滤过，将滤液以一定流速通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂层析柱。大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10。以水及不同浓度的醇梯度洗脱。同时，用硅胶薄层层析法检测指导洗脱。薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(2:7:1)为展开剂，5％的三氯化铁乙醇液为显色剂。收集富含多酚的洗脱液。

(3)将洗脱液减压浓缩，干燥，得到褐色粉末，即为普洱熟茶标准提取物PRC-001。

(4)上述方法中普洱熟茶的标准提取物PRC-001柱层析分离所用的填充剂，可以采用其他类型的聚苯乙烯型大孔吸附树脂。

(5)上述方法中普洱熟茶的标准提取物PRC-001的干燥方法可采用冷冻干燥法、加热干燥法、喷雾干燥法和减压干燥法等。

本发明所述的方法具有如下优点：本发明仅使用水和低级醇提取制备普洱熟茶标准提取物PRC-001，得率高、生产成本低、制备过程简单易行、生产周期短，适宜于批量制备和工业化生产。如选择乙醇进行生产，则无毒，无三废污染；本发明使用的柱层析填充剂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂填充剂材料可以重复使用；按本发明制备的普洱熟茶标准提取物PRC-001具有低咖啡因的特性，咖啡因的含量在1％以下。

在本发明的化妆品和食品组合物中，普洱茶的标准提取物PRC-001应占组合物总重量的0.001-10％，优选0.005-5％。

本发明的组合物可以应用于任何通常用于局部施用的形式，具体地是含水形式，含水的醇溶液形式，油状溶液形式，水包油或油包水或多相乳状液形式，含水或油状凝胶形式，软膏，奶液，露，泡沫，气溶胶以及固体形式等。

本发明的组合物可含有在化妆或皮肤外用品中通常使用的任何组合。这些组分具体选自于胶凝剂、防腐剂、乳化剂、润湿剂、维生素、防晒剂、紫外线吸收剂、消炎剂、抗氧化剂、经皮吸收促进剂、表面活性剂、植物油脂、脂肪物质、香料、高级醇类、颜料、填料和水的组分，及其混合物。

作为可在本发明中使用的亲水胶凝剂，可具体提及的有羧乙烯基聚合物、丙烯酸共聚物、聚丙烯酰胺、天然胶、多糖和粘土等。作为亲油胶凝剂，可提及的有聚乙烯、脂肪酸盐、改性粘土、疏水性二氧化硅等。

作为可在本发明中使用的乳化剂，可以具体提及的有像聚乙二醇硬脂酸酯之类的聚乙二醇的脂肪酸酯，和像甘油硬脂酸酯之类的甘油的脂肪酸酯及其混合物。

本发明的组合物也可以和现有使用的脱色素剂或皮肤增白剂，抗氧化剂如维生素E、维生素C及其盐类，以及一些植物提取物等配合使用。

本发明的组合物可以应用于各种通常的健康食品的形式，具体可以是各种饮料如茶饮料和乳酸菌饮料等、矿泉水、胶囊、咀嚼片、酸奶、饴、糖果等。可与食品生产中通常使用的葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、柠檬酸、苹果酸、乳酸、维生素C类、维生素B类、果胶、琼脂、氨基酸类、色素、香料和保存剂等配合使用。

本发明所述的药物组合物，由普洱茶的标准提取物PRC-001与药学上可接受的载体制备的药物剂型包括片剂、胶囊、口服液、针剂或粉针剂。

上文所述的的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、以及和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明普洱茶的标准提取物PRC-001可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊和注射剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1％～99.5％的活性成分，最优选含有重量比为0.5％～95％的活性成分。

本发明普洱茶的标准提取物PRC-001的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5mg/kg体重。可以一次或多次施用。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

普洱熟茶标准提取物PRC-001的制备：

(1)取普洱熟茶10kg，将普洱熟茶加入10倍量的水加热提取，共提取三次，每次提取时间为30分钟，过滤、合并滤液得普洱熟茶水提取液。

(2)将水提取液放置冷却后，滤过，将滤液以一定流速通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂D-101层析柱。大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10。以水及不同浓度的醇梯度洗脱。同时，用硅胶薄层层析法检测指导洗脱。薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(2:7:1)为展开剂，5％的三氯化铁乙醇液为显色剂。收集富含多酚的洗脱液。

(3)将洗脱液减压浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到1.7kg褐色粉末，即为普洱熟茶标准提取物PRC-001。

(4)上述方法中普洱熟茶标准提取物PRC-001的茶多酚含量按以下方法测定：

仪器与试剂：岛津UV-1700型紫外分光光度计；所用试剂均为分析纯，蒸馏水。

对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，使1ml中含没食子酸0.05mg，即得没食子酸对照品溶液。

空白溶液的制备：精密量取2ml水在25ml的容量瓶中，加1ml磷钼钨酸试液，加水10ml，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度。放置30min，在760nm的波长处测定吸光度。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置25ml棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1ml，再分别加水11.5，11.0，10.0，9.0，8.0，7.0ml，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，以相应的试剂为空白，在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备与测定：取25mg普洱熟茶标准提取物PRC-001，用水溶解在100ml的容量瓶中，精密量取2ml置25ml的容量瓶中，加1ml磷钼钨酸试液，再加水10ml，最后用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀即得。放置30min，在760nm的波长处测定吸光度。根据标准曲线计算普洱熟茶标准提取物PRC-001中茶多酚的含量(以没食子酸计)不得小于15％。

(5)上述方法中普洱熟茶的标准提取物PRC-001的咖啡因和没食子酸含量按以下方法测定：

仪器与试剂：HPLC仪器为waters 2695型高效液相色谱仪，自动进样器，Waters 2996 PDA二级管阵列可变波长检测器。色谱纯乙腈，超纯水，其余溶剂均为分析纯。

色谱条件及检测波长的选择：Agilent ZORBAX SB C18(4.6×150mm层析柱；乙腈:水(0.34％磷酸)(4:96至40:60，线形梯度)为流动相；柱温：30℃；流速:1ml/min；波长：280nm.

对照品溶液的制备：

精密称取干燥至恒重的咖啡因5.0mg，置于10.0ml的容量瓶中，用甲醇充分振荡溶解并定容至刻度线，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤，即得咖啡因对照品溶液。

精密称取没食子酸3.0mg，置于25.0ml的容量瓶中，用甲醇充分振荡溶解并定容至刻度线，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得没食子酸对照品溶液。

待测样品溶液的制备：

咖啡因含量的测定：精密称取普洱熟茶标准提取物PRC-001(100.0mg)，加水充分振荡溶解，定容到30.0ml，用氯仿按1：1的量萃取5次，合并氯仿萃取液，浓缩至干，加甲醇溶解，定容到5ml，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤，即得待测样品溶液。

没食子酸含量的测定：精密称取普洱熟茶标准提取物PRC-001(50.0mg)，加水溶解，定容到25ml，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤，即得待测样品溶液。

定量分析：由上述工艺制备的普洱熟茶标准提取物PRC-001中咖啡因的含量不得大于1％.没食子酸含量不得小于3％。

(6)上述方法中普洱熟茶的标准提取物PRC-001茶多糖的含量按以下方法测定：

仪器与试剂：岛津UV-1700型紫外分光光度计；所用试剂均为分析纯，蒸馏水。

对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的标准葡萄糖10mg于100ml的容量瓶中，加水溶解并定容至刻线，摇匀，待用。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0ml，置20ml的具塞试管中，各加入蒸馏水至2ml，依次加入6％的苯酚溶液1ml，迅速加入浓硫酸5ml，静置10min后摇匀，40℃下水浴15min，取出冷却至室温，在490nm波长处测吸光度，以葡萄糖的量(μg)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

样品溶液的制备：精密称取普洱熟茶标准提取物PRC-001 120mg于250ml三角瓶中，加入100ml乙醇溶液，浸泡过夜，过滤，残渣用少量乙醇洗涤三次，挥干乙醇，将残渣同滤纸一起放置在250ml的三角瓶中，加入200ml沸水，浸泡15min，过滤，用沸水洗涤滤渣3次，每次10ml，滤液收集到250ml的容量瓶中，加水定容至刻度线，摇匀，待用。

空白溶液的制备：精密吸取样品溶液0.5ml置于具塞试管中，各加入蒸馏水至2ml，依次加入6％的苯酚溶液1ml，迅速加入去离子水5ml，静置10min后摇匀，40℃下水浴15min，取出冷却至室温，即得空白溶液。

测定：精密吸取样品溶液0.5ml于具塞试管中，各加入蒸馏水至2ml，依次加入6％的苯酚溶液1ml，迅速加入浓硫酸5ml，静置10min后摇匀，40℃下水浴15min，取出冷却至室温，在490nm波长处测吸光度，以相应的样品溶剂为空白。根据标准曲线计算普洱熟茶的标准提取物PRC-001中茶多酚的含量(以葡萄糖计)不得小于7％。

实施例2：

普洱熟茶标准提取物PRC-001对高脂血症大鼠血脂水平的影响

1、脂代谢紊乱模型复制

用预防性给受试样品方法，选用健康雄性SD大鼠40只，体重150-200g，用普通饲料饲养观察5天，尾尖取血测血清TC。按血清TC水平随机分为4组，即正常对照组，高脂模型组，普洱熟茶标准提取物PRC-001的低、高剂量(0.2-0.8g.kg^-1.d^-1)预防组。除正常对照组继续喂饲普通饲料外，其余各组改喂高脂饲料进行实验性高脂血症模型复制(高脂饲料配方为基础饲料加1％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油、0.2％胆盐)。各预防组在进食高脂饲料的同时，每天ig给予相应剂量的普洱熟茶标准提取物PRC-001，模型对照组ig等体积溶剂。30天后进行血脂测定。

2、血脂测定

尾断取禁食12h以上空腹血，分离血清、用酶比色法测血清TC、TG及HDL-C，计算HDL-C/TC比值，操作过程按试剂盒使用说明书进行。结果见表1。

3、普洱熟茶标准提取物PRC-001降血脂作用

由表1结果可见，进食高脂饲料后，高脂模型组大鼠血清TC和TG水平较正常对照组显著升高，TC水平由2.23±0.20升至6.46±1.06mmol/L，TG水平由0.73±0.08升至0.98±0.08mmol/L(P<0.01)，表明实验性高脂血症模型已形成。

普洱熟茶标准提取物PRC-001二个剂量组动物血清TC均显著低于高脂模型组(P<0.05及P<0.01)呈一定的剂量相关性，在降低血清TC同时，虽HDL-C水平略有下降，但HDL-C/TC比值显著高于模型组。普洱熟茶标准提取物PRC-001高剂量同时还有显著降低血清TG作用(P<0.01)。

  表1  普洱熟茶标准提取物PRC-001对实验性高脂血症大鼠血脂水平的影响

x±s，n＝10，与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.05.

实施例3：

普洱熟茶标准提取物PRC-001对对大鼠肥胖的影响：

1、肥胖模型复制

采用预防肥胖模型法，选用健康雄性SD大鼠40只，体重100-150g，按体重随机分为4组，即空白对照组，肥胖模型组，普洱熟茶标准提取物低、高剂量预防组(0.2-0.8g.kg^-1.d^-1).每组中将体重相近的两只大鼠放在同一盒中喂养，每盒二只。自实验开始，模型对照组和实验组动物每天给予等量营养饲料(含10％猪油、10％蛋黄粉、80％基础饲料)，饲料给予量以多数动物吃完为准，空白对照组给予等量基础饲料。在进食高能量饲料的同时，预防组动物每天ig给予相应剂量的受试样品，模型对照组ig相同体积溶剂。记录每只动物每天的给食量和剩食量，计算进食量/只/d，(两只动物以总量的平均值计)，每周称体重一次，共45天。实验结束时放血处死大鼠、剖腹取肾周围脂肪及睾丸周围脂肪称重、计算肾周及睾丸周围脂肪重与体重之比值(脂/体比)。

2、普洱熟茶标准提取物PRC-001对大鼠肥胖的影响

1)对大鼠进食量的影响(表2)

由表2可见除实验第一周和实验结束前进食营养饲料动物平均每天摄食量大于正常对照组外其余时间与正常对照组无显著差异。第5周起，受试样品组动物摄食量较肥胖模型组也有增加，提示受试样品可能有增加大鼠食欲作用。

   表2  实验中各组动物每天进食量变化(g)

x±s，n＝10，与正常组比较^#P<0.05，^##P<0.01.与模型组比较^*P<0.05.

2)对大鼠体重增长的影响(表3)

由表3结果可见，进食高营养饲料动物体重增长速度大于正常对照组，自实验第三周起，差异逐渐具有显著性(P<0.05，P<0.01)，受试样品实验组大鼠体重增长与肥胖模型组无显著差异(P>0.05)，表明受试样品在增加大鼠进食量的同时，对体重无明显影响。

       表3  实验中各组动物体重变化(g)

n＝10，x±s，与正常组比^#P<0.05，^##P<0.01.

3)普洱熟茶标准提取物PRC-001对大鼠脂/体比的影响

进食高营养饲料各组大鼠肾周和睾丸周围脂肪重量与体重之比值(脂/体比)均大于正常对照组。与肥胖模型组比，受试高剂量组肾周及睾丸周围脂/体比均显著降低(P<0.01，P<0.05)，其肾周脂/体比与正常对照组无显著差异(P>0.05)。显示普洱熟茶标准提取物有减少动物体内脂肪堆积作用。

      表4  普洱熟茶提取物PRC-001对大鼠脂/体比的影响

x±s，n＝10，与模型组比较^##P<0.01，与模型组比较^*P<0.05.^**P<0.01.

实施例4：

普洱熟茶标准提取物PRC-001抗脂质过氧化作用：

1)小鼠肝匀浆的制备及氧化

健康雄性ICR小鼠断头放血处死，立即开腹取出肝脏，4℃预冷生理盐水洗净，滤纸吸干水分，称重，用玻璃匀浆器制备0.7％生理盐水肝匀浆，用Fe²⁺—半胱光氨酸(cys)反应系统产生氧自由基激发脂质过氧化反应，用硫代巴比妥酸显色法(TBA法)测定反应终产物中丙二醛(MDA)含量，在加入Fe²⁺和cys前在反应系统先加入不同浓度普洱熟茶标准提取物，维生素E为阳性对照，观察其对脂质过氧化反应过程中MDA生成的影响。以相同容积溶媒为空白对照，计算供试样品氧化抑制率。

普洱熟茶标准提取物PRC-001与阳性对照体外抗氧化活性比较见表5，在终浓度为21.5mg/L，受试组均有十分显著的抑制脂质过氧化作用。

      表5  普洱熟茶标准提取物PRC-001对小鼠肝匀浆脂质过氧化的影响

空白对照MDA浓度为3.11±0.38nmol/mg组织。

2)小鼠脂质过氧化损伤及普洱熟茶标准提取物PRC-001体内抗氧化作用

损伤模型复制：选用雄性ICR小鼠40只，体重18-24g，按体重随机分为4组，分组及给样品剂量同前，连续给受式样品或溶媒16天，第16天在禁食12h以上条件下尾静脉注射四氧嘧啶65mg/kg体重，注射后1h恢复进食，继续给受式样品至实验第21天。眼框取空腹血分离血清，进行相关指标测定。静脉注射四氧嘧啶成功复制出小鼠自由基损伤模型，表现为模型对照组血清脂质过氧化产物MDA浓度较正常对照组显著升高，SOD活性显著降低(P<0.01).

血清MDA及SOD测定

血清MDA测定采用硫代巴比妥酸显色法(TBA法)，SOD测定用黄嘌呤氧化酶法，选用南京建成生物工程研究所提供的测试盒，操作按试剂盒说明书规定程序进行。

普洱熟茶标准提取物PRC-001对静脉注射四氧嘧啶所致小鼠脂质过氧化损伤的影响结果见表6，提示试验组动物血清MDA水平较模型组显著降低，SOD活性显著升高，表明普洱熟茶标准提取物对四氧嘧啶所诱发的小鼠自由基损伤有显著对抗作用。

  表6  普洱熟茶提取物PRC-001对小鼠血清MDA、SOD水平的影响

n＝10，x±s，与模型组比^**P<0.01，与正常组比^△△P<0.01.

实施例5：

含有普洱熟茶标准提取物PRC-001的美白霜配方(W％)

普洱熟茶标准提取物PRC-001                 0.05

硬脂酸                                    8.0

C16醇                                     2.0

自乳化单甘酯                              2.0

氢化羊毛脂                                2.0

液体石蜡                                  12.0

甘油                                      7.0

乳化剂                                    1.5

防腐剂                                    0.2

香精                                      0.2

去离子水                                  加至100

按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。

实施例6：含有普洱熟茶标准提取物PRC-001的乳剂配方(W％)

普洱熟茶标准提取物PRC-001                0.05

硬脂酸                                   1.4

鲸蜡醇                                   0.1

2-乙基醇鲸蜡基硬脂酸酯                   1.8

肉豆蔻酸异丙酯                           0.2

2-己基-1-癸醇                            1.0

液体石蜡                                 7.5

甘油                                     3.0

丙二醇                                 8.0

三乙醇胺                               1.0

羧乙烯基聚合物                         0.35

Arlacel 165                            2.0

防腐剂                                 0.2

香精                                   0.2

去离子水                               加至100

按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。

实施例7：

含有普洱熟茶标准提取物PRC-001的乳酸菌饮料配方(W％)

普洱熟茶标准提取物PRC-001                   0.05

发酵乳                                      15

果糖葡萄糖液精                              13

柠檬酸                                      0.08

果胶                                        0.5

香精                                        0.2

去离子水                                    加至100

按常规制作食品的方法制得本发明的上述饮料。

实施例8：

含有普洱熟茶标准提取物PRC-001的片剂配方：

片剂：实施例1所得普洱熟茶标准提取物PRC-00110mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg；

制备方法：将普洱熟茶标准提取物PRC-001、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。

实施例9：

含有普洱熟茶标准提取物PRC-001的胶囊剂配方

胶囊剂：实施例1所得普洱熟茶标准提取物PRC-00110mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg；

制备方法：将普洱熟茶标准提取物PRC-001与助剂混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为10mg。

Claims (17)

1、一种普洱熟茶标准提取物PRC-001，其特征在于以普洱熟茶为原料用下述方法制得：取普洱熟茶，用水加热提取，过滤，柱层析分离，浓缩，干燥，即得到普洱熟茶标准提取物PRC-001。

2、如权利要求1所述的普洱熟茶标准提取物，其特征在于将普洱熟茶加入10倍量的水加热提取三次，每次30分钟，过滤、合并滤液得普洱熟茶水提取液；将水提取液放置，冷却后过滤，滤液通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂层析柱进行分离；大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10，以水及含水低级醇，如：乙醇、甲醇、丙醇、丁醇等梯度洗脱，同时用硅胶薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：以2:7:1的苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，5％的三氯化铁乙醇液为显色剂；收集富含多酚的洗脱液，浓缩，干燥，得普洱熟茶标准提取物PRC-001。

3、如权利要求1所述的普洱熟茶标准提取物，其特征在于所述的普洱熟茶系由大叶茶(Camellia sinensis var.assamica)制备的晒青毛茶经后发酵生产的普洱熟茶。

4、如权利要求1所述的普洱熟茶标准提取物，其特征在于大孔吸附树脂柱层析用的填充剂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂，包括但不限于D-101，DA-201，D1400，CAD-40，ADS-5，HPD-500，DM130，XAD-2，XAD-4，Diaion，AB-8；大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10。

5、如权利要求1所述的普洱茶标准提取物，其特征在于其咖啡因含量小于或等于1％，用高压液相色谱法进行咖啡因的含量检测。

6、如权利要求1所述的普洱茶标准提取物，其特征在于其没食子酸的含量为10-12％，用高压液相色谱法进行没食子酸的含量检测。

7、如权利要求1所述的普洱茶标准提取物，其特征在于其茶多酚的含量大于或等于15-23％，采用分光光度法进行茶多酚的含量检测。

8、如权利要求1所述的普洱茶标准提取物，其特征在于干燥方法可选用减压干燥、加热干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。

9、如权利要求1所述的普洱茶标准提取物，其特征在于普洱茶标准提取物PRC-001具有降低血清胆固醇、降低脂质过氧化、升高超氧化歧化酶(SOD)活性、促进肠胃消化、降低血糖、抗衰老、增强免疫功能、安全、无毒副作用。

10、普洱茶标准提取物PRC-001的制备方法，其特征在于将普洱茶加入10倍量的水加热提取三次，每次30分钟，过滤、合并滤液得普洱茶水提取液；将水提取液放置冷却后过滤，将滤液过聚苯乙烯型大孔吸附树脂D-101层析柱，大孔吸附树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10，以水及含水低级醇乙醇或甲醇或丙醇或丁醇梯度洗脱；观察洗脱液颜色由棕红色到无色，同时用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：以2:7:1的苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，5％的三氯化铁乙醇液为显色剂，收集富含多酚等水溶性有效物质部位的洗脱液；洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，得普洱茶标准提取物PRC-001。

11、化妆品组合物，含有普洱茶标准提取物PRC-001和常用载体。

12、如权利要求11所示的组合物中，常用载体选自胶凝剂、防腐剂、乳化剂、润湿剂、维生素、防晒剂、紫外线吸收剂、消炎剂、抗氧化剂、经皮吸收促进剂、表面活性剂、植物油脂、脂肪物质、香料、高级醇类、颜料、填料和水的组分中至少一种。

13、食品组合物，其中含有普洱茶标准提取物PRC-001和食品常用辅助剂。

14、如权利要求13所示的组合物中，辅助剂选自葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、维生素、果胶、柠檬酸、苹果酸、乳酸、抗氧化剂、香料和水的组分中至少一种。

15、药品组合物，其中含有普洱茶标准提取物PRC-001和药品常用载体。

16、普洱茶标准提取物PRC-001在制备减肥、调节血脂、抗氧化、抗衰老保健食品中的应用。

17、普洱茶标准提取物PRC-001在制备饮料、医药品、功能性化妆品中的应用。