KR101168169B1 - 복분자유 조성물, 이의 용도 및 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 공액리놀레산을 함유하는 복분자유 조성물, 이의 용도 및 제조방법에 관한 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류(ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산, 올레산 및 리놀레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 함유하는 복분자유를 포함하는 조성물, 이의 용도 및 그 제조방법에 관한 것이다.

Description

복분자유 조성물, 이의 용도 및 제조방법{Rubus coreanus Miquel oil composition, use and preparation method thereof}

본 발명은 공액리놀레산을 함유하는 복분자유 조성물, 이의 용도 및 제조방법에 관한 것으로서, 상기 조성물은 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류(ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산 및 올레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 함유할 수 있으며, 항산화, 항노화, 항비만 또는 항아토피 효과를 갖는다. 또한, 본 발명은 활성을 갖는 물질이 고함량으로 포함된 복분자유를 수득하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

복분자(Rubus coreanus Miquel, Korean black berry)는 장미과에 속하며, 동의보감에서는 보간신, 명목, 이뇨, 정력증강 효과가 있다고 알려져 있다. 최근 복분자 열매는 식품 또는 음료의 첨가제나 주조에 많이 사용되고 있다.

우리나라 농가에서 경쟁적으로 재배되는 복분자는 주로 냉동열매로 소량 판매하거나 농축액으로 판매하며, 원액의 수율을 높이고 살균을 동시에 하기 위하여 소규모 영농조합에서는 탱크시설에서 물:복분자를 1:1의 비율로 넣고 100 ℃ 이상으로 끓여 농축액을 열수 추출하는 방법을 사용한다. 그러나, 이러한 열수추출방법은 복분자 중의 비타민 성분을 파괴시킨다는 문제점이 있다. 또한, 복분자씨를 포함한 잔사는 대부분 버려지고 있는 실정이다.

일반적으로 복분자의 물 또는 유기용매 추출물이 항암, 항우울증 치료에 사용되는 약학 조성물이 보고된 바 있으나(각각 한국특허공개공보 10-2005-0113290호 및 한국특허공개공보 10-2007-0108724호), 항산화 활성이 있는 엘라그산 등에 대해 시사하고 있지 아니하며, 복분자씨에 대해서도 개시하고 있지 아니하다.

또한, 한국특허출원 10-2006-0033340호는 복분자로부터 항산화 활성 물질을 분리하는 방법에 대한 발명이나, 열수 추출법을 사용하고 있다는 한계가 있으며, 복분자씨의 이용 및 본 발명의 항산화 물질들의 종류에 대해 개시하고 있지 않다.

이에, 본 발명자는 복분자 항산화 유기활성 성분을 연구하던 중, 복분자씨에서 추출한 복분자유 중에 다량의 공액리놀레산이 존재한다는 것을 최초로 발견하였고, 이 밖에도 엘라지탄닌류 및 알레그산과 같은 활성성분이 다량 존재한다는 것을 발견하였으며, 이들 활성 성분의 파괴를 최소화하는 추출방법을 도출함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 공액리놀레산을 함유하는 복분자유 조성물, 그 용도 및 제조방법을 제공하기 위한 것으로서, 상기 조성물은 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류(ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산 및 올레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 함유하는 복분자유를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 우리나라에서 많이 재배되고 있는 복분자로부터 복분자유를 추출하여 항산화, 항노화, 항비만 또는 항아토피 활성을 갖는 물질이 고함량으로 포함된 복분자유를 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한, 복분자씨로부터 상기 활성 성분이 고함량으로 포함된 복분자유를 추출하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 공액리놀레산을 함유하는 복분자유를 포함하는 조성물을 그 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류(ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산 및 올레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 함유하는 복분자유 조성물을 제공함으로써, 항산화, 항노화, 항비만 또는 항아토피 효과가 우수한 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 복분자씨를 냉압착법, 온압착법, 저온압착법 및 용매 추출법으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 추출법을 수행하여 공액리놀레산(CLA)을 포함하는 복분자유을 추출하는 방법을 제공함으로써 상기 활성성분이 고함량으로 포함된 복분자유를 수득할 수 있다.

또한, 본 발명에서는 상기 공액리놀레산(CLA)을 포함하는 복분자유 조성물을 포함하는 건강기능식품, 식품, 화장품, 산화방지제, 노화 또는 아토피 예방 및 치료용 약제, 비만 예방 및 치료용 약제를 제공할 수 있다.

본 발명은 복분자로부터 항산화, 항노화, 항비만 또는 항아토피 활성을 갖는 물질이 고함량으로 포함된 복분자유를 추출하여, 이를 산화작용으로 인한 질환, 아토피 질환 등의 예방 및 치료에 사용될 수 있으며, 종래 복분자로부터 과즙을 추출한 후 남은 잔사와 함께 버려지던 복분자씨로부터 항산화 활성을 갖는 정유성분을 추출하여 활용함으로써 자원 낭비를 줄일 수 있다는 장점이 있다.

도 1은 종래 복분자 헥산 추출물(복분자 A), 실시예 2의 복분자유(복분자 B) 및 포도씨유 중의 지방산 성분을 분석한 결과이다 [PA: 팔미트산, ST: 스테아르산, OA: 올레산, LA: 리놀레산, LNA: 리놀렌산, CLA: 공액리놀레산].
도 2는 DPPH 분석 결과를 도시한 것이다.
도 3은 MTT 실험 결과를 도시한 것이다.
도 4는 MMP-1 저해효과 실험 결과를 도시한 것이다.
도 5는 베타헥소아미나디아제 유도제(A23187) 10μM, 실시예 2의 복분자유 각 농도군 및 대조군의 β-헥소아미니다아제 방출율을 측정한 결과를 도시한 것이다.

본 발명은 공액리놀레산(conjugated linoleic acid, CLA)을 함유하는 복분자유 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서, 복분자유 중 총 지방산의 함량을 기준으로, 공액리놀레산의 함량이 5 내지 30 중량%인 것을 특징으로 하며, 보다 구체적으로 그 함량은 10 내지 25 중량%일 수 있다.

본 발명에서, 상기 조성물은 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류 (ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산 및 올레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 함유하는 복분자유를 포함할 수 있으며, 이 밖에도 단백질, 식이섬유를 함유할 수 있다.

특히, 본 발명의 복분자유 조성물은 공액리놀레산 5 ~ 30 중량%, 팔미트산 0.8 ~ 3 중량%, 스테아르산 0.5 ~ 1.5 중량%, 올레산 5 ~ 15 중량%, 리놀레산 35 ~ 65 중량%, 리놀렌산 15 ~ 35 중량%을 함유하는 것이 보다 바람직하다.

본 발명에서, 상기 복분자유는 복분자씨로부터 추출될 수 있으며, 특히 복분자유는 복분자를 착즙하고 남은 잔사 중의 복분자씨로부터 분리될 수 있다.

공액리놀레산은 항암, 항동맥경화, 항비만, 항염증 및 항산화 작용에 대하여 보고된 바 있으며, 특히 비만세포 분화 억제효과 및 체지방량 감소에 도움을 주는 것으로 알려져 있으나, 복분자로부터 상기 성분이 검출된 것은 이번이 최초이다.

오메가-3는 오메가-3 지방산이라고도 불리며, 불포화지방산에 속한다. α-리놀렌산(ALA), 에이코사펜타노산(EPA) 및 도코사헥사에노산(DHA) 성분 등이 포함된다. 항산화활성, 항암활성, 심혈관계 질환의 예방 또는 치료 효능, 면역력 증강, 뇌기능 개선, 퇴행성 관절염의 예방 또는 치료 등에 유효한 성분으로 알려져 있다.

오메가-6는 오메가-6 지방산이라고도 불리며, 리놀레산, 감마-리놀레산, 아라키돈산 성분 등이 포함된다. 세포막의 생합성, 혈관, 면역체계 등의 생리조절 등에 관여하는 성분으로 알려져 있으며, 혈액 내의 콜리스테롤치를 낮추어 심장질환의 발병위험을 낮출 수 있으며, 면역 증강효과, 혈당 조절효과, 비만 예방 효과, 노화 예방 효과, 피부건강 유지 효과가 있다.

엘라지탄닌류(ellagitannins)는 항산화 효과, 간기능 개선 효과, 항암 효과, 피부 보호 효과, 항알러지 효과를 갖는 성분군의 하나로 알려져 있다.

엘라그산(ellagic acid)은 폴리페놀 4개의 링으로 구성되어 있으며, 식물체 내에서는 전구물질인 엘라지탄닌 형태로 존재한다. 항산화, 항바이러스, 항돌연변이, 항암기능을 가지고 있으며, 유방 및 식도, 피부, 결장, 전립선과 췌장에서의 암세포 활동을 억제하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서, 상기 조성물은 항산화, 항노화 또는 항아토피 효능을 갖는다. 또한, CLA의 항비만 효과가 알려져 있으므로 항비만 효과도 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 복분자유로부터 추출되고, 공액리놀레산(conjugated linoleic acid, CLA)을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 항산화, 항노화, 항비만 또는 항아토피 효능을 갖는다.

본 발명은 복분자씨를 냉압착법, 온압착법, 저온압착법 및 용매 추출법으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 추출법을 수행하여 공액리놀레산(CLA)을 포함하는 복분자유을 추출하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에서, 냉압착법이란 열을 가할 때 흘러나오는 씨를 열처리 하지 않고 바로 압착하여 기름을 얻는 방법으로 열을 가할 때 색소, 방향, 및 검(Gum)질 등이 기름 안에 흘러 나와 기름의 빛깔이 진하고 맛이 나쁠 때가 있으므로 좋은 기름을 얻기 위해 파쇄한 것을 열처리하지 않고 곧 압착하는 방법이며, 온압착법이란, 100 ~ 250 ℃의 고온에서 볶은 후 쪄서 압착하는 방법이고, 저온압착법이란, 43 ℃ 이하로 압착하여 기름을 짜내는 방법이다. 또한, 상기 용매 추출법은 n-헥산 등의 용매를 사용하여 추출하는 방법이다.

본 발명에서, 복분자(Rubus coreanum fruit) 10 중량부당 5 내지 100 중량부의 물을 넣고 착즙하여 과즙을 수득하며, 착즙 후의 잔사를 압착하여 추가로 과즙을 얻을 수 있다. 상기 수득된 과즙을 감압 농축하여 용매 성분을 제거한 후, 건조시켜 복분자씨를 분리한 후 이를 체 등을 이용하여 분리하였으며, 이를 원심분리하여 복분자씨만을 분리할 수 있다. 상기 복분자씨를 오일러버형 또는 익스펠라형의 착유기를 사용하여 80 ~ 150 ℃ (보다 바람직하기로는 100 ~ 130 ℃)에서 5 ~ 40분간 압착하여 공액리놀레산을 포함하는 복분자유를 얻을 수 있다.

본 발명의 공액리놀레산을 포함하는 복분자유 조성물은 천연물 유래의 물질로서 독성 및 부작용이 거의 없다.

본 발명은 복분자유 조성물을 유효성분으로 함유하는 노화 또는 아토피 예방 및 치료용 약제, 산화방지제, 비만 예방 및 치료용 약제를 제공한다.

본 발명에 따른 약제는, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 복분자유를 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에이스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 웨텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 또한, 비경구적으로 국소 적용할 수 있는 연고제, 액제, 패취제, 드레싱제, 스프레이제 등과 같은 피부외용제 형태로 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 공액리놀레산이 함유된 복분자유 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 복분자유 조성물은 1일 0.0001 내지 200 ㎎/㎏, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 복분자유 조성물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 상기 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 첨가할 수 있다. 상기 건강기능식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

이때, 건강기능식품 중의 복분자유의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 20 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 15 g, 바람직하게는 5 내지 12 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 복분자유 조성물을 함유하는 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 솔비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제인 타우마틴, 스테비아 추출물, 예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등; 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등을 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 2 g, 바람직하게는 약 1 내지 1.5 g이다.

상기 외에 본 발명의 복분자유 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 복분자유은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이때, 첨가제의 비율은 그다지 중요하지는 않지만 본 발명의 복분자유 100 중량부 당 0.1 내지 약 30 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 복분자유 조성물을 유효성분으로 함유하는 화장품을 제공한다.

상기 화장품의 경우, 복분자유를 기초제품 화장료(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 비누), 바디제품 화장료(바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 비누), 색조제품 화장료(파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발제품 화장료(샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤) 등에 화장료의 건조중량에 대하여 0.05 ? 20.0 중량% 함량으로 배합하여 사용할 수 있다.

이하, 본 발명에 따르는 실시예 및 본 발명에 따르지 않는 비교예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 제시된 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

< 제조예 1> 복분자씨 분리

전라북도 고창지역에서 재배된 복분자 과실(Rubus coreanum fruit) 1 kg을 물 1 kg에 넣고 상온에서 2시간 동안 1차 착즙하여 과즙을 800 g 수득하였다. 1차 착즙 후의 잔사를 진액압착기에 넣고 압착하여 복분자 농축액을 100 g 추가로 수득하였다.

1차 착즙 후의 잔사 및 압착 후의 잔사를 모아 진공회전 농축기로 감압 농축하여 용매 성분을 제거한 후, 열풍 건조시켜 복분자씨를 분리한 후 이를 체 진동기에 넣고 직경 0.1 mm 체에 털어 분리하였으며, 이를 다시 원심분리기에 넣고 3000 rpm에서 20분 동안 원심분리하여 복분자씨만을 분리하였다(100 g).

< 실시예 1> 복분자유 제조

복분자씨 20 kg을 온도 센서가 장착된 엑스펠라형 착유기에 넣고 자동온도조절기를 120 ℃에서 맞춰놓고 예열하였다. 복분자씨를 호퍼에 밀어넣고 착유기를 20분간 압착하여 공액리놀레산을 함유하는 복분자유 2 kg을 추출하였다(수율 10%).

< 실시예 2> 복분자유 - 헥산 추출 제조

복분자씨 20 kg을 그라인더로 3000 rpm에서 분쇄 후 n-헥산을 첨가하고 잘 흔들어 주었다. 24시간 후에 45 ℃에서 1시간 동안 감압농축기로 감압 농축 후 증발 건조시켜 공액리놀레산을 함유하는 복분자유 헥산 추출물 1.9 kg을 수득하였다(수율: 9.5%).

< 실험예 1> 복분자유의 성분 분석

기존 복분자 헥산 추출물[Bioresource Technology 99 "Characterization of seed oils from fresh Bokbunja(Rubus coreanus Miq.) and wine processing waste" (2008) 2852-2856, 비교예 1], 실시예 1에서 수득된 복분자유, 실시예 2에서 수득된 복분자유-헥산 추출 및 포도씨유에 대하여 가스 크로마토그래피법을 이용하여 성분 분석을 실시하였으며, 그 결과는 표 1과 도 1에 나타내었다.

상세한 가스크로마토그래피 조건 및 실험과정은 하기와 같다:

지방산 분석에 사용된 컬럼은 수펠코왁스-10 퓨즈드 실리카 캐필러리 컬럼(Supelcowax-10 fused silica capillary column, 100m X 0.25 mm i.d., 0.2 μm 필름 두께; Supelco, Inc., Bellefonte, PA, USA)을 사용하였으며 가스 속도(helium)는 1.2 mL/min로 흘려주었다.

컬럼 오븐의 온도는 190 ℃부터 240 ℃까지 분당 4 ℃씩 올려주었다. 시료의 인젝터(투입부, injector)와 검출부(detector)의 온도는 260 ℃로 맞춰주었다. 시료의 투입은 1 μL를 넣어주고 시료 시료는 1/50만 컬럼 내로 들어가게 설정하여 진행하였다.

복분자유의 성분 분석 결과

구분(중량%)	비교예 1	실시예 1	실시예 2
팔미트산(C16:0)	1.55±0.04	1.92	1.97±0.03
팔미트올레산	-	0.05	-
스테아르산(C18:0)	0.65±0.03	0.81	0.81±0.05
올레산(C18:1)	8.04±0.2	8.95	8.95±0.15
리놀레산(C18:2)	53.18±1.03	42.84	52.84±0.90
리놀렌산(C18:3)	29.36±0.53	20.6±0.34	20.09±0.34
감마리놀레산	-	0.03	-
9,11-CLA	-	24.8	14.72±0.02

< 실험예 2> 항산화 활성 실험

가. DPPH 분석

복분자유의 항산화력을 측정하기 위하여 DPPH 분석을 진행하였다. 복분자유의 농도에 따른 항산화능을 측정하기 위하여, 아스코르브산 100μg/mL, 실시예 1의 복분자씨유 10μg/mL, 100μg/mL, 1000μg/mL, 실시예 2의 복분자씨유(헥산 추출) 10μg/mL, 100μg/mL, 1000μg/mL로 샘플을 준비하고, 96-웰 프레이트에 상기 샘플을 10 μL씩 넣은 후, 거기에 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 시약을 190 μL씩 첨가하였다. 그 후 ELISA 515nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 대부분의 샘플에서 DPPH가 20% 이상 감소하였다 (도 2 참조).

나. 활성산소 소거능(Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) value) 측정

복분자유의 활성산소 소거능 측정 결과는 하기 표 2에 나타낸 바와 같으며, 활성산소 소거능이 우수함을 알 수 있다.

검체	ORAC value(μ㏖ TE/100g)
대조군(딸기.strawberry)	3,577
실시예 1 (복분자유 추출물)	5,347
브로콜리 (Broccoli)	3,083

< 실험예 3> 항노화 실험

가. MTT 실험

세포 생존도(Cell viability)를 측정하는 실험으로 황색 테트라졸리움 염 MTT(yellow tetrazolium salt MTT)는 살아있는 세포에서 물에 녹지 않는 포르마잔 결정(formazan crystal)으로 환원되는데, 이 결정을 나중에 DMSO로 녹여서 생성된 크리스탈의 양을 분광학적인 방법(Spectroscopic method)으로 측정하였다. 결국, 살아있는 세포의 수가 많을수록 이 결정의 생성도 많아지므로 이러한 방법을 통해 세포의 생존도를 쉽게 측정할 수 있다.

우선, HS68(human dermal fibroblast) 세포를 12-웰 플레이트에 2 X 10⁵로 깔아놓은 후 각 웰에 MTT 용액 400 ul를 넣고 37 ℃ CO₂ 인큐베이터에서 2시간 반에서 3시간 가량 두었다(복분자유 추출물은 0, 1, 5, 10, 50, 100μg/mL 농도로 실험하였음). 그 후, 배지를 제거하고 여기에 DMSO를 500 ul 넣었다. 파이펫팅으로 잘 섞어준 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 3 참조).

나. 콜라겐 분해효소 MMP-1(Proteins of the matrix metalloproteinase) 저해효과 측정

웨스턴 블롯(Western blot)을 이용하여 측정하였으며, 세포주로는 인간 피부 섬유아세포인 HS68을 사용하였고, 측정샘플로는 실시예 1의 복분자씨유를 사용하였다. 구체적으로는, 24시간 동안 샘플 처리한 세포들을 배양하여 세포를 모으고, 브래드포드 어세이(Bradford assay)로 단백질을 정량하여 러닝시 로딩할 값을 결정하였다. 러닝은 스택킹 겔(stacking gel)에서는 85V로 내리다가 세퍼레이팅 겔(separating gel)에서는 100V로 2시간 정도 내렸다. 그 후 100V는 1시간 반, 110V는 1시간으로 조건을 잡아 러닝된 겔을 막으로 트랜스퍼 시켰다. 이 트랜스퍼 된 막을 MMP 54 내지 55 kD 사이즈에 맞춰 적당한 크기로 자른 후, 스킴 밀크로 블로킹을 1시간 진행하였다. 그 후 스킴 밀크에 MMP-1에 대한 항체를 1:1000으로 넣고 최소 5시간 가량 바인딩하였다. 그 과정이 끝난 후 TBST로 3번씩 10분간 세척하고, ANTI-마우스 항체를 2시간 가량 붙였다. 그 후 동일하게 TBST(mixture of tris-buffered saline and Tween 20)로 3번씩 10분간 세척하고, LAS기계를 이용해 밴드를 확인하였다.

그 결과, 실시예 1의 복분자유에서 MMP-1 감소 효과가 우수한 것으로 나타났다[도 4 참조].

< 실험예 4> 항아토피 실험 -β- 헥소아미니다아제 저해효과 측정

실시예 2의 복분자유 5, 10, 25, 50, 100 μg/mL을 샘플로 하여 β-헥소아미니다아제　저해 효과를 다음과 같이 확인하였다.

세포에 β-헥소아미니다아제 유도제인 A23187을 처리하면 세포 안으로 칼슘이온이 들어오게 되고, 세포 내에서 β-헥소아미니다아제가 배지로 분비된다.

P-NAG 기질을 처리하여 분비된 β-헥소아미니다아제 효소와 결합하도록 하였다.

종결 버퍼(Na₂CO₃ 또는 NaHCO₃) 0.1 mol 헥사아미드 효소반응으로 1시간 처리 후 ELISA로 400 nm에서 흡광도를 측정하였다[도 5 참조].

그 결과, 복분자유의 경우 100 μg/mL에서 β-헥소아미니다아제 방출이 30% 이상 감소하는 것으로 나타났다.

제제예 1: 캅셀제의 제조

실시예 1의 복분자유 10 ㎎

결정성 셀룰로오스 3 ㎎

락토오스 14.8 ㎎

마그네슘 스테아레이트 2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 2: 주사제의 제조

실시예 1의 복분자유 10 ㎎

만니톨 180 ㎎

주사용 멸균 증류수 2794 ㎎

Na₂HPO₄12H₂O 26 ㎎

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플(2 ㎖)당 상기의 성분 함량으로 주사제를 제조하였다.

제제예 3: 연고제의 제조

실시예 1의 복분자유 5 g

세틸팔미테이트 20 g

세탄올 40 g

스테아릴알코올 40 g

미리스탄이소프로필 80 g

모노스테아린산 소르비탄 20 g

폴리솔베이트 60 g

파라옥시안식향산 프로필 1 g

파라옥시안식향산 메틸 1 g

인산 및 정제수 적량

통상의 연고제 제조방법에 따라 상기 성분으로 연고제를 제조하였다.

제제예 4: 건강 음료의 제조

실시예 1의 복분자유 10 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B1 0.25 g

비타민 B2 0.3 g

물 적량

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ의 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강 음료를 제조하였다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층이나 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

제제예 5: 에센스의 제조

실시예 1의 복분자유 10.0 mg

글리세린 3.0 mg

EDTA 0.05 mg

벤조페논-9 0.04 mg

카르복시비닐 폴리머 0.2 mg

트리에탄올아민 0.18 mg

옥시도테세스-25 0.6 mg

글리세릴모노스테아레이트 1.0 mg

방부제 0.01 mg

향료 0.01 mg

정제수 적량

통상의 에센스 제조방법에 따라 상기와 같은 조성으로 에센스를 제조하였다.

Claims (14)

1. 복분자 씨를 착유기로 80 ~ 150 ℃에서 5 ~ 40분간 압착하여 추출하며, 공액리놀레산(conjugated linoleic acid, CLA)을 함유하는 것을 특징으로 하는 복분자유 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   복분자유 중 총 지방산의 함량을 기준으로, 공액리놀레산의 함량이 5 내지 30 중량%인 것을 특징으로 하는 복분자유 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 오메가-3, 오메가-6, 엘라지탄닌류(ellagitannins), 엘라그산(ellagic acid), 팔미트산, 스테아르산 및 올레산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 함유하는 복분자유 조성물.
   
4. 삭제
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물이 항산화, 항노화 또는 항아토피 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 복분자유 조성물.
   
6. 복분자 씨를 착유기로 80 ~ 150 ℃에서 5 ~ 40분간 압착하여 공액리놀레산(CLA)을 포함하는 복분자유를 추출하는 것을 특징으로 하는 공액리놀레산(CLA)을 포함하는 복분자유의 제조방법.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 착유기는 오일러버형 또는 익스펠라형인 것을 특징으로 하는 복분자유의 제조방법.
   
8. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 건강기능식품.
   
9. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 식품.
   
10. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 산화방지제.
    
11. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 노화 예방 및 치료용 약제.
    
12. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 비만 예방 및 치료용 약제.
    
13. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 화장품.
14. 제1항, 제2항, 제3항 및 제5항 중에서 선택된 어느 한 항의 복분자유 조성물을 포함하는 아토피 예방 및 치료용 약제.

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