KR100706282B1 - 항산화 활성을 갖는 마름 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항산화 효과를 갖는 마름 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 마름 추출물은 노화 억제에 관여하는 항산화 활성의 증가와 유리 라디칼의 감소에 뛰어난 효능을 나타내므로, 동맥경화증과 같은 성인병 질환의 예방 및 치료에 효과적인 건강기능식품, 화장품 및 의약품에 유용하게 사용될 수 있다.

마름, 항산화, 건강기능식품, 의약품

Description

항산화 활성을 갖는 마름 추출물을 포함하는 조성물{Composition comprising an extract of Trapa japonica Flerov. showing antioxidative effect}

도 1은 마름 전체, 마름 껍질, 마름 과육 추출물의 각 농도별 항산화 활성을 나타낸 도이다.

본 발명은 항산화 활성을 갖는 마름 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.

2003년 한국인의 주요 사망요인은 암, 뇌혈관질환,심혈관질환, 당뇨병 순으로 나타났다(Korea National Statistical Office : The cause of death Statistics 2003. Annual Report of on the Cause of Death Statistics. Korea National Statistical Office, 2004). 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 심혈관질환, 당뇨병, 암, 퇴행성 신경병, 노화 등 만성퇴행성질환을 유발하는 주요 요인 이 될 수 있으며, 항산화물질은 만성퇴행성의 예방에 도움을 줄 수 있다고 알려져 있다(Bray, T.M. Nutrition. 16, pp578-581, 2000). 모든 호기성 유기체는 대사과정 중에서 필연적으로 해로운 활성 산소종을 수반하게 되므로, 이 활성 산소종을 제거하는 기작을 모든 유기체가 가지고 있어야 생존이 가능하다. 활성 산소종은 크게 과산화수소와 같이 산소 라디칼종을 형성하게 하는 화합물과 산소 라디칼종의 두가지로 분류될 수 있다. 이미 알려진 바와 같이, 과산화수소는 카탈라제(catalase)나 퍼록시다제(peroxidase)에 의해 산소나 물로 전환되나, 산소 라디칼종 제거 기작의 경우, O₂ ^-(superoxide anion)를 제거하는 기작 이외의 다른 산소 라디칼종 제거 기작은 아직 확실히 규명되지 않은 상태이다.

산소 라디칼종의 일종인 하이드록시 라디칼은 생명체 내에서 H₂O₂ 및 O₂ 의 반응에 의해 형성되며, 거의 모든 생체물질(biomolecules)에 존재하는 것으로 알려져 있다(Fridovich et al., Ann. Rev. Biochem., 44, pp147-159, 1975; Tauber et al., Blood, 53, pp666-676, 1979). 따라서, 생체내에서의 항상성을 유지하기 위해서는 필연적으로 반응성이 강한 하이드록시 라디칼에 대한 방어가 요구된다고 하는 것은 자명하다. 이러한 측면에서, 아스코르브산, 요산 등 유기물질은 화학반응으로 하이드록시 라디칼을 제거하는 것으로 알려져 있으나, 이는 근원적으로 하이드록시 라디칼을 제거하는 것이 아니라 반응성이 적은 라디칼로 변환시킴은 물론, 생체내에서 산화제로 철과 같은 전이금속과 반응하여 오히려 활성 산소 라디칼종의 생성을 촉진시킬 수 있는 것으로 보고되고 있다(Borg, DC and Schaich, KM, Handbook of Free Radicals and Antioxidant in Biomedicine, Vol. I, pp 63-80, CRC press, 1989). 인체 생리과정중 발생하는 활성산소(O₂ ^-, H₂O₂, OH 및 O ₂)는 반응성이 매우 강하여 이들에 의하여 야기되는 프리라디칼 반응은 지질을 포함한 주요 거대분자의 파괴효과를 나타낸다(Davies, KJA and Goldberg, AL, J. Biol. Chem., 262, p8220-8226, 1987). 이들은 정상적인 대사과정, 광증감반응, 약물대사과정 및 기타 세포대사의 이상을 초래하는 여러 요인에 의해 그 생성이 증가하며, 따라서 생체는 이들에 의하여 일어나는 프리라디칼 반응의 유해효과에 항상 노출되어 있다고 볼 수 있다(Morehouse, LA and Thomas, CE, J. Free Radicals Biol. Med., 1, p8, 1985). 특히 세포가 나이가 들어감에 따라 이들의 유해 라디칼에 의한 유해작용이 계속적으로 누적될 경우 발암, 동맥경화, 심장질환 및 피부노화 등 연령증가에 따른 여러 성인병과 관련된 질환은 물론 전반적인 세포의 노화를 야기하여 인간의 질병발생과 노화의 원인으로 제시되고 있다(Harman, D., Free Radicals in Biology, Academic Press, New York, pp255-275, 1982). 따라서 반응성 산소대사물에 의해 생체내 프리라디칼 반응을 억제시키거나 인체에 누적되어 있는 유해 활성산소를 제거함으로써, 지질대사, 면역질환 및 암 등의 질환 치료에 유용할 것으로 예상되는 후보물질을 찾고자 하는 연구들이 계속되어 왔다.

본 발명의 마름(Trapa japonica Flerov.)은 한국 전역에 분포하고 있는 수생식물로, 그 열매는 민간요법에서 위장병, 식도암, 자궁암, 당뇨병 등의 치료에 사용되어 왔으나(鄧元錐, 中草藥治療癌腫. 北京:藥要書刊, p103, 1976. 정보성, 원색 천연약물 대사전, 서울, 남성당, p271, 1984), 과학적으로 그 효능을 규명한 연구는 미비한 실정이며, 어떤 문헌에서도 마름 추출물의 항산화효과에 대해서는 어떠한 개시나 교시된 바 없다.

이에 본 연구자들은 다양한 용매를 사용하여 마름 추출액을 제조하여, 항산화효소 활성을 측정한 결과, 항산화활성이 우수하여 만성퇴행성 질환의 예방에 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 뛰어난 항산화활성을 갖는 마름 추출물을 제조하여 천연항산화 조성물 및 건강기능식품을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 현저한 항산화 효과를 갖는 마름(Trapa japonica Flerov.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.

상기 추출물은 물, 에탄올, 메탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급알콜 또는 이들의 혼합용매로부터 추출한 것을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 마름 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 마름을 구입하여, 동결건조하여 마쇄한 후 마름 시료 중량의 약 2 내지 15배, 바람직하게는 약 5 내지 10배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 70 내지 100%의 메탄올로 실온에서 약 1시간 내지 1일, 바람직하게는 6시간 내지 12시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 열수추출하여 감압여과에 의해 추출액과 잔사를 분리한 다음, 얻어진 잔사에 추출 시작 당시의 마름 시료 중량의 약 2 내지 10배, 바람직하게는 약 3 내지 5배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 70 내지 100%의 메탄올로 실온에서 약 1시간 내지 5시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 열수추출한 후 감압여과 및 농축하여 마름 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed., pp6-7, 1998).

본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 마름 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체 및 부형제를 포함하는 약학 조성물 및 화장품학적으로 허용가능한 기제를 포함하는 화장용 조성물을 포함한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

상기와 같은 방법으로 얻어진 마름 추출물의 유리자유기 소거능을 측정한 결과, 표준물질인 L-아스코르브산(L-ascorbic acid)과 유사한 항산화능을 나타내었다.

또한, 마름은 오랫동안 식용되거나 생약으로 사용되어 오던 약재로서 이로부터 추출된 본 발명의 추출물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.

본 발명의 항산화제 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.02 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 제조방법에 따라 얻어진 마름 추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 활성성분으로 포함하는 주름 생성 억제 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 마름 추출물을 포함하는 조성물은 피부노화방지 효과를 위한 화장품, 세안제 및 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 또는 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 피부노화방지 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 항산화 효과를 나타내는 상기 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 마름 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 항산화 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사 카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 마름 메탄올 추출물의 제조

마름을 동결건조하여 마쇄한 후, 마름 시료 중량의 10배에 해당하는 100% 메탄올을 첨가하여 12시간 동안 자석교반기를 이용하여 추출하였다. 감압여과하여 추출액과 잔사를 분리한 다음 얻어진 잔사에 추출 시작 당시의 마름 중량의 5배에 해당하는 100% 메탄올을 첨가하여 6시간 동안 자석교반기를 이용하여 추출하였다. 다시 감압여과한 후, 얻어진 잔사에 추출 시작 당시의 마름 중량의 3배에 해당하는 100% 메탄올을 첨가하여 3시간 동안 자석교반기를 이용하여 추출한 다음 감압여과 및 농축하여 최종 마름 메탄올 추출액을 수득하였다(수득율 17.6%).

실시예 2. 마름 아세톤 추출물의 제조

상기 실시예 1에서 추출용매를 아세톤으로 대체하고, 실시예 1의 제조 공정과 유사한 공정을 통하여 마름 아세톤 추출액을 수득하였다(수득율 19.8%)

실시예 3. 마름 에탄올 추출물의 제조

상기 실시예 1에서 추출용매를 에탄올로 대체하고, 실시예 1의 제조 공정과 유사한 공정을 통하여 마름 에탄올 추출액을 수득하였다(수득율 18.9%)

실시예 4. 마름 물 추출물의 제조

상기 실시예 1에서 추출용매를 물로 대체하고, 실시예 1의 제조 공정과 유사한 공정을 통하여 마름 물 추출액을 수득하였다(수득율 16.4%)

실험예 1. 시험관내 DPPH 법에 의한 항산화 활성 측정

마름 추출물의 시험관내(In vitro) 항산화 효과 측정을 위해 DPPH법(Blois, M. S. : Antioxidant determination by the use of a stable free radical, Nature, 26, 1199-1200, 1958)을 이용하였다.

DPPH(1,1- diphenyl picrylhydrazyl)법은 토코페롤(tocopherol), 아스코베이트(ascorbate), 플라보노이드(flavonoid) 화합물, 방향족 아민류, 마일라드(Maillard)형 갈변 생성물질, 펩티드 등의 항산화활성을 나타내는 생리활성물질에 의해 환원됨으로써 짙은자색이 탈색되는 정도에 따라 항산화 효과를 수소공여능으로 측정하는 방법으로서, 표준품으로는 L-아스코르브산을 사용하였으며, 각 시료에 2 x 10^-4 M DPPH를 넣고 517nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 마름의 물, 메탄올, 70% 에탄올, 아세톤 추출물의 DPPH 자유기 소거능은 0.05 g/L농도에서 각각 89.9%, 93.1%, 92.0%, 93.3%로 나타났으며, 표준품으로 사용한 L-아스코르브산의 활성은 96.3%로 나타났다(표 1 참조).

시료 및 표준품	DPPH 자유기 소거능
물 추출물	89.9%
메탄올 추출물	93.1%
70% 에탄올 추출물	92.0%
아세톤 추출물	93.3%
L-아스코르브산	96.3%

한편, 마름 전체, 껍질 및 과육 메탄올 추출액의 농도별 DPPH을 이용한 수소공여능을 도 1에 나타내었다. 마름 추출물의 DPPH 자유기 소거능은 0.05 g/L농도에서 각각 전체, 껍질, 과육 추출물이 각각 94.1%, 93.4%, 5.9%로 나타났으며, 표준품으로 사용한 L-아스코르브산의 활성은 95.9%로 나타났다. 마름 전체 메탄올 추출액의 DPPH 자유기 소거능은 0.025, 0.01 g/L 농도에서 각각 73.6%, 21.2%로 나타났으며, 마름 껍질 메탄올 추출액의 DPPH 자유기 소거능은 0.025, 0.01 g/L 농도에서 각각 72.3%, 32.3%로 나타나, 마름의 항산화물질은 껍질에 집중되어 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 2. 성인병 및 노화억제 실험

본 발명의 마름 추출물들의 노화방지에 대한 치료 효능을 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

본 동물실험에서 사용한 실험동물은 성인병 및 노화억제 실험을 위하여 4주령의 스프라그-도울리(Sprague-Dawley)계 흰쥐(120±10g ♂, 대구효창사이언스)를 사용하여 4주동안 대조군은 물을, 실험군은 본 발명의 마름 추출액 상등액를 물대신 투여한 다음 혈액을 사용하여 강장효과에 대한 실험을 하였다.

본 실험에 사용한 시약으로는 모두 1급 이상의 시약을 사용하였고 관련 효소시약은 시그마제 특급시약을 사용하여 측정하였다.

2-1. 혈액의 채취 및 분리

실험동물을 에테르로 마취시킨 후, 심장에서부터 혈액을 분취하여 저온에서 2시간동안 방치하여 700xg에서 10분간 원심분리하여 상등액을 항응고제(sodium heparin)를 혈액 1.0㎖당 0.05㎖ 처리한 CBC병(compete blood cell count; 녹십자)에 넣고 -70℃에서 동결 보존하면서 분석에 사용하였다.

2-2. 활성산소 및 과산화 지질의 측정

활성산소중에서 가장 강력한 프리 라디칼(free radicals)로 알려진 히드록시 라디칼의 측정은 데옥시리보스(Deoxyribose)의 파괴 정도로 히드록시 라디칼 (hydroxyl radical) 생성 정도를 측정하는 방법으로서 반응성 산소대사물에 의해 데옥시리보스가 파괴되어 알데히드가 생성되며 이 알데히드는 산성용액에서 티오바비튜릭 산과 반응하여 발색되는 것을 이용한 문헌(Halliwell B and Gutteridge JMC, FEBS. Lett., 128, pp347-350, 1981)의 방법에 따라 측정하였다.

이들 활성산소(oxygen radicals)에 의해서 생성되는 것으로 알려진 혈청중의 과산화지질(lipid peroxide : LPO)의 함량은 문헌 (Choi JH and Yu BP, AGE, 13, pp61-64, 1990)에 기재된 바와 같이 측정하였다.

본 발명의 추출물을 실험 동물 SD계 흰쥐에 3주간 투여하여 노화방지효과에 미치는 자연산 마름 추출물의 영향을 알아본 결과, 표 2에서 보는 바와 같이 마름 추출물 투여그룹의 과산화지질(LPO)의 생성은 대조그룹 대비 19.8%나 과산화 지질의 생성을 효과적으로 억제하였다. 또한 활성산소(free radicals)중에서 가장 강 력한 활성산소인 히드록시 라디칼(hydroxyl radical)의 생성에 미치는 마름 추출물 투여의 영향을 비교하여 보면 23.4%나 현저히 억제됨을 알 수 있다.

항 목	대조그룹	마름 추출물	대조그룹대비
과산화지질(LPO) nmol/㎖혈청	2.32 ± 0.20	1.86 ± 0.09	-19.8%
히드록시 라디칼(-OH) nmol/mg 단백질	2.99 ± 0.26	2.29 ± 0.12	-23.4%
수퍼옥시드 디스무타아제 (SOD) unit/mg 단백질	0.89 ± 0.06	1.00 ± 0.07	+12.4%
글루타치온 퍼옥시다아제 (GSHPx) IU/mg 단백질	46.14 ± 2.71	53.59 ± 2.94	+16.2%

2-3. 수퍼옥사이드 디스무타제 활성의 측정

활성산소종의 제거효소로서 중요한 수퍼옥시드 디스무타제(SOD)활성의 측정은 참조 문헌(Oyanagui, Y, Anal. Biochem., 42, pp290-296, 1984)의 방법에 따라 정량하였다. 또한 생체내의 중요한 제거효소로서 340㎚에서 NADPH의 감소를 측정하기 위한 방법으로 혈청중의 글루타치온 퍼옥시다아제(glutathione peroxidase: GSHPx)의 활성을 측정하였다(Lawrence, RA and Burk, RF, Lipid, 19, pp444-452, 1978).

또한 이들 활성산소의 제거효소로서 수퍼옥시드 디스무타아제(SOD)의 활성 및 글루타치온 퍼옥시다아제 (GSHPx)의 활성에 미치는 본 발명의 마름 추출물의 투여효과를 비교하여 보면 각각 12.4%, 16.2%의 유의적인 SOD 및 GSHPx의 활성이 증가됨을 알 수 있다. 상기의 결과들로 인해, 마름 추출물의 투여가 노화과정을 효 과적으로 예방 및 방지할 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.

실험예 3. 급성독성실험

6 주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹당 2마리씩의 동물에 본 발명의 마름 추출물을 100㎎/㎏의 용량으로 1회 경구투여 하였다. 실험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 본 발명의 마름 추출물은 랫트에서 각각 100㎎/㎏ 까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)은 100㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

본 발명의 마름 추출물을 함유하는 약학조성물의 제제예 및 화장료 조성물의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

마름 추출물 분말 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

마름 추출물 분말 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

마름 추출물 분말 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

마름 추출물 분말 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO_4·12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

마름 추출물 분말 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

마름 추출물 분말 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

마름 추출물 분말 100 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B₁ 0.25 g

비타민 B₂ 0.3g

물 적량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

제조예 1. 마름 추출물을 함유한 화장료 중 유연 화장수(스킨)

마름 추출물을 함유한 화장료 중 유연 화장수(스킨)의 제조예를 표 3 에 나타내었다.

번호	원료 (중량%)	제형예	비교제형예
1	마름 추출물	2.0	-
2	글리세린	3.0	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0	2.0
5	폴리옥시에칠렌 경화 파마자유	1.0	1.0
6	에탄올	10.0	10.0
7	트리에탄올아민	0.1	0.1
8	방부제	미량	미량
9	색소	미량	미량
10	향료	미량	미량
11	정제수	잔량	잔량

<제조방법>

제형예 : 11번에 2, 3, 4 및 8번을 순서대로 투입하여 교반하여 용해시킨 후 5번을 60℃정도 가열하여 용해시킨후 10번을 투입 교반하여 11번에 투입한다. 마지막으로 1, 6, 7 및 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 마이크로플루다이져를 통과시킨 후 숙성시킨다.

비교제형예 : 11번에 2, 3, 4 및 8번을 순서대로 투입하여 교반하여 용해시킨 후 5번을 60℃정도 가열하여 용해시킨후 10번을 투입 교반하여 11번에 투입한다. 마지막으로 6, 7 및 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 마이크로플루다이져를 통과시킨 후 숙성시킨다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 마름 추출물은 우수한 항산화효과를 나타내는 바, 자유 라디칼(free radicals)에 의해 유발되는 세포손상에 의한 암, 동맥경화, 노화, 당뇨병의 발생 및 당뇨 합병증등의 개선효과를 나타낸다.

Claims (8)

1. 항산화 효과를 갖는 마름(Trapa japonica Flerov.) 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하고 약학적으로 허용되는 담체 및 부형제를 포함하는 노화의 예방 및 억제용 약학조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 또는 아세톤에 가용한 추출물인 약학조성물.
3. 삭제
4. 삭제
5. 제 1항에 있어서, 조성물 총 중량에 대하여 마름 껍질 추출물을 0.02 내지 50 중량%로 포함하는 약학조성물.
6. 항산화 효과를 나타내는 마름 껍질 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 노화의 예방 및 개선용 건강기능식품.
7. 삭제
8. 항산화 효과를 갖는 마름 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하고 화장품학적으로 허용 가능한 기제를 포함하는 피부노화의 예방 및 개선용 화장용 조성물.

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