KR102641766B1 - 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 조성물 - Google Patents

동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항비만 및 항산화용 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화 활성을 갖는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높고 라디칼 소거능이 우수하며; 항비만 효과가 알려져 있는 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분 함량이 두드러지게 높고, 추출물의 농도 의존적으로 지방세포의 분화를 억제하고 세포 내 지방 축적을 감소시키는 효과가 우수한바, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 항비만 효과와 항산화 효과를 동시에 나타낼 수 있는 다양한 기능성 조성물(식품, 화장품 및 의약품)로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 동결 건조된 파우더 형태로 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한바, 1회용 스틱 포장으로 제품화가 가능하여 기능성이 높은 유용성분을 먹기 좋은 동백잎 스틱 차로 제공할 수 있는 이점을 갖는다. 특히, 본 발명의 추출물은 동백나무 잎으로부터 유래한 천연 소재에 해당하는바, 이를 포함하는 본 발명의 조성물은 장기간 사용에도 인체에 안전한 이점을 가진다.

Description

동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 조성물{Anti-obesity and antioxidant composition containing Camellia japonica parching leaf extract as an active ingredient}
본 발명은 항비만 및 항산화용 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화 활성을 갖는 조성물에 관한 것이다.
비만(obesity)은 과다한 열량 섭취와 운동부족이 주된 원인이지만 그 외에도 사회적, 유전적, 환경적인 요인 등이 영향을 미치는 복합증후군으로, 음식의 섭취량과 에너지 소비의 불균형에서 생기는 과잉의 에너지가 지방조직에서 중성지방으로 축적되면서 발생하는 질병이며, 전 세계적으로 유병률이 크게 증가하고 있는 실정이다.
비만은 그 자체가 갖는 문제점뿐만 아니라 당뇨, 심혈관질환, 고혈압, 고지혈증 같은 심각한 성인병을 유발할 수 있으며, 각종 암의 유병률을 높이기 때문에 치료에 많은 관심이 모이고 있다.
세계보건기구(WHO)에서는 비만인구가 증가함에 따라 비만을 치료해야 할 질병으로 인식하여 세계적인 영양문제로 다루고 있다.
비만을 개선하기 위한 방법으로는 외과적 치료 외에 운동요법, 식사요법, 행동요법 그리고 식용 억제제, 설사제 또는 포만감을 주기 위한 섬유질 등을 사용하는 약물요법 등이 현재 알려져 있다. 최근에는 비만 치료를 위한 약물 치료제 개발 연구가 진행되고 있지만, 현재까지 개발된 약물치료제는 효능에 비해 두통, 불면증, 신경불안, 고혈압, 복통, 복부팽만, 배변 증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있다.
이러한 약물 치료의 부작용으로 인해 새로운 항비만 기능성 식품 및 의약품 개발이 요구되고 있으며, 최근에는 천연물 소재에서 비만 예방 및 개선에 효과적인 기능성 소재들을 찾아내고 작용 기전을 밝히는 연구 및 개발이 이루어지고 있다.
이와 관련하여 지방세포를 사용한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 섭취한 영양소는 중성지방의 형태로 지방 조직에 축적되며, 비만은 지방세포의 비대와 과형성으로 인해 초래된다. 지방세포 연구는 지방 축적을 감소시키고 지방세포의 수를 줄이는 방안을 찾아내는 것이 핵심이다.
이러한 연구에서 사용될 수 있는 모델로 제시된 것이 3T3-L1 지방전구세포이다. 상기 3T3-L1 지방전구세포는 지방세포로 분화될 수 있는 위임 줄기세포(committed stem cell)로 배지에 우태아혈청과 함께 IBMX(3-isobutyl-1-methylxanthine), 덱사메타손 및 인슐린을 첨가하여 배양하면 지방세포로 분화되어 세포내 지방 축적을 관찰할 수 있다.
한편, 갈산(gallic acid)은 항산화 작용을 포함한 다양한 기능성이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 체지방 감소, 혈중 콜레스테롤 개선 및 피부 미백 효과가 우수하다고 알려져 있다. 또한, 니아신(niacin)은 지방산과 탄수화물 그리고 아미노산의 분해 및 생합성 과정에 직접적으로 관여할 뿐만 아니라 에너지의 효율적인 이용에 중요한 역할을 담당하며 식후 혈당상승을 억제하고, 피부 미백효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 니코틴아마이드(nicotinamide)는 니아신아마이드(niacinamide)라고도 불리며 비타민 B3 유도체의 일종으로, 지방 축적을 감소시켜 항비만 효과가 있다고 알려져 있다.
이에 본 발명자는 천연물질로부터 유래되어 인체에 안전하면서도, 비만 개선 효과를 나타낼 수 있는 소재를 찾고자 모색하던 중, 동백나무 덖음 잎 추출물의 기능성 식품 소재로서의 효과를 실험하였다. 그 결과 특정 제조 공정 조건을 통해 추출한 동백나무 덖음 잎 추출물의 경우 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높아 항산화 활성이 우수하며, 항비만 효과가 알려져 있는 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분 함량이 두드러지게 높을 뿐만 아니라, 농도 의존적으로 지방세포의 분화를 억제하고 세포 내 지방 축적을 감소시킬 수 있다는 사실을 확인하였다. 또한, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물의 경우 동결 건조된 파우더 형태로 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한바, 1회용 스틱 포장으로 제품화가 가능함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허 제10-2012-0081348 대한민국 공개특허 제10-2001-0086170
따라서 본 발명의 목적은 인체에 안전하고, 항비만 활성과 항산화 활성이 우수하며, 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 인체에 안전하고, 항비만 활성과 항산화 활성이 우수하며, 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인체에 안전하면서 비만을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서,
본 발명은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 건조된 동백나무 잎을 250 내지 300℃에서 10 내지 15분간 덖음 처리하는 단계; 덖음 처리한 동백나무 잎을 100 내지 110℃에서 10 내지 30분 동안 열수 추출하는 단계; 및 열수 추출물을 동결 건조하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동백나무 덖음 잎 추출물은 파우더 형태일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 갈산(gallic acid)을 3.0 내지 3.5 mg/g 함량으로 포함할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 조성물에 0.0001 내지 100 μg/ml의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 식품은 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높고 라디칼 소거능이 우수하며; 항비만 효과가 알려져 있는 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분 함량이 두드러지게 높고, 추출물의 농도 의존적으로 지방세포의 분화를 억제하고 세포 내 지방 축적을 감소시키는 효과가 우수한바, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 항비만 효과와 항산화 효과를 동시에 나타낼 수 있는 다양한 기능성 조성물(식품, 화장품 및 의약품)로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 동결 건조된 파우더 형태로 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한바, 1회용 스틱 포장으로 제품화가 가능하여 기능성이 높은 유용성분을 먹기 좋은 동백잎 스틱 차로 제공할 수 있는 이점을 갖는다. 특히, 본 발명의 추출물은 동백나무 잎으로부터 유래한 천연 소재에 해당하는바, 이를 포함하는 본 발명의 조성물은 장기간 사용에도 인체에 안전한 이점을 가진다.
도 1은 동백나무 잎 추출물의 추출 공정을 간략하게 보여주는 제조 공정도이다.
도 2는 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 자세한 추출 과정을 보여주는 제조 공정도이다.
도 3은 동백나무 잎 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 동백나무 잎 추출물의 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 5a는 본 발명의 실시예 <1-1>을 통해 제조된 ‘동백나무 생잎 추출물’의 HPLC 분석 결과이다((1) 티아민 하이드로클로라이드, (2) 니코틴아마이드, (3) 니아신, (4) L-아스코르브산, (5) 갈산, (6) 폴릭에시드 하이드레이트, (7) B12, (8) 타닌산).
도 5b는 본 발명의 실시예 <1-2>를 통해 제조된 ‘동백나무 잎 찜 추출물’의 HPLC 분석 결과이다((1) 티아민 하이드로클로라이드, (2) 니코틴아마이드, (3) 니아신, (4) L-아스코르브산, (5) 갈산, (6) 폴릭에시드 하이드레이트, (7) B12, (8) 타닌산).
도 5c는 본 발명의 실시예 <1-3>을 통해 제조된 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 A’의 HPLC 분석 결과이다((1) 티아민 하이드로클로라이드, (2) 니코틴아마이드, (3) 니아신, (4) L-아스코르브산, (5) 갈산, (6) 폴릭에시드 하이드레이트, (7) B12, (8) 타닌산).
도 5d는 본 발명의 실시예 <1-4>를 통해 제조된 ‘ 동백나무 덖음 잎 추출물 B’의 HPLC 분석 결과이다((1) 티아민 하이드로클로라이드, (2) 니코틴아마이드, (3) 니아신, (4) L-아스코르브산, (5) 갈산, (6) 폴릭에시드 하이드레이트, (7) B12, (8) 타닌산).
도 5e는 본 발명의 실시예 <1-5>를 통해 제조된 ‘ 동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 HPLC 분석 결과이다((1) 티아민 하이드로클로라이드, (2) 니코틴아마이드, (3) 니아신, (4) L-아스코르브산, (5) 갈산, (6) 폴릭에시드 하이드레이트, (7) B12, (8) 타닌산).
도 6은 본 발명의 실시예 <1-5>를 통해 제조된 ‘ 동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 농도별 세포독성을 MTT 에세이로 평가한 결과이다.
도 7은 지방전구세포(3T3-L1) 분화 시 본 발명의 실시예 <1-5>를 통해 제조된 ‘ 동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 농도별 처리에 따른 세포 내 지방 축적 정도를 Oil Red O 염색을 통해 확인한 결과이다(CON: 음성대조군, MDI: 분화 유도군, MDI+25μg/ml: 분화 유도 시 25μg/ml 농도의 추출물 처리군, MDI+50μg/ml: 분화 유도 시 50μg/ml 농도의 추출물 처리군, MDI+100μg/ml: 분화 유도 시 100μg/ml 농도의 추출물 처리군).
도 8은 본 발명의 실시예 <1-5>를 통해 제조된 ‘ 동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 물에 대한 용해도를 확인한 결과이다.
본 발명은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.
본 명세서에서 언급하는 ‘동백나무(Camellia japonica L.)’는 차나무과에 속하며, 전북 고창, 전남 해남, 완도, 강진, 여수, 광양, 경남, 거제, 남해안 지역과 제주도 등지에서 자라는 상록활엽 소교목이다. 키는 약 15 m, 직경이 약 50 ㎝ 정도로 자라며, 잎 표면은 짙은 녹색이고 광택이 나며 뒷면은 황록색이고 타원형으로 마주나며 길이는 5~12 ㎝, 폭이 3~7 cm 이고 물결 모양의 잔 톱니가 있다.
동백속의 성분 분석 및 활용화에 관해서는 많은 연구가 진행되어 왔지만, 아직까지 동백나무 잎 추출물의 비만 개선 효과에 대해 알려진 바 없다.
본 발명자들은 식품, 의약품 및 화장료 조성물의 소재로 동백나무 잎을 선정하고 다양한 추출 공정을 통해 추출물을 제조하였으며, 다양한 추출 공정 중 특정 제조 공정 조건을 통해 추출한 동백나무 덖음 잎 추출물의 경우 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높아 항산화 활성이 우수하며, 항비만 효과가 알려져 있는 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분 함량이 두드러지게 높을 뿐만 아니라, 농도 의존적으로 지방세포의 분화를 억제하고 세포 내 지방 축적을 감소시킬 수 있다는 사실을 확인하였다.
그러므로 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 항비만 및 항산화 활성을 나타내는 기능성 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된‘추출물’은 적절한 용매를 이용하여 동백나무의 덖음 잎(Camellia japonica leaf)으로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 동백나무 덖음 잎의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.
상기 동백나무 덖음 잎으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 안전성 등을 고려하여 바람직하게는 물(정제수)을 사용하는 것이 좋다.
추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 동백나무 덖음 잎 추출물은 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결 건조할 수도 있다.
예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 동백나무 덖음 잎 추출물은 전술한 바와 같이 추출된 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수도 있다. 또한 상기 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.
따라서 본 발명에 있어서 동백나무 덖음 잎 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 일구체예에서, 동백나무 덖음 잎 추출물은 건조된 동백나무 잎을 250 내지 300℃에서 10 내지 15분간 덖음 처리하는 단계; 덖음 처리한 동백나무 잎을 100 내지 110℃에서 10 내지 30분 동안 열수 추출하는 단계; 및 열수 추출물을 동결 건조하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조될 수 있다.
본 발명에 있어서, ‘항비만 및 항산화용 조성물’이란 비만을 예방, 개선, 완화 또는 치료할 수 있으며, 동시에 산소가 불안정한 상태에 있는 활성산소를 억제 또는 제거하는 작용을 통해 산화를 방지할 수 있는 물질을 의미한다.
본 발명의 상기 항비만 및 항산화용 조성물은 항비만과 항산화 활성이 요구되는 다양한 목적 및 용도로 사용될 수 있으며, 구체적으로는 식품, 의약품, 화장품 및 동물 사료 등 다양한 산업분야에서 적용되는 물품에 항비만 및 항산화 활성을 부여할 수 있는 기능성 소재로 사용할 수 있다.
아래에서는 본 발명의 항비만 및 항산화용 조성물이 적용될 수 있는 식품, 의약품, 화장품, 동물사료 형태로 자세히 살펴보았다.
먼저, 본 발명의 조성물은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동백나무 덖음 잎 추출물은 갈산(gallic acid)을 3.0 내지 3.5 mg/g 함량으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일실시예에 있어서, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 조성물에 대해 0.0001 내지 1000Oμg/ml의 농도로 포함될 수 있다.
이러한 식품 조성물은 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 식품 조성물로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 일구체예에서, 동백나무 덖음 잎 추출물은 파우더 형태일 수 있으며, 상기 식품 조성물은 동백나무 잎차 스틱 또는 동백나무 잎차 티백일 수 있다.
이러한 본 발명의 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물은 천연물질로서 화학약품과 같은 부작용은 거의 없으므로 항비만 및 항산화 기능성 부여를 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 및 항산화용 건강기능식품일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 비만을 예방 또는 개선하거나, 산화관련 질환 예방 또는 개선용을 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
본 발명에서 “건강기능식품”이라 함은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 “식품 첨가물 공전”에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.
예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.
캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 상기 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.
과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 동백나무 덖음 잎 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품은 하기 실시예에서도 확인한 바와 같이 우수한 항비만 및 항산화 효과를 실험적으로 입증하였는바, 비만의 예방 또는 개선과 더불어, 산화관련 질환의 예방 또는 개선에 효과적이다.
상기 건강기능식품은 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 90 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 다른 일실시예에 있어서, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 조성물에 대해 0.0001 내지 1000Oμg/ml의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 비만을 예방하거나 치료할 수 있는 효과가 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용, 항산화용 및 미백용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분 함량이 두드러지게 높으며, 라디칼 소거활성 우수하다. 참고로, 갈산(gallic acid)은 항산화 작용을 포함한 다양한 기능성이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 체지방 감소, 혈중 콜레스테롤 개선 및 피부 미백 효과가 우수하다고 알려져 있다. 또한, 니아신(niacin)은 지방산과 탄수화물 그리고 아미노산의 분해 및 생합성 과정에 직접적으로 관여할 뿐만 아니라 에너지의 효율적인 이용에 중요한 역할을 담당하며 식후 혈당상승을 억제하고, 피부 미백효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 니코틴아마이드(nicotinamide)는 니아신아마이드(niacinamide)라고도 불리며 비타민 B3 유도체의 일종으로, 지방 축적을 감소시켜 항비만 효과가 있다고 알려져 있다.
본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물은 상기와 같은 효과를 갖는 갈산(gallic acid), 니아신(niacin) 및 니코틴아마이드(nicotinamide) 성분을 높은 함량으로 포함하는바, 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 항비만, 항산화 및 미백 활성과 같은 다양한 기능성을 갖는 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 동백나무 덖음 잎 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 상술한 동백나무 덖음 잎 추출물 이외에, 동백나무 덖음 잎 추출물과 반응하여 피부보호 효과를 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 항산화제를 혼합하여 사용할 수도 있다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서 상기 동백나무 덖음 잎 추출물은 화장료 조성물에 0.0001 내지 10000 μg/ml의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 유연 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 수중유 형 에멀젼, 유중수 형 에멀젼, 페이스크성 무수 생성물, 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일 분산물, 이온성 지질 소포체, 비이온성 지질 소포체, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 보디오일, 수중유 형 메이크업베이스, 유중수 형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도우, 마스카라, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종의 제형을 포함한다.
또한 본 발명의 조성물은 항비만 및 항산화 기능성을 부여할 수 있는 사료용 조성물 또는 사료첨가제일 수 있다.
본 발명에 따른 사료 조성물은 상기 동백나무 덖음 잎 추출물을 조성물 충 중량 기준으로 0.1~50중량%, 보다 바람직하게는 1~20중량%로 포함할 수 있으나, 특별히 이러한 범위를 한정하는 것은 아니다. 한편, 사료첨가제로 사용되는 경우 동백나무 덖음 잎 추출물을 사료 조성물에 배합하여 사용할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
동백나무 잎 추출물 제조
<1-1> 동백나무 생잎 추출물 제조
완도 수목원에서 채취한 동백나무 잎을 사용하였다. 동백나무 잎을 세척한 후 3일 동안 서늘한 곳에서 건조하여 생잎 건조 분말로 사용하였다. 추출물을 제조하기 위해 상기 생잎 건조 분말 30g을 증류수 300ml에 혼합시킨 후 오토클레이브(auto clave)를 이용하여 100℃에서 10분 동안 열수 추출하였다. 추출물은 여과지를 사용하여 여과한 후 동결건조기를 이용하여 최종적인 본 발명의 ‘동백나무 생잎 추출물’을 제조하였다.
<1-2> 동백나무 잎 찜 추출물 제조
완도 수목원에서 채취한 동백나무 잎을 사용하였다. 동백나무 잎을 세척한 후 찜기(스텐삼발이 찜기 30; 대흥공업사 제조)를 이용하여 20분간 쪄 주었다. 동백나무 잎 찜 시료는 오토클레이브(auto clave)를 이용하여 100℃에서 10분 동안 열수 추출하였다. 추출물은 여과지를 사용하여 여과한 후 동결건조기를 이용하여 최종적인 본 발명의 ‘동백나무 잎 찜 추출물’을 제조하였다.
<1-3> 동백나무 덖음 잎 추출물 A 제조
완도 수목원에서 채취한 동백나무 잎을 세척 후 세절하여 30℃에서 3 ~ 5일간 건조하였다. 건조된 동백나무 잎을 240℃에서 5분간 덖어주었다. 덖음 공정을 진행한 동백나무 잎은 식혀준 뒤 파쇄한 후 오토클레이브(auto clave)를 이용하여 100℃에서 10분 동안 열수 추출하였다. 추출물은 여과지를 사용하여 여과한 후 동결건조기를 이용하여 최종적인 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 A’를 제조하였다.
<1-4> 동백나무 덖음 잎 추출물 B 제조
완도 수목원에서 채취한 동백나무 잎을 세척 후 세절하여 30℃에서 3 ~ 5일간 건조하였다. 건조된 동백나무 잎을 240℃에서 5분간 1차로 덖어준 다음, 동일한 조건에서 2차 덖음 공정을 진행하였다. 덖음 공정을 진행한 동백나무 잎은 식혀준 뒤 파쇄한 후 오토클레이브(auto clave)를 이용하여 100℃에서 10분 동안 열수 추출하였다. 추출물은 여과지를 사용하여 여과한 후 동결건조기를 이용하여 최종적인 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 B’를 제조하였다.
<1-5> 동백나무 덖음 잎 추출물 C 제조
완도 수목원에서 채취한 동백나무 잎을 세척 후 세절하여 30℃에서 3 ~ 5일간 건조하였다. 건조된 동백나무 잎을 299℃에서 10 ~ 15분간 덖어주었다. 덖음 공정을 진행한 동백나무 잎은 식혀준 뒤 파쇄한 후 오토클레이브(auto clave)를 이용하여 100℃에서 10분 동안 열수 추출하였다. 추출물은 여과지를 사용하여 여과한 후 동결건조기를 이용하여 최종적인 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’를 제조하였다.
본 발명의 5가지 동백나무 잎 추출물의 추출 과정은 도 1에서 나타내었으며, ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 자세한 추출 과정은 도 2에서 나타내었다.
<실험예 1>
동백나무 잎 추출물의 항산화 활성 평가
상기 <실시예 1>에서 제조한 본 발명의 동백나무 잎 추출물의 항산화 활성을 평가하기 위하여, DPPH 자유라디칼 소거능 및 ABTS 라디칼 소거능을 조사하였다.
<1-1> DPPH 자유라디칼 소거능
항산화 활성을 측정하기 위해 상기 <실시예 1>을 통해 준비된 5가지 추출물을 50-200μg/mL 농도로 제조하여 시료로 사용하였으며, 대조군은 증류수를 사용하였다. 제조된 시료 200μL에 1mM DPPH 시약 800μL를 혼합하여 암실에서 15분 동안 반응시킨 후, Biotek Synergy HT multi-detection microplate reader를 이용하여 517nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료에 대한 라디칼 소거 활성 (%)은 다음과 같은 식을 이용하여 계산하였다.
그 결과 하기 표 1 및 도 3에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 동백나무 잎 추출물의 처리 농도에 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증대되는 것을 확인할 수 있었다. 본 발명의 실시예 <1-1> 내지 <1-5>에서 제조된 추출물 각각의 IC50값이 120.39 μg/mL, 180.17 μg/mL, 173.47 μg/mL, 165.45 μg/mL, 212.07 μg/mL로 나타나, 실시예 <1-5>의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’가 가장 높은 DPPH 라디칼 소거능을 보이는 것을 확인하였다.
<1-2> ABTS 라디칼 소거능 소거능
7mM ABTS 시약과 2mM 포타슘 퍼옥소다이설페이트(potassium peroxodisulfate)를 2.45mM 농도로 제조한 후 1:1 비율로 혼합 후 암실에서 19시간동안 ABTS 라디칼을 형성시켰다. 이후 증류수를 이용해 ABTS 시약을 4배 희석하였다. 상기 <실시예 1>을 통해 준비된 5가지 추출물을 50-500μg/ml 농도로 제조하여 시료로 사용하였으며, 대조군은 증류수를 사용하였다. 각 농도별 시료 200μL에 ABTS 시약 1000μL를 혼합하여 암실에서 15분 반응시킨 후, Biotek Synergy HT multi-detection microplate reader를 사용하여 730nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료에 대한 라디칼 소거 활성(%)은 다음과 같은 식을 이용하여 얻어졌다.
그 결과 하기 표 1 및 도 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 동백나무 잎 추출물의 처리 농도에 의존적으로 ABTS 라디칼 소거능이 증대되는 것을 확인할 수 있었다. 본 발명의 실시예 <1-1> 내지 <1-5>에서 제조된 추출물 각각의 IC50값이 396.34 μg/mL, 359.01 μg/mL, 337.01 μg/mL, 341.64 μg/mL, 254.65 μg/mL으로 DPPH radical 소거능과 마찬가지로 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’가 가장 우수한 활성을 보이는 것으로 나타났다.
동백나무 잎 추출물의 항산화 활성
시료 DPPH IC50 (μg/mL) ABTS IC50 (μg/mL)
실시예 <1-1> 212.07 ± 6.55 396.34 ± 5.50
실시예 <1-2> 180.17 ± 1.20 359.01 ± 3.43
실시예 <1-3> 173.47 ± 47 341.64 ± 6.40
실시예 <1-4> 165.45 ± 2.49 337.01 ± 1.48
실시예 <1-5> 120.39 ± 0.11 254.65 ± 3.25
갈산 16.85 ± 0.31 32.93 ± 0.40
<실험예 2>
동백나무 잎 추출물의 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량 분석
상기 <실시예 1>에서 제조한 본 발명의 동백나무 잎 추출물의 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 조사하였다.
<2-1> 총 폴리페놀 함량
총 폴리페놀 함량 분석은 Folin-Ciocalteu 방법을 활용하여 측정하였다. 표준물질로 갈산(gallic acid)을 사용하였으며 각 농도별로 희석한 표준물질을 사용한 검량 곡선을 작성하여 총 폴리페놀 함량 분석에 이용하였다. 이때 추출물의 농도는 1mg/ml로 제조하였고 제조된 시료 500μl, 0.2M Folin-Ciocaltue’s phenol 시약 500μl, 2% sodium carbornate(w/v)를 순서대로 혼합하였다. 상온에서 30분 동안 반응시킨 후 흡광도는 Biotek Synergy HT multi-detection microplate reader를 이용하여 750nm 파장에서 측정하였다.
그 결과 하기 표 2에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 <1-1> 내지 <1-5>에서 제조된 추출물 각각의 총 폴리페놀의 함량은 119.40 GAE mg/g, 142.14 GAE mg/g, 144.00 GAE mg/g, 139.11 GAE mg/g, 190.51 GAE mg/g으로 나타나, ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’에서 가장 높은 폴리페놀 함량을 나타내었다.
<2-2> 총 플라보노이드 함량 함량
총 플라보노이드 함량 분석은 KIM 등의 방법을 활용하여 측정하였다(Nain KIM, Moon-Hee Choi, Seung-Hwa Yang, Deuk-Sil Oh, and Hyun-Jae Shin. (2022). Evaluation of Bioactivity of Castanopsis cuspidata var. sieboldii Leaves Extract and Isolation of Polyphenolic Compounds. KSBB Journal, 37(2), 64-70.). 표준물질로 퀘르세틴을 사용하였으며 각 농도별로 희석한 표준물질을 사용한 검량 곡선을 작성하여 총 플라보노이드 함량 분석에 이용하였다. 이때 추출물의 농도는 1mg/ml로 제조하였고 제조된 시료 500μl, 메탄올 1.5ml, 1M 포타슘 아세테이트 100μl, 증류수 1.4ml를 순서대로 혼합하였다. 상온에서 40분 동안 반응시킨 후 흡광도는 Biotek Synergy HT multi-detection microplate reader를 이용하여 415nm에서 측정하였다.
그 결과 하기 표 2에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 <1-1> 내지 <1-5>에서 제조된 추출물 각각의 총 플라보노이드의 함량은 19.00 QUE mg/g, 22.58 QUE mg/g, 23.73 QUE mg/g, 22.58 QUE mg/g, 25.31 QUE mg/g으로 나타나, ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’에서 가장 높은 플라보노이드 함량을 나타내었다.
동백나무 잎 추출물의 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량
시료 총 폴리페놀 함량 (GAE mg/g) 총 플라보노이드 함량 (QUE mg/g)
실시예 <1-1> 119.40 ± 0.41 19.00 ± 0.15
실시예 <1-2> 142.14 ± 0.79 22.58 ± 0.30
실시예 <1-3> 144.00 ± 1.90 22.60 ± 0.15
실시예 <1-4> 139.11 ± 0.94 23.73 ± 0.59
실시예 <1-5> 190.51 ± 0.52 25.31 ± 0.15
<실험예 3>
동백나무 잎 추출물의 HPLC를 이용한 폴리페놀 성분 분석
추출물에 함유된 폴리페놀류과 비타민류를 정량 분석하기 위하여 HPLC (SPD-20A, SHIMADZU CO., Japan)를 이용하여 유효성분을 확인하였다. 이때 폴리페놀류 표준물질로 (5) 갈산(gallic acid) (8) 타닌산(Tannic Acid)을 사용하였고 비타민류 표준물질로 (1) 티아민 하이드로클로라이드(Thiamine hydrochloride) (2) 니코틴아마이드(Nicotinamide) (3) 니아신(Niachin) (4) L-아스코르브산(L-Ascorbic Acid) (6) 폴릭에시드 하이드레이트(Folic Acid hydrate) (7) B12를 사용하여 표준물질은 100μg/ml 농도로 실험을 진행하였으며, 추출물은 1mg/ml 농도로 제조한 후 0.45μm 시린지 필터(syringe fliter)로 여과하여 사용하였다. HPLC 분석조건은 다음과 같다. 컬럼은 Shimpack GIS-ODS (C18, 4.6 ×250mm, 5.0μm, Shimadzu Co., Japan), 유속 1.0mL/min, 주입량 20μL로 분석하였다. 이동상은 0.1% Phosphoric Acid in water(A)와 Acetonitrile(B)를 사용하였다. 이동상의 gradient 조건은 이동상(B)를 기준으로 0min : B(8%), 0~10min : B(8%), 10~14min :　B(16%), 14~20min : B(16%), 20~25min : B(19%), 25~30min : B(22%), 30~40min : B(100%), 40~45min : B(100%)로 하였으며 UV dectector 280nm 파장에서 측정하였다.
그 결과 하기 표 3 및 도 5a-5e에서 나타낸 바와 같이, ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C(실시예 <1-5>)’에서 니코틴아마이드, 니아신 및 갈산의 함량이 두드러지게 높은 것을 확인할 수 있었다.
참고로, 갈산은 항산화 작용을 포함한 다양한 기능성이 있는 것으로 알려져 있다. 특히 갈산은 체지방 감소, 혈중 콜레스테롤 개선 및 피부 미백 효과가 우수하다고 알려져 있다. 한편, 니아신은 지방산과 탄수화물 그리고 아미노산의 분해 및 생합성 과정에 직접적으로 관여할 뿐만 아니라 에너지의 효율적인 이용에 중요한 역할을 담당하며 피부장벽을 튼튼히 해주며, 세라마이드의 합성을 촉진시키기 때문에 표피의 수분손실을 감소시켜 피부노화도 지연시킨다고 알려져 있고, 식후 혈당상승을 억제하고, 피부 미백효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 니코틴아마이드는 니아신아마이드라고도 불리며 비타민 B3 유도체의 일종으로, 지방 축적을 감소시켜 항비만 효과가 있음이 알려져 있다.
이에, 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 경우 다른 동백나무 잎 추출물 대비 두드러지게 증대된 니코틴아마이드, 니아신 및 갈산의 함량을 갖는바, 항비만 효과가 우수할 것으로 판단되었다.
동백나무 잎 추출물의 HPLC를 이용한 폴리페놀 성분 분석 결과 (mg/g)
No. 폴리페놀 성분 시료
실시예 <1-1> 실시예 <1-2> 실시예 <1-3> 실시예 <1-4> 실시예 <1-5>
1 티아민 하이드로클로라이드 - - - - -
2 니코틴아마이드 2.06 ± 0.12 2.13± 0.22 1.72 ± 0.24 1.47 ± 0.27 4.03 ± 0.85
3 니아신 0.14 ± 0.02 0.13 ± 0.01 0.24 ± 0.11 0.13 ± 0.04 0.70 ± 0.11
4 L-아스코르브산 1.72 ± 0.11 2.15 ± 0.13 - - -
5 갈산 0.06 ± 0.07 2.22 ± 0.26 2.02 ± 0.12 1.02 ± 0.08 3.13 ± 0.28
6 폴릭에시드 하이드레이트 31.85 ± 9.81 115.27 ± 11.89 85.60 ± 22.06 171.86 ± 34.40 346.85 ± 52.05
7 B12 5.23 ± 4.79 ± 0.57 4.16 ± 0.88 4.39 ± 1.00 3.12 ± 0.70
8 타닌산 17.55 ± 2.38 16.59 ± 0.41 15.70 ± 0.79 21.28 ± 2.36 22.23 ± 1.07
<실험예 4>
동백나무 잎 추출물의 세포독성 평가
상기 실시예 <1-5>에서 제조한 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 세포 독성을 평가하기 위하여 MTT 에세이를 진행하였다.
MTT 에세이는 MTT [3-(4,5-dimethylthizol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] 시약이 세포 내로 흡수된 후 미토콘드리아의 숙식산탈수소효소(succinate dehydrogenase)에 의해 포르마잔(formazan)을 형성하는데 이 물질의 세포내 축적은 미토콘드리아의 활성, 넓게는 세포의 활성을 의미하는 것으로써 세포의 생장율을 측정하는 대표적인 방법이다.
3T3-L1 세포 현탁액을 12 웰(well)에 1×104 cells/mL 농도로 200 μL씩 분주하여 배양기에서 24시간 동안 안정화를 시킨 후 시료를 농도 별로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 0.2 mg/mL MTT 용액을 웰(well) 당 100 μL씩 넣어 1시간 동안 배양기에 방치하였다. 이후 상등액을 제거하고 DMSO를 웰(well) 당 300 μL씩 가하고 1분간 쉐이킹(shaking)하여 포르마잔(formazan)을 완전히 용해시킨 후 ELISA Bio-Tek instrument Inc (Winooski, VT, USA)을 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 본 실험에 사용한 MTT 및 DMSO는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
그 결과 도 6에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 <1-5>에서 제조된 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’는 100 μg/mL 농도까지 세포 독성을 보이지 않았다. 이러한 결과를 통해, 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 경우 식품 및 화장품의 소재로 사용 시 안전함을 확인할 수 있었다.
<실험예 5>
동백나무 잎 추출물의 항비만 활성 평가
상기 실시예 <1-5>에서 제조한 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의한 지방축적 억제 효과를 측정하기 위하여, 지방세포 분화 후 세포 지질 함량을 오일 레드 O로 염색(Oil-Red O staining)을 통해 측정하였다.
3T3-L1 세포를 2×104 cells/well로 6웰(well) 플레이트에 시딩하여 배양한 후, 10 μg/ml 인슐린, 0.1 μM 덱사메타손 및 0.5 μM IBMX(3-Isobutyl-1-methylxanthine)가 포함된 분화배지(이하 간략하게, ‘MDI 배지’로 약칭함)로 교환하고 농도별(25, 50, 100 μg/mL)로 ‘동백나무 잎 덖음 추출물 C’를 처리하였다. 그 후 매 2일마다 10 μg/ml 인슐린이 포함된 배지로 교환하였으며, 분화 유도 9일째 오일-레드 O 염색 어세이를 수행하였다.
세포들을 PBS로 세척한 후 4% 파라포름알데히드를 1시간 동안 처리하여 고정해주고, 증류수로 세척한 후 60% 이소프로파놀로 5-10분간 배양하였다. 고정된 세포들은 고정된 세포들은 오일 레드 용액[1% Oil Red in isopropanol was diluted in dH2O in ratio of 6:4 (vol/vol)]로 1시간 동안 염색 시켜준 후 다시 PBS로 세척하였다. 염색된 세포들은 광학 현미경으로 관찰하였다.
그 결과 도 7에서 나타낸 바와 같이, 분화배지(MDI 배지)에서 지방전구세포 3T3-L1을 배양하는 경우 지방세포로 분화되어 세포 내 지방이 고밀도로 축적되는 것을 확인하였다. 반면에, MDI 배지에서 배양 시 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’를 처리한 경우, 추출물의 처리 농도에 의존적으로 세포 내 축적되는 지방 함량이 감소하는 것으로 나타났다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물 C의 경우 지방세포로의 분화를 억제하고, 세포 내 지방 축적을 감소시킴으로써 항비만 효과가 있음을 확인하였다.
<실험예 6>
동백나무 잎 추출물의 용해도 측정
상기 실시예 <1-5>에서 제조한 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’의 용해도를 측정하였다.
용해도는 100 mL의 물이 담긴 용기에 동백나무 덖음 잎 추출물이 온도에 따라 용해되는 양을 확인하기 위하여 10-100℃ 까지 용매를 가열하여 추출물의 용해도를 확인하였다. 자세하게는, 상기 실시예 <1-5>에서 제조한 본 발명의 ‘동백나무 덖음 잎 추출물 C’를 시험관에 넣고 증류수 100 mL에 넣고 충분히 저어주었다. 항온조에 넣어 온도를 유지하며 온도를 유지시켜 30여분 교반시키고, 용해되지 않은 용질은 피펫으로 20ml 용액을 정량하였다. 빈 증발용기의 질량을 측정한 뒤 정량한 용액을 넣어 실온에 방치시켰다. 모래 접시에서 가열하여 용액을 증발 시키고, 냉각시킨 후 질량을 측정하였다.
그 결과 도 8 및 표 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물의 경우 낮은 온도에서도 용해도가 우수한 것으로 나타났으며, 80 내지 100℃의 온도에서는 약 140 내지 250g/100mL의 용해도를 보여주었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물의 경우 동결 건조된 파우더 형태로 물에 대한 용해도가 우수하여 섭취가 용이한바, 1회용 스틱 포장으로 제품화가 가능함을 확인하였다.
본 발명의 동백나무 덖음 잎 추출물의 온도에 따른 용해도
온도 (℃) 용해도 (g/100mL)
10 22.4
20 40.7
40 61.3
60 92.3
80 140.5
100 244.7
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (8)

  1. 항비만 및 항산화용 식품 조성물로서,
    상기 식품 조성물은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 추출물은 건조된 동백나무 잎을 280 내지 300℃에서 10 내지 15분간 덖음 처리하는 단계; 덖음 처리한 동백나무 잎을 100 내지 110℃에서 10 내지 30분 동안 열수 추출하는 단계; 및 열수 추출물을 동결 건조하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조되는 것을 특징으로 하는, 항비만 및 항산화용 식품 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서,
    상기 동백나무 덖음 잎 추출물은 파우더 형태인 것을 특징으로 하는, 항비만 및 항산화용 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 갈산(gallic acid)을 3.0 내지 3.5 mg/g 함량으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 항비만 및 항산화용 식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 조성물에 0.0001 내지 100 μg/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 항비만 및 항산화용 식품 조성물.
  6. 항비만 및 항산화용 건강기능식품으로서,
    상기 건강기능식품은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 추출물은 건조된 동백나무 잎을 280 내지 300℃에서 10 내지 15분간 덖음 처리하는 단계; 덖음 처리한 동백나무 잎을 100 내지 110℃에서 10 내지 30분 동안 열수 추출하는 단계; 및 열수 추출물을 동결 건조하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조되는 것을 특징으로 하는, 항비만 및 항산화용 건강기능식품.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 식품은 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항비만 및 항산화용 건강기능식품.
  8. 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 약학적 조성물은 동백나무 덖음 잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 추출물은 건조된 동백나무 잎을 280 내지 300℃에서 10 내지 15분간 덖음 처리하는 단계; 덖음 처리한 동백나무 잎을 100 내지 110℃에서 10 내지 30분 동안 열수 추출하는 단계; 및 열수 추출물을 동결 건조하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조되는 것을 특징으로 하는, 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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