CN104523479A - 青刺尖提取物在美白用品中的应用及美白用品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及青刺尖提取物及可从其中分离出来的青刺尖酯醇在美白用品中的应用和包含青刺尖提取物和/或青刺尖酯醇的美白用品。本发明发现青刺尖提取物中的多酚类物质是一种新的美白活性成分,具有明显抑制酪氨酸酶活性和减少B16黑素细胞产生黑色素的效果,同时该美白活性成分来源于植物,安全性好,具有非常高的开发美白,祛斑等外用药物或者是美容化妆品的可行性。
Description
技术领域
本发明涉及青刺尖提取物的新用途和美白用品。
背景技术
近年来,由于人们压力的增大以及对高热量、高蛋白、高脂食物摄取的增加,使得人皮肤的颜色由多种因素决定,包括产生黑色素的黑素细胞(melanocytes)的活性、血管的分布、皮肤的厚度、色素如类胡萝卜素和胆红素的存在或缺乏等。在这些因素中,深色的色素黑色素是最主要的因素。黑色素通过包括酪氨酸酶(tyrosinase)的多种酶的作用由黑素细胞产生。黑色素的产生受遗传因素、如荷尔蒙分泌的生理因素、应激等以及如UV辐射的环境因素的影响。存在于皮肤中的黑色素在保护皮肤免受UV等刺激中起着重要的作用。然而,已知的是黑色素过量产生在加速色素沉着和皮肤老化且包括皮肤癌中发挥主要的作用。
长久以来,抗坏血酸(ascorbic acid)、曲酸(Kojic acid)、熊果苷(arbutin)、氢醌(hydroquinone)、谷胱甘肽(glutathione)以及它们的衍生物,或者具有酪氨酸酶抑制活性的组合物已被用于化妆品或药品中以治疗或改善由暴露于UV中引起的异常的皮肤色素沉着和过量的黑色素沉着。然而,由于皮肤增白效果不足、在皮肤上的安全问题、用于化妆品中时成分的不稳定性等问题,它们的应用是受到限制的。
青刺为蔷薇科扁核木属植物扁核木Prinsepiautilis,又名打油果、鸡蛋果等。青刺产云南、贵州、四川、西藏。生于山坡、荒地、山谷或路旁等处,海拔1000-2560米。巴基斯坦、尼泊尔、不丹和印度北部也有分布。青刺茎、叶、果、根均可入药,味微辛,有活血祛瘀、消肿止痛、治疗枪伤等功效。青刺的种子富含油脂,主要成分为油酸,亚油酸以及多种氨基酸类成分。青刺的嫩芽俗称青刺尖,根据现代化学成分研究,其主要成分跟青刺果有较大不同,主要为萜类(二萜,三萜类成分),木质素类成分,黄酮类成分。
传统上,青刺果在民间已有上千年的应用。青刺果油涂抹在皮肤上,可以防止蚊虫叮咬或消除跌打扭伤形成的肿块,防止皮肤干裂、瘙痒和治愈冻疮;用青刺果油擦头发能抑制头发脱落,有使白发变黑的作用;人体皮肤局部烧伤和烫伤,用青刺果油涂于患处可防止伤口感染,加快伤口愈合且不留疤痕。在当地民间,用青刺果油涂抹新生婴儿的皮肤,使皮肤干爽润滑,并能促进婴儿胎毛的脱落。根据专利检索,目前青刺果在化妆品方面的应用均以青刺果油为研究对象。在现代的产品应用中,也大都应用青刺果油,并开发出它的保湿,抗皱等功效。
青刺尖作为青刺的嫩芽在云南当地有悠久的食用历史,安全性高。相比青刺果来讲,其研究和开发力度要小得多。我们在开发青刺产品的时候,发现青刺尖提取物,经过富集之后的活性部位以及其中的活性化合物都有很高的美白活性,这一发明将会对青刺资源的充分利用起到巨大的推动作用。
本发明的目的是提供一种植物来源,具有突出的美白效果,同时又具有较高安全性的美白活性物。
发明内容
我们在研究中意外发现,青刺尖提取物中的多酚类物质具有明显抑制酪氨酸酶活性和减少B16黑素细胞产生黑色素的效果,具有非常高的开发美白,祛斑等外用药物或者是美容化妆品的可行性。
本发明具体涉及青刺尖提取物在美白用品中的应用。
根据本发明,所述美白用品可以是任何具有美白功能的产品。进一步地,美白用品优选为具有美白和/或祛斑功能的化妆品或药品,其中药品优选为外用药品。
根据本发明,所述的青刺尖提取物中总多酚是美白活性物质,总多酚的含量越高越好。青刺尖提取物中总多酚的含量优选在10%以上更优选在30%以上,进一步优选在40%以上,最优选在60%以上。
根据本发明,从青刺尖提取物中分离出的青刺尖酯醇,同样具有明显抑制酪氨酸酶活性和减少B16黑素细胞产生黑色素的效果。为此,本发明还涉及青刺尖酯醇在美白用品中的应用,青刺尖酯醇的结构式如下式所示:
本发明同时提供一种植物来源,具有突出的美白效果,同时又具有较高安全性的美白用品。
本发明采取的美白用品的方案是:
一种美白用品,其包含美白活性成分,该美白活性成分至少包括青刺尖提取物或青刺尖酯醇,青刺尖酯醇的结构式如下式所示:
根据本发明,美白用品优选为具有美白和/或祛斑功能的化妆品或药品,其中药品优选为外用药品。
所述美白用品中的美白活性成分可以是仅为青刺尖提取物或青刺尖酯醇或二者的组合,也可以是青刺尖提取物青和/或青刺尖酯醇与其他美白活性成分的组合。
根据本发明,所述的青刺尖提取物中总多酚是美白活性物质,总多酚的含量越高越好。青刺尖提取物中总多酚的含量优选在10%以上更优选在30%以上,进一步优选在40%以上,最优选在60%以上。
根据本发明,青刺尖提取物可以是青刺尖初提物(粗提物),也可以是或进一步分离纯化青刺尖初提物所得青刺尖总多酚富集的提取物。青刺尖提取物可以根据常规手段制备。
优选地,青刺尖提取物为初提物经进一步分离纯化所得总多酚富集的提取物。
所述青刺尖提取物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药,尤其是可应用于化妆品中,根据制剂的不同类型添加不同的用量。
所述皮肤外用剂组合物是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念,例如可以是化妆料组合物或药学组合物。所述化妆料组合物中可以是基础化妆料、面部妆容化妆料、身体用化妆料等,对其剂型无特殊限制,根据不同目的可合理选择。
所述化妆料组合物中根据剂型和目的的不同还含有不同的化妆品学层面允许的介质或基质赋形剂。
可以用于本发明皮肤外用剂组合物的化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂包括,但不限于一种或多种含水系统、甘油、C2-4醇类、多元醇类、二元醇类、植物油、矿物油、硅油、水或其任意组合。
可以将本发明的组合物配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括,但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以将本发明的组合物通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。
本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分:抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。
由于以上技术方案的采用,本发明与现有技术相比具有如下优势:
本发明提供了一种新的美白活性成分,该美白活性成分具有明显抑制酪氨酸酶活性和减少B16黑素细胞产生黑色素的效果,同时该美白活性成分来源于植物,安全性好。
具体实施方式
以下以结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。应理解,这些实施例用于说明本发明的基本原理、主要特征和优点,而本发明不受以下实施例的限制。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整,未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。实施例所用原料均为工业品。
实施例1:青刺尖提取物的制备
取2公斤青刺尖(青刺尖采集自云南丽江,晒干),粉碎,用20升70%乙醇室温浸泡一天后,回流提取60分钟,滤出提取液之后,向滤渣中再加入16升70%乙醇,回流提取40分钟,过滤。合并两次提取液,真空浓缩至干,得到360g青刺尖初提物(代号PUE),得率为18%。
实施例2:青刺尖多酚的制备
取实施例1中制备的青刺尖初提物100g,加水溶解,上AB-8大孔吸附树脂进行层析。提取物的量跟树脂重量比约1:20。依次用水,30%乙醇,60%乙醇和95%乙醇进行洗脱,每个梯度洗脱4-5个柱体积,流速为2-3个柱体积/小时。洗脱结束后,30%乙醇部位(PU30),60%乙醇部位(PU60)和95%乙醇(PU95)部位分别浓缩至干,其中,30%乙醇部位共20g,60%乙醇部位共43g,95%乙醇部位共15g。
实施例3:青刺尖美白活性化合物的分离和结构鉴定
取实施例2中60%乙醇部位30g,上硅胶柱层析,用氯仿:甲醇的体积比分别为20:1、15:1、10:1、5:1、1:1的比例进行梯度洗脱,分别得到5个部位。将其中氯仿:甲醇为5:1洗脱的部位再用C18反相制备柱进行层析,用20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、90%甲醇进行梯度洗脱,将其中40%甲醇洗脱的部位再经过Sephadex LH-20凝胶柱层析,用100%乙醇洗脱,得到化合物1,通过理化常数和现代波谱学手段(MS、NMR)鉴定结构。
化合物1:淡黄色粉末,ESI-MS给出分子离子峰为m/z:413[M+Na]+,结合氢谱碳谱确定分子式为C20H22O8,不饱和度Ω=10。1H-NMR谱显示苯环质子信号[δH 6.76(2H,d J=8.0Hz),6.83(2H,dd,J=1.7,8.2Hz),7.04(2H,d,J=1.7Hz)],亚甲基质子信号[δH 3.96(2H,d,J=9.48Hz,),4.10(2H,d,J=9.48Hz)],一个甲氧基质子信号(δH 3.85)。13C-NM谱显示有十个碳原子,推测化合物1具有对称结构。结合DEPT谱观察到有一组苯环信号(δC 112.8,115.6,121.6,129.5,147.6,148.7),一个连氧季碳(δC 89.2),一个连氧次甲基(δC 89.1),一个连氧亚甲基(δC 76.7),一个甲氧基(δC 56.4),综上推测化合物1为木质素类化合物,通过与文献数据[Kilidhar,S.B.,Prinsepiol,a lignan from stems of Prinsepiautilis.Phytochemistry,1982,21(3),796-797]比较,化合物1的结构鉴定为青刺尖酯醇,结构式如下:
实施例4:青刺尖提取物和部位总多酚的测定
青刺尖初提物和部位总多酚的测定参考国标GBT 8313-2008茶叶中茶多酚含量的检测方法,用福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂检测多酚含量
试剂配制:
10%福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂(现配):将20ml福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂转移到200ml容量瓶中,用水定容并摇匀。
7.5%Na2CO3溶液(质量浓度):称取37.50gNa2CO3加适量水溶解,转移至500ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀。
没食子酸标准储备溶液(1000μg/ml):称取0.100g没食子酸,于100ml容量瓶中溶解并定容至刻度,摇匀。
没食子酸工作液:用移液管分别移取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml的没食子酸标准储备液于100ml容量瓶中,分别用水定容至刻度,摇匀,浓度分别为10,20,30,40,50μg/ml。
没食子酸标准曲线:用移液管分别移取没食子酸工作液1.0ml于刻度管内,在每个试管内分别加入5.0ml福林酚(Folin-Ciocalteu),摇匀。反应3-8分钟内,加入4.0mlNa2CO3溶液,加水定容至刻度,摇匀。室温下放置60min,用10mm比色皿,在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度,根据没食子酸工作液浓度和相对应吸光度,制作标准曲线。
样品配制及测试:取青刺尖初提物和各个部位,配成0.2mg/ml溶液。取样品溶液1mL,按照上述的制作方法,测定其吸光度,每个样品做三个平行试验,取平均值,计算样品中的多酚含量,结果参见表1。
表1:青刺尖初提物和各个部位总多酚含量
样品 | 初提物 | 30%洗脱部位 | 60%洗脱部位 | 95%洗脱部位 |
代号 | PUE | PU30 | PU60 | PU95 |
总多酚 | 35.2% | 45.5% | 67% | 12.4% |
根据结果,青刺尖初提物经过富集工艺之后,总多酚含量有非常大的提高,其中60%乙醇洗脱部位总多酚含量最高。
实施例5:青刺尖提取物、总多酚和青刺尖酯醇抑制酪氨酸酶活性
试验方法:在样品管和样品对照管中各加入1ml不同浓度的样品溶液,阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液代替。在样品管和阳性对照管中加入0.5ml酪氨酸酶溶液(酶活单位125u/ml),样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液(pH=6.8)代替,振摇所有试管,使样品和酪氨酸酶充分混匀,37℃水槽孵育10分钟,加入2ml的0.03wt%酪氨酸溶液,反应10分钟,即刻在475nm处测定吸光度。
抑制率I(%)=[1-(T-T0)/(C-C0)]×100%
式中:T0:样品溶剂对照;
T:样品对照;
C:阳性对照;
C0:阳性对照溶剂对照。
试验结果如表2所示。
表2
样品 | 浓度(mg/ml) | 抑制率(%) |
PUE | 0.20 | 64.3 |
PU30 | 0.20 | 67.4 |
PU60 | 0.20 | 90.5 |
PU95 | 0.20 | 46.2 |
青刺尖酯醇 | 0.20 | 91.5 |
熊果苷 | 0.20 | 50.5 |
从表2的数据看,青刺尖提取物以及青刺尖酯醇的抑制酪氨酸酶活性要远远强于阳性对照熊果苷。随着提取物中总多酚含量的增加,其对于酪氨酸酶活性的抑制活性也增加,说明总多酚可能是抑制酪氨酸酶活性的活性成分。
实施例6:青刺尖提取物、青刺尖酯醇对黑色素抑制作用研究
采用Hosoi等改良方法测定提取物对对黑色素抑制作用。B16黑色素细胞以1×105密度培养在96孔板中,经24h后换液,添加不同浓度的药物,72h后,经PBS洗涤两次,样品经空气干燥,溶于200μl 1N NaOH(含1%DMSO),经加热80℃至1h后冷却,选择475nm波长在酶联免疫检测仪上读取吸光度值。
黑色素含量抑制率=[1-(药物孔吸光度值/药物孔细胞密度)(对照孔吸光度值/照孔细胞密度)]×100%,试验结果见表3.
表3
样品 | 浓度(mg/ml) | 抑制率(%) |
PUE | 0.20 | 43.5 |
PU30 | 0.20 | 56.8 |
PU60 | 0.20 | 80.5 |
PU95 | 0.20 | 54.2 |
青刺尖酯醇 | 0.20 | 88.7 |
熊果苷 | 0.20 | 50.5 |
以上表3的数据证明,青刺尖植物提取物具有非常明显的美白皮肤活性。
以上对本发明做了详尽的描述,其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.青刺尖提取物在美白用品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述美白用品为具有美白和/或祛斑功能的化妆品或药品。
3.如权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述的青刺尖提取物中总多酚的含量在10%以上。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的青刺尖提取物中总多酚的含量在30%以上。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的青刺尖提取物为青刺尖初提物或进一步分离纯化青刺尖初提物所得青刺尖总多酚富集的提取物。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述的青刺尖提取物中总多酚的含量在60%以上。
7.青刺尖酯醇在美白用品中的应用,所述青刺尖酯醇的结构式如下式所示:
8.一种美白用品,其包含美白活性成分,其特征在于:所述的美白活性成分至少包括青刺尖提取物或青刺尖酯醇,所述青刺尖酯醇的结构式如下式所示:
9.如权利要求8所述的美白用品,其特征在于:所述美白用品为具有美白和/或祛斑功能的化妆品或药品。
10.如权利要求8或9所述的美白用品,其特征在于:所述的青刺尖提取物中总多酚的含量在60%以上。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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