KR102553245B1 - 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 노화 억제용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 명세서에는 녹악매 추출물을 유효성분으로 하는, 항산화 또는 노화 억제용 조성물이 개시된다. 일 실시예에서 본 발명의 녹악매 추출물은 옥매, 홍매와 같은 다른 품종의 매화와 비교하여 현저하게 우수한 항산화 및 노화 억제 효과를 가진다. 이에 녹악매를 활용하여 다양한 화장품, 건강기능식품 등에 활용할 수 있다는 점에서 산업적인 의의를 가진다.

Description

녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 노화 억제용 조성물{Composition for antioxidant or inhibiting aging comprising Prunus mume f. viridicalyx extract}
본 명세서에는 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 노화 억제용 조성물이 개시된다.
최근 많은 이들이 건강하고 여유로운 삶을 추구하면서, 그 일 방안으로 기능성 화장품에 대한 관심이 더욱 높아지고 있다. 이에 따라, 미적 아름다움뿐만 아니라 질병의 예방과 치료의 개념이 도입된 고기능성, 다기능성을 지닌 미백, 주름개선, 자외선 차단과 같은 기능성을 동시에 갖춘 화장품들이 화장품 시장에서 큰 비중을 차지하고 있으며, 이에 발 맞춰 기능성 화장품 제조를 위한 다양한 연구가 진행되고 있다.
한편, 산소는 지구상에서 가장 많은 원소로서 건조 대기 중의 21%를 차지하고 있으며 호기성 생물은 이렇게 풍부한 산소를 전자 수용체로 하는 호흡을 통하여 에너지를 획득한다. 그러나 이러한 산소는 안정한 분자상태에서 체내 효소계, 환원 대사, 화학약품, 공해물질, 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적, 환경적 요인에 의하여 반응성이 매우 큰 활성 산소종으로 전환되어 생체에 치명적인 산소 독성을 지닌다는 양면성을 가진다. 이들 활성 산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴작용을 함으로써 각종 질병은 물론 노화, 피부질환을 일으키는 원인이 된다.
이에, 본 발명자들은 항산화 효과, 더 나아가 노화에 효과적이면서, 동시에 안전성이 확보되는 물질을 찾고자 노력한 결과, 천연물인 다양한 매화 품종 중에서도 백색 꽃잎에 녹색 꽃받침을 가지는 녹악매가 특히 우수한 항산화 효과를 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
KR 공개특허공보 제10-2018-0027664호 Guerra, M. E., and J. Rodrigo. "Japanese plum pollination: A review." Scientia Horticulturae 197 (2015): 674-686. 안완식 지음. “우리 매화의 모든 것”, 출판 눌와 (2011). Dong-Sun Lee & Nam-Sun Kim. 기체크로마토그래피-다중 질량분석법에 의한 매화나무[Prunus mume] 꽃 향기 성분 분석. Journal of Korean Society of Odor Research and Engineering 1, 59-67 (2002).
일 측면에서, 본 발명의 목적은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 달성하기 위하여, 일 측면에서 본 발명은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 조성물을 제공한다.
일 측면에서 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
또한, 일 측면에서 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
또한, 일 측면에서 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
일 실시예에서 본 발명의 녹악매 추출물은 옥매, 홍매와 같은 다른 품종의 매화와 비교하여 현저하게 우수한 항산화 및 노화 억제 효과를 가진다. 이에 녹악매를 활용하여 다양한 화장품, 건강기능식품 등에 활용할 수 있다는 점에서 산업적인 의의를 가진다.
도 1은 녹악매의 각 단계별(stage A부터 F까지) 모습을 나타낸 도이다.
도 2는 매화꽃 추출물에 대한 DPPH 활성 억제 효과를 확인한 결과를 IC50(ppm) 값으로 표시하여 나타낸 도이다.
도 3은 매화 품종별, 및 시기별 매화꽃 추출물에 대한 각질세포인 HaCaT에서의 세포 활성산소종(ROS) 억제 효과 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 HPLC-PDA(high pressure liquid chromatography- photodiode array detector)를 통한 각 매화꽃의 활성성분을 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 도 4에 나타낸 도면의 일부를 확대하여 나타낸 도이다.
본 명세서에서 인용된 모든 문헌은 그 전체가 본 명세서의 일부로 통합된다.
일 측면에서 본 발명은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 조성물을 제공한다.
이하, 상세히 설명한다.
매화는 한국 전역에서 쉽게 발견되는 식물이며, 매화의 품종은 꽃잎 및 꽃받침의 색에 따라 구별된다. (Dong-Sun Lee & Nam-Sun Kim. 기체크로마토그래피-다중 질량분석법에 의한 매화나무[Prunus mume] 꽃 향기 성분 분석. Journal of Korean Society of Odor Research and Engineering 1, 59-67 (2002) 참조)
본 명세서에 있어서, '녹악매'는 백색의 꽃잎에 녹색의 꽃받침을 가지는 매화를 지칭하는 것으로 학명은 Prunus mume f. viridicalyx이다.
본 명세서에 있어서, '옥매(Prunus mume f. alba)'는 백색의 꽃잎, 자주색의 꽃받침을 가지는 매화이다.
본 명세서에 있어서, '홍매(Prunus mume f. alphandi)'는 연분홍색 꽃잎, 적색의 꽃받침을 가지는 매화이다.
상기 꽃잎 및 꽃받침의 색에 따라 구별되는 각 매화 품종은 꽃잎 및 꽃받침 외에도 다양한 구별되는 특징을 가진다. 구체적으로, 다양한 품종들로 진화하거나 개발되어 있는 매화(학명: Prunus mume)의 각 품종들 간, 특히 지역 간에 유전적 분포가 상이(안완식 지음. “우리 매화의 모든 것”, 출판 눌와 (2011), p. 43~46 참조)하며, 각 품종들에 대하여 별도의 아종명이 부여되어 있고, 매화의 가장 큰 특징인 향기가 상이하다. 매화 품종 간 향기 차이를 뒷받침하는 향기 관련 성분들의 함량 차이를 안완식 지음. “우리 매화의 모든 것”, 출판 눌와 (2011), p. 36를 참조하여 하기 표 1에 나타내었다. 또한, 품종별 각 매화 추출물에 대하여 HPLC 분석 결과, 각 매화 추출물 내 함유되어 있는 활성성분이 상이하다(도 4 및 5 참조).
녹악매 옥매 홍매
백색의 꽃잎,
녹색의 꽃받침
백색의 꽃잎,
자주색의 꽃받침
연분홍색 꽃잎,
적색의 꽃받침
벤즈알데히드 96.3% 36.4% 60.2%
벤질알코올 1.3% 48.4% 2.0%
벤질아세테이트 1.2% 13.0% 37.1%
유제놀 1.2% 2.2% 0.7%
본 명세서에 있어서, 상기 녹악매는 녹악매 꽃봉오리 또는 개화된 녹악매 꽃일 수 있으나, 바람직하게는 녹악매 꽃봉오리이다. 이때, 녹악매의 꽃봉오리가 꽃잎을 열면서 활짝 피는 개화 상태가 될 때까지 단계를 나눌 수 있는 데, 구체적으로 ⅰ) stage A, 휴면기의 매화 꽃봉오리가 완전히 닫혀있으면서 갈색을 띠는 상태, ⅱ) stage B, 매화 꽃봉오리가 조금씩 부풀어오르면서 밝은 갈색을 나타내는 상태, ⅲ) stage C, 매화 꽃봉오리가 줄기에서 분리되면서 녹색을 나타내는 상태, ⅳ) stage D, 매화 꽃봉오리에서 꽃잎이 보이기 시작하는 단계로 아직 꽃잎이 벌어지지는 않은 상태, ⅴ) stage E, 꽃잎이 벌어지면서 꽃밥이 보이기 시작하는 단계, ⅵ) stage F, 꽃잎이 활짝 벌어져 꽃밥이 완전히 드러나는 상태로 나눌 수 있다. 상기 단계는 Guerra, M. E., and J. Rodrigo. "Japanese plum pollination: A review." Scientia Horticulturae 197 (2015): 674-686.에서 자세하게 기술하고 있으며, 이로부터 발췌한 상기 매화의 각 단계에서의 모습을 도 1에 나타내었다. 상기 내용을 바탕으로, 일 실시예에서, 본 발명의 녹악매 꽃봉오리는 stage A 내지 E일 수 있고, 바람직하게는 stage D 내지 E의 매화일 수 있으며, 보다 바람직하게 stage D의 녹악매일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.본 명세서에 있어서, '추출물'은 천연물로부터 어떤 활성 성분을 적당한 용매로 분리한 것을 모두 포함하는 개념으로, 본 발명에서 사용되는 추출물은 추출 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출물 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
일 실시예에서, 상기 추출물은 당업계에 공지된 추출, 분리 및 분획하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출, 분리 및 분획하여 수득한 것일 수 있으며, 다양한 추출 또는 분획 용매와 추출 방법에 따라 추출될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 추출물은 녹악매의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함하며, 그 중에서도 극성용매 가용 추출물인 것이 바람직하다. 더욱이 상기 극성용매 가용 추출물은 물 또는 유기용매, 예를 들어 상기 용매로는 물, C1-C6알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매일 수 있고, 바람직하게는 에탄올 또는 에탄올 수용액이며, 보다 바람직하게는 50 이상, 55 이상, 60 이상, 65 이상, 70 이상, 75 이하, 80 이하, 85 이하, 90 이하%(v/v)의 에탄올 수용액일 수 있으며, 보다 바람직하게는 50 이상 90 이하%(v/v)의 에탄올 수용액일 수 있으며, 가장 바람직하게는 70%(v/v)의 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에서, 상기 추출물의 추출 온도는 50~100 ℃인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다. 또한 일 실시예에서, 추출방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 실시예에서, 상기와 같이 물 또는 유기용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후에는 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조할 수도 있다. 아울러, 상기와 같이 추출된 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수도 있다.
일 실시예에서, 상기 추출물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있다.
본 명세서에 있어서, 상기 녹악매 추출물(단위: 중량%)은 전체 조성물에 대하여 0.000001 이상, 0.000005 이상, 0.00001 이상, 0.00005 이상, 0.0001 이상, 0.0005 이상, 0.001 이상, 0.005 이상, 0.01 이상, 0.05 이상, 0.1 이상, 0.5 이상, 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 6 이하, 7 이하, 8 이하, 9 이하, 10 이하 중량%일 수 있고, 바람직하게는 0.000001 내지 10 중량%일 수 있으며, 보다 바람직하게는 0.000001 내지 1 중량%일 수 있고, 가장 바람직하게는 0.00001 중량%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 있어서, 본 발명의 녹악매 추출물은 뛰어난 항산화 또는 노화 억제용도를 나타낸다.
본 명세서에 있어서, '항산화'는 생체 내에 발생하는 활성산소의 발생을 억제하거나, 생성된 활성산소를 제거하는 일련의 기작 등을 의미한다.
본 명세서에 있어서, '노화 억제'는 시간의 경과에 따라 일어나는 쇠퇴적인 변화 현상을 늦추는 것을 의미하며, 일 실시예에서 상기 노화는 피부 노화인 것이 바람직하다. 일 실시예에서 상기 피부 노화는 시간이 흐르면 노화하는 내인성 노화와 시간 경과에 따라 부여되는 외부 자극에 의하여 노화하는 외인성(외적) 노화를 모두 의미할 수 있으며, 바람직하게 본 발명의 노화는 피부 노화 중에서도 외인성 노화를 의미하는 것일 수 있다. 이때 외인성 노화는 자외선에 의한 노화일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 측면에서 본 발명은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 화장료 조성물을 제공한다.
본 명세서에 있어서, '화장료 조성물'은 인체의 외관을 아름답게 하는 모든 물건을 포함하는 개념으로, 본 발명의 항산화 또는 노화 억제용 조성물은 생체리듬 에 따른 생리적인 현상 또는 외부 자극에 의한 피부에서의 악영향을 억제하여 인체의 외관을 아름답게 하는 물건을 지칭하는 개념이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 녹악매 추출물 외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 페이스트, 겔, 크림, 파우더, 스프레이, 용액, 유탁액, 현탁액, 계면활성제-함유 클린싱, 로션, 비누, 오일, 파운데이션 등의 제형으로 제조될 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는, 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
일 측면에서 본 발명은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 명세서에 있어서, '건강기능식품'이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
일 실시예에서, 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
일 실시예에서, 상기 건강기능식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 건강기능식품의 예로는 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계된 식품을 모두 포함한다.
일 실시예에서, 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 포함할 수 있고, 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
일 측면에서 본 발명은 녹악매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에 있어서, '약학적'은 질병을 예방하거나 치료하는 데 사용되는 물질을 연구하는 분야를 의미한다.
본 명세서에 있어서, '투여'는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 녹악매 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것을 의미하는 것으로, 상기 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 있어서, '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 일례로 상기 녹악매 추출물을 포함하는 조성물의 1일 투여 용량은 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에서, 상기 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육 또는 피하에 투여될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 조성물은 항산화 또는 노화 억제를 위하여 단독으로, 또는 식이요법, 물리치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 및 제제예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예 및 제제예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예 및 제제예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예 및 제제예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1. 매화꽃의 품종 및 수득 시기에 따른 분류, 및 상기 분류한 매화꽃의 추출물의 제조
전남 함양에서 다양한 품종의 매화(Prunus mume)를 수득하였고, 이로부터 꽃잎 및 꽃받침 색으로 각각 녹악매(Prunus mume f. viridicalyx), 옥매(Prunus mume f. alba), 및 홍매(Prunus mume f. alphandi)로 나누어 분류하고, 더 나아가 꽃잎이 벌어지지 않은 꽃봉오리 상태인 stage D의 매화꽃과 꽃잎이 활짝 벌어져있는 상태인 stage F의 매화꽃으로 나누어 총 6종으로 분류하였다. 그리고 나서 상기 6종의 매화를 상온에서 70%(v/v) 에탄올 용매로 추출하였다. 하기 표 2에 분류하여 추출한 추출물을 자세하게 나타내었다.
녹악매
(백색 꽃잎,
녹색 꽃받침)
옥매
(백색 꽃잎,
자주색 꽃받침)
홍매
(연분홍색 꽃잎,
적색 꽃받침)
Stage D(bloom stage) PMGB PMWB PMRB
Stage F(full bloom) PMGF PMWF PMRF
실시예 2. DPPH 활성 억제 효과 확인
항산화 지표로 알려진 DPPH(α, α-diphenyl-β-picrylhydrazyl)의 활성 억제에 따른 항산화 효과를 확인하였다. 구체적으로, 농도별로 상기 실시예 1에서 제조한 각 추출물 중 PMGB, PMWB, PMRB에 0.1 mM의 DPPH를 첨가하였다. 그리고 나서, 30분 동안 37℃에서 배양하였다. Spectra Max 190을 이용하여 배양한 각 추출물에 대하여 517 nm로 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 DPPH에 대한 IC50(ppm) 값으로 표시하여 도 2에 나타내었다. 한편, 대조군에는 실시예 1에서 제조한 추출물 대신 항산화 활성을 가지는 것으로 알려진 비타민 C를 처리하였다.
도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 다양한 품종의 매화 중 녹악매가 가장 뛰어난 항산화 효과를 가짐을 알 수 있다.
실시예 3. DCF(dichlorofluorescein) 분석을 통한 각질세포인 HaCaT에서의 세포 활성산소종(ROS) 억제 효과 확인(자외선에 의한 노화 억제 효과 확인)
3-1. 품종별 매화 추출물의 효과 차이 확인
HaCaT 세포에서의 활성산소종 억제 효과의 확인을 통한 항산화 효과를 확인하였다. 구체적으로, 먼저 실험에 사용할 세포로 HaCaT(immortalized human keratinocytes)를 10%(v/v) 소 태아 혈청이 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다. 이 후 배양한 세포주에 UVB 20 mJ/cm2를 조사하고, 이어서 상기 실시예 1의 녹악매 추출물(PMGB), 옥매 추출물(PMWB)을 농도별로 50 ppm, 100 ppm으로 처리하였다. 그리고 나서 DCF 분석 키트를 이용하여 DCF-DA로 염색하였고, 염색 결과는 Victor2 1420 multilabel counter를 이용하여 분석하였다. 이때, 대조군으로 ⅰ) UVB도 처리하지 않은 실험군, ⅱ) UVB만 처리한 실험군, ⅲ) UVB 처리 후 상기 실시예 1의 추출물 대신 항산화 및 항노화 효과를 가진 것으로 알려진 비타민 C를 처리한 실험군에 대하여 독립적으로 실험을 수행하였다. 그 결과는 표 3 및 도 3에 나타내었다.
UV treat Sample 농도(ppm) %평균
non-UVB NT   100.00
UVB NT   190.20
vit C 50 159.90
100 151.60
PMWB 50 163.10
100 167.70
PMGB 50 145.70
100 139.20
표 3 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 다른 매화 품종인 옥매 추출물과 달리 녹악매 추출물에서 유의적인 UVB에 의한 손상 개선 효과가 나타남을 확인하였다. 이는 녹악매 추출물이 다양한 매화 품종 중에서도 특히 우수한 자외선에 의한 항산화 및 노화의 억제 효과를 가짐을 나타낸다.
3-2. 시기별 매화 추출물의 효과 차이 확인
HaCaT 세포에서의 활성산소종 억제 효과의 확인을 통한 항산화 효과를 확인하였다. 구체적으로, 먼저 실험에 사용할 세포로 HaCaT(immortalized human keratinocytes)를 10%(v/v) 소 태아 혈청이 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다. 이 후 배양한 세포주에 UVB 20 mJ/cm2를 조사하고, 이어서 상기 실시예 1의 추출물 중 녹악매 꽃봉오리 추출물(PMGB)및 녹악매 꽃 추출물(PMGF)을 농도별(50 ppm, 100 ppm)로 처리하였다. 그리고 나서 DCF 분석 키트를 이용하여 DCF-DA로 염색하였고, 염색 결과는 Victor2 1420 multilabel counter를 이용하여 분석하였다. 이때, 대조군으로 ⅰ) UVB도 처리하지 않은 실험군, ⅱ) UVB만 처리한 실험군, ⅲ) UVB 처리 후 상기 실시예 1의 추출물 대신 항산화 및 항노화 효과를 가진 것으로 알려진 비타민 C를 처리한 실험군에 대하여 독립적으로 실험을 수행하였다. 그 결과는 표 4 및 도 3에 나타내었다.
UV treat Sample 농도(ppm) %평균
non-UVB NT   100.00
UVB NT   190.20
vit C 50 159.90
100 151.60
PMGB 50 145.70
100 139.20
PMGF 50 156.00
100 165.00
표 4 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 개화된 꽃 상태의 녹악매에 비하여 꽃봉오리 상태의 녹악매에서 현저한 UVB에 의한 손상 개선 효과가 나타남을 확인하였다. 더욱이, 비타민 C를 처리한 대조군에 비하여 꽃봉오리 상태의 녹악매가 더 우수한 UVB에 의한 손상 개선 효과가 나타났다. 이는 녹악매 꽃봉오리 추출물이 특히 우수한 자외선에 의한 항산화 및 노화의 억제 효과를 가짐을 나타낸다.
실시예 4. HPLC-PDA(high pressure liquid chromatography- photodiode array detector)를 통한 각 매화꽃의 활성성분 분석
Water® Empower 2 software를 이용하여 HPLC-PDA를 수행함으로써 상기 실시예 1의 추출물 중 PMGB, PMGF, PMWB, PMRB, PMRF에 포함되어 있는 다양한 활성 성분의 유무 및 함량을 측정하였다. 그 결과는 도 4에 나타내었고, 도 4의 일부만을 확대하여 도 5에 나타내었다.
도 4 및 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 같은 매화라 하더라도 품종에 따라 포함되어 있는 활성 성분의 함량 및 종류가 상이함을 알 수 있다.
이하 본 발명에 따른 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하는 것이 아니라 구체적으로 설명하는 수단으로 활용하고자 함이다.
제제예 1. 화장료 조성물의 제조
1-1. 유연화장수 제조
녹악매 추출물 0.1중량%, 1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%, 올레일알코올 1.5중량%, 에탄올 3.2중량%, 폴리솔베이트 20 3.2중량%, 벤조페논-9 2.0중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 글리세린 3.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
1-2. 밀크로션 제조
녹악매 추출물 0.1중량%, 글리세린 5.1중량%, 프로필렌글리콜 4.2중량%, 토코페릴아세테이트 3.0중량%, 유동파라핀 4.6중량%, 트리에탄올아민 1.0중량%, 스쿠알란 3.1중량%, 마카다미아너트오일 2.5중량%, 폴리솔베이트 60 1.6중량%, 솔비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%, 프로필파라벤 0.6중량%, 카르복실비닐폴리머 1.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.
1-3. 영양크림 제조
녹악매 추출물 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 2.1중량%, 유동파라핀 5.3중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.6중량%, 토코페릴아세테이트 5.4중량%, 폴리솔베이트 60 3.2중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.
1-4. 마사지크림 제조
녹악매 추출물 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 0.5중량%, 유동파라핀 24.0중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.1중량%, 토코페릴아세테이트 0.1중량%, 폴리솔베이트 60 2.4중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 2.3중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.
1-5. 세정용 바디클렌저 제조
녹악매 추출물 1g, 음이온계면활성제 18g, 비이온계면활성제 5g, 글리세린 7g, 소듐클로라이드 3g, 천연올리브액상비누 1.5g, 향료 1g 및 물 100g을 혼합하여 통상의 방법으로 세정용 바디클렌저를 제조하였다.
제제예 2. 건강기능식품 조성물의 제조
2-1. 건강식품 제조
녹악매 추출물 100㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70g, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2g, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10g, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50g, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎ 및 염화마그네슘 24.8㎎을 혼합한 다음, 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다. 이때, 상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
2-2. 건강음료 제조
통상의 건강음료 제조방법에 따라 녹악매 추출물 100㎎, 비타민 C 15g, 비타민 E(분말) 100g, 젖산철 19.75g, 산화아연 3.5g, 니코틴산아미드 3.5g, 비타민 A 0.2g, 비타민 B1 0.25g, 비타민 B2 0.3g 및 정량의 물을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다. 이때, 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예 3. 약학적 조성물의 제조
3-1. 산제 제조
녹악매 추출물 20㎎, 유당 100㎎ 및 탈트 10㎎을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
3-2. 정제 제조
녹악매 추출물 10㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2㎎을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3-3. 캡슐제 제조
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 녹악매 추출물 10㎎, 결정성 셀룰로오스 3㎎, 락토오스 14.8㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 0.2㎎을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
4-4. 주사제 제조
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1앰플당(2mL) 녹악매 추출물 10㎎, 만니톨 180㎎, 주사용 멸균 증류수 2,974㎎ 및 Na2HPO4* 2H2O 26㎎으로 제조하였다.

Claims (11)

  1. 녹악매 꽃봉오리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 화장료 조성물로서,
    상기 녹악매 꽃봉오리는 stage D 내지 E의 녹악매 꽃봉오리인, 조성물.
  2. 녹악매 꽃봉오리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 노화 억제용 건강기능식품 조성물로서,
    상기 녹악매 꽃봉오리는 stage D 내지 E의 녹악매 꽃봉오리인, 조성물.
  3. 삭제
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1-C6 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출되는, 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 추출물은 50 내지 90%(v/v) 에탄올 수용액으로 추출되는, 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 녹악매 추출물은 전체 조성물에 대하여 0.000001 내지 10 중량%로 포함되는, 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 노화는 피부 노화인, 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 노화는 외인성 노화인, 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 외인성 노화는 자외선에 의한 노화인, 조성물.
  10. 삭제
  11. 삭제
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고운빛 오디농부의 건강이야기, 카카오스토리(2018.03.03.) 1부.*
매화 꽃봉오리 에탄올 추출물의 항산화 및 항노화 효과, 복영옥, 원광대학교 학위논문(2017.) 1부.*
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