CN109096345A - 一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法，将茶叶粉碎经过粗提后得到茶多酚初提物，在经过茶多酚初步纯化、茶多酚纯化得到茶多酚，其提取率可以到达43%。本发明制备方法简单，提取率高。

Description

一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法

技术领域

本发明属于茶多酚提取工艺，具体涉及一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法。

背景技术

茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。主要为黄烷醇（儿茶素）类，儿茶素占60~80%。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。

茶多酚作为生物抗氧化剂，已广泛应用于食品加工、医药保健和日用化工等领域，具有广阔的应用前景，是一类极具开发价值的天然产物，因此，开发高效、安全的茶多酚提取方法具有重要意义。

通过教育部查新工作站17个中文数据库，12个英文数据库检索，通过与本发明方案最接近的已有技术：广西克鲁尼茶叶生物科技有限公司通过使用乙醇对茶叶中的茶多酚进行索氏提取，将所得索氏提取物使用15％正己烷和85％乙酸乙酯的混合溶液溶解，离心，大孔吸附树脂等步骤从鲜茶叶中提取茶多酚。该技术所用有机溶剂多，但有机溶剂作用激烈，使茶多酚的结构会发生改变，导致茶多酚活性被抑制或丧失，因此该法提取的茶多酚的药理生理活性还有进一步验证。

发明内容

本发明的目的在于提供一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法，所述方法包括如下步骤：

1）将茶叶放进65℃烘干箱烘干，放到粉碎机中粉碎，过80目筛，称取18g经过粉碎的茶叶，放进用滤纸折成的圆柱状滤纸筒中，将茶叶和滤纸筒一并塞进索氏提取器的回流管中，加80%乙醇270ml到索氏瓶中，电热套温度为200℃，加热时间60min；低压浓缩，冻干茶多酚初提物；配乙酸乙酯混合液，具体方法为：蒸馏水：乙酸乙酯体积比＝1:3，之后用柠檬酸溶液调pH为４作为备用；

2）茶多酚初步纯化：配茶多酚初提物溶液，浓度为0.05mg/ml，将茶多酚初提物溶液：乙酸乙酯混合液体积比＝1:3放进分液漏斗中，静置30分钟，待溶液分层后，收集下层没有颜色的溶液（初步纯化的茶多酚），低压浓缩，冷冻干燥。

3）茶多酚纯化：

(1)称取上面茶多酚初步纯化的样品，配茶多酚溶液10mg/ml；

(2)装树脂之前，在玻璃层析柱内盛超纯水，主要以防气体进入树脂内部，影响柱效；量取80mL预处理的NKA型大孔吸附树脂，沿着玻棒将湿NKA型大孔树脂装入玻璃层析柱内，树脂最后沉降到柱体积的2/3处，装玻璃层析柱盖子之前，要先启动恒流泵，让玻璃层析柱盖子流出洗脱液，洗脱液为80%v/v乙醇；

（3）洗脱之前先要设定恒流泵转速为50 rpm，收集器延时40秒，阈值为4MV，溢出滴数60滴；

（4）先用80%（v/v）乙醇以恒流泵转速为50rpm，平衡柱子，直到气泡排干净，没有上下波动成一直线为止；

（5）柱子平衡以后，用移液枪吸取浓度为10mg/ml茶多酚溶液2ml，沿柱壁小心加到树脂表面；

（6）待样品液面降至树脂表面时，以恒流泵转速为50rpm，用 80%（v/v)乙醇对样品进行洗脱，收集从收集器废液管流出的洗脱液，直至阈值低于2MV为止。

本发明的优点在于：本发明技术以乙醇为溶剂索式提取茶叶中茶多酚，随后利用乙酸乙酯混合液(乙酸乙酯与蒸馏水)进行初步纯化，最后利用NKA型大孔树脂纯化。本发明技术所具有的优点是所用有机溶剂少，茶多酚的结构不会发生改变，茶多酚活性没有被抑制或丧失，该发明技术提取的茶多酚的药理生理活性没有受到影响或影响很小。此外，本发明技术通过初步纯化后，使用NKA型大孔树脂纯化，效果较好，成本也降低等。

具体实施方式

实施例1

1）将茶叶放进65℃烘干箱烘干，放到粉碎机中粉碎，过80目筛，称取18克经过粉碎的茶叶，放进用滤纸折成的圆柱状滤纸筒中，将茶叶和滤纸筒一并塞进索氏回流管中，加80%乙醇270ml到索氏瓶中，电热套温度为200℃，加热时间60分钟。低压浓缩，冻干茶多酚初提物。配乙酸乙酯混合液，具体方法为：蒸馏水：乙酸乙酯体积比＝1:3，之后用柠檬酸溶液调pH为４作为备用。

2）茶多酚初步纯化：配茶多酚初提物溶液，浓度为0.05mg/ml，将茶多酚初提物溶液：乙酸乙酯混合液体积比＝１：３放进分液漏斗中，静置30分钟，待溶液分层后，提取下层没有颜色的溶液。

3）茶多酚纯化：

(1)称取上面茶多酚初步纯化的样品，配茶多酚溶液10mg/ml；

(2)装树脂之前，先要在玻璃层析柱内盛一定量超纯水，主要以防气体进入树脂内部，影响柱效。量取大约80mL预处理的NKA型大孔吸附树脂，沿着玻棒将湿NKA型大孔树脂装入ø5cm×24cm的玻璃层析柱内，树脂最后沉降到柱体积的2/3处，约16厘米(注意在装柱和以后使用柱子过程中树脂面上液体不能流干，以免气泡进入树脂内部，影响分离效果)，装玻璃层析柱盖子之前，要先启动恒流泵，让玻璃层析柱盖子流出洗脱液（80%（v/v）乙醇），主要是排尽气体，以免气体进入树脂内部，影响柱效；

（3）洗脱之前先要设定恒流泵转速为50 rpm，收集器（CBS程控多功能全自动部分收集器）延时40秒，阈值为4MV，溢出滴数60等等参数；

（4）先用80%（v/v）乙醇以恒流泵（HL-2S）转速为50rpm，平衡柱子，直到气泡排干净，没有上下波动成一直线为止；

（5）柱子平衡以后，用移液枪吸取茶多酚溶液2ml(浓度为10mg/ml)，沿柱壁小心加到树脂表面，如果树脂表面留有比较多洗脱液时，要用枪吸一些起来，直至洗脱液快要接近树脂表面时加样品，以防样品被严重稀释；

（6）待样品液面降至树脂表面时，以恒流泵（HL-2S）转速为50rpm，用 80%（v/v)乙醇对样品进行洗脱，收集从收集器废液管流出的洗脱液，直至阈值低于2MV为止，最终得率为43%。

经过检测，多酚的结构未发生改变，茶多酚活性没有被抑制或丧失，该发明技术提取的茶多酚的药理生理活性没有受到影响或影响很小。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (1)

1.一种茶叶中提取和纯化茶多酚方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1）将茶叶放进65℃烘干箱烘干，放到粉碎机中粉碎，过80目筛，称取18g经过粉碎的茶叶，放进用滤纸折成的圆柱状滤纸筒中，将茶叶和滤纸筒一并塞进索氏提取器的回流管中，加80%乙醇270ml到索氏瓶中，电热套温度为200℃，加热时间60min；低压浓缩，冻干茶多酚初提物；配乙酸乙酯混合液，具体方法为：蒸馏水：乙酸乙酯体积比＝1:3，之后用柠檬酸溶液调pH为４作为备用；

2）茶多酚初步纯化：配茶多酚初提物溶液，浓度为0.05mg/ml，将茶多酚初提物溶液：乙酸乙酯混合液体积比＝1:3放进分液漏斗中，静置30分钟，待溶液分层后，收集下层没有颜色的溶液（初步纯化的茶多酚），低压浓缩，冷冻干燥；

3）茶多酚纯化：

(1)称取上面茶多酚初步纯化的样品，配茶多酚溶液10mg/ml；

(2)装树脂之前，在玻璃层析柱内盛超纯水，主要以防气体进入树脂内部，影响柱效；量取80mL预处理的NKA型大孔吸附树脂，沿着玻棒将湿NKA型大孔树脂装入玻璃层析柱内，树脂最后沉降到柱体积的2/3处，装玻璃层析柱盖子之前，要先启动恒流泵，让玻璃层析柱盖子流出洗脱液，洗脱液为80%v/v乙醇；

（3）洗脱之前先要设定恒流泵转速为50 rpm，收集器延时40秒，阈值为4MV，溢出滴数60滴；

（4）先用80%（v/v）乙醇以恒流泵转速为50rpm，平衡柱子，直到气泡排干净，没有上下波动成一直线为止；

（5）柱子平衡以后，用移液枪吸取浓度为10mg/ml茶多酚溶液2ml，沿柱壁小心加到树脂表面；

（6）待样品液面降至树脂表面时，以恒流泵转速为50rpm，用 80%（v/v)乙醇对样品进行洗脱，收集从收集器废液管流出的洗脱液，直至阈值低于2MV为止。