CN101343645A - 一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种肝素钠技术,尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术;将(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐,在加温前先加入重量比为2.3%-2.8%的精盐,调pH值到9.0-9.2;(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10∶0.5到10∶5之间,双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3%-0.4%,继续加温到50℃-55℃,保温酶解2h-5h,然后继续加温到80℃-85℃,保温10-20分钟后过滤;(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。本发明与现有技术相比,具有如下优点:1.整个工序的时间减少了大概33%;2.产品的收率提高了29.6%;3.效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-110)。

Description

一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术
发明内容
本发明涉及一种肝素钠技术,尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。
背景技术
目前我国生产几乎全部采用猪小肠为原料,在常规反应器内运用盐解法、碱解法和酶解法等几种,其中盐解法应用最为普通,其生产工序是:原料(肠黏膜)、常规反应器内盐水提取、过滤、树脂吸附、洗脱、乙醇沉淀、脱水、干燥、肝素钠粗品。
上述方法生产肝素钠的工艺过程虽然比较简单易于实现,但存在的不足之处在于过程的精致,因为粗品肝素钠经反复的酸碱处理,不仅会使肝素钠的收率减少,而且对肝素钠的生物活性也影响很大,尤其效价很难达到90USPu/mg以上,并且时间较长。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法,利用双酶组进行酶促提取肝素纳,通过选择酶的种类、酶组合的比例、超声场的强度、控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。
该方法采用以下步骤:
(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐,在加温前先加入重量比为2.3%-2.8%的精盐,调PH值到9.0-9.2;
(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10∶0.5到10∶5之间,双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3%-0.4%,继续加温到50℃-55℃,保温酶解2h-5h,然后继续加温到80℃-85℃,保温10-20分钟后过滤;
(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
所述的步骤(a)中,还可将将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐,复频超声条件为20+40kHZ,选择超声强度在0.1 W/m2到0.9W/m2。所述的步骤(b)中,所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10∶2。所述的步骤(b)中,所选择保温酶解的优选时间在2h。复频超声反应罐所选择的超声强度优选为0.3W/m2到0.7W/m2
本发明与现有技术相比,具有如下优点:
1、整个工序的时间减少了大概33%;
2、产品的收率提高了29.6%;
3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-110)。
具体实施方式
实施例1
制小肠粘膜(10副小肠),每根小肠与水混合后约4-6公斤,将刮制好的小肠抽入常规酶解罐,在加温前先加入2.3-2.8%(体量)的精盐,调PH值9.0-9.2;在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10∶2),占总溶液重量比为0.4%;继续加温至52℃,保温3小时后进行酶解,然后继续加温到80℃-85℃,保温15分钟后过滤,对上述步骤中的过滤溶液进行吸附:吸附水过滤,冷却到58℃时加入树脂吸附;洗涤:收集树脂,清水漂洗数次,再用清水加温58-60℃,调PH到7.5,到树脂洗干净为止,用1.2N盐水溶液,调PH到8加入树脂中,加温到60℃,洗涤0.5h,去处洗涤溶液,滤干树脂;洗脱:用4M的NaCl溶液洗脱2次后,将两次洗脱溶液合并,过滤;沉淀:将一、二次洗脱液用85%的乙醇沉淀,体积比例是1∶1.5左右,兑好后的酒精混合液浓度大约是30-40度,沉淀后脱水干燥得肝素钠产品。
常规酶解罐内酶解法双酶的各比例下所得肝素钠的比例图
投酶比例 10∶0.5 10∶1 10∶2 10∶3 10∶5
得产品量 5.16克 5.29克 5.47克 5.49克 5.49克
常规酶解罐内盐解法(国内通用方法)10副小肠可以制得5克肝素钠。
综合成本考虑选择胰蛋白酶和脂肪酶的比例10∶2最优,该条件下相比盐解法产率提高9.4%。
实施例2
刮制小肠粘膜(10副小肠),每根小肠与水混合后约4-6公斤,将刮制好的小肠抽入复频超声反应器(20+40kHZ),在加温前先加入2.3-2.8%(体量)的精盐,调PH值9.0-9.2;在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10∶2),占总溶液重量比为0.4%;继续加温至52℃,保温3小时后进行酶解,然后继续加温到80℃-85℃,保温15分钟后过滤,对过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤。
对于不同超声强度西的产品的得率比较表:
超声强度 0.1W/m2 0.3W/m2 0.5W/m2 0.7W/m2 0.9W/m2
得产品量 5.79克 6.18克 6.48克 6.51克 6.51克
从上表可以看出在超声强度为最优为0.5W/m2
实施例3
刮制小肠粘膜(10副小肠),每根小肠与水混合后约4-6公斤,将刮制好的小肠抽入复频超声反应器(20+40kHZ),超声强度为0.5W/m2,在加温前先加入2.3-2.8%的精盐,调PH值9.0-9.2;在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10∶2),占总溶液重量比为0.4%;继续加温至52℃,保温不同时间后进行酶解,然后继续加温到80℃-85℃,保温15分钟左右后过滤,对过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤。
不同超声酶时间下产品的得率对比表:
超声酶解时间 0.5h  1h  2h  3h  5h
得产品量 2.44克  4.06克  6.48克  6.52克  6.52克
由此可以看出,仅需要2小时的酶解时间,相比常规反应器盐解法在时间上节省了大约33%。

Claims (5)

1、一种用双酶法提取肝素钠的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐,在加温前先加入重量比为2.3%-2.8%的精盐,调PH值到9.0-9.2;
(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10∶0.5到10∶5之间,双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3%-0.4%,继续加温到50℃-55℃,保温酶解2h-5h,然后继续加温到80℃-85℃,保温10-20分钟后过滤;
(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
2、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(a)中,还可将将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐,复频超声条件为20+40kHZ,选择超声强度在0.1W/m2到0.9W/m2
3、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(b)中,所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10∶2。
4、根据权利要求1或3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(b)中,所选择保温酶解的优选时间在2h。
5、根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:复频超声反应罐所选择的超声强度优选为0.3W/m2到0.7W/m2
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