CN101343645B - 一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术 - Google Patents
一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术 Download PDFInfo
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Abstract
本本发明涉及一种肝素钠技术，尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术；将(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐，在加温前先加入重量比为2.3％-2.8％的精盐，调PH值到9.0-9.2；(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶，并且使其比例在10：0.5到10：5之间，双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3％-0.4％，继续加温到50℃-55℃，保温酶解2h-5h，然后继续加温到80℃-85℃，保温10-20分钟后过滤；(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。本发明与现有技术相比，具有如下优点：1、整个工序的时间减少了大概33％；2、产品的收率提高了29.6％；3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-110)。
Description
发明内容
本发明涉及一种肝素钠技术，尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。
背景技术
目前我国生产几乎全部采用猪小肠为原料，在常规反应器内运用盐解法、碱解法和酶解法等几种，其中盐解法应用最为普通，其生产工序是：原料(肠黏膜)、常规反应器内盐水提取、过滤、树脂吸附、洗脱、乙醇沉淀、脱水、干燥、肝素钠粗品。
上述方法生产肝素钠的工艺过程虽然比较简单易于实现，但存在的不足之处在于过程的精致，因为粗品肝素钠经反复的酸碱处理，不仅会使肝素钠的收率减少，而且对肝素钠的生物活性也影响很大，尤其效价很难达到90USPu/mg以上，并且时间较长。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法，利用双酶组进行酶促提取肝素纳，通过选择酶的种类、酶组合的比例、超声场的强度、控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。
该方法采用以下步骤：
(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐，在加温前先加入重量比为2.3％-2.8％的精盐，调PH值到9.0-9.2；
(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶，并且使其比例在10：0.5到10：5之间，双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0.3％-0.4％，继续加温到50℃-55℃，保温酶解2h-5h，然后继续加温到80℃-85℃，保温10-20分钟后过滤；
(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
所述的步骤(a)中，还可将将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐，复频超声条件为20+40kHZ，选择超声强度在0.1W/m2到0.9W/m2。所述的步骤(b)中，所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10：2。所述的步骤(b)中，所选择保温酶解的优选时间在2h。复频超声反应罐所选择的超声强度优选为0.3W/m2到0.7W/m2。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
1、整个工序的时间减少了大概33％；
2、产品的收率提高了29.6％；
3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-110)。
具体实施方式
实施例1
制小肠粘膜(10副小肠)，每根小肠与水混合后约4-6公斤，将刮制好的小肠抽入常规酶解罐，在加温前先加入2.3-2.8％(体量)的精盐，调PH值9.0-9.2；在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10：2)，占总溶液重量比为0.4％；继续加温至52℃，保温3小时后进行酶解，然后继续加温到80℃-85℃，保温15分钟后过滤，对上述步骤中的过滤溶液进行吸附：吸附水过滤，冷却到58℃时加入树脂吸附；洗涤：收集树脂，清水漂洗数次，再用清水加温58-60℃，调PH到7.5，到树脂洗干净为止，用1.2N盐水溶液，调PH到8加入树脂中，加温到60℃，洗涤0.5h，去处洗涤溶液，滤干树脂；洗脱：用4M的NaCl溶液洗脱2次后，将两次洗脱溶液合并，过滤；沉淀：将一、二次洗脱液用85％的乙醇沉淀，体积比例是1：1.5左右，兑好后的酒精混合液浓度大约是30-40度，沉淀后脱水干燥得肝素钠产品。
常规酶解罐内酶解法双酶的各比例下所得肝素钠的比例图
| 投酶比例 | 10：0.5 | 10：1 | 10：2 | 10：3 | 10：5 |
| 得产品量 | 5.16克 | 5.29克 | 5.47克 | 5.49克 | 5.49克 |
常规酶解罐内盐解法(国内通用方法)10副小肠可以制得5克肝素钠。
综合成本考虑选择胰蛋白酶和脂肪酶的比例10：2最优，该条件下相比盐解法产率提高9.4％。
实施例2
刮制小肠粘膜(10副小肠)，每根小肠与水混合后约4-6公斤，将刮制好的小肠抽入复频超声反应器(20+40kHZ)，在加温前先加入2.3-2.8％(体量)的精盐，调PH值9.0-9.2；在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10：2)，占总溶液重量比为0.4％；继续加温至52℃，保温3小时后进行酶解，然后继续加温到80℃-85℃，保温15分钟后过滤，对过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤。
对于不同超声强度西的产品的得率比较表：
| 超声强度 | 0.1W/m2 | 0.3W/m2 | 0.5W/m2 | 0.7W/m2 | 0.9W/m2 |
| 得产品量 | 5.79克 | 6.18克 | 6.48克 | 6.51克 | 6.51克 |
从上表可以看出在超声强度为最优为0.5W/m2。
实施例3
刮制小肠粘膜(10副小肠)，每根小肠与水混合后约4-6公斤，将刮制好的小肠抽入复频超声反应器(20+40kHZ)，超声强度为0.5W/m2，在加温前先加入2.3-2.8％的精盐，调PH值9.0-9.2；在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10：2)，占总溶液重量比为0.4％；继续加温至52℃，保温不同时间后进行酶解，然后继续加温到80℃-85℃，保温15分钟左右后过滤，对过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤。
不同超声酶时间下产品的得率对比表：
| 超声酶解时间 | 0.5h | 1h | 2h | 3h | 5h |
| 得产品量 | 2.44克 | 4.06克 | 6.48克 | 6.52克 | 6.52克 |
由此可以看出，仅需要2小时的酶解时间，相比常规反应器盐解法在时间上节省了大约33％。
Claims (5)
1.一种用双酶法提取肝素钠的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐，在加温前先加入重量比为2.3％-2.8％的精盐，调pH值到9.0-9.2；
(b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶，并且使其比例在10∶0.5到10∶5之间，双酶总共在步骤(a)中溶液的重量比为0.3％-0.4％，继续加温到50℃-55℃，保温酶解2h-5h，然后继续加温到80℃-85℃，保温10-20分钟后过滤；
(c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(a)中，将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐，复频超声条件为20+40kHZ，选择超声强度在0.1W/m2到0.9W/m2。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(b)中，所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10∶2。
4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(b)中，所选择保温酶解的优选时间在2h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：复频超声反应罐所选择的超声强度优选为0.3W/m2到0.7W/m2。
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